Studju Komparattiv dwar Kostitwenti Kimiċi U Kontenut Ta' Cistanche Tubulosa (Guanhua Roucongrong) U l-Prodotti Pproċessati tiegħu

Astratt

Għan:Biex tinvestiga l-varjazzjoni (mudelli ta 'bidla) fil-kontenuti ta' kostitwenti kimiċi ta 'prodotti pproċessati ta'Cistanche tubulosa(Guanhua Roucongrong).
Metodi:Ġew magħżula ħames tipi ta 'biċċiet tad-decoction, inklużi slices nejjin, slices inbid-steamed, slices steamed, slices ipproċessati bil-fażola sewda, u slices ipproċessati bil-meraq tal-fażola sewda. Ġie stabbilit metodu tal-marki tas-swaba 'HPLC u kkombinat ma' evalwazzjoni ta 'xebh, analiżi tal-cluster (CA), u analiżi tal-komponenti prinċipali (PCA) biex jiġu skrinjati u kkonfermati komponenti differenzjali bejn il-prodott mhux ipproċessat u l-prodotti pproċessati. Metodi kimometriċi u HPLC ġew impjegati biex jiddeterminaw u jqabblu d-differenzi fil-kontenuti ta 'glycosides totali ta' phenylethanoid, polysaccharides, flavonoids totali, u erba 'phenylethanoid glycosides fost il-kampjuni mhux ipproċessati u pproċessati.
Riżultati:Marki tas-swaba' HPLC ta'Cistanche tubulosa and its processed products were established. With Mark peak matching, 9 common peaks were assigned for raw slices, whereas 11 common peaks were assigned for the other four processed products. Peaks No. 2 and No. 7 were differential chromatographic peaks. By comparison with reference standards, four chromatographic peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Fingerprints of the processed products showed similar profiles with the same number of common peaks; similarity values were all >0.9. Bl-użu ta 'echinacoside bħala l-quċċata ta' referenza, l-RSD ta 'ħinijiet ta' żamma relattivi ta 'qċaċet komuni fost prodotti pproċessati differenti varjaw minn 0.11% sa 0.82%, filwaqt li l-RSD ta' żoni peak relattivi varjaw minn 15.46% għal 76.07%. Meta d-distanza bejn il-klassijiet kienet issettjata għal 10, CA kklassifikat flieli nejjin u prodotti pproċessati fi tliet kategoriji. Il-PCA indikat differenzi fil-kompożizzjoni bejn kampjuni mhux ipproċessati u pproċessati: il-varjabbli tal-quċċata 11 tnaqqsu għal tliet komponenti prinċipali; komponenti prinċipali differenti korrelatati ma 'qċaċet kromatografiċi differenti. Ibbażat fuq il-matriċi tal-komponenti u l-ippeżar lineari, punteġġi komprensivi wrew li l-flieli pproċessati bil-meraq tal-fażola sewda u l-flieli tal-fwar tal-inbid isfar u tal-fwar tal-ilma kklassifikaw ogħla. Il-kontenuti fil-kampjuni mhux ipproċessati u pproċessati kienu kif ġej: phenylethanoid glycosides totali 3.80%-7.07%, polysaccharides totali 5.85%-6.70%, flavonoids totali 14.16%-24.26%; echinacoside 4.11%-5.99%, acteoside 0.67%-1.34%, cistanoside A 0.06%-0.36%, u isoacteoside 0.25%-1.66%. Kien hemm differenzi konsiderevoli fost il-prodotti pproċessati.
Konklużjoni:Il-metodu tal-marki tas-swaba HPLC stabbilit għandu speċifiċità qawwija, jiddistingwi b'mod effettiv il-flieli nejjin minn prodotti pproċessati ta'Cistanche tubulosa, u huwa adattat għal analiżi kwalitattiva u kwantitattiva ta 'echinacoside, acteoside, cistanoside A, u isoacteoside fil-mediċina mhux raffinata u prodotti pproċessati. Il-profili komparattivi u l-bidliet fil-kontenut fost kampjuni differenti jistgħu jipprovdu bażi xjentifika għall-identifikazzjoni u l-kontroll tal-kwalità ta'Cistanche tubulosau l-prodotti pproċessati varji tagħha.

Kliem ewlieni: Cistanche tubulosa; l-ipproċessar; kostitwenti kimiċi; marki tas-swaba'; kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC)

 

1 Introduzzjoni

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight (Guanhua Roucongrong) hija ħaxixa perenni f'Orobanchaceae u hija sors elenkat uffiċjalment ta' Cistanches Herba fil-Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina (minn hawn 'il quddiem imsejħa l-"Farmakopea Ċiniża"). Il-parti mediċinali hija iz-zokk imnixxef imlaħħam bi weraq bil-qoxra. Huwa ta 'natura sħuna, ħelu u mielaħ fit-togħma, u jidħol fil-meridjani tal-kliewi u tal-musrana l-kbira, b'funzjonijiet ta' tonifikazzjoni tal-yang tal-kliewi, li jibbenefikaw l-essenza u d-demm, u niedja l-imsaren biex ittaffi l-istitikezza [1]. Studji farmakoloġiċi moderni kkonfermaw attivitajiet multipli, bħalma huma l-anti-aging, it-titjib immuni, it-tonifikazzjoni tal-kliewi u l-effetti afrodisjaċi, l-effetti lassattivi, u l-attività kontra l-pressjoni għolja.

Cistanche tubulosahija rikka fl-phenylethanoid glycosides, iridoids u l-glycosides tagħhom, lignans, oligosaccharide esteri, polyols, polysaccharides, flavonoids, u kostitwenti oħra [2]. Fost dawn, phenylethanoid glycosides huma l-komponenti attivi ewlenin u l-aktar komposti abbundanti; huma wkoll il-komponenti li jimmarkaw għad-determinazzjoni tal-kontenut fil-farmakopea, u juru bijoattivitajiet diversi bħal effetti antiossidanti, promozzjoni metabolika, titjib tat-tagħlim u l-memorja, u titjib tal-funzjoni sesswali [3].

