Konsolidazzjoni ta 'Rappreżentazzjonijiet tal-Memorja Ċellulari fin-Neocortex Superfiċjali

SOMMARJU

Konsolidazzjoni tal-memorja fil-livell tas-sistemi, kunċett ewlieni fir-riċerka tal-memorja, tinvolvi l-konverżjoni ta 'memorji li jiddependu fuq l-ippokampus għall-formazzjoni tagħhom f'forom effiċjenti indipendenti mill-ippokampus, preżumibbilment kodifikati minn konnessjonijiet kortikokortikali. Madankollu, ftit huwa mifhum dwar in-natura tal-kodiċijiet newrali konsolidati fil-livell ta 'ensemble ċellulari.

Il-memorji fil-livell tas-sistemi jirreferu għal preferenzi jew mudelli ta 'mġieba li persuna tiżviluppa kmieni fil-ħajja u japprofondixxu maż-żmien. Il-memorja fil-livell tas-sistema taffettwa l-ħsieb, l-azzjonijiet u d-deċiżjonijiet ta’ persuna. Hija imġieba subkonxja.

B’kuntrast, il-memorja tirreferi għall-kapaċità ta’ persuna li tfakkar u żżomm l-informazzjoni. Memorja tajba tgħinna nitgħallmu l-ħiliet, insolvu problemi, u niksbu s-suċċess. Madankollu, biex ikollna memorja eċċellenti, għandna bżonn l-appoġġ tal-memorja fil-livell tas-sistema.

Il-memorja fil-livell tas-sistema ttejjeb il-memorja tagħna għaliex tipprovdilna qafas biex niksbu għarfien ġdid. Kull meta nitgħallmu affarijiet ġodda, normalment inqabbduhom ma’ dak li tgħallimna qabel. Din il-konnessjoni tifforma struttura ta’ għarfien sod li tgħinna nifhmu u niftakru aħjar informazzjoni ġdida.

Barra minn hekk, il-memorja fil-livell tas-sistemi tista 'tinfluwenza l-mod kif naħsbu. Jekk niżviluppaw attitudni pożittiva li ssolvi l-problemi, naħsbu b'mod aktar ċar u malajr, li jagħmilha aktar faċli li nżommu l-informazzjoni u nsolvu l-problemi. B'kuntrast, jekk niżviluppaw attitudni negattiva u passiva, il-ħsieb tagħna jsir bil-mod u mċajpar, u jfixkel il-memorja tagħna u l-abbiltajiet tat-tagħlim.

Għalhekk, għandna nistinkaw biex nikkultivaw memorja tajba fil-livell tas-sistema, li tgħin biex ittejjeb il-memorja tagħna u r-rata ta 'suċċess. Nistgħu niżviluppaw drawwiet tajbin billi nimxu f'direzzjoni pożittiva u nagħmluhom sodi fil-ħajja tagħna ta' kuljum, u b'hekk niffurmaw attitudni pożittiva u proattiva biex issolvi l-problemi. B'dan il-mod, nistgħu nużaw aħjar il-memorja fil-livell tas-sistema biex intejbu l-memorja tagħna u l-abbiltajiet ta 'tagħlim. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche deserticola jista' jtejjeb b'mod sinifikanti l-memorja minħabba li Cistanche deserticola huwa materjal mediċinali tradizzjonali Ċiniż li għandu ħafna effetti uniċi, li wieħed minnhom huwa li jtejjeb il-memorja. L-effikaċja tal-laħam ikkapuljat ġejja mid-diversi ingredjenti attivi li fih, inklużi l-aċidu, il-polisakkaridi, il-flavonoids, eċċ. Dawn l-ingredjenti jistgħu jippromwovu s-saħħa tal-moħħ b'diversi modi.

Ikklikkja taf 10 modi biex ittejjeb il-memorja

Il-ġrieden jeħtieġu hippocampus intatt għal tagħlim spazjali "virtwali" u biex jiżviluppaw rappreżentazzjonijiet neokortiċi tal-esperjenzi korrispondenti. Insibu li, filwaqt li ambjent virtwali ġdid la huwa mgħallem u lanqas rappreżentat fil-kortiċi superfiċjali wara ħsara severa lill-ippokampus, memorji li tgħallmu qabel l-operazzjoni u r-rappreżentazzjonijiet korrispondenti tagħhom ta 'ensemble newrali skarsa u mifruxa fil-korticallayers II-III huma preservati, sine qua non tal-konsolidazzjoni tal-memorja. Dawn is-sejbiet jipprovdu tieqa ġdida għal studju futur tal-mekkaniżmi ċellulari tal-konsolidazzjoni tal-memorja.

