Il-Farmakoloġija tan-Netwerk U l-Validazzjoni Sperimentali Jiżvelaw Ir-Rwol Mekkanistiku Ta' Cistanche Phenylethanoid Glycosides fit-Trattament tan-NAFLD Permezz tal-Pathway TNF/PI3K/Akt
Oct 29, 2025
3. Riżultati
3.1 Netwerk Farmakoloġija
3.1.1 Komposti Attivi u Miri Potenzjali
Ibbażat fuq riċerka preċedenti tat-tim tal-proġett u informazzjoni minn databases u letteratura, intgħażlu għaxar komposti rappreżentattivi b'attività farmakoloġika [10-11]:verbascoside, isoverbascoside, echinacoside, 2′-acetyl-verbascoside, cistanoside A, cistanoside B, salidroside, isocrenatoside II, cistanche glycoside A, u cistanche glycoside F.
Kontenut Għoli Verbascoside(acteoside) Cistanche Estratt għat-Trattament tal-Lipidi tad-Demm
Lista tal-ispeċifikazzjonijiet tal-estratt tal-Cistanche
Bl-użuSwissTargetPrediction, Inkisbu 44 mira;NetInfermbassar l-aqwa 20 mira, li wasslu għal 45 mira;SuperPredta 118-il mira. Wara li tgħaqqad u tneħħi d-duplikati,195 mira unikaġew identifikati.
Mill-GSE89632sett tad-dejta, li kien jinkludi 39 kampjun NAFLD u 24 kampjun normali,589 ġeni espressi b'mod differenzjaliġew skrinjati. Tikkombina data minnGeneCardsuDisGeNET, 2,315 ġene tal-mard relatat ma 'NAFLDnkisbu wara d-duplikazzjoni (Figuri 1A–1B). Billi jaqsam miri relatati mal-komposti mal-miri tal-mard,77 mira li jikkoinċiduġew identifikati bħala miri terapewtiċi potenzjali ta 'Cistanche phenylethanoid glycosides kontra NAFLD (Figura 1C).
Dawn il-miri ġew importati fil-STRING database with an interaction threshold >0.400. Nodi iżolati tneħħew, u n-netwerk ġie viżwalizzat permezzCytoscape, li jirriżulta f'aNetwerk PPI b'75 nodu u 408 truf(Figura 1D). Bl-użu tal-funzjoni "Analizza Netwerk" f'Cytoscape, l-aqwa 10 miri bbażati fuq il-valur tal-grad ġew identifikati bħala miri ewlenin:TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1, HIF1A, STAT1, APP, PRKACA, SMAD3.
3.1.2 Analiżi ta' Arrikkiment GO, KEGG, u DO
L-analiżi tal-arrikkiment GO żvelat 93 terminu għalfunzjoni molekulari (MF), 38 għalkomponent ċellulari (CC), u 989 għalproċess bijoloġiku (BP). L-aqwa 10 entrati f'kull kategorija ġew viżwalizzati (Figura 2). Ir-riżultati indikaw li Cistanche phenylethanoid glycosides jistgħu jeżerċitaw effetti kontra l-NAFLD permezz ta’ mogħdijiet relatati ma’infjammazzjoni, ċitokini, metaboliżmu, u rispons immuni.
arrikkiment DO identifikat833 mardassoċjati mal-miri, bl-aqwa 25 viżwalizzati (Figura 4), inklużmard metaboliku, immuni, kardjovaskulari, relatat mal-obeżità, u epatiku, kollha relatati mill-qrib man-NAFLD.
3.1.3 Netwerk "Kompost–Target–Pathway".
Ibbażat fuq ir-riżultati tal-arrikkiment KEGG, anetwerk "kompost-mira-mogħdija".inbniet bl-użuCytoscape 3.9.1. Kwadri ħodor jirrappreżentaw komposti attivi, ċrieki blu jirrappreżentaw miri, u nodi oranġjo f'forma ta 'V jirrappreżentaw mogħdijiet (Figura 5). Dan juri li Cistanche phenylethanoid glycosides jeżerċitaw effetti kontra l-NAFLD permezzkomposti multipli, miri, u mogħdijiet, bilechinacoside u verbascosideli huma l-komposti markaturi l-aktar abbundanti u elenkati fl-edizzjoni 2020 tal-Farmakopea Ċiniża.
