Effetti ta 'Titjib U Mekkaniżmi Ta' Flavonoids Totali Ta 'Cistanche (Melastoma Dodecandrum Lour.) Fuq Indeboliment Konjittiv fil-ġrieden Dijabetiċi

 

Astratt

Għan:Biex tinvestiga l-effetti u l-mekkaniżmi potenzjali ta 'flavonoids totali minn Cistanche (Melastoma dodecandrum Lour.) fit-titjib ta' indeboliment konjittiv fil-ġrieden tad-dijabete mellitus tat-tip 2 (T2DM).

Metodi:Ġrieden maskili C57BL/6J ġew indotti jiżviluppaw T2DM permezz ta 'dieta b'ħafna xaħam flimkien ma' injezzjonijiet ta 'streptozotocin (STZ). Ġrieden bi glucose fid-demm sawm (FBG) Iktar minn jew ugwali għal 16.7 mmol/L ġew assenjati b'mod każwali lill-gruppi li ġejjin (n=12 kull wieħed): mudell T2DM, metformin (0.5 g/kg), donepezil (0.001 g/kg), u doża għolja, medja u baxxa totali flavonoids (0.6,0.6,0.6. g/kg). Il-gruppi kollha kkurati rċevew gavage orali kuljum tal-aġenti rispettivi u komplew dieta b'ħafna xaħam għal 8 ġimgħat. 12-il ġrieden b'saħħithom addizzjonali servew bħala l-kontroll vojt. Il-piż tal-ġisem u l-FBG ġew irreġistrati. It-tagħlim spazjali u l-memorja ġew evalwati bl-użu tal-labirint tal-ilma Morris. Ġew imkejla l-indiċi tal-moħħ, u l-livelli ta 'ħadid tal-ħadid (Fe2+), superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), u glutathione (GSH) fis-serum u t-tessuti tal-moħħ. Il-morfoloġija ta' l-ippokampju kienet osservata istoloġikament. Livelli ta' espressjoni tal-proteini ta' -amyloid (A ), Tau, glutathione peroxidase 4 (GPX4), fattur nukleari erythroid 2 relatat mal-fattur 2 (Nrf2), u prostaglandin-endoperoxide synthase 2 (PTGS2/COX-2) fit-tessut tal-moħħ ġew ukoll evalwati.

Riżultati:Flavonoids totali ta 'Cistanche żiedu l-piż tal-ġisem u naqqsu l-glukożju fid-demm fil-ġrieden T2DM, tejbu l-prestazzjoni fil-labirint tal-ilma, naqqsu l-ħsara tal-ippocampal, u rregolaw il-livelli ta' Fe 2+, SOD, MDA, u GSH kemm fis-serum kif ukoll fit-tessut tal-moħħ (P <0.01). Huma naqqsu b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'proteini A u Tau (P <0.01), filwaqt li żiedu l-espressjoni ta' proteini relatati mal-ferroptosi PTGS2, Nrf2, u GPX4 (P <0.01).

Konklużjoni:Flavonoids totali minn Cistanche ibaxxu l-glukożju fid-demm, itejbu t-tagħlim spazjali u l-memorja fil-ġrieden T2DM, jirregolaw il-metaboliżmu tal-ħadid, jagħtu spinta lill-kapaċità antiossidanti, u jtaffu l-indeboliment konjittiv. Dawn l-effetti jistgħu jiġu medjati permezz tal-modulazzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar Nrf2/GPX4 relatata mal-ferroptosi.

Kliem ewlieni:Flavonoids totali ta' Cistanche (Melastoma dodecandrum Lour.);Dijabete mellitus tat-tip 2; Hippokampus;Indeboliment konjittiv; Antiossidant; Nrf2; GPX4; Ferroptożi

 

 

 

Riċerka dettaljata dwar cistanche fil-funzjonijiet konjittivi....