Cistanche tubulosajippreferi art salina-alkali u reġjuni deżert Gobi, parasitizes fuq għeruq taTamarixspp., u hija distribwita prinċipalment fil-Mongolja ta' ġewwa, Xinjiang, u Gansu fiċ-Ċina [4]. Żoni ġeo-awtentiċi selvaġġi u kkultivati ​​jinkludu l-Kontea ta 'Minfeng, Yutian, Pishan, u Moyu fil-Prefettura ta' Hotan, Xinjiang. L-ipproċessar tiegħu huwa prinċipalment żviluppat f'biċċiet ta 'decoction imqatta', materjali veġetali mhux raffinati, estratti, prodotti tas-saħħa, u ikel funzjonali; fost dawn, biċċiet tad-decoction kummerċjali jibqgħu mainstream. Madankollu, fis-suq, prodotti pproċessati differenti-bħal flieli nejjin, flieli pproċessati bl-inbid, flieli inattivati ​​bl-enzimi b'temperatura għolja, u flieli steamed bl-ilma - ħafna drabi huma mħallta u diffiċli biex jiġu distinti.

L-ipproċessar ta 'Cistanches Herba evolviet maż-żmien, minn rekords antiki bħalTaiping Shenghui Fang, Zhenglei Bencao, uPuji Fang[5–7] (eż., ħasil bl-inbid, ħawwad bl-inbid, fwar/ħami bl-inbid, tixrib/ħami niexef bl-inbid, togħlija fl-ilma, fwar triplu, u stir-fry tal-butir) għal metodi moderni bħall-maċerazzjoni tal-inbid (fwar), fwar wieħed, "erba 'fwar u erba' xemx", u [8-bean]. Metodi ta 'pproċessar differenti jistgħu jaffettwaw il-kontenut ta' kostitwenti attivi, is-sigurtà u l-attività bijoloġika. Cai Hong et al. [9] sabet li l-inattivazzjoni tal-enżimi ta 'materjal frisk b'ilma sħun ta' 70 grad għal 6 min irriżulta f'kontenuti ta 'echinacoside u acteoside li jkunu 7.3 darbiet u 6.5 darbiet dawk ta' tnixxif dirett mix-xemx, rispettivament. Tie Xiaoyan et al. [10] irrapporta li l-ipproċessar tal-fwar tejbet b'mod notevoli l-kwalità tal-biċċiet tad-decoction meta mqabbla ma 'materjali friski. Chen Weijun et al. [11] osserva li l-kontenut ta’ betaine naqas wara l-ipproċessar tal-inbid, tal-melħ u tal-fwar meta mqabbel ma’ prodotti friski. Zhang Chao et al. [12] wera li waqt il-fwar ta 'l-inbid, b'ħin itwal ta' fwar, echinacoside, acteoside, cistanoside A, u 2′-acetylatteoside naqsu gradwalment, filwaqt li isoacteoside żdied b'mod sinifikanti.

L-edizzjoni attwali tal-2025 tal-Farmakopea Ċiniża tistabbilixxi biss limiti għall-echinacoside u l-acteoside fi slices nejjin u slices inbid steamed, iżda ma tispeċifikax komponenti ta 'markatur għal prodotti pproċessati oħra, u m'għandhiex metodi effettivi ta' kontroll tal-kontenut. Għalhekk, l-analiżi u t-tqabbil tal-kostitwenti karatteristiċi u l-esplorazzjoni tal-mudelli ta 'bidliet fil-kompożizzjoni huma partikolarment importanti għall-identifikazzjoni kwalitattiva u l-kontroll kwantitattiv ta' prodotti mhux ipproċessati u pproċessati.

Il-marki tas-swaba' tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM) hija rappreżentazzjoni olistika tal-kostitwenti kimiċi. B'vantaġġi ta 'integrità, speċifiċità u informazzjoni rikka, hija użata ħafna fl-evalwazzjoni tal-kontroll tal-kwalità ta' drogi u preparazzjonijiet mhux raffinati, allinjament ma 'standards internazzjonali, identifikazzjoni tal-awtentiċità, monitoraġġ tal-proċess tal-manifattura, u riċerka dwar sustanzi farmakodinamiċi [13]. Ibbażat fuq il-marki tas-swaba HPLC, dan l-istudju għażel echinacoside, acteoside, cistanoside A, u isoacteoside bħala markaturi ta 'kwalità, u uża analiżi ta' xebh, CA, u PCA flimkien ma 'determinazzjoni tal-kontenut biex iqabblu kostitwenti kimiċi u mudelli ta' bidla fil-kontenut fost prodotti pproċessati differenti, li jipprovdu bażi xjentifika għall-identifikazzjoni u l-kontroll tal-kwalità.

 

2 Strumenti u Materjali

2.1 Strumenti

Sistema HPLC U3000 (Thermo Fisher); UPL-111-20R sistema ta 'ilma ultrapur (Sichuan Youpu); Bilanċ elettroniku AB 265-S (Mettler Toledo); KQ-5200DA estrattur ultrasoniku/cleaner (Kunshan Ultrasonic); GZX-9240MBE forn tat-tnixxif elettriku (Shanghai Boxun); UV-2600 Spettrofotometru UV–Vis (Shimadzu, iċ-Ċina).

