Ottimizzazzjoni U Effetti ta' Titjib ta' Irqad Ta' Estratt tax-Xarba Congrong–Zaoren–Wumei fil-ġrieden

2 Riżultati u Analiżi

2.1 Ottimizzazzjoni tal-Proċess ta' Preparazzjoni għall-Estratt tax-Xorb Congrong–Zaoren–Wumei

 

Mill-Figura 1, il-metodu HPLC stabbilit kiseb separazzjoni effettiva bejn il-qċaċet kromatografiċi tal-erba 'komposti ta' referenza - aċidu ċitriku, echinacoside, verbascoside, u spinosin - u l-qċaċet adjaċenti. Il-ħinijiet ta' żamma kienu tR1=9.0 min, tR2=21.6 min, tR3=24.3 min, u tR4=25.9 min, rispettivament. Rigressjonijiet lineari tal-ogħla żona kontra l-konċentrazzjoni tal-analite taw firxiet lineari ta '12.12-2016, 0.14-110, 0.18-112.50, u 2.44-18.30 µg·mL-1, b'valuri R2 ta' 0.9998, 11, eċċellenti li jindikaw lineari1, lineari u 1. Taħt dawn il-kundizzjonijiet, il-limiti ta’ skoperta (LOD) għall-aċidu ċitriku, echinacoside, verbascoside u spinosin kienu 3.636, 0.045144, 0.058, u 0.7564 µg·mL-1, u l-limiti ta’ kwantifikazzjoni (LOQ) kienu 12.12, 0.14, 0.14, u 0.14, u 0.14. µg·mL–1, rispettivament. It-testijiet ta 'preċiżjoni wrew RSDs ta' 0.10%, 0.07%, 0.06%, u 0.33% għall-erba 'analiti, li jindikaw preċiżjoni tajba tal-istrument. L-istabbiltà fuq 0-12-il siegħa kienet tajba, b'RSDs ta '0.78%, 0.16%, 0.20%, u 1.46%. It-testijiet ta 'ripetibbiltà pproduċew RSDs ta' 0.51%, 0.42%, 0.37%, u 0.38% għall-analiti, li juru ripetibbiltà tajba. It-testijiet ta 'spike-irkupru urew irkupri medji ta' 97.42%, 103.32%, 98.90%, u 99.71%, b'RSDs ta '0.70%, 0.52%, 1.05%, u 0.63%, rispettivament. Għalhekk, il-metodu HPLC stabbilit għad-determinazzjoni simultanja ta 'dawn l-erba' komponenti ewlenin huwa preċiż u affidabbli, adattat għal analiżi ta 'ottimizzazzjoni tal-proċess sussegwenti.

 

 

 

 

Fig.1 Kromatogrammi HPLC tar-referenza u s-soluzzjonijiet f’tul ta’ mewġ ta’ 210 nm (A) u tul ta’ mewġ ta’ 330 nm (B u Ċ)

 

Fl-evalwazzjoni metodoloġika tal-polisakkaridi mhux raffinati, il-LOD kien 0.098 µg·mL–1. Il-valuri OD ta 'solvent blank u kontroll vojt f'485 nm ma wrew l-ebda tibdil evidenti, li jindika speċifiċità tajba. Ir-rigressjoni lineari ta 'OD kontra l-konċentrazzjoni tat R2=0.9997, li tindika linearità eċċellenti. L-RSD għal sitt kejl konsekuttivi kien 0.47%, li juri preċiżjoni tajba. L-RSD għall-kontenut tal-polisakkarid fi żmien 12-il siegħa kien 0.44%, li jindika stabbiltà tajba. L-RSD fuq sitt kampjuni ppreparati b'mod indipendenti kien 2.51%, li jindika ripetibbiltà tajba. Għalhekk, il-metodu huwa adattat għall-kwantifikazzjoni tal-polisakkaridi mhux raffinati waqt l-ottimizzazzjoni tal-proċess.