Ikkuntattjana

 

 

 

Introduzzjoni

Id-dijabete hija marda metabolika kronika. Ipergliċemija fit-tul twassal għal kumplikazzjonijiet multipli, fosthom disfunzjoni konjittiva hija kumplikazzjoni newroloġika komuni. Jimanifesta bħala tnaqqis fil-memorja u indeboliment tal-funzjonijiet konjittivi, u huwa meqjus bħala fattur ta 'riskju għall-marda ta' Alzheimer (AD). Fid-dijabete mellitus tat-tip 2 (T2DM), l-ipergliċemija, ir-reżistenza għall-insulina u l-istress ossidattiv jistgħu jagħmlu ħsara lill-istruttura u l-funzjoni newronali, u jqanqlu defiċits konjittivi fil-memorja, fil-lingwa, u aktar, li jaffettwaw b'mod sever il-kwalità tal-ħajja. Il-mekkaniżmi patoloġiċi sottostanti l-indeboliment konjittiv dijabetiku għadhom mhux ċari, u t-trattamenti huma limitati. Għalhekk, l-iżvilupp ta’ terapewtiċi għal indeboliment konjittiv relatat mat-T2DM huwa meħtieġ.

Riċerka dettaljata dwar cistanche fil-funzjonijiet konjittivi....

 

Evidenza emerġenti tissuġġerixxi ferroptosis, mod ta 'mewt taċ-ċelluli regolata, jista' jkollha rwol ewlieni fil-patoġenesi ta 'indeboliment konjittiv. Nrf2 (fattur nukleari erythroid 2 relatat mal-fattur 2) huwa fattur importanti ta 'traskrizzjoni antiossidant li jirregola ferroptosis billi jikkontrolla t-traskrizzjoni ta' ġeni ewlenin bħal glutathione peroxidase 4 (GPX4) u familja ta 'trasportatur solute 7 membru 11 (SLC7A11). Per eżempju, Fan Yun et al. irrapporta li l-aċidi porikoiċi tejbu l-indeboliment konjittiv fil-firien AD billi attivaw il-mogħdija Nrf2/SLC7A11/GPX4 biex jinibixxu l-ferroptożi. Studji farmakoloġiċi moderni juru ħafna flavonoids minn ħxejjex mediċinali tradizzjonali jistgħu jtejbu l-indeboliment konjittiv. Il-flavonojdi tal-weraq tal-bambu attenwaw il-ħsara newronali tal-hippocampal u l-infjammazzjoni tal-hippocampal fil-firien dijabetiċi, u b'hekk itejbu l-konjizzjoni; troxerutin tejbet il-konjizzjoni fil-firien STZ-dijabetiċi billi jimmodula l-livelli tal-mRNA u tal-proteini heme oxygenase-1 (HO-1) fl-ippokampus, u saħħaħ id-difiżi antiossidanti. Dawn is-sejbiet jenfasizzaw il-potenzjal tal-flavonoids minn pjanti mediċinali biex itejbu l-indeboliment konjittiv.

Cistanche (Melastoma dodecandrum Lour.) hija pjanti sħaħ mediċinali tal-familja Melastomataceae, imqassma f'Guangxi, Guizhou, Yunnan, u reġjuni oħra. Huwa abbundanti u vvalutat medikament, tradizzjonalment użat għal "Xiaoke" (ħela-għatx, terminu TCM li jikkoinċidi mad-dijabete), "defiċjenza u għeja," u huwa komunement użat fl-etnomediċina Yao. Cistanche fih flavonoids u kostitwenti oħra, juri effetti ipogliċemiċi f'mudelli ta 'annimali ipergliċemiċi, u jista' jimmodula l-metaboliżmu tal-glukożju-lipidu u stress ossidattiv. Il-farmakoloġija tan-netwerk tindika li fi ħdan in-netwerk ta 'interazzjoni bejn il-flavonoids totali tal-miri ta' Cistanche u T2DM, PTGS2 (ġene markatur ferroptosis) jaġixxi bħala mira ewlenija fin-netwerk PPI, li jissuġġerixxi flavonoids totali jistgħu jirregolaw PTGS2 biex jeżerċitaw effetti terapewtiċi f'T2DM. Docking molekulari jkompli jissuġġerixxi affinità qawwija bejn il-flavonoids Cistanche u GPX4.