INTRODUZZJONI

Ħsara lill-formazzjoni ta 'l-ippokampus tfixkel serjament l-akkwist ta' memorja ġdida, ''episodika''.1,2 Dan il-fenomenu jista 'jkun relatat mal-pożizzjoni ta' l-ippokampus fil-quċċata tal-ġerarkija ta 'żoni ta' assoċjazzjoni neokortika, u mal-fatt li n-numru ta ' newroni kortikali jaqbeż ħafna n-numru ta’ konnessjonijiet li jistgħu jiġu appoġġjati minn newron partikolari (Schwindel & McNaughton, 2011, għal reviżjoni). is-sinapsi meħtieġa bejn kwalunkwe żewġ ċelluli neokortiċi attivi arbitrarji x'aktarx ma jeżistux qabel.

In-neocortex jista' jegħleb din il-problema permezz tal-formazzjoni mgħaġġla ta' assoċjazzjonijiet indiretti fost in-newroni attivi tiegħu bħalissa, medjati minn mudell komuni minn fuq għal isfel mill-ippokampus. Skont din il-fehma, kull esperjenza unika tiġġenera mudell korrispondenti uniku u skars fl-ippokampus, li jservi bħala kuntest jew ''indiċi''4-6 għas-sett ta 'korticalneurons attivi bħalissa. Dawn il-mudelli huma uniċi għall-post u n-natura ta 'kull esperjenza (eż. Leutgeb et al.7). Plastiċità assoċjata fil-projezzjonijiet ta' feedback mill-hippocampus (l-''indiċi'') għaċ-ċelloli kortikali attivi korrispondenti (l-''attributi' ') ikun jippermetti l-irkupru sussegwenti tal-attributi tal-memorja.

Għalhekk, għall-inqas inizjalment, il-memorja ssir kodifikata bħala konnessjonijiet bejn l-ippokampus u l-kortiċi, aktar milli fost iċ-ċelloli kortikali direttament. Xi memorji u mgieba mgħallma qatt ma jitilfu d-dipendenza tagħhom fuq hippokampus intatt; madankollu, xi wħud isiru reżistenti maż-żmien għall-ħsara tal-hippocampal,8 li jissuġġerixxi li konnessjonijiet kortiko-kortikali xierqa, biżżejjed biex jissostitwixxu dawk tal-hippocampo-kortikali, jiżviluppaw maż-żmien u jsiru dominanti.

Dan il-proċess jista 'wkoll jakkumpanja l-estrazzjoni ta' l-istruttura mill-memorja fl-għarfien ''semantiku'' tal-kortiċi, 9–15 li ġeneralment jibqa 'ħajja hippocampalloss. Filwaqt li kien hemm ħafna studju tad-dinamika tal-imġieba u tal-espressjoni tal-ġeni ta 'dan il-proċess ta' konsolidazzjoni tal-memorja, kien hemm ftit investigazzjoni fil-livell ta 'kodifikazzjoni ċellulari dwar in-natura u l-post ta' tali rappreżentazzjonijiet tal-memorja indipendenti mill-hippocampus fil-kortiċi.

Studji reċenti wrew li, waqt traversals ta 'sekwenza ta' postijiet (jew reali jew virtwali), korticalneurons, speċjalment fil-kortiċi superfiċjali, jiżviluppaw sekwenzi skarsi, korrelatati mal-pożizzjoni ta 'attività newrali, 16-19 ħafna bħal fil-hippocampus.

Fil-ġrieden intatti, ċelluli korrelatati mal-pożizzjoni joħorġu fil-kortiċi fi ftit sessjonijiet f'''ambjent'' virtwali ġdid, li jikkonsisti f'ċinturin tat-treadmill b'sinjali ''spazjali'' mehmuża,20 iżda jiżviluppaw ħażin fil-ġrieden b'leżjonijiet tal-hippocampal dorsali. 16,17 Hawnhekk, nuru li rappreżentazzjonijiet superfiċjali tal-kortiċi ta 'ambjent virtwali li tgħallem qabel l-operazzjoni jinżammu wara leżjonijiet tal-ippocampal, bħalma hija l-memorja spazjali korrispondenti, filwaqt li l-istess ġrieden la jitgħallmu ambjent ġdid wara l-operazzjoni u lanqas jirrappreżentawh bħala ċelluli korrelatati mal-pożizzjoni. fil-kortiċi superfiċjali.