2.2 Drogi u Reaġenti

FriskCistanche tubulosa(Il-lott Nru . 20241008) ġie fornut minn Xinjiang Congrongtang Biotechnology Co., Ltd. u awtentikat mir-Riċerkatur Wang Guoping (l-Istitut tar-Reġjun Awtonomu Xinjiang Uygur tal-Materia Medica) bħala zokk imlaħħam ta'Cistanche tubulosa(Schenk) Wight (Orobachaceae).

Sustanzi ta' referenza: D-glukożju anidru (Lott Nru . 361810, 100.00%, Shenzhen Jinhui Biotechnology Co., Ltd.); echinacoside (Lott Nru . 111670-201907), rutin (Lott Nru . 100080-202012), acteoside (Lott Nru . 11530-202315), cistanoside A (Lott Nru . 313512), u isoacteoside (Lott Nru {. 313413), b'purità tal-assaġġ HPLC Akbar minn jew ugwali għal 91.8%, 92.2%, 92.2%, 97.2%, 97.6%, 97.6% 98.09%, rispettivament, mill-Istituti Nazzjonali għall-Kontroll tal-Ikel u d-Droga (iċ-Ċina).(Nota: linja waħda ta' purità hija maqtugħa fit-test ipprovdut; dan ta' hawn fuq isegwi l-parti li tinqara.)

Inbid tar-ross isfar (tip semi-niexef, alkoħol 16%; Zhejiang Guyuelongshan Shaoxing Wine Co., Ltd.); metanol u aċetonitrile (grad HPLC, Fisher Scientific, USA). Reaġenti oħra kienu ta 'grad analitiku.

3 Metodi u Riżultati

3.1 Preparazzjoni ta 'flieli mhux ipproċessati u prodotti pproċessati ta'Cistanche tubulosa

Il-metodi li ġejjin intużaw biex jippreparaw flieli nejjin u prodotti pproċessati, kull wieħed f'6 lottijiet.

Flieli nejjin:FriskCistancheinqatgħet fi flieli 3 mm u mnixxfa f'60 grad.

Metodu ta' fwar:Skont il-letteratura [14], 20 g ta 'flieli nodfa tħalltu ma' 6 mL ilma distillat f'kontenitur issiġillat, niedja għal 4 sigħat [12], steamed fuq l-ilma għal 12-il siegħa, imkessħa, u mnixxfa f'60 grad.

Metodu tal-ipproċessar tal-inbid:Ippreparat skont il-metodu tal-istewing tal-inbid jew tal-fwar tal-inbid (Regola Ġenerali 0213, Farmakopea Ċiniża).

Ħawwad-ipproċessar bil-fażola sewda:Ippreparat skondĊiniż Materia Medica(Zhonghua Bencao) taħt Cistanches Herba; fażola sewda ġiet miżjuda f'1 kg għal kull 10 kg ta 'Cistanchematerjal.

Ipproċessar tal-meraq tal-fażola sewda:Flieli tħalltu ma 'meraq tal-fażola sewda u mbagħad ipproċessati bil-metodu tal-fwar ta' hawn fuq; id-dożaġġ tal-fażola sewda kien l-istess bħal hawn fuq.

3.2 Determinazzjoni ta' Oġġetti ta' Spezzjoni

L-umdità ġiet iddeterminata bit-tnixxif fil-forn (Regola Ġenerali 0832, Farmakopea Ċiniża); irmied totali bir-Regola Ġenerali 2302; estrattivi li jinħallu fl-alkoħol bil-metodu ta’ maċerazzjoni kiesħa taħt ir-Regola Ġenerali 2201. Ir-riżultati huma murija fit-Tabella 1.

 

3.3 Analiżi Komparattiva tal-Marki tas-Swaba' HPLC ta'Cistanche tubulosau l-Prodotti Ipproċessati tagħha

3.3.1 Kundizzjonijiet Kromatografiċi

Kolonna Waters Xterra RP18 (250 mm × 4.6 mm, 5 µm). Fażi mobbli: aċetonitrile (A)–0.1% aċidu formiku (B) b'eluzzjoni gradjent: 0–12 min, 14% A → 17% A; 12-30 min, 17% A → 19% A; 30-35 min, 19% A → 14% A; 35-50 min, 14% A. Rata tal-fluss: 1.0 mL·min⁻¹. Temperatura tal-kolonna: 30 grad. Wavelength ta 'skoperta: 330 nm. Volum ta' injezzjoni: 10 µL.

3.3.2 Preparazzjoni tas-Soluzzjonijiet

Soluzzjonijiet ta' referenza:Echinacoside, acteoside, cistanoside A, u sustanzi ta 'referenza isoacteoside ġew miżuna u maħlula b'mod preċiż f'50% metanol f'garafini volumetriċi 10 mL biex jinkisbu soluzzjonijiet ta' 1.1301, 0.2294, 0.2255, u 0.2109 mg·mL⁻;¹, rispettivament; iffiltrat biex jinkisbu soluzzjonijiet finali.

Soluzzjonijiet kampjun:0.5 g ta’ trab ta’ 80 malji ta’ kampjuni mhux ipproċessati u pproċessati intiżen b’mod preċiż, estratt b’50% metanol f’kunjett volumetriku ta’ 25 mL, ultrasonikat (200 W, 40 kHz) għal 40 min, imkessaħ, imħallat, jitħalla joqgħod, u ffiltrat minn membrana ta’ 0.22 µm; il-filtrat intuża.

3.3.3 Validazzjoni tal-Metodu (marki tas-swaba')

3.3.3.1 Preċiżjoni

L-istess soluzzjoni tal-kampjun ġiet injettata sitt darbiet konsekuttivi. Bl-użu ta 'echinacoside bħala l-quċċata ta' referenza, l-RSD ta 'ħinijiet ta' żamma relattivi ta 'qċaċet komuni kien<0.48% and the RSD of relative peak areas was <2.86%, indicating good instrumental precision.

