Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides Induċu Apoptożi fiċ-Ċelloli tal-Karċinoma Epatoċellulari H22 Permezz Kemm Mogħdijiet ta' Sinjali Estrinsiċi kif ukoll Intrinsiċi

Sfond

Il-kanċer tal-fwied ikklassifika fis-sitt post għall-inċidenza tal-kanċer u r-raba 'għall-imwiet mill-kanċer madwar id-dinja. Barra minn hekk, ikklassifika r-raba' għall-inċidenza tal-kanċer u l-ewwel għall-mortalità tal-kanċer f'pajjiżi b'indiċi soċjodemografiku baxx [1]. Fiċ-Ċina, il-kanċer tal-fwied huwa t-tielet kawża ewlenija ta 'mewt relatata mal-kanċer fl-2015 [2]. Aktar minn 90% tal-kanċer primarju tal-fwied huma karċinoma epatoċellulari (HCC) fid-dinja [3]. Bħalissa, ir-resezzjoni tal-fwied hija l-għażla ewlenija għat-terapija tal-HCC. Madankollu, inqas minn 30% tal-pazjenti b'HCC issodisfaw il-kriterji ta' risezzjoni tal-fwied kurattiva u r-rata ġenerali ta' sopravivenza ta' 5-sena għadha baxxa daqs 35-50% minħabba r-rata għolja ta' rikorrenza [4, 5] . Id-disponibbiltà ta' għażliet ta' trattament għal pazjenti b'HCC intermedju għal avvanzat hija limitata ħafna. Sorafenib, mediċina mmirata molekulari, ġie approvat mill-FDA bħala l-ewwel trattament għal HCC avvanzat. Madankollu, sorafenib itawwal biss madwar 3 xhur ta 'sopravivenza u r-rata ta' rispons hija inqas minn 4% [6, 7]. Huwa urġenti li jiġu żviluppati mediċini jew strateġiji ġodda kontra l-HCC.

Il-mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM) waħedha jew magħquda ma’ strateġiji oħra ntużat biex tikkura l-HCC u wriet benefiċċji kliniċi inkluż ħin ta’ sopravivenza fit-tul, kwalità tal-ħajja mtejba, reazzjonijiet avversi mnaqqsa, eċċ [8, 9]. Cistanche, tip ta 'TCM, għandu diversi funzjonijiet bijoloġiċi, bħal anti-ossidazzjoni, anti-infjammazzjoni, anti-aging, u newroprotezzjoni [10, 11]. Phenylethanoid glycosides tqiesu l-komponenti attivi ewlenin ta 'Cistanche, li għandhom attivitajiet diversi inklużi antiossidazzjoni, anti-infjammazzjoni, epatoprotezzjoni u newroprotezzjoni [12-15]. Il-grupp tagħna rrapporta danCistanche tubulosa phenylethanoid glycosides (CTPG)jista' jinduċi apoptożi fiċ-ċelluli tal-melanoma B16-F10 u jinibixxi t-tkabbir ta' tumuri fil-ġrieden [16]. F'dan l-istudju, kejlna l-effett antitumorali ta 'CTPG fuq ċelluli HCC H22 kemm in vitro kif ukoll in vivo u investigajna l-mekkaniżmi tiegħu. Sibna li CTPG ikkawża apoptożi fiċ-ċelloli H22 permezz ta 'mogħdijiet ta' sinjalar kemm estrinsiċi kif ukoll intrinsiċi u ssopprimi t-tkabbir ta 'tumuri H22 fil-ġrieden.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-FUNZJONI SESSWALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Metodi

Linja taċ-ċelluli

Iċ-ċelluli tal-karċinoma epatoċellulari tal-ġurdien H22 nkisbu mil-Laboratorju Ewlenin ta 'Xinjiang tar-Riżorsi Bijoloġiċi u l-Inġinerija Ġenetika, l-Università ta' Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, iċ-Ċina) u kkultivati ​​f'medja RPMI 1640 (Gibco) supplimentata b'100 U/ml peniċillina u 100 ug/ml streptomycin, u 10% serum bovin fetali inattivat bis-sħana (Gibco) f'37 grad f'atmosfera umidifikata ta '5% CO2.

