L-Attività Kumplimentari Hija rregolata fil-Glomerulopatija C3 Permezz ta' Proteini tal-Fużjoni tal-Fattur H IgG Bi U Mingħajr Domini ta' Immirar ta' Properdin

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Alyssa C. Gilmore, Yuchun Zhang, H. Terence Cook', Deborah P. Lavin, Suresh Katti, YiWang2, Krista K. Johnson, SungKwon Kim², u Matthew C. Pickering

'Ċentru għall-Mard Infjammatorju, Imperial College London, UK; and²Alexion Pharmaceuticals, New Haven, Connecticut, l-Istati Uniti

C3 glomerulopatijahija kkaratterizzata mill-akkumulazzjoni ta' komplement C3 fi ħdan il-glomeruli. Kawżi jinkludu iżda mhumiex limitati għal, anormalitajiet fil-fattur H, ir-regolatur negattiv ewlieni tal-passaġġ alternattiv tal-kompliment. Ġrieden defiċjenti ta' Fattur H (Cfh-/-) jiżviluppaw C3glomerulopatijaflimkien ma' tnaqqis fil-livelli ta' C3 fil-plażma. Bl-użu ta’ dan il-mudell, ivvalujna l-effikaċja ta’ żewġ proteini tal-fużjoni li fihom id-dominji regolatorji tal-passaġġi alternattivi tal-fattur H (FH1-5)

marbuta jew ma' immunoglobulina tal-ġrieden li ma timmirax (IgG-FH1-5) jew ma' antikorp ta' properdin kontra l-ġrieden (Anti-P-FH1-5). Iż-żewġ proteini żiedu C3 fil-plażma u naqqsu d-depożizzjoni ta' C3 glomerulari b'mod ekwivalenti, li jissuġġerixxu li l-immirar ta' properdin ma kienx meħtieġ għal FH1-5 biex ibiddel l-attivazzjoni ta' C3 jew fil-plażma jew fil-glomeruli. Wara l-amministrazzjoni ta' IgG-FH1-5, il-livelli ta' C3 fil-plażma kkorrelataw temporanjament ma' bidliet fil-livelli tal-fattur B filwaqt li l-livelli ta' C5 fil-plażma kkorrelataw ma' bidliet fil-livelli ta' properdin fil-plażma. Notevolment, iż-żidiet fil-plażma

Il-livelli ta' C5 u properdin baqgħu jippersistu għal aktar żmien miż-żidiet f'C3 u fil-fattur B. Fil-ġrieden Cfh-/- IgG-FH1-5 naqqset il-ħsara fil-kliewi waqt nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata. Għalhekk, id-dejta tagħna turi li IgG-FH1-5 irrestawra l-attività tal-mogħdija alternattiva li tiċċirkola u naqqset id-depożizzjoni glomerulari C3 fil-ġrieden Cfh-/- u li l-livelli tal-properdin fil-plażma huma markatur sensittiv tal-attività C5 convertase f'defiċjenza tal-fattur H. Il-proteina FH1-5 konjugata immunoglobulina, permezz tal-half-life tal-plażma komparattivament twila tagħha, tista' tkun terapija potenzjali għal C3glomerulopatija.

Cistanche jista 'jgħin bil-glomerulopatija

Dikjarazzjoni Translazzjonali

C3 glomerulopatija(C3G) hija marda tal-kliewi kkaratterizzata minn akkumulazzjoni anormali ta' komplement C3 fi ħdan glomeruli u ħsara glomerulari. Huwa dovut għal attivazzjoni mhux ikkontrollata tal-passaġġ alternattiv tal-kompliment. Proteini tal-fużjoni, magħmulin minn oqsma funzjonali tar-regolatur tal-passaġġ alternattiv, fattur H (FH), marbut ma 'antikorp, regolazzjoni tal-kompliment restawrata, u C3 glomerulari mnaqqsa f'mudell tal-ġurdien C3G. Il-konjugazzjoni ta 'antikorpi mhux mmirati rriżultat f'half-life tal-plażma tal-proteini tal-fużjoni komparattivament twila, u dan, jew metodi ta' konjugazzjoni simili, jistgħu jintużaw biex iżidu l-funzjoni FH fit-terapija ta 'C3G.

C3 glomerulopatija(C3G) huwa disturb renali medjat mill-kompliment ikkaratterizzat minn ammonti anormali ta' C3 fi ħdan glomeruli.1 Jista' javvanza għal insuffiċjenza renali u m'għandu l-ebda trattament definittiv.2 C3G huwa assoċjat ma' attivazzjoni anormali tal-passaġġ alternattiv tal-kompliment (AP). L-attivazzjoni tal-AP tirriżulta fil-produzzjoni ta 'C3bBb (C3 convertase), enzima li taqsam C3. Wara ż-żieda ta 'molekula C3b oħra, il-kumpless C3bBbC3b li jirriżulta (C5 convertase) jista' jaqsam il-komplement C5. Mhux ikkontrollat

L-attivazzjoni tal-AP f'C3G tista' tkun assoċjata ma' tnaqqis fiċ-ċirkolazzjoni ta' C3, C5, fattur B (FB), u properdin. Kawżi ta 'attivazzjoni AP mhux ikkontrollata jinkludu telf ta' bidliet fil-funzjoni fir-regolaturi tal-kompliment u qligħ ta 'bidliet fil-funzjoni fl-attivaturi tal-kompliment. 3 Fattur nefritiku C3, antikorp li jistabbilizza l-AP C3 convertase huwa frekwenti f'C3G.4 Fattur nefritiku C3 jista' jirriżulta fi tnaqqis f'C3 waħdu (fattur nefritiku C3 indipendenti minn proprju) jew tnaqqis kemm f'C3 kif ukoll f'C5 (properdin- fattur nefritiku C3 dipendenti).5,6

Għalkemm id-defiċjenza ta' properdin ma tjiebx il-livelli ta' C3 fil-plażma, il-livelli ta' C5 żdiedu, u dan jissuġġerixxi li l-properdin kien meħtieġ għall-attività tas-C5 iżda mhux C3 convertase.8,9

L-għoti ta' ġrieden10 jew FH11,12 uman għal ġrieden Cfh–/– naqqas it-tbajja' glomerulari C3 u żied il-livelli ta' C3 fiċ-ċirkolazzjoni. Kostruzzjonijiet li fihom biss id-dominji regolatorji u mmirati ta 'FH (molekuli mini-FH) huma wkoll effikaċi f'dan il-mudell.13 Approċċi oħra jinkludu proteini li jimmiraw siti ta' attivazzjoni tal-kompliment. Dawn jinkludu TT30,14 proteina li fiha d-dominji regolatorji tal-komplement tal-FH (FH1-5) marbuta mad-dominji li jorbtu lill-kompliment tar-riċettur 2 tal-kompliment, u molekuli omodimeriċi FH,15 molekuli mini-FH li fihom dominji li jorbtu lill-kompliment. tal-proteina 1 relatata mal-fattur H.