3.3.3.2 Ripetibbiltà

Sitt soluzzjonijiet ta 'kampjuni paralleli ġew ippreparati mill-istess lott (porzjon mhux maħdum S1). Bl-użu ta 'echinacoside bħala l-quċċata ta' referenza, l-RSD ta 'ħinijiet ta' żamma relattivi kien<0.07% and the RSD of relative peak areas was <2.77%, indicating good method repeatability.

3.3.3.3 Stabbiltà

L-istess soluzzjoni tal-kampjun ġiet analizzata f'0, 3, 6, 9, 12, u 24 siegħa. Bl-użu ta 'echinacoside bħala l-quċċata ta' referenza, l-RSD ta 'ħinijiet ta' żamma relattivi kien<0.11% and the RSD of relative peak areas was <2.33%, indicating stability within 24 h.

3.3.4 Stabbiliment ta' Marki tas-Swaba'

Tletin lott taCistanche tubulosau prodotti pproċessati ġew analizzati. Intużat is- "Sistema ta 'Evalwazzjoni ta' Similarjetà għall-Marki tas-Swaba 'Kromatografiċi tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża" (edizzjoni 2012). Il-porzjon nej S1 u l-porzjon isfar tal-inbid J1 intużaw bħala marki tas-swaba’ ta’ referenza; il-metodu medju u wisa 'tieqa ta' ħin ta '0.1 min ġew applikati għall-korrezzjoni multipunt u Mark peak tqabbil biex jiġġeneraw marki tas-swaba' (Figuri 1-2), u nkisbu kromatogrammi overlaid bi standards ta 'referenza mħallta (Figura 3).

Ir-riżultati wrew li l-erba 'prodotti pproċessati kellhom profili tal-marki tas-swaba' simili għal dawk ta 'flieli mhux maħduma. Il-flieli nejjin kellhom 9 qċaċet komuni, filwaqt li l-flieli pproċessati bl-inbid bil-fwar, bil-fwar, ħawwad-proċessati bil-fażola sewda, u l-biċċiet ipproċessati bil-meraq tal-fażola sewda kellhom 11-il qċaċet komuni. Disa' qċaċet komuni kienu kondiviżi mit-tnejn. Il-Qċaċet Nru. 2 u Le. 7 kienu qċaċet karatteristiċi li jiddistingwu slices nejjin minn prodotti pproċessati. Il-profili tal-marki tas-swaba' fost l-erba' prodotti pproċessati kienu simili, u ma kinux jirriflettu b'mod ċar differenzi bejniethom.

3.3.5 Analiżi ta' Xebh

Using J1 as the reference fingerprint, similarity analysis was performed for different processed products (Table 2). Similarities were all >0.9, li jindika karatteristiċi simili ta 'marki tas-swaba' fost prodotti pproċessati differenti.

3.3.6 Identifikazzjoni tal-Qċaċet Komuni

Billi tqabbel iż-żminijiet ta 'żamma ma' standards ta 'referenza mħallta u l-kromatogramma tal-porzjon mhux maħdum, ġew identifikati erba' qċaċet kromatografiċi: Peak 4, echinacoside; Peak 9, cistanoside A; Peak 10, acteoside; Peak 11, isoacteoside (Figura 2). Bil-Peak 4 (echinacoside) bħala l-quċċata ta 'referenza, il-valuri RSD ta' ħinijiet ta 'żamma relattivi ta' qċaċet komuni fost lottijiet differenti tal-erba 'prodotti pproċessati varjaw minn 0.11% sa 0.82%, u l-valuri RSD ta' żoni relattivi peak varjaw minn 15.46% sa 76.07%.

3.3.7 Analiżi tal-Cluster

SPSS 27.0 intuża għall-analiżi tal-clusters ta 'flieli mhux ipproċessati u prodotti pproċessati. Ġiet applikata rabta bejn il-gruppi u ntużat distanza Ewklidja kwadrata (Figura 4). Meta d-distanza bejn il-klassi kienet<5, water-steamed slices and wine-steamed slices clustered together. When the inter-class distance was 10, raw slices and the four processed products were classified into three categories: raw materials (S1–S6) as one category; black-bean-juice-processed slices (H1–H6) as one category; and wine-steamed slices (J1–J6) together with water-steamed slices (Q1–Q6) and stir-processed-with-black-beans slices (C1–C6) as one category. When the inter-class distance was between 15 and 25, black-bean-juice-processed slices formed a separate cluster from the other samples.

3.3.8 Analiżi tal-Komponent Prinċipali

Wara l-istandardizzazzjoni taż-żoni peak, PCA twettqet bl-użu ta 'SPSS 27.0. Il-valur KMO kien 0.679 u s-sinifikat tat-test ta 'Bartlett kien<0.001, indicating suitability for PCA. With eigenvalues >1, tliet komponenti prinċipali ġew estratti b'valuri eigen 6.815, 1.987, u 1.105. Ir-rati tal-kontribuzzjoni tal-varjanza kienu 61.954%, 18.063%, u 10.047%, rispettivament, b'rata ta 'kontribuzzjoni tal-varjanza kumulattiva ta' 90.064% (Tabella 3). Dan jindika li l-ewwel komponent prinċipali huwa l-aktar indikatur importanti għall-punteġġ komprensiv.