Assaġġ MTT

CTPG inxtara minn Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, iċ-Ċina) u l-komposti ewlenin ta 'CTPG ġew ikkwalifikati u kkwantifikati minn kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja [16]. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet evalwata minn 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , USA) assaġġ. Iċ-ċelluli H22 ġew imlaqqma fi 96-pjanċi bir-bir f'densità ta' 2 × 104 ċelluli f'100 ul medju għal kull bir u kkultivati ​​f'37 grad. Wara 24 siegħa, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CTPG (0, 100, 200, 300, u 400 ug/ml) jew 0.3% DMSO (ugwali għal dak f'400 ug/ml CTPG) għal 24, 48 u 72 siegħa, rispettivament. Wara ċ-ċentrifugazzjoni f'1000 rpm għal 7 min, is-supernatant ġie mormi u 100 ul ta 'soluzzjoni MTT (5 mg/ml f'PBS) ġew miżjuda ma' kull bir. Il-pjanċi ġew inkubati f'37 grad għal 4 sigħat u 100 ul DMSO ġie miżjud biex jinħall il-kristalli formazan iffurmati. Il-valuri OD490 ġew skoperti minn 96-well microplate reader (Bio-Rad Laboratories, CA, USA). Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet ikkalkulata skont il-formula: Vijabbiltà taċ-ċelluli (%)=(Otrattati/Omhux trattati) × 100%.

Sejbien ta' apoptożi

Iċ-ċelloli H22 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CTPG (0, 100, 200, 300, u 400 ug/ml) jew 0.3% DMSO għal 24 siegħa, u mbagħad imtebbgħin b'Annexin VFITC/Propidium Jodur (PI) Apoptosis Detection Kit (YEASEN, iċ-Ċina) skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-kampjuni ġew analizzati b'ċitometrija tal-fluss (BD FACSCalibur, USA).

Sejbien tal-potenzjal tal-membrana mitokondrijali

Iċ-ċelloli H22 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CTPG (0, 200, u 400 ug/ml) għal 24 siegħa, u mbagħad imtebbgħin biż-żebgħa JC-1 permeabbli mill-membrana (Beyotime, iċ-Ċina) għal 20 min f'37 grad. Wara li nħaslu darbtejn b'JC-1 buffer, il-kampjuni ġew sospiżi mill-ġdid bi 300 ul ta' JC-1 buffer u analizzati permezz ta' flow cytometry (BD FACSCalibur, USA).

Analiżi taċ-ċiklu taċ-ċelluli

Iċ-ċelloli H22 ġew imlaqqma f'platti ta' kultura ta' 60 mm u ttrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CTPG (0, 100, 200, 300, u 400 ug/ml) jew 0.3% DMSO għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli kollha nġabru u maħsula darbtejn bil-PBS. Iċ-ċelluli ġew iffissati f'70% etanol kiesaħ fis-silġ f'-20 grad għal 2 sigħat u maħsula darbtejn b'PBS, imbagħad reġgħu ġew sospiżi fi 300 ul Propidium iodide / RNase tbajja buffer (BD Biosciences). Wara 10 min f'temperatura tal-kamra, inġabru kampjuni permezz ta 'ċitometrija tal-fluss (BD FACSCalibur, USA), u d-distribuzzjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli ġiet analizzata bis-softwer ModFit LT 3.0.

Hoechst 33,258 tbajja

Il-bidliet morfoloġiċi tan-nuklei taċ-ċelluli H22 ġew analizzati permezz ta 'żebgħa Hoechst 33,258 li torbot id-DNA permeabbli mal-membrana. Iċ-ċelloli H22 ġew miżrugħa fi 6-pjanċa bir-bir fil-konċentrazzjoni ta' 1 × 105 ċelluli/bir f'medja ta' 2 ml. Wara 60% ~ 70% konfluwenza, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'CTPG (0, 100, 200, 300 u 400 ug/ml) għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli nġabru u ġew iffissati b'4% Paraformaldehyde kiesaħ fis-silġ f'4 gradi għal 10 min. Wara l-ħasil bil-PBS, iċ-ċelloli kienu mtebbgħin b'Hoechst 33,258 (Beyotime, iċ-Ċina) f'4 gradi għal 10 min. Il-kampjuni ġew osservati minn mikroskopju fluworexxenti maqlub (Nikon Eclipse Ti-E, il-Ġappun).

Western blot

Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2, u antiBax inxtraw minn Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina). Anti-caspase-7, anti-cleaved-caspase-7, anti-caspase-8, anti-cleaved-caspase-8, anti-caspase-9, anti -cleaved-caspase-9, anti-PARP, anti-cleaved PARP, anti-mouse IgG-HRP u anti-fenek IgG-HRP inxtraw minn Cell Signaling Technology. Anti- -actin inxtara minn Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Beijing, iċ-Ċina).