Minħabba li l-utilità terapewtika tal-inibizzjoni tal-attivazzjoni tal-kompliment C3 hija taħt investigazzjoni f'C3G,2 huwa importanti li wieħed jifhem il-kinetika tad-depożizzjoni glomerulari C3 u r-relazzjoni tagħha mal-attivazzjoni tal-AP kemm fil-glomeruli kif ukoll fiċ-ċirkolazzjoni. F'mudelli ta' glomerulonefrite medjata minn kumpless immuni, C3c glomerulari neħħiet fi żmien 24 siegħa mill-prevenzjoni tal-attivazzjoni tal-komplement, filwaqt li C3d glomerulari ppersistew għal ġimgħat. , billi C3d glomerulari jibqa' mhux mibdul.11

F'dan l-istudju, investigajna l-effikaċja ta '2 proteini ta' fużjoni ġodda b'attività regolatorja komplementari fil-mudell tal-ġurdien Cfh–/– ta 'C3G. Il-proteini kien fihom id-dominji regolatorji tal-FH tal-ġrieden (FH1-5), li kien konjugat ma' Ig tal-ġrieden biex itawwal il-half-life bijoloġika. Waħda mill-proteini tal-fużjoni, imsejħa IgG-FH1-5, ġiet ikkonjugata ma' antikorp monoklonali tal-ġrieden mhux fil-mira. L-ieħor, imsejjaħ anti-P-FH1-5, kien konjugat ma' antikorp monoklonali għall-properdin tal-ġurdien. Dan sar biex tiġi ttestjata l-ipoteżi li l-immirar ta 'din il-proteina tal-fużjoni lejn siti ta' attivazzjoni tal-kompliment, billi jinteraġixxi mad-depożizzjoni tal-properdin, itejjeb ir-regolamentazzjoni tal-kompliment tat-tessut. Id-dejta tagħna turi li kemm il-proteini li ma jimmirawx (IgG-FH1-5) kif ukoll dawk li jindirizzaw propdin (anti-P-FH1-5) irrestawraw ir-regolazzjoni tal-plażma u C3 glomerulari fil-ġrieden Cfh–/–. Studji Timecourse wrew li r-restawr tal-livelli C3 u FB kien jirrifletti l-livelli tal-proteini tal-fużjoni fiċ-ċirkolazzjoni. B'kuntrast, żidiet fil-plażma C5 baqgħu jippersistu wara li l-proteini tal-fużjoni kienu neħħew miċ-ċirkolazzjoni. Aħna nuru li IgG-FH1-5 tjiebet il-ħsara glomerulari waqt nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata fil-ġrieden Cfh–/–.

cistanche jista 'jikkura mard tal-kliewi jtejjeb il-funzjoni renali

RIŻULTATI

Ġenerazzjoni ta' proteini ta' fużjoni u valutazzjoni in vitro u in vivo ta' attività Proteini ta' fużjoni nħolqu billi għaqqad l-ewwel 5 dominji qosra ta' repetizzjoni ta' kunsens (SCR) ta' FH tal-ġurdien (FH1-5) jew ma' antikorp properdin kontra l-ġurdien (anti -P-FH1-5) jew antikorp b'dominju Ig mhux fil-mira (IgG-FH1- 5, Figura Supplimentari S1). L-attività tal-proteini ġiet ivvalutata bl-użu ta 'assaġġ emolitiku speċifiku għall-AP (Figura 1a). Anti-P-FH1-5 u IgG-FH1-5 inibixxu l-emolisi b'mod dipendenti mid-doża b'qawwa akbar għal anti-P-FH1-5. Anti-properdin (anti-P) naqqas ukoll l-emolisi b'mod dipendenti fuq id-doża, iżda l-kontroll IgG ma kellu l-ebda effett. Wara injezzjonijiet ekwimolari tal-proteini fil-ġrieden Cfh–/–, il-proteina IgG-FH1-5 kienet skoperta sa 11-il jum wara l-injezzjoni, filwaqt li anti-P-FH1-5 kienet skoperta sa 4 ijiem wara. injezzjoni (Figura Supplimentari S2). Biex niddeterminaw jekk IgG-FH1-5 u anti-P-FH1-5 jistgħux jirrestawraw ir-regolamentazzjoni tal-AP fil-plażma fil-ġrieden Cfh–/–, l-ewwel kejlna l-livelli ta’ C3 fil-plażma wara l-injezzjoni tal-proteini tal-fużjoni (Figura 1b) . L-għoti ta' jew IgG-FH1-5 jew anti-P-FH1-5 żied b'mod sinifikanti C3 fil-plażma f'24 siegħa u, sa ċertu punt, f'96 siegħa wara l-injezzjoni (Figura 1b). Din id-dejta wriet li kemm IgG-FH1-5 kif ukoll anti-P-FH{1-5 jistgħu temporanjament jirrestawraw ir-regolamentazzjoni tal-AP fil-plażma fil-ġrieden Cfh–/–. Imbagħad għamilna analiżi dettaljata ta 'dawn il-bidliet billi kkaratterizzajna l-kors taż-żmien tal-bidliet mhux biss fil-plażma C3 iżda wkoll fil-plażma C5 u l-proteini tal-mogħdija alternattiva FB u properdin. Żidiet fil-livelli taċ-ċirkolazzjoni ta' C5 u properdin jippersistu aktar minn żidiet f'C3 u FB wara l-għoti ta' IgG-FH1-5 u anti-P-FH1-5 fil-ġrieden Cfh–/–

Aħna qabblu l-kinetika tal-bidliet f'C3, C5, FB, u properdin billi kejlu proteini f'intervalli sa 27 jum wara injezzjoni waħda ta' jew IgG-FH1-5 jew anti-P-FH1-5 ( Figura 2). Wara l-għoti ta' IgG-FH1-5, l-ogħla żieda f'C3, C5, FB, u properdin kollha seħħet fl-ewwel jum ta' wara l-injezzjoni. Iż-żmien biex dawn il-bidliet jaqgħu għal-livelli ta' qabel it-trattament kien differenti. Ir-ritorn għal-livelli ta 'pretrattament seħħ bejn ġranet 1 u 4 għal FB, bejn ġranet 7 u 11 għal C3, u bejn ġranet 14 u 21 kemm għal properdin kif ukoll C5 (Figura 2a, c, e, u g). Wara l-għoti ta' anti-P-FH1-5, l-ogħla livelli ta' C3 seħħew fl-1 jum iżda waqgħu għal-livelli ta' qabel it-trattament bejn il-ġranet 4 u 7 (Figura 2b). L-ogħla livelli C5 seħħew f'jum 4 u reġgħu lura għal-livelli ta 'qabel it-trattament bejn il-ġranet 7 u 11-il jum (Figura 2d). L-ogħla żieda fl-FB seħħet fl-1 jum u waqgħet għal-livelli ta 'qabel it-trattament bejn il-ġranet 1 u 4 (Figura 2f). Kif mistenni, il-properdin fil-plażma ħielsa tbattal wara injezzjoni ta' jew anti-P-FH1-5 jew anti-P (Figura 2h). Il-livelli ta' properdin fil-plażma ħielsa baqgħu baxxi sa 7 ijiem wara anti-P-FH1-5 u sa 14-il jum wara anti-P (Figura 2h). Għalkemm iż-żewġ proteini tal-fużjoni temporanjament irrestawraw ir-regolamentazzjoni AP fil-plażma, it-tul ta 'titjib fil-livelli C3, FB, u C5 irrifletta t-tul ta' żmien tal-kxif tagħhom fil-plażma, li kien iqsar għal anti-P-FH 1-5 (Figura Supplimentari S2) . Fil-qosor, bidliet fil-livelli ta 'C3 u FB wara l-injezzjoni ta' kwalunkwe proteina kienu iqsar minn dawk ta 'C5 u properdin. Din id-dejta tissuġġerixxi li l-plażma FB hija markatur sensittiv tal-attività ta 'C3 convertase f'dan l-issettjar, filwaqt li properdin huwa markatur ta' attività ta 'C5 convertase. Notevolment, wara injezzjoni anti-P, kien hemm żieda fis-C5 f'24 u 96 siegħa u jum 7