Il-matriċi tal-komponenti wriet li fl-ewwel komponent prinċipali, il-koeffiċjenti assoluti tal-varjabbli tal-ogħla żona għal Peaks 2-9 u Peak 11 kienu relattivament kbar, li jissuġġerixxu influwenza qawwija fuq F1. It-tieni komponent prinċipali kkorrelata mal-informazzjoni tal-Qċaċet 1 u 10, u t-tielet komponent prinċipali kkorrelata mal-Quċċata 1. Il-matriċi tal-komponenti tidher fit-Tabella 4; il-plott scree u l-plott tat-tagħbija huma murija fil-Figuri 5 u 6. Bl-użu tal-punteġġi tat-tliet komponenti prinċipali u r-rati tal-kontribuzzjoni tal-varjanza tagħhom bħala piżijiet għall-ippeżar lineari, ġew ikkalkolati punteġġi komprensivi (Tabella 5), ​​li jindika li flieli pproċessati bil-meraq tal-fażola sewda, flieli steamed fl-ilma, u flieli steamed inbid ogħla.

 

3.4 Determinazzjoni HPLC ta 'Kostitwenti Multipli fiCistanche tubulosau l-Prodotti Ipproċessati tagħha

3.4.1 Kundizzjonijiet Kromatografiċi u Speċifiċità

Il-kundizzjonijiet kromatografiċi kienu l-istess bħal dawk użati għat-teħid tal-marki tas-swaba’. Soluzzjonijiet tal-kampjun, soluzzjonijiet ta 'referenza, u soluzzjonijiet vojta negattivi (inbid tar-ross isfar, ilma purifikat, meraq tal-fażola sewda) ġew injettati kull wieħed (10 µL). Il-ħinijiet ta' żamma ġew imqabbla. Is-soluzzjonijiet vojta negattivi ma wrew l-ebda interferenza ma 'echinacoside, cistanoside A, acteoside, u isoacteoside.[test nieqes fis-sors]

3.4.2 Linearità

Soluzzjonijiet ta 'referenza ta' echinacoside, acteoside, cistanoside A, u isoacteoside f'konċentrazzjonijiet ta '1.1301, 0.2294, 0.2255, u 0.2109 mg·mL⁻¹ ġew pipettati b'mod preċiż f'1, 2, 4, 8, 10µL u 16µL injettati. Rigressjoni lineari twettqet b'erja massima XXX kontra konċentrazzjoni injettata YYY (mg·mL⁻¹). L-ekwazzjonijiet lineari u l-firxiet huma murija fit-Tabella 6.

3.4.3 Preċiżjoni

L-istess soluzzjoni tal-kampjun ġiet injettata sitt darbiet konsekuttivi. Il-valuri RSD tal-kontenut għall-erba' analiti (echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside) kienu 0.23%, 2.71%, 0.53%, u 2.08%, rispettivament (Tabella 7), kollha<3%, indicating good instrumental precision.

3.4.4 Ripetibbiltà

Sitt soluzzjonijiet ta 'kampjuni paralleli ġew ippreparati mill-istess lott (porzjon mhux maħdum S1). Il-valuri RSD tal-kontenut għall-erba' analiti kienu 0.22%, 2.46%, 0.50%, u 2.46%, rispettivament (Tabella 7), kollha<3%, indicating good repeatability.

3.4.5 Stabbiltà (Fil-ġurnata)

L-istess soluzzjoni tal-kampjun ġiet analizzata f'0, 3, 6, 9, 12, u 24 siegħa. Il-valuri RSD tal-kontenut għall-erba' analiti kienu 0.80%, 1.62%, 1.72%, u 1.49%, rispettivament (Tabella 7), kollha<2.0%, indicating stability within 24 h.

3.4.6 Stabbiltà (Inter-day)

L-istess soluzzjoni tal-kampjun ġiet analizzata għal ħamest ijiem konsekuttivi. Il-valuri RSD tal-kontenut għall-erba' analiti fuq ħamest ijiem kienu 2.80%, 2.53%, 3.53%, u 2.88%, rispettivament (Tabella 7), li jindikaw stabbiltà fi żmien ħamest ijiem.

3.4.7 Irkupru

Ammont xieraq taCistanche tubulosakampjun ġie miżun, u standards ta 'referenza ta' echinacoside, acteoside, cistanoside A, u isoacteoside ġew miżjuda fi proporzjon 1:1. Ġew ippreparati u analizzati sitt soluzzjonijiet ta' kampjuni paralleli (injezzjoni ta' 10 µL). L-irkupri medji kienu 99.29%, 98.75%, 99.45%, u 96.13% (n=6), b'valuri RSD ta '2.51%, 0.38%, 1.71%, u 0.49%, rispettivament.

3.4.8 Riżultati ta' Determinazzjoni

Għal kull kampjun, 0.5 g ta 'trab intiżen b'mod preċiż; Ġie injettat 10 µL biex jiġi ddeterminat u kkalkulat il-kontenut perċentwali tal-erba' kostitwenti. Ir-riżultati huma murija fil-Figuri 7–10.

 

3.5 Determinazzjoni tal-Glycosides Totali tal-Phenylethanoid, Total Polysaccharides, u Total Flavonoids

3.5.1 Determinazzjoni ta 'Glycosides Phenylethanoid Totali

3.5.1.1 Preparazzjoni tas-Soluzzjoni ta' Referenza

Ammont xieraq ta' sustanza ta' referenza echinacoside kien miżun b'mod preċiż u maħlul fil-metanol fi flixkun volumetriku ta' 10 mL biex tinkiseb soluzzjoni b'konċentrazzjoni ta' 0.32 mg·mL⁻¹. Skont il-letteratura [15], 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, u 1.2 mL tas-soluzzjoni ta 'referenza ġew pipettati, dilwiti għal 10 mL b'metanol, u l-assorbiment (A) tkejjel f'333 nm. L-ekwazzjoni tal-kurva standard imwaħħla kienet Y=24.7596X+0.0147Y=24.7596X + 0.0147Y=24.7596X{+0.0147, R2=0.9995R^{2=0.9995R{2=0.9995, b'medda lineari ta' 0.0029–0.0359 mg.¹·mL.