RIŻULTATI

Immaġini b'żewġ fotoni Ca2+ intużaw biex jirreġistraw l-attività newrali fil-ġrieden waqt ġiri ffissat bir-ras fuq ċinturini tat-treadmill li fihom diversi indikazzjonijiet viżuo-mess (Figura 1; Metodi STAR), qabel u wara leżjonijiet bilaterali tal-ippokampus dorsali. L-annimali ġew ittestjati fuq l-istess ċinturin ''familjari'' qabel u wara l-ippocampallesions (jew kirurġiji sham). Ċinturini ''Novelli'' b'settijiet ta' cue differenti ġew impjegati għall-perjodi ta' qabel u ta' wara l-operazzjoni (leżjoni/sham) wara (ri) familjarità maċ-ċinturin ''familjari''. Intraċċajna l-attività newronali fi tliet oqsma neokortiċi: kortiċi retrosplenjali (RSC), kortiċi tal-muturi sekondarji u kortiċi somatosensorji primarji.

Il-leżjoni tal-ippokampju tikkawża amnesija anterograda iżda mhux retrograda għal postijiet ta' premju ambjenti spazjali invirtwali

Kull ċinturin kellu post virtwali partikolari fejn ingħata l-premju tal-ilma (Figura 1C). Qabel l-operazzjoni, iż-żewġ gruppi esprimew imġieba simili kemm f'ambjenti familjari kif ukoll ġodda Figura S2. Il-veloċitajiet ta' ġiri ta' wara l-operazzjoni fiċ-ċinturini familjari u ġodda kienu wkoll simili bejn il-gruppi ta' sham u ta' leżjonijiet. xellug); madankollu, id-distribuzzjonijiet tal-licks fl-ambjent ġdid kienu differenti b'mod sinifikanti bejn il-gruppi.

Għall-grupp sham, proporzjon kbir ta 'licks kienu kkonċentrati fis-sit tal-premju kemm f'ambjenti familjari kif ukoll ġodda. L-istess imġieba kienet esebita mill-grupp ta 'leżjoni fl-ambjent familjari; madankollu, fl-ambjent ġdid, il-ġrieden feruti kienu l-aktar barra miż-żona tal-premju. (Figura 2-nofs, lemin). Għalhekk, il-memorja pre-operattiva nżammet, iżda t-tagħlim fl-ambjent ġdid kien imfixkel serjament. Din hija l-karatteristika li tiddefinixxi l-kunċett tal-konsolidazzjoni tal-memorja.

In-newroni kortikali jippreservaw il-kodifikazzjoni ta' ambjent spazjali familjari wara l-ippocampallesion, iżda l-kodifikazzjoni ta' ambjent ġdid tonqos milli tifforma

Aħna użajna kriterji relattivament liberali (ara l-Metodi STAR) biex nikkategorizzaw iċ-ċelloli bħala ''spazjalment selettivi'' u biex niddefinixxu ċelloli' ''post fields''. B'mod ġenerali, ma kien hemm l-ebda differenzi bejn il-gruppi (leżjoni vs sham) jew bejn l-ambjent (F, N) fi kwalunkwe mit-tliet reġjuni kortikali fil-proporzjon ta 'ċelluli li għaddew mill-limitu tas-selettività, li kien b'mod ġenerali madwar 40% b'dawn il-kriterji liberali (Figura S3A). Madankollu, għall-novelenvironment, iċ-ċelloli li jissodisfaw il-kriterji ta 'selettività kienu b'mod ġenerali ħafna inqas selettivi spazjalment u kollettivament iffurmaw kodifikazzjoni tal-popolazzjoni inqas uniformi taċ-ċinturin fil-grupp tal-leżjoni (Figuri 3A u 3B). Din id-differenza kienet assoċjata ma 'żieda fil-proporzjonijiet ta' ċelluli tal-grupp ta 'leżjoni b'oqsma ta' post multipli, minflok waħda waħda (Figura S3B).