Figura 1| (a) Ikkumplimenta l-assaġġ tal-emolisi li jiddependi mill-mogħdija alternattiva. L-antikorpi ġew ttitrati f'dilwizzjonijiet ta' 2-darbiet minn 60 nM sa 0.5 nM. Ir-reaġenti IgG-FH1-5, anti-P-FH1-5, u anti-P naqqsu l-emolisi tal-eritroċiti tal-fniek b'mod dipendenti fuq id-doża. L-ebda inibizzjoni ma ntużat il-proteina ta 'kontroll IgG. Il-vireg orizzontali jindikaw valuri medji, u l-vireg tal-iżball jirrappreżentaw SD. (b) Kumpliment tal-plażma C3 fil-ġrieden Cfh–/– wara injezzjoni ta 'proteini tal-fużjoni. Plażma C3 tkejjel qabel u 24 siegħa u 96 siegħa wara l-għoti ta' IgG-FH1-5 (trijangoli ħomor, n ¼ 5) Anti–P–FH1-5 (trijangoli vjola, n ¼ 6), Anti -P (tikek ħodor, n ¼ 5), u kontroll IgG (tikek blu, n ¼ 5). Il-vireg orizzontali jindikaw valuri medji, u l-whiskers jindikaw SD. ***P # 0.001 kontra l-valur tat-trattament minn qabel u derivat minn 2-mod ANOVA bit-test ta' paraguni multipli ta' Bonferroni. FH, fattur H; P, properdin.

(Figura 2d). Kif irrappurtat, 8,9 jindika li l-konvertażi C5 hija dipendenti fuq properdin fil-ġrieden Cfh–/–.

IgG-FH1-5 u anti-P-FH1-5 naqqsu C3c glomerulari iżda ma biddlux it-tbajja’ C3d fil-ġrieden Cfh–/–

Imbagħad ivvalutajna l-influwenza ta 'IgG-FH1-5 u anti-P-FH1-5 fuq C3b/iC3b/C3c glomerulari, C3d, properdin, u proteini relatati ma' FH (FHR). F'96 siegħa wara l-injezzjoni ta 'IgG-FH1-5, it-tbajja' glomerulari C3b/iC3b/C3c naqset iżda C3d glomerulari (Figura 3a) u t-tbajja' FHR (Figura 3b) ma kinitx. Glomerulari C3b/iC3b/C3c baqgħu mhux mibdula jew bil-kontroll IgG jew kontra l-P. Il-mudell lineari anormali tat-tbajja’ glomerulari tal-properdin fil-ġrieden Cfh–/– mhux ittrattati9 baqa’ 96 siegħa wara l-kontroll tal-IgG. Fil-ġrieden Cfh–/– injettati jew b'anti-P jew IgG-FH1-5, il-livell tal-properdin glomerulari kien kważi ma jinstabx f'96 siegħa (Figura 3b). B'mod mhux mistenni, injezzjoni ta 'anti-P-FH1-5 irriżulta f'mudell ta' tbajja glomerulari granulari bl-użu ta 'antikorpi anti-properdin, anti-FH/FHR, u anti-IgG (Figura 3b). Din is-sejba ssuġġeriet li l-proteina anti-P-FH1-5 kienet qed tiġi depożitata fil-glomeruli. Injezzjoni ta' proteina anti-P-FH1-5 fi ġrieden tat-tip selvaġġ irriżultaw fi tbajja glomerulari b'antikorpi anti-properdin, anti-FH/FHR, u anti-IgG f'96 siegħa (Figura Supplimentari S3), li tindika li dan reaġent jinteraġixxi mal-glomeruli normali. Madankollu, aħna spekulajna li l-proteina anti-P-FH1-5 tista' wkoll tinteraġixxi mal-properdin glomerulari pre-eżistenti fil-ġrieden Cfh–/–. Meta injettajna r-reaġent fil-ġrieden Cfh–/– li kienu ġew ittrattati minn qabel b'anti-P biex ineħħu l-properdin glomerulari, kien hemm tnaqqis fil-mudelli tat-tbajja granulari bl-użu ta 'anti-properdin, anti-FH/FHR, u anti-IgG ( Figura Supplimentari S4). Dawn l-osservazzjonijiet jindikaw li l-interazzjoni glomerulari tal-proteina anti-P-FH1-5 fil-ġrieden Cfh–/– tiddependi parzjalment fuq properdin glomerulari.

IgG-FH1-5 tjiebet il-ħsara fil-kliewi waqt nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata fil-ġrieden Cfh–/–

F'pazjenti b'C3G, ħsara renali akuta tista' tiżviluppa fil-kuntest ta' infezzjonijiet interkurrenti. Per eżempju, telf ta 'funzjoni renali fin-nefropatija FHR5 huwa assoċjat ma' episodji ta 'ematurja makroskopika sinfarinġitika.17 Id-disregolazzjoni sottostanti C3 f'pazjenti C3G x'aktarx tirriżulta f'korriment renali medjat mill-kompliment imtejjeb wara trigger li jirriżulta f'infjammazzjoni renali. Biex timmudella dan, indottajna nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata, kumpless immuni

Figura 2| Kors tal-ħin tal-profil tal-komplement tal-plażma fi ġrieden Cfh–/– injettati b'IgG-FH1-5 u anti-P-FH1-5. Plażma C3 (a,b), C5 (c,d), FB (e,f), u properdin (P; g,h) mill-bidu sperimentali sa 27 jum wara injezzjoni waħda ta' IgG-FH{{1{{21 }}}} (a,c,e,g; triangoli ħomor, n ¼ 5) jew anti-P- FH1-5 (b,d,f,h; triangoli vjola, n ¼ 6). Il-kontrolli kienu jinkludu anti-P (tikek ħodor, n ¼ 5) u antikorp monoklonali imqabbel mal-isotip (kontroll IgG; tikek blu, n ¼ 5). Il-vireg orizzontali jindikaw valuri medji, u l-whiskers jindikaw SD. *P # 0.05, **P # 0.01, ***P # 0.001 kontra l-valur tat-trattament minn qabel u derivati ​​minn 2-mod analiżi tal-varjanza mat-test ta' paraguni multipli Bonferroni. FB, fattur B; FH, fattur H.