3.5.1.2 Preparazzjoni tas-Soluzzjoni tal-Kampjun

100 mg ta 'trab tal-kampjun (mgħoddi minn għarbiel ta' 100 malji) intiżen b'mod preċiż, estratt ultrasoniku b'metanol għal 30 min (200 W, 40 kHz), dilwit għal 10 mL, u ffiltrat minn membrana ta '0.22 µm. Imbagħad 0.2 mL ta 'filtrat ġew dilwiti aktar għal 10 mL b'metanol u mħallta għall-analiżi.

3.5.1.3 Determinazzjoni

Għal kull kampjun, intuża 100 mg ta 'trab biex jipprepara s-soluzzjoni tal-kampjun. L-assorbiment tkejjel f'333 nm u l-kontenut perċentwali tal-glikożidi feniletanojdi totali ġie kkalkulat (Tabella 9).

Ekwazzjoni (1):
Kontenut (%) =C×V×Dm×100%= \\dfrac{C \\times V \\times D}{m} \\times 100\\%=mC×V×D​×100%
fejn CCC hija l-konċentrazzjoni tal-analite fis-soluzzjoni tal-kampjun, VVV huwa l-volum tat-trattib, DDD huwa l-fattur tat-trattib, u mmm huwa l-massa tal-kampjun (mg).

3.5.2 Determinazzjoni tal-Polysaccharides Totali

3.5.2.1 Preparazzjoni tas-Soluzzjoni ta' Referenza

Ammont xieraq ta' sustanza ta' referenza anidruża D-glukożju kien miżun b'mod preċiż, maħlul f'ilma purifikat, u dilwit għal 10 mL biex tinkiseb soluzzjoni ta' 0.190 mg·mL⁻¹. Wara t-taħlit u l-filtrazzjoni (0.22 µm), 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, u 1.0 mL ġew pipettati. L-iżvilupp tal-kulur sar bil-metodu anthrone–sulfuric acid [16]. L-assorbiment kien imkejjel f'625 nm. L-ekwazzjoni tal-kurva standard mwaħħla kienet Y=35.1316X−0.0079Y=35.1316X - 0.0079Y{=35.1316X−0.0079, R{2=0.9957R^{2=0.9957R{2=0.9957, b'medda lineari ta' 0.0038–0.0190¹.

3.5.2.2 Preparazzjoni tas-Soluzzjoni tal-Kampjun

40 mg ta' trab tal-kampjun intiżen b'mod preċiż, maħlul ultrasonikament f'ilma purifikat għal 30 min (200 W, 40 kHz), dilwit għal 10 mL, u ffiltrat minn membrana ta' 0.22 µm.

3.5.2.3 Determinazzjoni

Għal kull kampjun, intuża 40 mg biex tipprepara s-soluzzjoni tal-kampjun. Imbagħad 0.1 mL ta 'filtrat ġie pipettat u supplimentat b'ilma purifikat għal 2.00 mL. Wara l-iżvilupp tal-kulur bil-metodu anthrone-sulfuric acid, ġiet imkejla l-assorbiment u ġie kkalkulat il-kontenut perċentwali tal-polisakkaridi totali (Tabella 8).

3.5.3 Determinazzjoni tal-Flavonoids Totali

3.5.3.1 Preparazzjoni tas-Soluzzjoni ta' Referenza

Ammont xieraq ta 'sustanza ta' referenza ta 'rutin ġie miżun b'mod preċiż, maħlul f'70% etanol, u dilwit għal 25 mL; iffiltrat minn membrana ta' 0.22 µm. Imbagħad 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, u 4.0 mL ġew pipettati. L-iżvilupp tal-kulur sar bl-użu tal-metodu tan-nitrat tas-sodju–nitrat tal-aluminju–idrossidu tas-sodju [17]. L-assorbiment kien imkejjel f'510 nm. L-ekwazzjoni tal-kurva standard imwaħħla kienet Y=11.5699X+0.0684Y=11.5699X + 0.0684Y=11.5699X{+0.0684, R2=0.9989R^2=0.9989R{2=0.9989, b'medda lineari ta' 0.0097–0.0738 mg¹.

3.5.3.2 Preparazzjoni tas-Soluzzjoni tal-Kampjun

50 mg ta 'trab intiżen b'mod preċiż, maħlul ultrasonikament f'70% etanol għal 30 min (200 W, 40 kHz), dilwit għal 10 mL, u ffiltrat minn membrana ta' 0.22 µm.

3.5.3.3 Determinazzjoni

Għal kull kampjun, intużat 50 mg biex tipprepara s-soluzzjoni tal-kampjun. Imbagħad 0.5 mL ta 'filtrat ġew trasferiti fi flixkun volumetriku ta' 10 mL u reaġenti tal-kulur ġew miżjuda f'sekwenza kif hawn fuq. Ilma purifikat serva bħala l-vojt. L-assorbiment ġiet imkejla u l-kontenut perċentwali tal-flavonoids totali ġie kkalkulat (Tabella 8).

 

4 Diskussjoni

F'dan l-istudju, marki tas-swaba HPLC taCistanche tubulosa and its various processed products were established. Peak matching across different batches confirmed 9 common peaks in raw slices and 11 common peaks in processed products. By comparison with reference standards, four common peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Similarity analysis showed that similarity values among four processed products were all >0.9, u l-profili ġenerali tal-marki tas-swaba 'kienu simili, li jindikaw li t-tipi kostitwenti tagħhom kienu qrib. Madankollu, id-differenzi kbar fl-RSD ta 'żoni peak relattivi jissuġġerixxu differenzi notevoli fil-kontenut kostitwenti.