Għalhekk, dan l-istudju uża dieta b'ħafna xaħam flimkien ma 'STZ biex jistabbilixxi mudell tal-ġurdien T2DM, evalwa l-effetti ta' flavonoids totali ta 'Cistanche fuq indeboliment konjittiv dijabetiku, u esplora jekk mekkaniżmi jinvolvux modulazzjoni tal-mogħdija Nrf2/GPX4 relatata mal-ferroptosi, li tipprovdi bażi sperimentali għall-iżvilupp u l-applikazzjoni translazzjonali ta' din l-ethnomedicine Yao.

Materjali u Metodi

Materjali

1.1 Annimali

Ġrieden C57BL/6J ta 'grad SPF maskili, piż tal-ġisem 22 ± 2 g, inxtraw minn Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd Liċenzja tal-produzzjoni: SCXK (Xiang) 2021-0002. L-annimali kienu miżmuma fiċ-Ċentru tal-Esperiment tal-Annimali tal-Università ta 'Guangxi tal-Mediċina Ċiniża taħt kundizzjonijiet standard: 20-26 grad, 40%-70% umdità, ċiklu ta' dawl-dlam 12/12 h, b'aċċess ħieles għall-ikel u l-ilma. Dieta b'ħafna xaħam inkisbet minn Tianjin Keao Xieli Feed Co., Ltd. (Kat. Nru . 22073211). Approvazzjoni tal-etika: Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Mediċina Ċiniża tal-Università ta 'Guangxi (Nru ta' Approvazzjoni DW20231214-270).

 

1.2 Drogi

Il-materja prima ta 'Cistanche (Melastoma dodecandrum) inkisbet minn Nanning Xiao Yaowang Pharmacy (Lott Nru . 20220820) u awtentikata mill-Prof. Liang Zining, Iskola tal-Farmaċija, Università ta' Guangxi tal-Mediċina Ċiniża. Flavonoids totali ta 'Cistanche ġew ippreparati mil-Laboratorju Ewlenin tal-Farmakoloġija Neuro-Metabolika u Immuni tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża tal-Universitajiet ta' Guangxi. Preparazzjoni: itħan it-trab tal-flavonoids totali mnixxef f'mehrież f'direzzjoni waħda, żid ilma distillat biex tħejji soluzzjoni ta 'dożaġġ, u aħżen f'4 gradi.

Donepezil hydrochloride pilloli (Zhejiang Huahai Pharmaceutical Co., Ltd., Lott Nru . 0000041612).
Metformin hydrochloride pilloli (Jiangsu Merck Pharmaceutical Co., Ltd., Lott Nru ACG9518).

 

1.3 Reaġenti u strumenti

Streptozotocin (STZ) (Sigma-Aldrich, USA, S0130); Kit ta 'assaġġ tal-proteina BCA (Shanghai Yase Bio-Pharma, ZJ102); kit kolorimetriku tal-jone tal-ħadid, kit ta 'proteini totali, kit SOD, kit MDA, u kit mikro GSH (Istitut tal-Bijoinġinerija ta' Nanjing Jiancheng; Nri tal-Kat.: E-BC-K773-M, A045-4-2, A001-3-2, A003-1-2, A006-2-1). Antikorpi: Tau/MAPT (Beijing Bioss jew bejjiegħ speċifikat, 10274-1-AP); A (Protetech jew bejjiegħ speċifikat, 25524-1-AP); mogħoż kontra l-fenek sekondarju (bs-10233R); PTGS2, Nrf2, GPX4 (Shanghai SAB Biotech, 27308-1-AP, 80593-1-RR, 30388-1-AP). Glukometru (Sinocare, GA-3); ċentrifuga (Eppendorf KA-1000); omoġenizzatur (Shanghai Jiyi, Fastprep-24MP); qarrej tal-mikroplate (Thermo Scientific X21-19905); banju bl-ilma (Shanghai Yuhua HH-S1); mikroskopju ottiku wieqaf (Nikon Eclipse E100); shaker (Jintan Fuhua TS-1); vortiċi (Qilinbeier Vortex-2); apparat tal-elettroforeżi (Beijing Liuyi DYCZ24DN); sistema tal-immaġini tal-ġel (Shanghai Peiqing JS-680A).