Mudell tal-glomerulonefrite li jinvolvi mogħdijiet medjati mir-riċettur tal-kompliment u Fc,18,19 fil-ġrieden Cfh–/–. Preċedentement urejna li l-ġrieden Cfh–/– huma ipersensittivi għall-ħsara renali f'dan l-ambjent7 u ipoteżijna li l-proteina FH1-5, billi ttejjeb ir-regolamentazzjoni tal-AP, tista 'ttejjeb il-ħsara renali medjata mill-kompliment f'dan il-mudell. Minħabba li d-dejta tagħna indikat li l-proteina anti-P-FH1-5 kienet depożitata fil-glomeruli normali, użajna IgG-FH1-5 waqt nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata. Erbgħa u għoxrin siegħa qabel l-injezzjoni ta' serum nefrotossiku tan-nagħaġ, il-ġrieden irċevew injezzjoni ip ta' kontroll ta' IgG (n ¼ 7) jew IgG-FH1-5 (n ¼ 8). Il-protokoll sperimentali huwa muri fil-Figura 4a. Il-ġrieden inqatlu 6 ijiem wara l-għoti tas-serum nefrotossiku tan-nagħaġ. It-3 miżuri istoloġiċi kollha tal-patoloġija glomerulari (punteġġ tas-severità, numru totali taċ-ċelluli, u numru tal-makrofagi) kienu sinifikament aktar baxxi fil-grupp IgG-FH1-5 (Figura 4b). Il-ħsara tubulointerstizjali kienet ukoll aktar baxxa fil-grupp IgG-FH1-5 (Figura 4b). L-urea fis-serum kienet elevata b’mod sinifikanti fi

Figura 3| Immunotezzjoni tal-kompliment glomerulari fil-ġrieden Cfh–/– 96 siegħa wara l-injezzjoni ta' jew IgG-FH1-5 jew anti-P-FH1-5. (a) Immaġini rappreżentattivi flimkien ma' kwantifikazzjoni ta' C3b/iC3b/C3c glomerulari u C3d fl-4 gruppi sperimentali: IgG-FH1-5 (trijangoli ħomor, n ¼ 5), anti-P-FH1-5 (trijangoli vjola, n ¼ 6), anti-P (tikek ħodor, n ¼ 5), u kontroll IgG (tikek blu, n ¼ 5).Livell tal-PlasmaC3 fil-ħin tal-qtil muri fil-Figura1. (b) Il-punti tad-dejta jirrappreżentaw valuri medjani, u l-whiskers jindikaw medda interkwartili. Valuri P derivati ​​mit-test Kruskal-Wallis bit-test ta' paraguni multipli Dunn. (b)Immaġini rappreżentattivi ta'IgG glomerulari, FHR,u,tbajja'fl-4gruppi esperimentali.Bar ¼ 100 mm.AFU,unitajiet fluworexxenti arbitrarji; FH, fattur H; P, properdin. Biex tottimizza l-wiri ta' din l-immaġni, jekk jogħġbok ara l-verżjoni online ta' dan l-artikolu fuqwww.kidney-international.org.

il-grupp ta 'kontroll IgG, iżda bidliet fl-albumina tas-serum u l-proporzjon ta' albumina ta 'l-awrina għal kreatinina ma kinux differenti (Figura 4b). Kif mistenni, C3b/iC3b/C3c glomerulari tnaqqset b'mod sinifikanti fil-grupp IgG-FH1-5 (Figura 4b), iżda IgG glomerulari tal-ġurdien (Figura 4b) u IgG tan-nagħaġ (dejta mhux murija) ma kinux differenti bejn il-gruppi .

Figura 4| It-trattament minn qabel b'IgG-FH1-5 tjiebet il-ħsara fil-kliewi waqt nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata fil-ġrieden Cfh–/–. (a) Skematika tal-protokoll aċċellerat tan-nefrite nefrotossika tas-serum. Ġrieden immunizzati minn qabel b'IgG tan-nagħaġ irċevew jew IgG-FH1-5 (grupp ta' trattament, n ¼ 8) jew kontroll IgG (grupp ta' kontroll, n ¼ 7) 24 siegħa qabel l-għoti tas-serum nefrotossiku tan-nagħaġ. (b) Funzjoni renali u istoloġija 6 ijiem wara l-induzzjoni ta' nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata fil-ġrieden ittrattati jew b'IgG-FH1-5 (trattament; trijangoli ħomor, n ¼ 8) jew kontroll IgG (kontroll; ċrieki blu, n ¼ 7). Il-vireg orizzontali jindikaw valuri medjani, u l-whiskers jindikaw firxa interkwartili. *P # 0.05, **P # 0.01, ***P # 0.001 kontra l-kontroll u derivat mit-test Mann-Whitney. FH, fattur H; P, properdin.

DISKUSSJONI

Kemm IgG-FH1-5 kif ukoll anti-P-FH1-5 innormalizzaw il-livelli C3, FB, u C5 fil-ġrieden Cfh–/–. Din is-sejba hija konsistenti mal-fatt li d-dominji regolatorji komplementari tal-FH tal-ġurdien jinsabu f’dominji SCR 1 sa 5 (sit li jgħaqqad C3b u l-attività tal-kofattur għall-qsim medjat tal-fattur I ta’ C3b).20 Dominji ta’ rikonoxximent tal-wiċċ, li jinfluwenzaw l-irbit ma' eparina u ċelluli endoteljali u jinkludu t-tieni sit ta' rbit ta' C3b, huma preżenti fi ħdan id-dominji SCR 18 sa

20 (FH18-20) u għalhekk mhumiex preżenti fil-proteini tal-fużjoni.20 Madankollu, iż-żewġ proteini naqqsu iC3b/C3b/C3c glomerulari, u jindikaw li FH18-20 ma kienx meħtieġ f'dan l-ambjent. Din is-sejba hija konsistenti ma' data preċedenti li turi li l-ġrieden Cfh–/– li jesprimu proteina FH mutant li tikkonsisti f'dominji SCR 1 sa 15 (Cfh–/– .FHD16-20) ma żviluppawx depożizzjoni C3 glomerulari anormali.21,22 Madankollu, l-annimali Cfh–/–.FH D16-20 ma setgħux jirregolaw l-attivazzjoni C3 tul l-endotelju renali u żviluppaw mikroanġjopatija trombotika. Huwa possibbli li, minħabba n-nuqqas tal-wiċċ li jimmira għad-dominji FH18-20, l-amministrazzjoni ta' proteini tal-fużjoni li fihom FH1-5 f'defiċjenza ta' FH tista' tirriżulta f'suxxettibilità għal mikroanġjopatija trombotika. Huwa wkoll possibbli li l-avidità miżjuda għall-irbit ta' C3b, taħt l-istruttura dimerika tal-proteini tal-fużjoni, hija biżżejjed biex tikkumpensa għan-nuqqas tal-wiċċ li jimmira għad-dominji FH18-20. Madankollu, ir-rikonoxximent tal-wiċċ ta 'C3b huwa wkoll influwenzat minn bidliet konformazzjonali f'FH.23 A Streptococcus pneumoniae proteina li torbot FH (PspCN, li torbot id-dominju SCR 9), iqanqal bidla konformazzjonali FH, u l-kumpless FH-PspCN kien żied l-irbit ta' C3b u attività mtejba li taċċellera t-tħassir. Is-sit li jgħaqqad FH20 C3d mhuwiex espost f'FH iżda jsir espost fil-kumpless FH-PspCN. Dan jista' jispjega għaliex FH19-20 jinteraġixxi mal-wiċċ C3d iżda FH le.24,25 Aħna nispekulaw li l-aġenti tagħna, permezz ta' bidliet konformazzjonali, jistgħu jinteraġixxu b'mod effiċjenti kemm mal-fażi tal-fluwidu kif ukoll mal-wiċċ C3b. Notevolment, kemm IgG-FH1-5 kif ukoll anti-P-FH1-5 ipproteġu eritroċiti mill-liżi f'assaġġ tal-emolisi dipendenti fuq AP.