 

 

Cistanche Roucongrong jibbenefika fil-Ktieb Antik

Ikklikkja għal aktar dettalji

Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-Għal aktar dettalji dwar il-kooperazzjoni
Email:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

2.1.2 Riżultati ta' Investigazzjonijiet ta' Fattur Uniku

Bl-użu tal-metodu HPLC stabbilit flimkien mal-assaġġ tal-polysaccharide, u filwaqt li l-kontenut ta 'aċidu ċitriku, echinacoside, verbascoside, spinosin, u polysaccharides fl-estratt bħala indiċi ta' evalwazzjoni, twettqu investigazzjonijiet b'fattur wieħed fuq it-temperatura tal-estrazzjoni, il-proporzjon solidu-likwidu, u l-ħin tal-estrazzjoni biex isostnu d-disinn ortogonali.

F'temperaturi ta 'estrazzjoni ta' 60, 80, u 100 grad, il-kontenut ta 'aċidu ċitriku, echinacoside, verbascoside, spinosin, u polisakkaridi mhux raffinati fl-estratti żdiedu mat-temperatura.

Fi proporzjonijiet solidu-likwidu ta '1:3, 1:5, 1:7, 1:10, u 1:12 (g·mL-1), il-kontenuti ta' aċidu ċitriku, spinosin, u polisakkaridi mhux raffinati żdiedu bi proporzjonijiet ogħla; echinacoside u verbascoside laħqu l-quċċata f'1:10 (g·mL–1) u naqsu f'1:12 (g·mL–1). Madankollu, il-kontenut totali tal-komponenti kollha tal-markatur żdied bil-proporzjon solidu-likwidu.

F'ħinijiet ta 'estrazzjoni ta' 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, u 3.0 sigħat, il-kontenut ta 'analytes individwali varja b'mod differenti, iżda l-kontenut totali tal-komponenti tal-markatur żdied biż-żmien.

Dejta dettaljata hija pprovduta fil-Materjali Supplimentari. Meta wieħed iqis il-prattiċità industrijali (li tiġi evitata estrazzjoni twila eċċessivament), il-fatturi u l-livelli għad-disinn ortogonali ġew stabbiliti bħal fit-Tabella 2, u l-iskema ortogonali tidher fit-Tabella 3.

Tabella 2. Livelli ta' fatturi ta' disinn sperimentali ortogonali għall-metodu ta' estrazzjoni tax-xarba Congrong–Zaoren–Wumei

Fatturi:

A: Temperatura ta 'estrazzjoni (grad)

B: Proporzjon solidu-likwidu (g mL-1)

C: Ħin ta' estrazzjoni (h)

Livell	A: Temperatura (grad)	B: Proporzjon (g mL–1)	C: Ħin (h)
1	60	1:7	1.0
2	80	1:10	1.5
3	100	1:12	2.0

2.1.3 Riżultati tad-Disinn Ortogonali

L-estrazzjoni saret skont il-firxa ortogonali. Il-kontenuti ta 'aċidu ċitriku, echinacoside, verbascoside, spinosin, u polisakkaridi mhux raffinati huma murija f'Tabella 3. Ibbażat fuq analiżi tal-firxa (R), l-ordni tal-influwenza tal-fattur fuq il-kontenut totali tal-markatur kien A > B > C, jiġifieri, temperatura ta 'estrazzjoni > proporzjon solidu-likwidu > ħin ta' estrazzjoni. It-tqabbil tal-valuri k issuġġerixxa l-aħjar kombinazzjoni A3B3C3: temperatura ta 'estrazzjoni 100 grad, proporzjon solidu-likwidu 1:12 (g·mL-1), u ħin ta' estrazzjoni 2 h. ANOVA (Tabella 4) indikat li t-temperatura tal-estrazzjoni kellha effett sinifikanti fuq il-kontenut totali tal-markatur, filwaqt li l-effetti tal-proporzjon solidu-likwidu u l-ħin ma kinux sinifikanti.