L-emerġenza tal-kodifikazzjoni tal-pożizzjoni kortikali tas-saff II-III ġiet ikkwantifikata bl-użu ta 'miżuri ta' kontenut ta 'informazzjoni spazjali fuq bażi għal kull newron21 għaċ-ċelloli kollha li jgħaddu mil-limitu ta' selettività spazjali. Xi tinsa kienet mistennija fil-30-jum waqfa bejn l-aħħar sessjoni ta’ qabel il-leżjoni/sham u l-ewwel sessjonijiet ta’ wara l-operazzjoni. Tabilħaqq, kien hemm degradazzjoni (jinsa) dipendenti fuq il-ħin tal-kontenut ta’ informazzjoni spazjali fl-ambjent familjari ; madankollu, il-memorja familjari rkuprat matul sessjonijiet kemm fil-ġrieden tal-leżjoni kif ukoll tal-ġrieden finti, mingħajr differenza bejn il-gruppi (Figura 3C-top). Il-ġrieden finti wrew akkwist normali tar-rappreżentazzjoni kortikali tal-ambjent ġdid (Belt 3); madankollu, il-grupp tal-leżjoni wera ftit li xejn informazzjoni spazjali fl-ambjent ġdid f'RSC (Figura 3C-qiegħ). Fir-reġjuni kortikali kollha, il-kontenut ta 'informazzjoni spazjali tan-newroni kien simili bejn sham u leżjoni għall-ambjent familjari, filwaqt li din il-kwantità kienet ridotta b'mod sinifikanti fil-grupp ta' leżjoni għall-ambjent ġdid (Figuri 3D u 3E).

Aħna kkwantifikajna l-affidabbiltà tal-kodifikazzjoni spazjali fil-livell tal-popolazzjoni billi kkalkulajna l-iżball tad-dekodifikazzjoni dawra b'pożizzjoni, bl-użu ta 'decoder Bayesian (Metodi STAR). Matul il-fażi ta 'wara l-operazzjoni, id-distribuzzjoni tal-pożizzjoni dekodifikata bħala funzjoni tal-post tal-annimal tindika li d-decoder mill-grupp tal-leżjoni fl-ambjent ġdid jagħti stima inqas preċiża tal-pożizzjoni (Figura 4A). Kien hemm żieda sostanzjali (2 x) fl-iżball tad-dekodifikazzjoni fl-ambjent ġdid fit-tliet reġjuni kortikali kollha, fil-grupp tal-leżjoni, iżda mhux fil-grupp ta 'sham, u xejn fl-ambjent familjari fi kwalunkwe grupp (Figura 4B).

DISKUSSJONI

B'mod ġenerali, filwaqt li l-leżjonijiet tal-ippocampal imfixkla b'mod sever l-emerġenza ta' ċelluli korrelatati mal-pożizzjoni li jirrappreżentaw ambjent virtwali ġdid, u bl-istess mod imfixkla t-tagħlim spazjali f'dak il-kuntest ġdid, ir-rappreżentazzjoni ta' ambjent familjari espost qabel l-operazzjoni u l-memorja għall-post tal-premju f'dak l-ambjent ġew meħlusa. . L-attività tal-isparar selettiva spazjalment tal-ġrieden feruti fl-ambjent ġdid kienet preġudikata lejn l-isparar fil-viċinanza tal-indikazzjonijiet ewlenin. Risposti mhux selettivi jew dgħajjef selettivi fil-indikazzjonijiet ewlenin kienu komuni fil-ġrieden feruti fl-ambjenti ġodda, li taw lok għal oqsma multipli ''post'', li setgħu kkontribwew għall-iżball ogħla ta 'dekodifikazzjoni spazjali.