L-ebda proteina tal-fużjoni ma naqqset it-tebgħa glomerulari C3d, forsi minħabba n-natura persistenti ta 'C3d glomerulari. F'nefrite immuno-kumplessa sperimentali, C3c glomerulari riżolta fi żmien 24 siegħa mill-waqfien tal-attivazzjoni tal-komplement iżda C3d baqa' jippersisti għal ġimgħat.16 Barra minn hekk, C3d glomerulari huwa persistenti fin-nefrite lupus.26 Dan x'aktarx jirrifletti l-interazzjoni kovalenti tiegħu ma 'uċuħ glomerulari. Injezzjonijiet ripetuti ta' FH uman fil-ġrieden Cfh–/– wrew tnaqqis fis-C3d glomerulari fuq 10 ijiem.11 X'aktarx li dożaġġ ripetut ta' IgG-FH1-5 jista' jnaqqas is-C3d glomerulari f'dan il-mudell. Ma kien hemm ukoll l-ebda bidla fit-tebgħa glomerulari tal-FHR. Ftit huwa magħruf dwar il-funzjonijiet tal-proteini FHR tal-ġurdien, iżda jistgħu jinteraġixxu kemm ma 'C3b27,28 kif ukoll C3d.27 Fil-fatt, l-affinità apparenti ta' kemm FHR-A kif ukoll FHR-B għal C3d hija aktar b'saħħitha minn dik ta 'FH.27 Aħna nispekulaw li l-proteini glomerulari FHR x'aktarx li jitneħħew mill-glomeruli biss meta C3d tneħħa. F'dan il-kuntest, huwa notevoli li fis-C3G tal-bniedem, il-proteina 5 relatata mal-fattur H tassoċja ma' C3d glomerulari.29

Il-proteina anti-P-FH1-5 tbattal il-livelli ta' properdin fil-plażma ħielsa kif mistenni minħabba li l-parti anti-properdin ta' din il-proteina tal-fużjoni tista' timblokka l-attività AP (minħabba t-tnaqqis tal-properdin) għal 8 ijiem wara injezzjoni waħda.30 Madankollu, id-dejta tagħna wriet li l-effikaċja ta 'FH1-5 fiż-żieda fil-livelli ta' C3 fil-plażma u t-tnaqqis tat-tbajja' glomerulari C3b/iC3b/C3c kienet komparabbli bejn iż-żewġ proteini tal-fużjoni (jiġifieri, kienet indipendenti mill-immirar tal-properdin). Barra minn hekk, it-tbajja' anormali ta' properdin glomerulari tnaqqset b'mod sinifikanti wara l-għoti ta' jew anti-P jew IgG-FH1-5. Evidentement, b'kuntrast mal-proteini C3d u FHR, il-properdin glomerulari jitneħħa faċilment wara r-restawr tar-regolament C3. Il-properdin glomerulari nbidel fil-mudell wara l-amministrazzjoni tal-proteina anti-P-FH1-5, iżda dan kien ikkumplikat mill-osservazzjoni li skoprejna depożizzjoni ta 'din il-proteina tal-fużjoni kemm fil-glomeruli Cfh–/– kif ukoll tat-tip selvaġġ. Dan kien parzjalment minħabba interazzjoni ma 'properdin glomerulari, iżda d-depożizzjoni fil-glomeruli tat-tip selvaġġ indikat li kienet ukoll parzjalment kompletament dipendenti fuq il-kompliment glomerulari u x'aktarx relatata mal-proprjetajiet fiżikokimiċi tal-proteina tal-fużjoni.

Id-dejta kinetika tagħna wriet sejbiet ġodda dwar il-bidliet temporali f'FB, C5, u properdin li jakkumpanjaw żidiet f'C3 fil-ġrieden Cfh–/– wara l-injezzjoni tal-proteini tal-fużjoni. Il-livelli ta' FB żdiedu malajr wara l-injezzjoni

u reġa 'lura għal-livelli ta' linja bażi fi żmien meta kemm il-livelli ta 'C5 kif ukoll ta' properdin baqgħu elevati. Livelli ta 'properdin fil-ġrieden Cfh–/– tnaqqsu fil-linja bażi u żdiedu għal livelli normali (20 mg/ml30) wara injezzjoni ta' IgG-FH1-5 u baqgħu f'dawn il-livelli għal mill-inqas 14-il jum. Kors ta' żmien simili deher għaż-żieda fil-livelli ta' C5 fil-plażma. B'mod impressjonanti, IgG-FH1-5 kien l-aktar assenti miċ-ċirkolazzjoni fi 11-il jum, li jindika li l-formazzjoni tal-konvertażi C5 fil-ġrieden Cfh–/– hija aktar bil-mod minn dik tal-konvertażi C3 (minħabba li l-livelli C3 reġgħu lura għal-linja bażi bejn 7 u 11-il jum). Il-plażma C5 żdiedet wara trattament anti-P u żdiedet aktar bil-proteina anti-P-FH1-5. Għalhekk, kemm l-immirar tal-properdin kif ukoll l-effetti tal-FH1-5 kienu qed jikkontribwixxu għall-livelli C5 miżjuda u jindikaw li l-konvertażi C5 hija parzjalment dipendenti fuq il-properdin fil-ġrieden Cfh–/–. Din is-sejba hija konsistenti mat-titjib tad-disregolazzjoni C5 fil-ġrieden b'defiċjenza kombinata ta 'FH u properdin. {30}}.31,32 Id-dejta tagħna tappoġġja rabta intima bejn il-livelli ta' properdin u l-attività tal-konvertażi C5 u tappoġġja l-użu ta' livelli ta' properdin bħala bijomarkatur tal-attivazzjoni C5 glomerulari kontinwa.

Notevolment, il-proteina IgG-FH1-5 kienet għadha skoperta fiċ-ċirkolazzjoni sa 11-il jum wara injezzjoni waħda. Dan huwa ħafna itwal minn dak li rrapportajna qabel għall-proteina mhux konjugata tal-ġurdien FH1-5, li tneħħiet miċ-ċirkolazzjoni fi żmien 24 siegħa.14 Din is-sejba tindika li l-half-life tal-plażma itwal tal-IgG-FH{ {9}} proteina hija derivata mill-konjugazzjoni tal-antikorpi. Il-half-life tal-plażma tal-proteina IgG-FH1-5 kienet ukoll itwal minn dak li osservajna qabel għal FH full-length.10,11 Pereżempju, FH uman tneħħa miċ-ċirkolazzjoni b'96 siegħa wara injezzjoni waħda. fil-ġrieden Cfh–/–.11 Flimkien mad-dejta tagħna li turi l-effikaċja tal-proteina IgG-FH1-5 fir-regolamentazzjoni komplementari, aħna nqisu li l-konjugazzjoni tal-proteina FH{1-5 biex ittawwal il-profil farmakokinetiku tagħha għandha potenzjal terapewtiku. utilità f'C3G.

Fil-qosor, aħna nuru li, minkejja n-nuqqas ta' oqsma ta' rikonoxximent tal-wiċċ, il-proteini tal-fużjoni FH1-5 kienu effettivi biex inaqqsu l-attivazzjoni glomerulari C3 u jirrestawraw ir-regolamentazzjoni tal-kumpliment tal-plażma f'defiċjenza FH. Ma kien hemm l-ebda vantaġġ ovvju fil-konjugazzjoni tad-dominji FH1-5 ma' anti-properdin, u l-proteina IgG-FH1-5 naqqset il-ħsara renali f'nefrite sperimentali. B'kuntrast mal-isfidi fil-produzzjoni ta' preparazzjonijiet fuq skala kbira ta' FH għal użu terapewtiku, il-produzzjoni fuq skala kbira ta' terapiji bbażati fuq antikorpi hija stabbilita sew, li tagħmel IgG-FH1-5 terapewtika potenzjali attraenti għal C3G.