Iċ-ċelloli H22 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'CTPG (0, 100, 200, 300, u 400 ug/ml) jew 0.3% DMSO għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli nġabru u ġew lisati bis-Soluzzjoni tal-Liżi taċ-Ċelluli RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) għal 30 min fuq is-silġ. Il-kampjuni ġew mibrumin 'l isfel (12,000 g għal 15-il minuta f'4 gradi) biex jiġbru s-supernatanti u l-konċentrazzjonijiet tal-proteini ġew imkejla minn BCA Kit (Thermo Fisher Scientific, USA). Ammont ugwali ta 'proteina f'kull kampjun ġie iżolat bi 12% SDS-PAGE u trasferit għal membrani PVDF (Biosharp, iċ-Ċina). Wara l-imblukkar bil-buffer TBST li fih 5% ħalib bla xaħam, il-membrani ġew inkubati b'antikorpi primarji korrispondenti u antikorpi sekondarji konjugati ma 'horseradish peroxidase (HRP), rispettivament. Wara l-ħasil bit-TBST, il-proteini fil-mira ġew skoperti minn kit ta 'assaġġ ECL (Beyotime, iċ-Ċina).

Dikjarazzjoni dwar l-annimali u l-etika

6-8 ġrieden Kunming maskili ta 'ġimgħat inxtraw miċ-Ċentru tal-Laboratorju tal-Annimali, Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, iċ-Ċina). Il-ġrieden inżammu f'faċilità standard ta 'l-annimali ikkontrollata b'temperatura kkontrollata u b'ċiklu ħafif fl-Università ta' Xinjiang. L-istudji kollha fuq l-annimali twettqu skont il-linji gwida tal-Kumitat għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università ta 'Xinjiang. Il-protokoll ġie approvat mill-Kumitat dwar l-Etika ta 'Esperimenti fuq l-Annimali tal-Laboratorju Ewlenin ta' Xinjiang tar-Riżorsi Bijoloġiċi u l-Inġinerija Ġenetika (BRGE-AE001), l-Università ta 'Xinjiang.

Studju tal-ġrieden tat-tumur

Għall-induzzjoni tal-mudell tal-ġrieden tat-tumur, ġrieden Kunming maskili ġew injettati taħt il-ġilda b'ċelluli H22 1 × 106 f'100 ul PBS fil-ġenb tal-lemin. Wara 3 ijiem, il-ġrieden ġew maqsuma b'mod każwali fi 3 gruppi (7 ġrieden/grupp). Il-grupp ta 'kontroll ġie injettat b'0.1 ml DMSO taħt il-ġilda madwar it-tumur. Gruppi CTPG-200 u CTPG-400 ġew injettati taħt il-ġilda b'200 jew 400 mg/kg CTPG f'0.1 ml DMSO madwar it-tumur. Il-ġrieden ġew ittrattati kull jumejn sa 21 jum. Id-daqsijiet tat-tumur ġew imkejla bl-użu ta' kalipers sa 25 jum u l-volum tat-tumur ġie kkalkulat skont il-formula: volum tat-tumur (mm3 )=(tul × wisa'2 )/2. Wara 25 jum, is-sopravivenza tal-ġrieden tat-tumur ġiet immonitorjata kuljum sat-tmiem ta 'dan l-istudju.

Analiżi statistika

Is-sinifikat statistiku ġie kkalkulat b'analiżi one-way tal-varjanza fost il-gruppi ta 'trattament u ta' kontroll. Id-dejta kollha ġiet espressa bħala l-medja ± devjazzjoni standard (SD). p < 0.05 tqieset statistikament sinifikanti.