Meta mqabbla mal-flieli mhux maħduma, l-erba 'prodotti pproċessati esibiti żewġ qċaċet addizzjonali (Qċaċet 2 u 7), li jindika li kostitwenti kimiċi mibdula wara l-inbid-fwar, ilma-fwar, jew l-ipproċessar tal-fażola sewda. Dawn il-qċaċet iġġenerati ġodda huma preżunti li jiġu ffurmati waqt l-ipproċessar; il-karatterizzazzjoni tal-komponenti tagħhom se tiġi indirizzata fi studji sussegwenti.

Ir-riżultati CA wrew li meta d-distanza inter-klassi kienet<5, wine-steamed and water-steamed slices clustered together, suggesting similar chemical composition and content. At an inter-class distance of 10, raw slices could be separated from black-bean-juice-processed slices, stir-processed-with-black-beans slices, and wine/water-steamed slices. At inter-class distances of 15–25, differences between black-bean-juice-processed slices and other samples became more prominent. PCA results indicated that three principal components had substantial influence on comprehensive evaluation.

Metodi ta 'proċessar differenti affettwaw direttament il-livelli ta' kostitwenti varji. Ibbażat fuq determinazzjoni kimometrika, il-glikożidi feniletanojdi totali kklassifikati bħala: ipproċessat bil-meraq tal-fażola sewda > flieli nej > steamed-ilma > inbid-steamed > ħawwad-proċessat-bil-fażola-iswed. Polysaccharides totali kklassifikati bħala: ilma bil-fwar > inbid steamed > ħawwad-ipproċessat-bil-fażola-iswed> iswed-fażola-meraq ipproċessat > flieli nejjin. Flavonoids totali kklassifikati bħala: black-bean-juice-processed > water-steamed > stir-processed-with-black-beans > inbid-steamed > flieli nejjin. Meta mqabbel ma 'flieli nejjin, l-ipproċessar tal-meraq tal-fażola sewda żied il-glikożidi feniletanojdi totali, filwaqt li metodi oħra ta' pproċessar naqsuh; l-erba 'metodi ta' pproċessar żiedu b'mod sinifikanti l-polisakkaridi totali u l-flavonoids totali. Bejn iż-żewġ metodi tal-fażola sewda, l-ipproċessar tal-meraq tal-fażola sewda pproduċa żidiet akbar fil-glikożidi tal-feniletanojdi totali u flavonoids totali minn ħawwad-ipproċessar bil-fażola sewda, b'differenzi statistiċi.

 

Tabella 8. Riżultati tad-determinazzjoni tal-glikożidi feniletanojdi totali, polisakkaridi totali, u flavonoids totali f'Cistanche tubulosau l-prodotti pproċessati tagħha

Prodott ipproċessat (biċċiet tad-decoction)	Glikożidi feniletanojdi totali (%)	Polisakkaridi totali (%)	Flavonojdi totali (%)
Flieli nejjin	6.81 ± 0.06	5.85 ± 0.10	14.16 ± 0.24
Flieli tal-inbid steamed	5.10 ± 0.05***	6.61 ± 0.05***	20.84 ± 0.33***
Flieli bil-fwar tal-ilma	5.23 ± 0.05***	6.70 ± 0.15***	21.59 ± 0.37***
Ħawwad ipproċessat bi slices tal-fażola sewda	3.80 ± 0.02***	6.56 ± 0.09***	21.02 ± 0.35***
Flieli pproċessati bil-meraq tal-fażola sewda	7.07 ± 0.09****	6.09 ± 0.03****	24.26 ± 0.18****

Noti: Meta mqabbel ma 'flieli mhux maħduma: *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001; meta mqabbla ma 'flieli ħawwad-proċessati bil-fażola sewda: *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001.

Echinacoside, acteoside, cistanoside A, u isoacteoside huma glikożidi feniletanojdi ewlenin li jikkontribwixxu għall-effetti ta 'tonifikazzjoni tal-kliewi u ta' benefiċċju għall-essenza.Cistanche tubulosa. It-tqabbil tal-HPLC ta 'dawn l-erba' kostitwenti wera li d-differenzi fiż-żona tal-quċċata fost il-qċaċet komuni jistgħu jservu bħala bażi biex jiddistingwu prodotti pproċessati differenti. Meta mqabbel ma 'flieli mhux ipproċessati, echinacoside, cistanoside A, u isoacteoside żdiedu fi gradi differenti fi prodotti pproċessati, b'żidiet aktar evidenti fil-prodotti tal-meraq tal-fażola sewda. Acteoside naqas fi tliet prodotti pproċessati iżda żdied fil-prodotti ħawwad-proċessati bil-fażola sewda. Dan jista 'jirrelata ma' l-istabbiltà inerenti ta 'acteoside: bħala diglycoside phenylethanoid b'moety caffeoyl, jista' jgħaddi minn qsim ta 'bonds ester taħt bidliet fit-temperatura tat-tisħin, ħin, u pH biex jiġġenera aċidu caffeic, u isomerize parzjalment għal isoacteoside. It-tnaqqis osservat fl-acteoside u ż-żieda fl-isoacteoside fl-erba 'prodotti pproċessati jistgħu jkunu assoċjati ma' fwar f'temperatura għolja, konsistenti ma 'mudelli rrappurtati għall-ipproċessar ta' Rehmanniae Radix [18].

Echinacoside żdied wara l-ipproċessar tal-fwar tal-inbid/ilma u l-fażola sewda f'dan l-istudju, li huwa kuntrarju għal Zhang Chao et al. [12]. Meta tqabbel l-ipproċessar tal-ħawwad mal-fażola sewda u l-ipproċessar tal-meraq tal-fażola sewda, dan tal-aħħar wera kontenuti ogħla b'mod sinifikanti ta 'echinacoside u cistanoside A u xejra ta' konverżjoni aktar evidenti minn acteoside għal isoacteoside. B'mod ġenerali, dan l-istudju jiżvela bidliet fil-kompożizzjoni u fil-kontenut wara diversi metodi ta 'proċessar u jivverifika l-bidla规律 bejn acteoside u isoacteoside. Il-marki tas-swaba' HPLC jipprovdu metodu xjentifiku biex jiġu identifikati flieli nejjin u prodotti pproċessati, u joffru referenza biex jiġu stabbiliti standards ta' kontroll tal-kwalità u għal analiżi kwalitattiva u kwantitattiva.