3.1.4 Docking Molekulari
L-aqwa ħames miri ewlenin fin-netwerk PPI (TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1) ġew ikkalkolati mal-komposti attivi, u l-enerġiji minimi vinkolanti tagħhom ġew ikkalkulati (Figura 6). Il-punteġġi kollha tad-docking kienu inqas minn–6 kcal/mol, li jindika affinitajiet qawwija ta' rbit.TNF wera l-aktar affinità qawwija. Xi riżultati ta 'docking ġew viżwalizzati bl-użuPyMOL(Figura 7).
3.2 Esperimenti taċ-ċelluli
3.2.1 Effetti tal-FFA fuq l-Akkumulazzjoni tal-Lipidi fiċ-Ċelloli HepG2
Kif muri fiFigura 8, iż-żieda fil-konċentrazzjonijiet ta 'FFA minn 0.5 sa 2 mmol / L wasslet għal żieda fil-qtar tal-lipidi ħomor, li ngħaqdu fi qtar ta' lipidi kbar, li jindika tagħbija ta 'lipidi b'suċċess.
3.2.2 Effetti ta 'FFA u Cistanche Phenylethanoid Glycosides fuq il-Vijabilità taċ-Ċelloli
Kif muri fiFigura 9A, konċentrazzjonijiet FFA ta1 mmol/L u inqasma kellu l-ebda effett sinifikanti fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli (P> 0.05); għalhekk,1 mmol/Lintgħażlet għall-immudellar. Kif muri fiFigura 9B, Cistanche phenylethanoid glycosides sa200 μg/mLma affettwax b'mod sinifikanti l-vijabbiltà (P > 0.05), iżda400 μg/mLinibit b'mod sinifikanti l-vijabbiltà (P < 0.01). Għalhekk,25, 50, u 100 μg/mLintgħażlu bħala dożi baxxi, medji u għoljin għat-trattament.
3.2.3 Effetti fuq l-Akkumulazzjoni tal-Lipidi
Kif muri fiFigura 10, il-grupp tal-mudell wera akkumulazzjoni sinifikanti ta 'qtar tal-lipidi aħmar meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll (P <0.01), li jikkonferma l-immudellar b'suċċess. Trattament ma50 u 100 μg/mLta 'Cistanche phenylethanoid glycosides naqqsu b'mod sinifikanti l-formazzjoni ta' qtar tal-lipidi (P <0.01). FilFigura 11, livelli ta 'TG u TC kienu elevati fil-grupp mudell (P <0.01), filwaqt li l-gruppi ta' trattament kollha wrew livelli mnaqqsa b'mod sinifikanti meta mqabbla mal-grupp mudell (P <0.01).
3.2.4 Effetti fuq il-Ħsara Mitokondrijali
JC-1 iż-żebgħa jakkumula fil-mitokondrija b'saħħitha u temetti fluworexxenza ħamra; fil-mitokondrija bil-ħsara, tibqa 'f'forma monomerika u temetti fluworexxenza ħadra. Kif muri fiFigura 12, il-fluworexxenza ħamra ddominat fil-grupp ta 'kontroll, filwaqt li l-fluworexxenza ħadra kienet prominenti fil-grupp tal-mudell. Gruppi ta 'trattament urew fluworexxenza ħadra mnaqqsa u fluworexxenza ħamra miżjuda, li jindikaw potenzjal imtejjeb tal-membrana mitokondrijali.
3.2.5 Effetti fuq Livelli ta 'ROS Intraċellulari
Kif muri fiFigura 13, il-grupp mudell wera intensità ta 'fluworexxenza miżjuda b'mod sinifikanti (P <0.01), li jindika ROS elevat. Trattament b'Cistanche phenylethanoid glycosides naqqas b'mod sinifikanti l-livelli ta 'ROS fil-konċentrazzjonijiet kollha (P <0.01).
3.2.6 Effetti fuq l-Apoptożi
Hoechst 33342 tbajja nuklei, b'nuklei apoptotiċi li juru morfoloġija blu qawwi, kondensata jew frammentata. Kif jidher fiFigura 14, il-grupp ta 'kontroll kellu fluworexxenza qawwija minima, filwaqt li l-grupp mudell wera nuklei apoptotiċi blu qawwi abbundanti. Il-gruppi ta 'trattament urew intensità mnaqqsa ta' fluworexxenza, li jindika tnaqqis fl-apoptożi.