Tabella 3. Disinn sperimentali ortogonali u kontenut imkejjel tal-komponenti tax-Xarba Congrong–Zaoren–Wumei (mg g–1)

Fatturi: A (temperatura), B (proporzjon solidu-likwidu), C (ħin)

Prova Nru.	A	B	C	Markers totali	Aċidu ċitriku	Spinosin	Echinacoside	Verbascoside	Polisakkaridi mhux raffinati
1	3	3	1	116.71	75.55	4.08	1.62	0.48	34.98
2	1	2	3	70.98	59.01	2.60	0.80	0.36	8.22
3	3	1	3	117.86	73.87	3.53	1.21	0.45	38.80
4	1	3	2	72.55	59.73	2.37	0.94	0.41	9.99
5	2	3	3	83.64	63.20	2.15	1.08	0.44	16.77
6	2	1	2	117.76	74.09	2.58	1.37	0.48	39.24
7	2	2	1	110.74	70.96	2.36	1.07	0.43	35.92
8	2	1	1	69.63	58.37	1.74	0.54	0.34	8.65
9	1	1	3	69.66	58.14	2.48	0.86	0.36	7.83

K statistika (somma tat-totali għal kull livell ta' fattur)

K1: A = 71.06, B = 85.72, C = 85.49

K2: A = 74.46, B = 86.29, C = 86.65

K3: A = 117.44, B = 90.97, C = 90.83

Medda R: A=46.38, B=5.25, C=4.19

2.1.4 Validazzjoni u Skala-Up

Il-validazzjoni tal-proċess taħt il-kundizzjonijiet ottimali tat kontenut totali medju ta 'komponenti ta' markatur ta '119.74 mg·g–1 b'RSD 0.57%, li jindika stabbiltà u affidabilità. Il-prova ta 'scale-up taħt l-istess kundizzjonijiet ipproduċiet kontenut ta' markatur totali medju ta '120.89 mg·g-1 b'RSD 0.95%, konsistenti mar-riżultati ta' qabel l-iskala, li kkonfermat aktar ir-robustezza. Kampjuni mit-tliet lottijiet li jiżdiedu ntużaw għal studji sussegwenti relatati mal-irqad; il-kontenut medju tagħhom kien: aċidu ċitriku 77.73 mg·g-1, echinacoside 2.69 mg·g-1, verbascoside 1.03 mg·g-1, spinosin 0.50 mg·g-1, u polysaccharides 38.93 mg·g-1.

Tabella 4. Analiżi tal-varjanza minn esperimenti ortogonali

Fattur	Somma ta' kwadri	df	Kwadru medju	F	P
Temperatura ta 'estrazzjoni	4010.50	2	2005.25	116.26	0.01
Proporzjon solidu-likwidu	49.79	2	24.90	1.44	0.41
Ħin ta' estrazzjoni	47.37	2	23.68	1.37	0.42

Liu et al. [16] estrazzjoni milwiema ottimizzata ta 'phenylethanoid glycosides minn Cistanche tubulosa u identifikat 1:15 (g·mL-1), 80 grad, u 2 h bħala ottimali; phenylethanoid glycoside kontenut naqas 'il fuq minn 90 grad. Fl-istudju preżenti, il-kontenut ta 'echinacoside u verbascoside laħaq proporzjon ta' 1:10 (g·mL-1) u naqas f'1:12 (g·mL-1), iżda żdied b'temperaturi ta '60, 80, u 100 grad. Din id-diskrepanza tista 'tkun relatata mal-użu ta' Cistanche deserticola (deżert Cistanche) fix-xarba tagħna u ma 'effetti matriċi minn Suanzaoren u Wumei koeżistenti li jistgħu jinfluwenzaw id-dissoluzzjoni ta' phenylethanoid glycoside.

Tabella 5. Effett tal-estratt tax-xarba Congrong–Zaoren–Wumei fuq irqad dirett fil-ġrieden (n=12)

Grupp	Annimali totali	Annimali irqad	Rata ta' sleep (%)
Blank	12	0	0
Estazolam	12	0	0
Estratt b'doża baxxa	12	0	0
Estratt ta' doża medja	12	0	0
Estratt b'doża għolja	12	0	0

Fil-qosor, bl-użu tal-HPLC u l-metodu tal-aċidu fenol-sulfuriku, ottimizzajna l-proċess ta 'estrazzjoni bbażat fuq il-kontenut ta' aċidu ċitriku, echinacoside, verbascoside, spinosin u polysaccharides. Esperimenti b'fattur wieħed u ortogonali segwiti minn validazzjoni stabbilixxew l-aħjar kundizzjonijiet: 100 grad, proporzjon solidu-likwidu 1:12 (g·mL-1), u ħin ta 'estrazzjoni ta' 2 h, li jipprovdu referenza għal żvilupp industrijali futur.