METODI

Proteini tal-fużjoni

IgG-FH1-5. L-ewwel 5 oqsma tal-ġurdien FH SCR (mFH1-5) konnessi

għal Ig tal-ġurdien IgG1 mhux fil-mira (antikorp anti-idjotipiku mqajjem kontra antikorp monoklonali tal-ġurdien).

Anti-P-FH1-5. Murine FH1-5 marbut ma' antikorp tal-ġurdien kontra l-properdin (anti-P),30 ipprovdut lil Alexion minn W. Song, Università ta' Pennsylvania).

Kontrolli. Il-kontrolli kienu Ig tal-ġurdien mhux immirati imqabbla bl-isotip (kontroll IgG) u anti-properdin tal-ġurdien (anti-P) (Figura Supplimentari S1). Proteini ġew iġġenerati bl-użu ta 'vettori pVEK u ċelluli Expi293 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), purifikat bl-użu ta' proteina A (MabSelect Sure, Cytiva, Marlborough, MA).

Assaġġ emolitiku speċifiku għall-AP

Għoxrin fil-mija serum normali tal-ġurdien ttitrat minn 60 nM sa 0.5 nM ġie inkubat b'eritroċiti tal-fniek (1.5 106 ċelluli/ml) f'37 C għal 30 minuta. Ir-rilaxx tal-heme ġie kkwantifikat b'mod spettrofotometriku (densità ottika 415 nm); 100 fil-mija liżi kienet serum mingħajr inibitur.

Plażma FB u FH

Il-plażma nkisbet wara ċ-ċentrifugazzjoni tad-demm miġbur f'tubi li fihom ethylenediamine tetraacetic acid (Sarstedt, Nordrhein-Westfalen, il-Ġermanja). Il-proteini ġew imkejla permezz ta 'immunoassay elettroforesi kapillari (WES, ProteinSimple, San Jose, CA). L-antikorpi użati kienu poliklonali anti-ġurdien FH antikorp (Alexion Pharmaceuticals, Boston, MA) u anti-ġurdien FB antikorp (Abcam, Cambridge, UK); Intuża l-modulu ta 'skoperta ta' kontra l-fenek WES (ProteinSimple, San Jose, CA). Sinjali kimiluminixxenti ġew analizzati b'softwer Compass għal SW (ProteinSimple, verżjoni 5.0.1), kwantifikati bħala żoni peak, u normalizzati għall-kontroll tal-assaġġ.

Ġrieden

Il-ġrieden kollha kienu miżmuma f'kundizzjonijiet speċifiċi ħielsa minn patoġeni; proċeduri twettqu skont linji gwida istituzzjonali u approvati mill-Uffiċċju tal-Intern tar-Renju Unit. Ġrieden tat-tip selvaġġ C57BL/6 inxtraw minn Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME), u ġrieden Cfh–/– ġew iġġenerati kif deskritt qabel.7 Ġrieden kienu mqabbla għall-età u s-sess; Dożi ekwimolari ta' proteini ġew amministrati permezz ta' injezzjoni ip (1 mg għal anti-properdin u kontroll IgG; 1.4 mg għal IgG-FH1-5 u anti-P-FH1-5). Nefrite nefrotossika tas-serum aċċellerata ġiet indotta minn injezzjoni iv ta 'serum nefrotossiku tan-nagħaġ fil-ġrieden immuni minn qabel b'IgG tan-nagħaġ.

C3, C5, u properdin ħieles Il-plażma C3 tkejlu b'assaġġ immunosorbent marbut ma' enżimi.14 Il-livelli ta' properdin "ħieles" u C5 fil-plażma tkejlu bl-użu ta' immunoassays elettrokemiluminixxenti (Meso Scale Discovery [MSD], Meso Scale Diagnostics, Rockville, MD) b'anti - properdin jew C5 anti-murine apposta miksi fuq pjanċi MSD li jgħaqqdu għoli. Properdin "ħieles" marbut u C5 ġew skoperti ma 'anti-properdin (minn W. Song) jew anti-C5 monoklonali bijotinilati (Alexion) flimkien ma' streptavidin-SULFO (MSD, Meso Scale Diagnostics). Is-sinjal kimiluminixxenti ġie akkwistat bl-użu ta’ imager SECTOR S 6000 (MSD, Meso Scale Diagnostics) u ġie analizzat bis-softwer MSD Discovery Workbench (Meso Scale).

Dijanjostiċi, verżjoni 4.0.12.1). Properdin murini rikombinanti u C5 intużaw bħala standards.

Funzjoni renali u istoloġija

Ematurja u proteinurja ġew evalwati bl-użu ta' Hema-Combistix (Bayer, Reading, UK); L-urea tal-plażma ġiet imkejla u t-tessut tal-kliewi ġie pproċessat kif deskritt qabel.9 Il-krejatinina urinarja ġiet iddeterminata fuq kampjuni tal-awrina fuq il-post bl-użu tal-assaġġ tal-Protokoll tal-Kreatinina Companion (#1012; Excell, Philadelphia, PA), u l-awrina spot/ L-albumina tal-plażma tkejjel b'assaġġ immunosorbenti marbut ma' enzimi (#E99-134; Bethyl Laboratories, Montgomery, TX). Sezzjonijiet tal-kliewi mtebbgħin bl-aċidu perjodiku-Schiff ġew evalwati b'mod blinded u kklassifikati skont is-severità tal-ħsara glomerulari u tubulointerstizjali (0 [xejn], 1 [ħafif], 2 [moderat]). Għaxar glomeruli għal kull sezzjoni ġew ivvalutati biex jiġi ddeterminat in-numru medju taċ-ċelluli glomerulari. Tbajja ta' immunofluworexxenza twettqet fuq krijosezzjonijiet ta' 5-mm mmuntati bl-użu ta' Vectashield medium b'DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA). L-antikorpi użati kienu fluorescein isothiocyanate (FITC)-konjugat polyclonal mogh anti-ġurdien C3b/C3c/iC3b (1:200; #55500; MP Biomedical, Santa Ana, CA)9; IgG poliklonali tal-mogħoż poliklonali konjugat għall-katina tal-fig-speċifiku tal-FITC (1:400; #F5387; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); Ġurdien monoklonali konjugat bi FITC kontra l-mogħoż/nagħaġ IgG (1:100; #F5137; Sigma-Aldrich); jew properdin kontra l-bniedem tal-mogħoż konjugat bil-FITC (1:50; #GAHu/PPD/FITC, Nordic Immu- no logic Laboratories, Kopenħagen, id-Danimarka).9 Mogħoż bijotinilat kontra l-ġurdien C3d (1:10; # BAF2655; Sistemi R&D , Minneapolis, MN) intuża fuq sezzjonijiet imblukkati bil-bijotina (Biotin Blocking System; Agilent Dako, Santa Clara, CA), b'antikorp sekondarju streptavidin AF488 (1:200; #S-32354; Thermo Fisher Scientific). FH ġie viżwalizzat f'sezzjonijiet ippurifikati kontra l-ġurdien CD16/CD32-(1:100; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) bl-użu ta' FH anti-bniedem tal-mogħoż (1:1000; #A312; Quidel, San Diego , CA) u antikorp sekondarju monoklonali IgG-FITC kontra l-mogħoż (1:100; klonu GT-34; F4891; Sigma-Aldrich). Il-makrofagi glomerulari ġew identifikati bl-użu ta' CD68 kontra l-ġrieden tal-firien konjugat bil-FITC (klonu FA-11 GTX43518; GeneTex, Irvine, CA). Analiżi kwantitattiva tal-immunofluworexxenza saret bl-użu ta’ mikroskopju ottiku Leica DM4B flimkien ma’ kamera diġitali Leica DFC700T (Leica Microsystems, Wetzlar, il-Ġermanja) u softwer Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Rockville, MD, verżjoni 7). Għaxar glomeruli ġew eżaminati għal kull taqsima, u l-intensità medja kienet espressa f'unitajiet arbitrarji tax-xjenza tal-fluores.