 

Metodi

2.1 Raggruppament u stabbiliment tal-mudell

Disgħin ġrieden maskili SPF C57BL/6J ġew akklimatizzati għal 7 ijiem, imbagħad randomised permezz ta 'tabella ta' numri każwali fi grupp ta 'kontroll vojt (n=12; chow standard) u grupp ta' dieta b'ħafna xaħam (n=78). Wara 42 jum fuq dieta b'ħafna xaħam, ġrieden sawmu għal 12-il siegħa u rċevew injezzjonijiet STZ intraperitoneali f'50 mg / kg għal 5 ijiem konsekuttivi biex jinduċu T2DM. FBG tkejjel fi 72 siegħa u 7 ijiem wara l-injezzjoni. Ġrieden b'FBG Akbar minn jew ugwali għal 16.7 mmol/L u polydipsia, polyphagia, polyuria tqiesu mmudellati b'suċċess. Sitt ġrieden mietu waqt l-immudellar. Ġrieden immudellati b'suċċess ġew randomised fi: mudell T2DM (dieta b'ħafna xaħam), metformin (0.5 g / kg), donepezil (0.001 g / kg), u flavonoids totali ta 'doża għolja, medja, baxxa ta' Cistanche (1.2, 0.8, 0.6 g / kg), n=12 għal kull grupp.

2.2 Dożaġġ

Il-gruppi kollha ta 'trattament irċevew gavage orali ta' kuljum tal-aġenti rispettivi tagħhom flimkien ma 'dieta kontinwa b'ħafna xaħam għal 8 ġimgħat. Il-piż tal-ġisem u l-FBG ġew irreġistrati kull ġimgħa. Wara 8 ġimgħat, sar il-labirint tal-ilma Morris. Wara l-ittestjar tal-imġieba, il-ġrieden sawmu għal 12-il siegħa, ġew anestetizzati, u nġabar id-demm permezz tal-enukleazzjoni. Wara l-ġbir tad-demm, il-ġrieden ġew ewtanizzati; imħuħ ġew imqassma immedjatament u miżun. L-emisferu tax-xellug ġie ffissat f'4% paraformaldehyde għat-tbajja 'HE; it-tessuti li kien fadal ġew alikkwotati u maħżuna f'-80 grad.

 

2.3 Valutazzjonijiet

2.3.1 Labirint tal-ilma Morris

Pool ċirkolari (dijametru 0.9 m; temperatura ta 'l-ilma 25 ± 1 grad ) kienet maqsuma f'erba' kwadranti; il-pjattaforma (dijametru 7.5 ċm) tqiegħdet fil-kwadrant III. Il-protokoll ta '7 ijiem: Adattament ta' Jum 1 (għawma ħielsa, 1 min). Jiem 2–6 provi tan-navigazzjoni: erba’ provi/jum, siegħa ’l bogħod minn xulxin; latency biex issib/immonta pjattaforma fi żmien 1 min ġiet irreġistrata (latency ta 'ħarba). Jekk ma nstabx fi żmien 1 min, il-ġrieden ġew iggwidati lejn il-pjattaforma u jitħallew jibqgħu għal 10 s; latenza rreġistrata bħala 1 min. Prova tas-sonda Jum 7: pjattaforma mneħħija; numru ta' qsim fuq il-post oriġinali tal-pjattaforma fi żmien minuta rreġistrat.

 

2.3.2 Indiċi tal-moħħ

Indiċi tal-moħħ (%)=m1 / m × 100%, fejn m1 huwa l-piż tal-moħħ imxarrab (g) u m huwa l-piż tal-ġisem (g).

 

2.3.3 Assaġġi bijokimiċi

Serum u tessut tal-moħħ Fe2+, SOD, MDA, u GSH ġew imkejla skont l-istruzzjonijiet tal-kit.