Riżultati

CTPG naqqas il-vijabbiltà taċ-ċelloli H22 in vitro

Biex jiġi esplorat l-effett antitumorali ta 'CTPG fuq HCC, ċelluli H22 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CTPG (0, 100, 200, 300, u 400 ug/ml) in vitro. Wara 24 siegħa, il-morfoloġija taċ-ċelloli H22 ġiet osservata bl-użu ta 'mikroskopju maqlub. Sibna li l-morfoloġija taċ-ċelluli H22 nbidlet b'mod drammatiku bit-trattament CTPG. Biż-żieda fil-konċentrazzjoni ta 'CTPG, iċ-ċelloli saru żgħar u tondi, u n-numru taċ-ċelluli tnaqqas ukoll ħafna (Fig. 1a). Assaġġ MTT intuża biex janalizza l-vijabbiltà taċ-ċelloli H22 wara trattament CTPG għal 24, 48, u 72 siegħa, rispettivament. CTPG naqqas b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelluli H22 b'mod dipendenti fuq id-doża u fuq il-ħin (Fig. 1b). CTPG bi 300 ug / ml wasal bl-aħjar rata inibitorja (Fig. 1c). Il-valuri ta' IC50 ta' CTPG għal ċelluli H22 huma 236 ug/ml f'24 siegħa u 169.8 ug/ml fi 48 siegħa.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-MEMORJA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

CTPG indotta apoptożi fiċ-ċelloli H22

Biex tinvestiga jekk il-vijabbiltà mnaqqsa taċ-ċelluli H22 hijiex medjata mill-induzzjoni tal-apoptożi, iċ-ċelluli H22 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CTPG (0, 100, 200, 300 u 400 ug/ml) għal 24 siegħa u mtebbgħin b' PI u Annexin V. Ir-riżultati taċ-ċitometrija tal-fluss urew li CTPG indotta b'mod sinifikanti l-apoptożi taċ-ċelluli H22 (inkluża apoptosi bikrija u tardiva) b'mod dipendenti mid-doża (Fig. 2a). Għalkemm id-doża għolja ta 'CTPG żiedet ukoll b'mod sinifikanti n-nekrożi taċ-ċelluli H22, in-nekrożi għandha rwol minuri fl-inibizzjoni tat-tkabbir taċ-ċelluli H22 minħabba l-proporzjon aktar baxx tagħha (8.3%) meta mqabbla ma' dik ta 'apoptożi (52.6%). Barra minn hekk, il-proteini totali taċ-ċelluli H22 ġew iżolati wara t-trattament CTPG, u l-espressjonijiet tal-limfoma taċ-ċelluli B anti-apoptotiċi 2 (Bcl-2) u l-proteina X assoċjata b'BCL-2-proapoptotika (Bax) ġew skoperti minn Western blot. Id-dejta tal-iskannjar fuq skala griża wriet li l-livelli tal-espressjoni ta’ Bax u Bcl-2 żdiedu u naqsu, rispettivament. Il-proporzjon Bax/Bcl-2 żdied b'mod sinifikanti (Fig. 2b). Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li CTPG jinduċi apoptożi fiċ-ċelloli H22.

CTPG jinduċi kondensazzjoni kromosomali u arrest taċ-ċiklu taċ-ċelluli fiċ-ċelloli H22

Ġie rrappurtat li l-ħsara fid-DNA u l-arrest taċ-ċiklu taċ-ċelluli indotti minn mediċini jistgħu jinibixxu t-tkabbir taċ-ċelluli tat-tumur u jikkawżaw apoptożi fiċ-ċelloli tat-tumur [17, 18]. Biex tiskopri l-morfoloġija tan-nuklei fiċ-ċelloli H22 wara trattament CTPG għal 24 siegħa, iċ-ċelloli H22 ġew imtebba minn Hoechst 33,342 u osservati bl-użu ta 'mikroskopija fluworexxenti invertita. Iċ-ċelloli trattati CTPG wrew żieda dipendenti fuq id-doża ta 'kromatina kkondensata b'mod qawwi ta' nuklei, filwaqt li ċ-ċelloli mhux ittrattati wrew nuklei mtebbgħin b'mod omoġenju (Fig. 3a). Id-distribuzzjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli fiċ-ċelloli H22 ġiet analizzata aktar permezz ta 'tbajja' PI waraTrattament CTPGgħal 24 siegħa. Kif muri fil-Fig. 3b, it-trattament CTPG żied b'mod sinifikanti l-proporzjon ta 'ċelluli tal-fażi G0/G{1- u G2/M u naqqas b'mod sinifikanti l-proporzjon ta' ċelluli tal-fażi S, li jissuġġerixxi li CTPG indotta G 0/G1 u G2/Mphase arrest fiċ-ċelloli H22. Id-doża għolja ta 'CTPG żiedet ukoll b'mod sinifikanti l-proporzjon ta' ċelloli sub-G1.