3.2.7 Effetti fuq TNF/PI3K/Akt Signaling Pathway u Bax Expression
Kif muri fiFigura 15, meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-grupp mudell wera espressjoni elevata b'mod sinifikanti ta'TNF-α, PI3K p85, Akt, u Baxproteini (P < 0.05, P < 0.01). Mat-trattament:
Il-gruppi kollha ta 'Cistanche phenylethanoid glycoside wrew imnaqqsaTNF-αespressjoni (P < 0.01),
Il-50 μg/mLgrupp wera mnaqqsaPI3K p85espressjoni (P < 0.01),
Il-100 μg/mLgrupp wera mnaqqsaAkt u Baxespressjoni (P < 0.05).
4. Diskussjoni
NAFLD hija marda tal-fwied kumplessa assoċjata ma 'disturbi metaboliċi, li tinvolviżbilanċ fil-metaboliżmu tal-lipidi, reżistenza għall-insulina, u stress ossidattiv[12]. Fis-snin riċenti,mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM)wera wegħda sinifikanti fit-trattament tan-NAFLD.
Ir-riċerka moderna wriet liphenylethanoid glycosides minn Cistanchejista 'jirregola l-metaboliżmu tal-lipidi u tal-glukożju fil-fwied u jinibixxi l-istress ossidattiv, l-infjammazzjoni u l-fibrożi [13-15]. Il-fwied jużaβ-ossidazzjonibiex jimmetabolizzaw l-aċidi grassi uCYP7A1biex jikkonverti l-kolesterol f'aċidi tal-bili għall-omeostażi tal-lipidi [16–18]. F'ambjenti b'ħafna xaħam, l-iżbilanċ metaboliku jwassal għal akkumulazzjoni ta 'lipidi u NAFLD [19].
Dan l-istudju kkonferma liĊelloli HepG2 indotti minn FFAwera żieda fil-qtar tal-lipidi u livelli elevati ta' TC u TG. It-trattament b'glikożidi ta 'Cistanche phenylethanoid naqqas b'mod sinifikanti l-formazzjoni ta' qtar tal-lipidi u l-livelli ta 'TC/TG, ittejjeb l-isteatosi epatika.
Disfunzjoni mitokondrijali twassal għal β-ossidazzjoni mnaqqsa, produzzjoni eċċessiva ta 'ROS, u perossidazzjoni tal-lipidi [20]. ROS ikompli jagħmel ħsara lill-mitokondrija, u jaggrava l-isteatożi [21]. Ir-riżultati tagħna juru li Cistanche phenylethanoid glycosidestnaqqas ROS, ittejjebpotenzjal tal-membrana mitokondrijali, u ittaffistress ossidattiv, u b'hekk tittaffa l-akkumulazzjoni tax-xaħam.
Il-farmakoloġija tan-netwerk indikat li l-effetti kontra n-NAFLD jinvolvu multiplimogħdijiet metaboliċi u relatati mal-apoptożi. Docking molekulari wera affinitajiet qawwija ta 'rbit bejn komposti attivi u miri, speċjalmentTNF, li jissuġġerixxi r-rwol ċentrali tiegħu.
Il-mogħdija tat-TNFhuwa kritiku fis-sinjalar taċ-ċelluli. TNF-α jeħel ma'TNFR1, li jattiva mogħdijiet tar-riċetturi tal-mewt u jinduċi l-apoptożi [22]. Jattiva wkoll il-mogħdija PI3K/Aktpermezz tas-sinjalar parakrini [23-24]. Is-sinjalar PI3K/Akt anormali huwa marbut ma 'akkumulazzjoni tal-lipidi, infjammazzjoni u fibrożi fin-NAFLD [25]. Id-dejta tagħna turi li Cistanche phenylethanoid glycosidesjinibixxi l-apoptożiu tnaqqas l-espressjoni taTNF-α, PI3K, Akt, uBax, konsistenti mal-previżjonijiet tan-netwerk, li tikkonferma l-importanza tal-TNF/PI3K/mogħdija Akt.
Konklużjoni
Cistanche phenylethanoid glycosides jirregolaw NAFLD permezzproċessi u mogħdijiet multipli, inklużi:
Tnaqqas l-akkumulazzjoni tal-lipidi,
Jinibixxi l-istress ossidattiv,
Ittaffi l-ħsara mitokondrijali,
It-trażżin tal-apoptożi.
Dawn l-effetti jistgħu jkunu marbuta mill-qrib mal-TNF/PI3K/mogħdija ta' sinjalazzjoni Akt. Dan l-istudju jipprovdi mhux biss appoġġ xjentifiku għall-applikazzjoni ta 'Cistanche phenylethanoid glycosides fit-trattament NAFLD iżda wkoll referenza għall-iżvilupp u r-riċerka klinika ta' mediċini terapewtiċi ġodda.
