Cistanche Deserticola Polysaccharides Għandhom Effett Newroprotettiv

għal aktar informazzjoni:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

Astratt:

Il-puplesija iskemija hija marda b'morbidità u mortalità għolja.Cistanchedeserticolapolisakkaridi(CDP) jippossjedi firxa wiesgħa ta 'effetti ta' benefiċċju, inklużi epatoprotection u omeostasi immuni. Safejn nafu, l-effett protettiv ta 'CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)fuq newroni midruba minn deprivazzjoni/riperfużjoni ta 'ossiġnu-glukożju (OGD/RP) ma ġietx investigata. F'dan l-istudju, OGD/RP danneġġa mudell taċ-ċellula PC12. Fil-qosor, CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)({{0}}.05, 0.5, u 5 ug/ml) ingħata qabel ir-riperfużjoni. L-effett protettiv ta 'CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)imbagħad ġie evalwat fuq il-bażi tal-vijabbiltà taċ-ċelluli, tnixxija tal-lactate dehydrogenase (LDH), [Ca2 plus ] I, potenzjal tal-membrana mitokondrijali (MMP) u apoptożi taċ-ċelluli, status andredox wara riperfużjoni ġie evalwat billi jiġu analizzati speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS), catalase ( CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px) u kapaċità antiossidant totali. Ibbażat fuq il-fatt li l-proteina assoċjata mal-marda ta' Parkinson DJ-1 tipparteċipa f'antiossidazzjoni endoġena u twettaqnewroprotettiveffetti wara ischemiastroke, investigajna l-interazzjoni bejn CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)u DJ{{0}}. L-espressjoni ta' DJ-1 ġiet skoperta permezz ta' analiżi ta' ELISA u Western blot, u t-traslokazzjoni ta' DJ-1 ġiet evalwata permezz ta' immunofluworexxenza. Ir-riżultati wrew li CDP (0.05, 0.5, u 5 ug/ml) attenwat il-mewt taċ-ċelluli PC12, ippreservat MMP u omeostażi tal-kalċju; stress ossidattiv inibit, u tnaqqis fl-apoptosi taċ-ċelluli. Barra minn hekk, CDP (5 ug/ml) stimula b'mod notevoli is-sekrezzjoni u l-espressjoni ta' DJ-1. B'mod ġenerali, ir-riżultati ssuġġerew li CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)jeżerċita anewroprotettiveffett kontra l-korriment ikkaġunat mill-OGD/RP billi jinibixxi l-istress ossidattiv u jirregola l-passaġġ DJ-1

Kliem ewlieni:Cistanche deserticola, Polysaccharides, Newroprotective, Oxygen glucose deprivazzjoni/riperfużjoni, Ossidative stressDJ-1

Ikklikkja għall-prodotti Cistanche UK

1. Introduzzjoni

Il-puplesija iskemika hija t-tieni kawża ewlenija ta' mortalità u l-kawża ewlenija ta' diżabilità fit-tul globalment [1]. Il-mewt minħabba puplesija mistennija titla’ għal 7.8 miljun fl-2030 [2]. Fiċ-Ċina, 58 sa 142 għal kull 100,000 nies imutu minn puplesija kull sena. Għalhekk, għandhom jiġu żviluppati strateġiji effettivi li l-ħsara ta' iskemija-riperfużjoni inversa. Evidenza estensiva tappoġġja li l-istress ossidattiv huwa fattur ewlieni li jippromwovi l-iżvilupp u l-progressjoni tal-infart ċerebrali waqt ir-riperfużjoni[3,4]. Għalhekk, l-iskoperta effettivanewroprotettivaġenti kapaċi li jnaqqsu l-ROS u jrażżnu l-istress ossidattiv ġibdu interess konsiderevoli fir-riċerka. proteinDJ-1 assoċjata mal-marda ta' Parkinson timmedja n-newroprotezzjoni billi tistimula l-espressjoni tal-ġeni anti-apoptotika u antiossidativa [4,5]. DJ-1 jista 'jiġi traslokat fil-mitokondrija permezz ta' stress ossidattiv u stimulazzjoni tal-mitoġenu u jista 'jiġi secreted lill-matriċi extraċellulari taħt kundizzjonijiet patoloġiċi, bħal kanċer tas-sider, melanoma, u korriment OGD/RP [6]. Barra minn hekk, DJ-1 huwa utli fl-immirar terapewtiku għan-newrodeġenerazzjoni iskemika minħabba r-rwol kritiku tiegħu fl-anti-ossidazzjoni [4,7]. Fl-aħħar 10 snin, diversi gruppi kkonfermaw li DJ-1 għamelnewroprotettiveffetti fuq mudelli ta 'iskemija ċerebrali in vivofocal u mudelli in vitro OGD/RP [6-9]. Sadanittant, xi mediċini, inkluż cyclosporine A u sodium phenylbutyrate, ineħħi l-mewt taċ-ċelluli newronali permezz ta' DJ-1 upregulation iniskemia stroke [9,10 ].