Analiżi statistika

GraphPad Prism, verżjoni 8.0 (GraphPad, San Diego, CA) intuża għall-analiżi statistika. Miżuri ripetuti 2-analiżi tal-mod ta' varjanza bit-test ta' tqabbil multipli Bonferroni (fatturi kienu ħin u trattament) intużat għall-analiżi tal-kors tal-ħin. It-test ta 'paraguni multipli Kruskal-Wallis ma' Dunn intuża meta tqabbel gruppi multipli, u l-ittestjar Mann-Whitney intuża għal 2 gruppi.

ŻVELAR

MCP irċieva miżati ta' konsulenza mingħand Alexion, ChemoCentryx, Novartis, Gyroscope, u Achillion Pharmaceuticals. HTC irċieva miżati ta' konsulenza mingħand Alexion, Novartis, Aurinia, u Achillion Pharmaceuticals. YZ, YW, KKJ, u SK-K huma impjegati ta' Alexion Pharmaceuticals. SK huwa eks impjegat ta' Alexion Pharmaceuticals u bħalissa huwa impjegat minn Gemini Pharmaceuticals. L-awturi l-oħra kollha ddikjaraw l-ebda interessi konkorrenti.

RIKONOXXIMENTI

MCP huwa Wellcome Trust Senior Fellow fix-Xjenza Klinika (referenza tal-għotja 212252/Z/18/Z), u ACG u DPL huma appoġġjati minn din il-fellowship. YZ, SK, YW, KKJ, u SK-K ġew iffinanzjati minn Alexion Pharmaceuticals.

MATERJAL SUPPLIMENTARI

Fajl Supplimentari (PDF)

Figura S1. Proteini tal-fużjoni użati f'dan l-istudju.IgG-FH1-5 fih l-ewwel 5 dominji tal-fattur H tal-ġurdien (FH1-5) marbuta ma' Ig tal-ġurdien li ma jimmirax. Anti-P-FH1-5 jikkonsisti f'mFH1-5 marbut ma' antikorp newtralizzanti tal-ġurdien kontra l-properdin tal-ġurdien (anti-P; ara Miwa et al.30). Il-proteini tal-kontrolli kienu jinkludu Ig tal-ġurdien mhux immirat imqabbel mal-isotip (kontroll IgG) u l-antikorp newtralizzanti tal-ġurdien kontra l-ġurdien properdin (Anti-P). Figura S2. Analiżi blot WES biex tiskopri FH1-5 f'kampjuni ta' plażma minn ġrieden defiċjenti ta' FH injettati jew b'(A) IgG-FH1-5 jew (B) Anti-P-FH1-5. Il-94-kDaIgheavychainlinkedtomouseFH1-5 (HC-FH1-5) jista' jinduna sa 11-il jum wara l-injezzjoni ta' IgG-FH1-5 u sa 4 ijiem wara l-injezzjoni ta' proteina anti-P-FH1-5 (kaxxi ħomor ).Kontrolli inkludew plażma minn ġrieden tat-tip selvaġġ fejn il-proteina tal-fattur H ta' tul sħiħ hija skoperta (FH, kaxxi suwed, korsija C1) u ġrieden defiċjenti ta' FH mhux injettati, fejn l-ebda FH ma hija evidenti (kaxxi suwed, korsijaC2,). Kif mistenni, la FHnorFH1-5 ma jista' jinduna f'kampjuni tal-plażma minn ġrieden injettati b'kontroll Anti-P jew IgG.

Figura S3. Immunotezzjoni tal-kompliment glomerulari 96 siegħa wara l-injezzjoni ta' kontroll IgG jew anti-P-FH1-5 fi ġrieden tat-tip selvaġġ. Huma murija immaġini glomerulari rappreżentattivi (bar ¼ 100 mm).

Figura S4. Ir-rwol tal-properdin fuq id-depożizzjoni ta' anti-P-FH1-5 fil-glomeruli ta' ġrieden defiċjenti ta' FH. Ġrieden Cfh–/– ġew injettati jew b'kontroll IgG jew anti-P (trattament 1) segwit 24-sigħat wara jew b'kontroll IgG jew anti-P-FH1-5 (trattament 2). L-annimali nqatlu 120 siegħa wara t-trattament wieħed u tbajja glomerulari għal IgG, properdin, u FH/FHR ġiet ivvalutata. Huma murija immaġini rappreżentattivi. L-injezzjoni ta 'anti-P naqqset b'mod notevoli t-tbajja' ta' properdin (ringiela 1, kolonna 2) iżda mhux FH/FHR (jibqa' mhux mibdul) jew IgG (jibqa' assenti). Amministrazzjoni ta' anti-P-FH1-5 24-sigħat wara l-kontroll IgG irriżulta fid-dehra ta' tbajja granulari b'antikorpi anti-IgG, anti-FH/FHR, u anti-P kif jidher wara injezzjoni ta' anti-P-FH 1-5 waħdu (ara Figura 3b). Din it-tbajja granulari tnaqqset meta l-injezzjoni anti-P-FH1-5 kienet preċeduta minn injezzjoni anti-P, li tnaqqas kemm iċ-ċirkolazzjoni (ara Figura 1h) kif ukoll glomerulari (ara Figura 3b). Tbajja glomerulari b'anti-IgG kienet evidenti biss fil-ġrieden injettati b'anti-P-FH1-5 (ringiela 3, kolonni 3 u 4) u kienet aktar baxxa b'mod sinifikanti fil-ġrieden li rċevew anti-P-FH1-5 preċedut minn anti-P. Aħna kkonkludejna li d-depożizzjoni ta 'anti-P-FH1-5 fil-glomeruli ta' ġrieden Cfh–/– kienet parzjalment dipendenti fuq properdin. Il-vireg orizzontali jindikaw valuri medjani, u l-whiskers jindikaw il-medda interkwartili. Il-valur P ġie derivat mit-test Mann-Whitney. Bar ¼ 100 mm.

REFERENZI

1.FakhouriF, Frémeaux-Bacchi V, Noöl LH, et al C glomerulopathy∶ anew dassification. Nat Rev Nephrol.20106:494-499.

2 SmithRH.AppeG8.BlomAMet aLC3gkomeripathy—fehim ta 'mard reali rari mmexxi mill-kompliment. Nat ReyNephrol.201915129-143

3. Pickering MC, Cook HT.Serje ta 'mini-reviżjoni tat-traduzzjoni dwar il-fattur tal-kompliment H: mard tal-kliewi assoċjat ma' għarfien ġdid tal-fattur tal-kompliment H mill-bnedmin u l-annimali. Cin Exp Immunol.2008;151:210-230.

4. Daha MR Fearon DT Austen KF, fattur C3nechritic （C3NeF）∶stabbilizzazzjoni tal-fażi tal-fluwidu u convertase tal-passaġġ alternattiv marbut maċ-ċelluli. J Immunol 1976;116:1-7.

5. Mollnes TE, Ng YC, Peters DK, l-effett et al ta 'fattur nefritiku fuq C3 u fuq il-mogħdija terminali ta' komplement in vivo u in vitro. Oin Exp Immunol. 1986;65:73-79.