CTPG naqqas il-potenzjal tal-membrana mitokondrijali u żied ir-rilaxx ta 'cytochrome c

Il-mogħdija dipendenti mill-mitokondrijali għandha rwol importanti fl-induzzjoni tal-apoptożi [19, 20]. Il-bidliet fil-potenzjal tal-membrana mitokondrijali (Δψm) jistgħu jiġu mmonitorjati permezz ta 'tbajja' JC-1 minħabba li l-aggregat JC-1 (fluworexxenza ħamra) jista' jiddiżintegra f'monomeru (fluworexxenza ħadra) bit-tnaqqis ta 'Δψm [21]. Wara trattament CTPG għal 24 siegħa, iċ-ċelluli H22 ġew imtebba 'b'żebgħa JC- 1. Id-dejta taċ-ċitometrija tal-fluss uriet li l-fluworexxenza ħamra fil-kanal FL-2 u l-fluworexxenza ħadra fil-kanal FL-1 naqsu u żdiedu b'mod sinifikanti mat-trattament CTPG. Il-proporzjon taċ-ċelloli PE− FITC + żdied b'mod sinifikanti (Fig. 4a), li jissuġġerixxi li CTPG naqqas il-Δψm fiċ-ċelloli H22. Dan huwa konsistenti mal-proporzjon Bax/Bcl-2 miżjud. Konsegwentement, osservajna li r-rilaxx taċ-ċitokromu ċ żdied b'mod sinifikanti fuq it-trattament CTPG (Fig. 4b). Dawn ir-riżultati indikaw li CTPG jista 'jinduċi parzjalment apoptożi fiċ-ċelloli H22 permezz ta' mogħdija dipendenti mill-mitokondrija (intrinsika).

CTPG attiva l-mogħdija tal-caspase u pprevjeni t-tiswija tad-DNA

Sussegwentement, ġiet analizzata l-attivazzjoni ta 'caspase indotta minn CTPG permezz ta' mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni kemm estrinsiċi kif ukoll intrinsiċi. Wara t-trattament CTPG għal 24 siegħa, il-proteini totali ġew iżolati miċ-ċelloli H22 u l-livelli ta 'pro- u cleaved-caspases ġew skoperti minn Western blot. Meta mqabbel mal-kontroll mhux ittrattat jew DMSO, it-trattament CTPG irregola b'mod sinifikanti mhux biss il-livell ta 'caspase cleaved -8 (mogħdija estrinsika) iżda wkoll il-livell ta' caspase cleaved -9 (mogħdija intrinsika) (Fig. 5). Sekwenzjali, caspase attivat-8 u -9 qasmu l-pro-caspase downstream-3 u -7 li kienet osservata f'Fig. 5. Caspase attivata-3 qasmet id-DNA enżima tat-tiswija tal-polimerażi poly (ADP-ribose) (PARP) biex tipprevjeni t-tiswija tad-DNA u takkumula l-ħsara fid-DNA kif osservat f'Fig. 3a.

Dawn ir-riżultati indikaw li CTPG ikkawża apoptożi fiċ-ċelloli H22 permezz ta 'mogħdijiet ta' sinjalazzjoni kemm estrinsiċi kif ukoll intrinsiċi.

CTPG irażżan it-tkabbir ta 'H22 HCC in vivo u jtejjeb ir-rata ta' sopravivenza tal-ġrieden tat-tumur

Fl-aħħarnett, l-effett antitumorali ta 'CTPG fuq HCC ġie evalwat f'mudell ta' ġrieden tat-tumur, li ġie stabbilit b'injezzjoni taħt il-ġilda ta 'ċelluli H22. Wara 3 ijiem ta 'injezzjoni taċ-ċelluli H22, ġrieden tat-tumur ġew ittrattati b'CTPG 8 darbiet. Il-piż tal-ġisem tal-ġrieden u d-daqsijiet tat-tumur ġew immonitorjati f'punti ta 'żmien indikati. Kif muri fil-Fig. 6a, il-piż tal-ġisem tal-ġrieden f'kull grupp m'għandu l-ebda differenza sinifikanti, li jissuġġerixxi li d-dożi magħżula ta 'CTPG m'għandhomx effetti sekondarji ovvji.

Interessanti, it-tkabbir tat-tumur fil-ġrieden ittrattati kemm b'200 mg/kg kif ukoll b'400 mg/kg ta' CTPG kien inibit b'mod sinifikanti (Fig. 6b). Barra minn hekk, iż-żewġ dożi ta 'trattament CTPG tejbu ħafna s-sopravivenza tal-ġrieden tat-tumur (3/7, 3/7) meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll (0/7) fl-aħħar tal-esperiment (Fig. 6b). Sibna wkoll li CTPG tejjeb b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni ta 'splenocytes iżolati minn ġrieden Kunming maskili b'mod dipendenti fuq id-doża (Fig. 6c), li jissuġġerixxi li CTPG għandu effett immunostimulatorju.