Industrialization context: WECISTANCHE (Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd., established 2003) operates a vertically integrated cistanche supply chain with seed-breeding bases (~20,000 acres), cultivation bases (>85,000 acres), kapaċità ta 'ħażna frisk-cistanche (~ 15,000 tunnellata), u workshops tal-manifattura ċertifikati GMP (cleanrooms ta' 100,000 klassi) mgħammra b'ultrafiltrazzjoni u nanofiltrazzjoni avvanzati għall-purifikazzjoni u l-konċentrazzjoni, flimkien ma 'laboratorju tal-mikrobijoloġija ta' 10,000 klassi. Iċ-ċertifikazzjonijiet jinkludu ċ-Ċina SC, HACCP, u programmi organiċi (eż., NOP). Din l-infrastruttura tappoġġja t-traduzzjoni diretta tal-protokoll ottimizzat tal-estrazzjoni akwea u l-istandardizzazzjoni tal-marker għal produzzjoni fuq skala kbira u konformi mal-esportazzjoni ta’ xorb u estratti funzjonali.

Tabella 6. Effett tal-estratt fuq l-effett ipnotiku tas-subthreshold sodium pentobarbital fil-ġrieden (x̄ ± s, n=12)

Grupp	Annimali totali	Annimali irqad	Rata ta' sleep (%)
Blank	12	1	8.33
Estazolam	12	10	83.33**
Estratt b'doża baxxa	12	4	33.33
Estratt ta' doża medja	12	5	41.67
Estratt b'doża għolja	12	6	50.00*

Nota: Meta mqabbel mal-grupp vojt, * P < 0.05; ** P < 0.001.

 

2.2 Effetti tal-Estratt fuq l-Imġieba tal-Maws u l-Irqad

2.2.1 Irqad Dirett

Kif muri fit-Tabella 5, wara 30 jum ta 'amministrazzjoni kontinwa, ġrieden fil-grupp ta' estazolam u fil-gruppi ta 'estratt ta' doża baxxa / medja / għolja ma wrewx irqad ovvju fi żmien 20 minuta wara d-doża finali, mingħajr differenzi sinifikanti kontra l-grupp vojt. Dan jindika l-ebda effett dirett li jinduċi l-irqad wara 30 jum ta 'amministrazzjoni ta' estratt.

 

2.2.2 Effetti tal-Imġieba

Test fuq il-post miftuħ evalwa effetti li jixbħu sedattivi. L-impatti fuq id-distanza totali vvjaġġata u l-entrati taċ-ċentru huma murija fil-Figura 2. Meta mqabbel mal-grupp vojt, estazolam żied id-distanza totali u d-dħul taċ-ċentru b'14.48% u 31.07%, rispettivament, mingħajr sinifikat statistiku. L-estratt b'doża baxxa żied b'mod sinifikanti d-distanza totali b'25.10% (P <0.05) u żied b'mod mhux sinifikanti l-entrati taċ-ċentru b'50.93%. Id-doża medja żiedet b'mod sinifikanti d-distanza totali u d-dħul taċ-ċentru b'27.09% u 72.33% (P <0.05). Id-doża għolja żiedet id-distanza totali u d-dħul taċ-ċentru bi 15.60% u 40.78%, rispettivament, mingħajr sinifikat. Versus estazolam, id-dożi baxxi/medji/għoli żiedu d-distanza totali b'1.73, 1.87, u 1.07 darbiet, u l-entrati taċ-ċentru b'1.64, 2.33, u 1.31 darbiet, rispettivament, xejn sinifikanti. Dawn ir-riżultati jindikaw li l-estratt naqqas imġieba bħal ansjetà fil-qasam miftuħ wara 30 jum, li jissuġġerixxi effett sedattiv.