6. Nq YC, Peters DK. Fattur nefritiku G3 (C3NeF): dissoċjazzjoni ta 'stabbilizzazzjoni tal-fażi fluwida marbuta maċ-ċelluli ta' passaġġ alternattiv C3 convertase. Cn Exp Imunol.19865:450-457.

7. Pickering MC, Cook HT, Warren J, et al Attivazzjoni mhux ikkontrollata C3 tikkawża glomerulonefrite membranoproliferattiva fil-ġrieden defiċjenti fil-fattur tal-kompliment H. Nat Genert.2002:31;424-428.

8. Lesher AM, Zhou L, Kimura Y, et al. Kombinazzjoni ta 'mutazzjoni tal-fattur H u defiċjenza ta' properdin tikkawża glomerulonefrite C3 severa. J Am Soc Nephrol. 2013;24:53–65.

9. Ruseva MM, Veron KA, Lesher AM, et al. It-telf ta' properdin jaggrava l-glomerulopatija C3 li tirriżulta minn defiċjenza tal-fattur H. J Am Soc Nephrol. 2013;24:43-52.

10. Paixao-Cavalcante D, Hanson S, Botto M, et al. Il-Fattur H jiffaċilita t-tneħħija ta 'iC3b marbut ma' GBM billi jikkontrolla l-attivazzjoni C3 fil-fażi tal-fluwidu. Mol Immunol.2009;46:1942-1950.

11Fakhouri F, de Jorge EG. Brune F, et al Trattament bil-fattur tal-kompliment uman H jaqleb malajr id-depożizzjoni tal-kompliment renali fi ġrieden defiċjenti tal-fattur H. Kidney Int.2010:78:279-286.

12. Michelfelder S, Parsons J, Bohlender Ll, et al Fattur uman H prodott minn Moss, ottimizzat bil-glycosylation għal applikazzjoni terapewtika f'disturbi komplementari. JAm Soc Nephrol.201728:1462-1474.

13. Nichols EM, Barbour TD, Pappworth Y, et al Molekula tal-fattur H ta 'mini-complement estiża ttejjeb il-glomerulopatija C3 sperimentali. Kidney Int. 201588:1314-1322.

14. Ruseva MM, Peng T, Laser MA, et al Effikaċja ta 'inibizzjoni ta' komplement immirat f'glomerulopatija C3 sperimentali. J Am Soc Nephrol. 2016;27:405-416.

15. Yang Y, Denton H, Davies OR, et al Kostruzzjoni tal-fattur H tal-kompliment inġinerija għat-trattament tal-glomerulopatija C3. J Am Soc Nephrol. 2018;29:1649-1661.

16. Schulze M, Pruchno CJ, Burns M, et allL Glomerular C3clocalization tindika formazzjoni ta 'depożitu immuni kontinwu u attivazzjoni komplementari fi glomerulonefrite sperimentali. Am J PatholL. 1993:142179-187.

17. Athanasiou Y, Voskarides K Gale DP, et al Glomerulopatija familjari C3 assoċjata ma 'karatteristiċi kliniċi ta' mutazzjonijiet CFHRS ta '91 pazjent f'16-il pedigree. CTn JAm Soc Nephrol.20116:1436-1446.

18. Kaneko Y, Nimmer动hn F, Madaio MP, et al Il-patoloġija u l-protezzjoni fin-nefrite nefrotossika hija determinata minn ingaġġ selettiv ta 'riċetturi speċifiċi Fc. J Exp Med.2006;203:789-797.

19. Sheerin NS, Springall T, Carroll MC, et al. Protezzjoni kontra l-membrana tal-kantina anti-glomerulari (nefrite medjata mill-GBM fil-ġrieden defiċjenti C3-u C4-. C Exp Immunol. 1997;110:403-409.

20. Cheng ZZ Hellwae J, Seeberger H et al. Tqabbil tar-rikonoxximent tal-wiċċ u l-proprjetajiet li jorbtu C3b tal-fattur tal-kumpliment tal-ġurdien u tal-bniedem H.Mol Immunol.2006;43.972-979.

21dp roe EG. Macor P.Paixao-Caakante D. et al L-iżvilupp tas-sindromu uremiku emolitiku tipiku jiddependi fuq komplement C5.J Am Soc Nephrol.2011;22:137-145.

22.Pdkering MC, de Jorge EG.Martinez-Barricarte Ry et al Sindromu uremiku emolitiku spontanju ikkawżat minn fattur komplementari H nieqes minn dominji ta 'rikonoxximent tal-wiċċ. J Exp Med.2007;204:1249-1256.

23Herbert AP. Mike E, Chen ZAet aL Kompliment evażjoni medjata minn titjib tal-fattur H maqbud: implikazzjonijiet għall-protezzjoni ta 'awto-uċuħ mill-complement.J Immunol. 2015;195:4986-4998.

24. Goicoechea de Jorge E Caesar JJ, Malik TH, et al Dimerizzazzjoni ta 'proteini relatati mal-fattur H tal-komplement jimmodula l-attivazzjoni tal-kompliment fil ma'. Proc Natl Acad Sci US A.2013;110:4685-4690.

25. Schmidt CQ, Bai H Lin Z, et al.Inġinerija razzjonali ta 'inibitur immuni minimizzat bi proprjetajiet uniċi ta' mira triplu. J Immunol. 2013;190:5712-5721.

26. Wilson HR, Medjera-Thomas NR, Gilmore AC, et al. Il-kumpless tal-attakk tal-membrana glomerulari mhuwiex markatur affidabbli tal-attivazzjoni C5 li għaddejja fin-nefrite tal-lupus. Kidney Int. 2019.95655-665.

27. Antonioli AH White J, Crawford F, et alL Modulazzjoni tal-mogħdija alternattiva ta 'komplement minn proteini relatati mal-fattur H murini. J Immunol. 2018;200:316-326.

28. Cserhalmi M, CsincsiALMezei Z, et al. Il-proteina FHR-B relatata mal-fattur H murini tippromwovi l-attivazzjoni tal-kompliment. Front Immunol.20178:1145.

29. Medjeral-Thomas NR, Moffett H, Lomax-Browne HJ et al Il-proteina 5 relatata mal-fattur H tal-kompliment glomerulari (FHR5) hija prevalenti ħafna fil-glomerulopatija C3 u assoċjata ma 'indeboliment renaliKdney Int Ren. 2019;4:1387-1400.

30. Miwa T, Sato S, Gullipalli D, et al.Blocking properdin, il-mogħdija alternattiva, u r-riċetturi anafilatoxini jtejbu l-korriment ta 'iskemija-riperfużjoni renali f'fattur li jaċċelera t-tħassir u ġrieden CD59 double-knockout. J Immunol. 2013;190:3552-3559.

31. Corillo F, Bravo Garcia-Morato M, Nozal P, et al Konsum ta 'properdin fis-Serum bħala bijomarkatur ta' disregolazzjoni ta 'C5 convertase fil-glomerulopatija C3. Clin Exp Immunol.2016;184:118-125.8. Lesher AM, Zhou L Kimura Y, et al. Kombinazzjoni ta' mutazzjoni tal-fattur H u defiċjenza ta' properdin tikkawża glomerulonefrite C3 severa.JAm Soc Nephrol.2013;2453-65.

32. zhang Y, Nester OM Martin B.et al Id-definizzjoni tal-profil tal-bijomarkatur komplementari tal-glomerulopatija C3. Clin J Am Soc Nephvol.20149:186-1882.