Il-leżjonijiet infushom għamlu ħsara lil 50% jew aktar tal-ippokampus dorsali, iżda ħallew l-ippokampus ventrali fil-biċċa l-kbira intatt (Figura 1E). Għalhekk, ma nistgħux nikkonkludu li l-memorja ppreservata kienet kompletament indipendenti mill-ħruġ tal-ippocampus22 għalkemm ħafna studji juru li huwa l-ippokampus dorsali li huwa predominantement meħtieġ għat-tagħlim spazjali23,24 u li l-output tiegħu huwa ffukat fuq il-kortiċi retrosplenjali.25-28 Iż-żewġ gruppi wrew tnaqqis. fl-irfinar spazjali għall-ambjent familjari matul l-intervall ta' 30-ġurnata bejn l-aħħar prova ta' qabel il-leżjoni/sham u l-ewwel prova ta' wara l-leżjoni/sham. Mhux magħruf jekk dan kienx minħabba l-mogħdija tal-ħin jew il-proċedura kirurġika (eż. anestesija); madankollu, dawn id-dinamiċi jindikaw li xi traċċa tal-kodifikazzjoni preċedenti ġiet ippreservata, filwaqt li kodifikazzjoni ġdida kienet imfixkla. Spjegazzjoni waħda possibbli għat-tnaqqis fl-irfinar spazjali matul it-30 jum hija li l-ippokampus intatt jippermetti l-formazzjoni ta’ konnessjonijiet sinaptiċi ġodda fil-kortiċi li jistgħu jitilfu l-effikaċja maż-żmien iżda jippersistu fiżikament sabiex ikunu jistgħu jerġgħu jiġu ppotenzjati mal-espożizzjoni mill-ġdid għall- ambjent familjari.

Spjegazzjoni oħra hija li l-kodifikazzjoni hija ppreservata f'saffi aktar profondi tal-kortiċi, li ma kinux aċċessibbli għall-immaġini f'dawn l-istudji. Huwa magħruf sew li l-espożizzjoni mill-ġdid għal ambjent familjari mhijiex essenzjali biex iseħħu proċessi ta' konsolidazzjoni tal-memorja; jistgħu jseħħu wkoll matul perjodi ''offline'' bħal slow-wavesleep.4 Madankollu, l-irkupru ta 'proċessi konsolidati jista' jeħtieġ espożizzjoni mill-ġdid fl-assenza tal-hippocampus.

B'mod ġenerali, ir-riżultati preżenti juru li hippokampus intatt jippermetti lill-kortiċi superfiċjali tiżviluppa rappreżentazzjonijiet skarsi u selettivi tal-esperjenza li tkun f'postijiet partikolari taħt imġiba u kuntest sensorju partikolari u li dawn il-kodiċi newrali emerġenti jippersistu wara ħsara lill-ippokampju biżżejjed biex jipprevjenu tagħlim ġdid fil- livelli newrali u komportamentali taħt kundizzjonijiet simili. Dawn is-sejbiet jipprovdu qafas ġdid li fih jiġu studjati l-pedamenti ċellulari u molekulari ta 'memorja fit-tul, indipendenti mill-ippokampus.

Limitazzjonijiet ta' l-istudju

Minħabba d-daqs limitat tal-kampjun, żona kortikali waħda biss minn tliet reġjuni ta’ interess tista’ tiġi vvalutata b’qawwa statistika raġonevoli matul il-fażijiet ta’ espożizzjoni/espożizzjoni mill-ġdid tal-esperimenti, fuq ġranet ta’ reġistrazzjoni suċċessivi. Għażilna l-kortiċi retrosplenjali b'konsiderazzjoni tal-fatt li jirċievi projezzjonijiet diretti mill-ippocampus dorsali.25-28 Aħna osservajna li wara l-leżjoni tal-ippokamp, ​​ir-rappreżentazzjoni neuronal ta 'ambjent familjari fil-kortiċi retrosplenjali terġa' tinkiseb gradwalment b'espożizzjonijiet ripetuti. Madankollu, dan ma jeskludix il-fatt li żoni kortikali oħra jistgħu jirkupraw b'rata aktar mgħaġġla. Barra minn hekk, skambji bejn reġjuni mqassma jistgħu jikkontribwixxu għal dan l-irkupru, li ma jistax jiġi ddeterminat sakemm żewġ reġjuni jew aktar ma jiġux evalwati simultanjament. Kif it-traċċi tal-memorja spazjali huma ppreservati u ''erġa' potenzjalment'' f'żoni kortikali differenti, wara t-telf tal-ippokampju, għalhekk għad irid jiġi determinat.