2.2.3 Irqad Ikkaġunat mill-Pentobarbital tas-Sodju Sottolimitu

Kif muri fit-Tabella 6, meta mqabbel mal-grupp vojt, estazolam u t-tliet dożi tal-estratt żiedu r-rata ta 'rqad taħt doża taħt il-limitu ta' sodium pentobarbital. Estazolam żied in-numru ta' annimali irqad b'9 darbiet meta mqabbel mal-vojt (P <0.001). Gruppi ta 'estratt ta' doża baxxa, medja u għolja żiedu l-annimali ta 'l-irqad bi 3-, 4-, u 5 darbiet, rispettivament; id-doża għolja biss laħqet sinifikat statistiku (P < 0.05). Meta mqabbel ma 'estazolam, l-ebda waħda mid-dożi ta' estratt ma wriet effett aktar qawwi li jinduċi l-irqad. Għalhekk, l-estratt jista 'jtejjeb l-irqad indott minn subthreshold sodium pentobarbital sa ċertu punt.

 

2.2.4 Sodium Pentobarbital Sleep Latency

Meta mqabbel mal-grupp vojt, estazolam u t-tliet dożi tal-estratt qassru b'mod sinifikanti l-latenza tal-irqad indotta minn pentobarbital (P <0.001). Estazolam naqqas il-latenza bi 58.44% (P <0.001). Il-gruppi ta 'estratt ta' doża baxxa, medja u għolja naqqsu l-latency b'29.59%, 31.42%, u 53.83% (kollha P <0.001), rispettivament. Ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti bejn dożi baxxi u medji; id-doża għolja naqset b'mod sinifikanti l-latenza meta mqabbla ma 'dożi kemm baxxi kif ukoll medji b'34.43% u 32.69% (P <0.01), b'effett simili għal estazolam (Tabella 7). Għalhekk, it-tliet dożi kollha qassru b'mod sinifikanti l-latenza ta 'rqad indotta minn pentobarbital, bid-doża għolja tagħmel l-aħjar.

Il-mediċini tradizzjonali Ċiniżi fihom kostitwenti bijoattivi varji li jaġixxu fuq miri multipli, li joffru vantaġġi uniċi għat-trattament ta’ nuqqas ta’ rqad [17]. B'attenzjoni dejjem tikber għall-kwistjonijiet tal-irqad, it-TCMs mediċinali li jittieklu huma dejjem aktar investigati għall-modulazzjoni tal-irqad [18]. Pereżempju, xarba solida komposta li tinkludi prinċipalment Suanzaoren u Poria tqassar b'mod sinifikanti l-latenza ta 'rqad indotta minn pentobarbital u tul ta' żmien ta 'rqad fit-tul fil-ġrieden, potenzjalment permezz ta' bidliet f'5-HT, DA u GABA [19]. Hawnhekk, l-estratt żied b'mod sinifikanti l-irqad taħt il-pentobarbital subthreshold u qassar il-latenza ta 'rqad indotta minn pentobarbital, ippromwovi l-bidu ta' l-irqad u jonqos il-latenza, filwaqt li ma wera l-ebda effett dirett li jinduċi l-irqad. Il-kontenuti tal-komponent primarju mkejla kienu, f'ordni dixxendenti: aċidu ċitriku (77.73 mg·g-1), polysaccharides (38.93 mg·g-1), echinacoside (2.69 mg·g-1), verbascoside (1.03 mg·g-1), u spinosin (0.50 mg·g-1). Spinosin intwera li jtejjeb l-irqad indott minn pentobarbital; jista 'jżid l-irqad mhux REM u jbiddel l-espressjoni ta' c-Fos f'reġjuni regolatorji tal-moħħ tal-irqad-qawmien [20], jnaqqas l-insomnja kkaġunata mill-PCPA, inaqqas il-latenza tal-irqad u jtawwal l-irqad [21]. Verbascoside irrapporta attivitajiet ansjolitiċi, ipnotiċi u rilassanti tal-muskoli [22]. B'kuntrast, il-kostitwenti ewlenin-aċidu ċitriku, polysaccharides (minn Cistanche, Suanzaoren, u Wumei), u echinacoside-għandhom inqas rapporti diretti dwar it-titjib tal-irqad; madankollu, riċerka reċenti dwar polisakkaridi TCM (eż., Acanthopanax senticosus polysaccharides) tissuġġerixxi benefiċċji potenzjali għall-irqad permezz ta' mogħdijiet bħal SIRT1/PGC-1 [23]. Għalhekk, ir-rwoli ta 'aċidu ċitriku, polysaccharides, u echinacoside fil-modulazzjoni ta' l-irqad jiġġustifikaw aktar studju.