 

2.3.4 Tbajja 'HE' ta' hippocampal DG u CA1

Imħuħ iffissati f'4% paraformaldehyde għal Aktar minn jew ugwali għal 24 siegħa ġew ipproċessati. Hippocampi ġew dissected u ttikkettati. It-tessuti għaddew minn deidrazzjoni gradata, inkorporazzjoni tal-paraffin f'65 grad, sezzjoni, tnixxif f'60 grad, deparaffinizzazzjoni u riidratazzjoni, tbajja ta 'ematossilina u eosina, deidrazzjoni gradata, immuntar tar-reżina newtrali, u osservazzjoni mikroskopika.

 

2.3.5 Western blot

Ħamsin milligramma ta 'tessut tal-moħħ iffriżat ġew omoġenizzati u lysed biex tiġi estratta l-proteina totali. Il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet iddeterminata b'BCA. Il-kampjuni tħalltu ma 'buffer tat-tagħbija (4: 1), denaturati f'100 grad għal 10 min, imkessħa fuq is-silġ, separati minn SDS-PAGE, u trasferiti għal membrani PVDF. Il-membrani ġew imblukkati, maħsula, u inkubati matul il-lejl f'4 grad b'antikorpi primarji: A (1:1000), Tau (1:6000), PTGS2 (1:2000), Nrf2 (1:1000), GPX4 (1:1000), u -actin (1:1000). Wara l-ħasil, il-membrani ġew inkubati b'antikorp sekondarju tal-mogħoż kontra l-fenek (1:20000) għal 2 sigħat, maħsula, żviluppati b'ECL, immaġinati, u analizzati minn ImageJ għal densitometrija tal-medda.

 

2.4 Statistika

Id-dejta ġiet analizzata bl-użu tal-SPSS 26.0. Id-dejta tal-kejl hija espressa bħala medja ± SD. Paraguni ta' żewġ gruppi użaw t-tests; paraguni multi-grupp użat ANOVA one-way. P <0.05 tqieset statistikament sinifikanti.

Noti għall-prattikanti u għall-iżviluppaturi....

Identità tal-ħxejjex aromatiċi: L-impjant studjat huwa Melastoma dodecandrum Lour., hawnhekk imsejjaħ "Cistanche (Melastoma dodecandrum)" skont it-talba tiegħek biex tallinja ma 'familjarità usa' tal-industrija. Jekk tifformula jew tissejjes, tiżgura identità botanika korretta u awtentikazzjoni biex tevita konfużjoni ma 'Cistanche deserticola jew Cistanche tubulosa, li huma ġeneri/speċi differenti użati komunement fis-supplimenti.

Kuntest tad-dożaġġ: Dożi ta 'l-annimali (0.6–1.2 g/kg ta' flavonoids totali) ma jistgħux jiġu estrapolati b'mod lineari għall-bnedmin; huma meħtieġa kalkoli ta' doża ekwivalenti għall-bniedem (HED) u studji dwar is-sigurtà.

Enfasi mekkanistiku: Benefiċċji jidhru marbuta ma 'mogħdijiet antiossidanti/anti-ferroptotic (Nrf2/GPX4), modulazzjoni tal-immaniġġjar tal-ħadid, u tnaqqis A / Tau-utli għall-ippożizzjonar fl-appoġġ konjittiv għall-popolazzjonijiet dijabetiċi.

Kontrolli: Metformin (kontroll gliċemiku) u donepezil (referenza konjittiva) isaħħu l-interpretabilità kemm għar-riżultati metaboliċi kif ukoll newrokognittivi.

 

Jekk tixtieq, nista':

 

Ikkonverti dan f'sommarju faċli għar-regolament għal dossier ta' prodott.

Abbozz ta' sommarju għall-edukazzjoni tal-konsumatur.

Ipproponi spec ta' estratt standardizzat (eż., flavonoids totali permezz ta' UV/HPLC) u firxa HED preliminari b'kawżi ta' sigurtà.