RIKONOXXIMENTI

Nirringrazzjaw lil Dr M. Mohajerani għas-superviżjoni/amministrazzjoni tal-mikroskopju u l-faċilitajiet tat-trobbija tal-annimali, Jennifer Tarnowsky għall-appoġġ loġistika, Valerie Lapointe u Karim Ali għall-appoġġ tekniku, u WestGrid u Compute Canada għall-appoġġ tal-IT. BLM jirrikonoxxi finanzjament mill-NIH Research ProjectGrant Programme (R01) [nru. NS121764], Aġenzija ta 'Proġetti ta' Riċerka Avvanzata tad-Difiża (DARPA) [nru. HR0011-18-2-0021], Kunsill tar-Riċerka tax-Xjenzi Naturali u l-Inġinerija tal-Kanada (NSERC) [nru. 1631465], u l-Istituti Kanadiżi tar-Riċerka tas-Saħħa (CIHR) [nru. PJT 156040]. HC huwa appoġġjat mill-Boroż ta' Studju tal-Gradwati tal-Kanada għall-Programm ta' Dottorat (NSERC CGS-D).

KONTRIBUZZJONIJIET TA' L-AWTUR

IME u BLM ikkonċettwaw l-esperiment. IME u ARN wettqu l-esperimenti u ġabru d-dejta. IME, HC, u BLM analizzaw u interpretaw id-dejta. IME, HC, u BLM kitbu l-manuskritt, li l-awturi kollha għenu biex jirrevedu.

DIKJARAZZJONI TA' INTERESSI

L-awturi jiddikjaraw li m'għandhom l-ebda interessi li jikkompetu.

REFERENZI

1. Scoville, WB, u Milner, B. (1957). Telf tal-memorja riċenti wara leżjonijiet bilaterali ippokampali. J. Neurol. Neurosurg.Psikjatrija 20, 11–21.https://doi.org/10.1136/jnnp.20.1.11.

2. Yonelinas, AP, Kroll, NEA, Quamme,JR, Lazzara, MM, Sauve´, MJ, Widaman,KF, u Knight, RT (2002). Effetti ta' ħsara estensiva fil-lobu temporali jew ipossija ħafifa fuq it-tifkira u l-familjarità. Nat.Neurosci. 5, 1236–1241.https://doi.org/10.1038/nn961.

3. Schwindel, CD, u McNaughton, BL(2011). Interazzjonijiet ippocampali-kortikali u d-dinamika tat-traċerattivazzjoni tal-memorja. Prog. Brain Res. 193, 163–177.https://doi.org/10.1016/B978-0-444-53839-0.00011-9.

4. McNaughton, BL (2010). Ġerarkiji kortikali, irqad, u l-estrazzjoni tal-għarfien mill-memorja. Artif. Intell. 174,205–214.https://doi.org/10.1016/j.artint.2009.11.013.

5. Teyler, TJ, u DiScenna, P. (1986). It-teorija tal-indiċjar tal-memorja tal-ippocamp. Newrosci. 100, 147–154. https://doi.org/10.1037/0735-7044.100.2.147.6. Teyler, TJ, u Rudy, JW (2007). It-teorija tal-indiċjar tal-hippocampal u l-memorja episodika: aġġornament tal-indiċi. Hippokampus17, 1158–1169.https://doi.org/10.1002/hipo.20350.

7. Leutgeb, S., Leutgeb, JK, Barnes, CA,Moser, EI, McNaughton, BL, u Moser,M.-B. (2005). Kodiċijiet indipendenti għall-memorja spazjali u episodika f'ensembles hippocampalneuronal.... Xjenza 309, 619–623.https://doi.org/10.1126/science.1114037.

8. Sutherland, RJ, u Lehmann, H. (2011) .Kunċepimenti alternattivi ta 'konsolidazzjoni tal-memorja u r-rwol tal-hippocampus fil-livell tas-sistemi f'annimali gerriema.Curr. Opinja. Neurobiol. 21, 446–451.https://doi.org/10.1016/j.conb.2011.04.007.

9. Frankland, PW, u Bontempi, B. (2005). L-organizzazzjoni ta' memorji riċenti u remoti.Nat. Dun Neurosci. 6, 119–130. https://doi.org/10.1038/nrn1607.10. Marr, D. (1970). Teorija għall-cerebraneocortex. Proc. R. Soc. Londra. B Biol. Sci. 176,161–234.

For more information:1950477648nn@gmail.com