 

kapaċi 7. Effett tal-estratt fuq il-latenza tal-irqad indotta mis-sodium pentobarbital fil-ġrieden (x̄ ± s, n=12)

Grupp	Annimali totali	Latenza tal-irqad (min)
Blank	12	32.34 ± 4.27
Estazolam	12	13.44 ± 3.20**
Estratt b'doża baxxa	12	22.77 ± 5.81**#
Estratt ta' doża medja	12	22.18 ± 6.05**#
Estratt b'doża għolja	12	14.93 ± 3.35**

Noti:

Meta mqabbel mal-grupp vojt: ** P < 0.0001.

Meta mqabbel ma 'grupp ta' estratt ta 'doża għolja: # P < 0.01.

 

3 Konklużjoni

Bl-użu tat-TCMs mediċinali li jittieklu Cistanche deserticola, Ziziphi Spinosae Semen, u Mume Fructus biex nifformulaw xarba Congrong-Zaoren-Wumei, ottimizzajna l-proċess ta 'preparazzjoni tal-estratt tiegħu billi użaw il-kontenut ta' erba 'komponenti markaturi (echinacoside, verbascoside, spinosin, aċidu ċitriku) u indiċi ta' evalwazzjoni bħala polisakkaridi. L-aħjar kundizzjonijiet ta 'estrazzjoni ġew determinati bħala 100 grad, proporzjon solidu-likwidu ta' 1:12 (g·mL-1), u 2 h, li jipprovdu gwida teoretika għall-produzzjoni industrijali. Evalwazzjoni ulterjuri wriet li l-amministrazzjoni kontinwa ta '30 jum ma kellha l-ebda effett dirett li jinduċi l-irqad fil-ġrieden, iżda naqqset b'mod sinifikanti l-imġieba li tixbah l-ansjetà fit-test fuq il-post miftuħ (li tissuġġerixxi effett sedattiv), tejbet l-irqad taħt doża taħt il-limitu ta' pentobarbital tas-sodju, u tqassar b'mod notevoli latenza ta 'rqad indotta minn pentobarbital. Dawn is-sejbiet jindikaw li l-estratt ippreparat taħt il-proċess ottimizzat juri effetti favorevoli li jtejbu l-irqad fil-ġrieden, li jipprovdu bażi xjentifika għall-iżvilupp ta 'linji ta' prodotti li jtejbu l-irqad ibbażati fuq Cistanche.

Application and manufacturing note: Given the optimized aqueous extraction and the need to standardize to marker profiles (citric acid, echinacoside, verbascoside, spinosin, plus polysaccharides), WECISTANCHE's integrated cistanche value chain and GMP infrastructure-100,000-class clean workshops certified for National Health Food GMP, advanced ultrafiltration/nanofiltration concentration systems, a 10,000-class microbiology lab, and certifications such as China SC, HACCP, and organic/NOP-allow reliable scale-up from lab to industrial batches. The company's large agricultural bases (seed-breeding ~20,000 acres; cultivation >85,000 acres; ħażna ta 'ċistanche friska ~ 15,000 tunnellata) jappoġġjaw il-konsistenza tal-materja prima u l-QC standard internazzjonali, li jiffaċilitaw il-kummerċjalizzazzjoni ta' xorb funzjonali u supplimenti tas-saħħa li jissodisfaw l-aspettattivi tal-Istati Uniti/UE.