 

Kunflitt ta' Interess

L-awturi jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur

XU Xiaoqin: appoġġ għall-proġett, disinn ta 'studju, determinazzjoni sperimentali, u kitba manuskritt;
QING Degang: koordinazzjoni ġenerali u ġbir ta 'materjali mediċinali;
ZHANG Juan u ZHAO Peng'an: determinazzjoni tal-kostitwenti u analiżi tad-dejta;
WANG Guoping: awtentikazzjoni ta 'materjali mediċinali.

 

Fabbrika tal-Kampjuni ta' Cistanche:

https://www.xjcistanche.com/about-us

 

 

Referenzi

[1] Kummissjoni tal-Farmakopea tal-Ministeru tas-Saħħa tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina.Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina[M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2025.
[2] Jia Xiaoguang, Ni Hui, Zhang Juan, et al. Status ta 'riċerka u żvilupp industrijali ta'Cistanche tubulosa [J]. Ġurnal tal-Università Medika ta 'Xinjiang, 2012, 35(7): 876–880.
[3] Liu Yuewen. Progress tar-riċerka dwar phenylethanoid glycosides fiCistanche tubulosa [J]. Makkinarju Agrikolu Kontemporanju, 2020(11): 60–62.
[4] Tu Pengfei. Eżami mill-ġdid tal-evidenza testwali erbali għal Cistanches Herba [J].Ċina Ġurnal ta 'Materia Medica Ċiniż, 2022, 47(20): 5670–5679.
[5] Zhu Su, Teng Shuo, Liu Chun.Puji Fang[M]. Beijing: People's Medical Publishing House, 1959.
[6] Wang Huaiyin.Taiping Shenghui Fang[M]. Beijing: People's Medical Publishing House, 1959.
[7] Tang Shenwei.Chongxiu Zhenghe Jingshi Zhenglei Beiyong Bencao[M]. Beijing: People's Medical Publishing House, 1957.
[8] Zhang Yong, Wu Huan. Evoluzzjoni storika tal-metodi tal-ipproċessar għal Cistanches Herba [J].Ċina Ġurnal ta 'Materia Medica Ċiniż, 1992, 17(4): 213–214.
[9] Cai Hong, Bao Zhong, Jiang Yong. Teknoloġija tal-ipproċessar għall-friskCistanche tubulosa [J]. Ċina Ġurnal ta 'Materia Medica Ċiniż, 2007, 32(13): 1289–1291.
[10] Tie Xiaoyan, Feng Yinping, Ma Dongni. Effett tal-ipproċessar tal-fwar taż-żona tal-oriġini fuq il-kwalità tad-deżert Cistanches Herba [J].Ġurnal tal-Mediċina Veterinarja Tradizzjonali Ċiniża, 2021, 40(2): 54–56.
[11] Chen Weijun, Jia Cuiyu, Li Lianjiang. Effetti ta 'metodi ta' pproċessar differenti fuq il-kontenut ta 'betaine f'XinjiangCistanche tubulosa [J]. Mediċina ta' Riklamazzjoni Agrikola, 2009, 31(5): 400–402.
[12] Zhang Chao, Hua Yue, Lian Jing, et al. Studju dwar il-varjazzjoni tal-kontenut规律 ta' phenylethanoid glycosides waqt l-ipproċessar ta' Cistanches Herba [J].Ġurnal Ċiniż ta 'Informazzjoni dwar il-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2022, 29(4): 92–97.
[13] Wu Chunxing, Yang Yang, Meng Mei, et al. L-istatus tar-riċerka u l-analiżi tat-tendenza tal-marki tas-swaba tat-TCM fl-aħħar għaxar snin [J].Ġurnal tal-Università ta' Minzu taċ-Ċina (Edizzjoni tax-Xjenzi Naturali), 2024, 33(4): 63–72.
[14] Jiang Yong, Bao Zhong, Sun Yongqiang. Studju dwar it-teknoloġija tal-ipproċessar tal-flieli Cistanches Herba [J].Ġurnal Farmaċewtiku Ċiniż, 2011, 46(14): 1074–1076.
[15] Zhang Leihong, Du Niansheng, Wang Qing. Determinazzjoni ta' phenylethanoid glycosides f'kapsuli totali ta' glycoside Cistanches Herba permezz ta' spettrofotometrija UV [J].Ġurnal tal-Università Medika ta 'Xinjiang, 2002, 25(4): 407–408.
[16] Ailadan·Maimaiti Aili, Yang Ting, Yuan Jie. Proċess ta 'estrazzjoni u attività antiossidant in vitro ta' polisakkaridi minn residwi ta 'Cistanche tubulosa [J]. Inġinerija Kimika u Bijokimika Kwartwali(isem tal-ġurnal tradott ibbażat fuq iċ-Ċiniż), 2020, 37(2): 36–41.
[17] Luo Yan. Ottimizzazzjoni tal-proċess ta 'estrazzjoni ta' flavonoids totali minnCistanche tubulosa[D]. Shihezi: Shihezi University, 2015.
[18] Shan Guoshun, Zhao Qimiao, Li Rui, et al. Studju dinamiku tal-kontenut ta 'acteoside waqt l-ipproċessar ta'Rehmannia glutinosa [J]. Mediċina Tradizzjonali Asja-Paċifiku, 2019, 15(3): 37–39.