L-OGĦLA KWALITÀ CISTANCHE TUBULOSA GĦAT-TITJIB TAL-FUNZJONI SESSWALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Diskussjoni

It-TCM intuża biex jikkura diversi mard inkluż il-kanċer għal storja twila. Ġie rrappurtat li t-TCM jista 'jikkaġuna apoptożi f'tipi differenti ta' ċelluli tat-tumur permezz ta 'mogħdijiet ta' sinjalar kemm estrinsiċi (medjati mir-riċettur tal-mewt) kif ukoll intrinsiċi (dipendenti mill-mitokondrija) biex jeżerċitaw effetti antitumorali [22-25]. Iż-żewġ mogħdijiet jistgħu jattivaw caspase-8 u -9, rispettivament [24, 26]. Hawnhekk, sibna li CTPG soppressa b'mod sinifikanti t-tkabbir taċ-ċelluli H22 permezz ta 'induzzjoni ta' apoptożi u arrest taċ-ċiklu taċ-ċelluli. Il-livelli ta' caspase maqsuma-8 u -9 kienu regolati b'mod sinifikanti 'l fuq minnTrattament CTPG, li jissuġġerixxi li kemm mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni estrinsiċi kif ukoll intrinsiċi kienu involuti fl-induzzjoni ta' apoptożi. L-istudju preċedenti tagħna wera li CTPG ikkawża apoptosi fiċ-ċelluli tal-melanoma B16-F10 permezz ta' mogħdija dipendenti fuq il-mitokondrija li żiedet il-livell ta' caspase cleaved-9 iżda mhux caspase-8 [16]. CTPG jista' jattiva mogħdijiet ta' sinjalar distinti f'tipi differenti ta' ċelluli tat-tumur.

L-integrità tal-membrana mitokondrijali hija rregolata sewwa mill-membri tal-familja tal-proteini BCL-2 inklużi Bax u Bcl-2 [27, 28]. Il-proporzjon ta' Bax għal Bcl-2 għandu rwol kritiku fil-mogħdija tal-apoptożi dipendenti mill-mitokondrija [29]. F'ċelluli H22 ittrattati b'CTPG, il-proporzjon Bax/Bcl-2 kien regolat b'mod sinifikanti 'l fuq, li jista' jikkawża t-tnaqqis ta 'Δψm u r-rilaxx ta' ċitokromju osservat f'dan l-istudju. Konsegwentement, il-pro-caspase-9 ġie maqsum u attivat. Fl-aħħarnett, l-inizjaturi ta 'caspase attiva-8 u -9 attivaw l-eżekuzzjoni ta' caspase-3 biex jaqtgħu PARP biex jipprevjenu t-tiswija tad-DNA. Meħuda flimkien, dawn ir-riżultati ssuġġerew li CTPG ikkawża apoptożi fiċ-ċelloli H22 permezz ta 'mogħdijiet ta' sinjalazzjoni kemm estrinsiċi kif ukoll intrinsiċi.

F'mudell ta 'ġrieden tat-tumur, CTPG soppressa b'mod sinifikanti t-tkabbir ta' H22 HCC u tejbet ħafna s-sopravivenza tal-ġrieden tat-tumur. Interessanti, CTPG tiddependi mid-doża promossi l-proliferazzjoni ta 'splenocytes mill-ġrieden Kunming, li hija konsistenti mal-istudju preċedenti tagħna [16]. Dawn ir-riżultati ssuġġerew li CTPG jista 'jrażżan it-tkabbir ta' H22 HCC fil-ġrieden kemm permezz ta 'effett dirett kontra t-tumur kif ukoll titjib indirett tal-immunità.

Konklużjonijiet

CTPG irażżan it-tkabbir taċ-ċelloli H22 kemm in vitro kif ukoll in vivo u indotta apoptożi fiċ-ċelloli H22 permezz ta 'mogħdijiet ta' sinjalazzjoni kemm estrinsiċi kif ukoll intrinsiċi. Din id-dejta indikat li CTPG jista' jkun kandidat potenzjali għat-trattament tal-HCC.