Cistanchedeserticola, l-impjant imnixxef integrali ta 'CistanchedeserticolaYCMa u Cistanche tubulosa Wight, huwa prodott prinċipalment fiż-żoni tad-deżert tat-tramuntana u l-majjistral taċ-Ċina [11]. C. deserticola jittiekel u ġie onorat bħala l-'Ġinseng tad-deżerti'. Fil-preskrizzjoni ta 'l-acupoint, huwa użat bħala trattament għal mard kroniku tal-kliewi, impotenza sesswali, infertilità femminili, lewkorrea, metrorraġija, u stitikezza senile [12].C. polysaccharides deserticola, komponent attiv ewlieni iżolat minnCistanche deserticola. CDP, jimmodula l-funzjoni immuni u l-bilanċ tal-lipidi u jipprovdi protezzjoni kontra tixjiħ, ossidazzjoni, u ħsara fil-fwied. Barra minn hekk, CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)jipprevjeni korriment iskemija-riperfużjoni fil-qalb u fil-fwied [13,14]. Studji riċenti rrappurtaw li CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)mhumiex tossiċi[12,15,16], u fitokimiċi oħra estratti minn C. Deserticola, inklużi echinacoside, isoacteoside, acteoside, u salidroside, jurunewroprotettiveffetti [11,12]. Madankollu, l-użu potenzjali ta' CDP għat-titjib tal-ħsara ta' puplesija iskemika ma ġiex irrappurtat s'issa.

Fl-istudju preżenti, aħna ipoteżi li CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)jinibixxi l-istress ossidattiv għan-newroprotezzjoni. L-effetti protettivi potenzjali tas-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)ħsara iniskemija puplesija ġew eżaminati bl-użu OGD/RP danneġġjata PC12cells. Imbagħad ġew esplorati l-interazzjonijiet sottostanti assoċjati ma' DJ-1.

2. Metodi

2.1. Kultura taċ-ċelluli u mudell OGD/RP

Iċ-ċelloli PC12 ġew ikkultivati ​​f'medja RPMI 1640 li fiha 10 fil-mija FBS f'37 grad f'inkubatur normoxic li fih 5 fil-mija CO2. Il-medju kien mibdul kull 48 siegħa. Ġie ppreparat mudell OGD/RP. Iċ-ċelloli PC12 ġew maħsula u esposti għas-soluzzjoni bilanċjata tal-melħ ta' Earle. Imbagħad, iċ-ċelluli ġew trasferiti għal kamra anerobika li kien fiha 5 fil-mija CO2 u 95 fil-mija N2 f'37 grad għal 4 sigħat u mbagħad jitħallew jgħaddu minn riossiġenazzjoni. Matul dan il-pass, l-istess volum ta 'mezz ta' kultura ġie miżjud maċ-ċelluli. Wara r-riossiġenazzjoni, iċ-ċelloli tqiegħdu fuq inkubatur normoxic għal 24 siegħa.

2.2. Amministrazzjoni tad-droga

CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)inxtara minn Yuanye Biological Technology Co.,Shanghai, iċ-Ċina (C23J7Y18405,> 98 fil-mija purità). Nimodipine, mediċina preventiva tal-ewwel linja għall-puplesija tal-iskemija, intuża bħala kompost ta 'kontroll pożittiv [17-19]. L-injezzjoni ta' Nimodipine kienet minn Bayer Company. Iċ-ċelloli kienu maqsuma b'mod każwali f'sitt gruppi, jiġifieri, il-kontroll, ve hicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)(0.05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)(0.5 ug/ml)u CDP (5 ug/ml). Nimodipine u CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)ġew miżjuda qabel riperfużjoni. Il-grupp ta 'kontroll kien ikkultivat f'medja normali u inkubata taħt kundizzjoni normossika.

2.3. Vijabilità taċ-Ċelloli: Assays MTT u NRU

Iċ-ċelluli PC12 (6 × 103 għal kull bir) ġew miżrugħa fi 96-platt tal-kultura tal-bir. Iċ-ċelloli ġew ittrattati skont ir-rekwiżit ta 'kull grupp. MTT (Solarbio, iċ-Ċina) ġie miżjud maċ-ċelloli f'konċentrazzjoni ta '5 mg/ml u inkubat għal 4 h f'temperatura ta' 37 grad. Formazan huwa l-prodott ta 'tnaqqis ta' succinate dehydrogenase fiċ-ċelloli ħajjin [20]. DMSO kien miżjud għad-dissoluzzjoni ta 'formazan blu iġġenerat. L-assorbiment f'wavelength ta '490 nm ġiet skoperta b'Microplate Reader (Thermo, USA) wara li ċ-ċelloli tħawwdu għal 10 min f'25 grad. Ir-riżultati tal-vijabbiltà taċ-ċelluli kienu manifestati bħala persentaġġ tal-grupp ta 'kontroll [21].

Assaġġ tal-assorbiment tal-aħmar newtrali (NRU) sar skont protokoll ippubblikat qabel [22]. Meta tlestew il-perjodi ta' riperfużjoni, ġie miżjud aħmar newtrali (Solarbio, iċ-Ċina) maċ-ċelloli f'konċentrazzjoni ta' 50 ug /ml. It-taħlita ġiet inkubata għal 3 sigħat. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew maħsula malajr b'soluzzjoni li kien fiha 0.5 fil-mija formaldehyde u 1 fil-mija klorur tal-kalċju. Iċ-ċelloli ġew sussegwentement miżjuda ma 'taħlita li fiha 1 fil-mija aċidu etiliku u 50 fil-mija anhydrousethanol. Il-pjanċi nqraw b'assorbiment ta' 540 nm wara li ċ-ċelloli ġew imħawwad għal 20 minuta f'37 grad. Ir-riżultati tal-vijabbiltà taċ-ċelluli kienu manifestati bħala persentaġġ tal-grupp ta 'kontroll.

Cistanche deserticola polysaccharidesgħandhom aEffett newroprotettiv

2.4. Valutazzjoni taċ-ċitotossiċità

LDH hija enzima ċitoplasmika li tikkatalizza l-ossidazzjoni tal-lactate topyruvate. LDH jiġi rilaxxat malajr fil-fluwidu extraċellulari meta l-membrana taċ-ċellula tkun bil-ħsara. Għalhekk, is-sejbien tal-LDH normalment isir għall-evalwazzjoni taċ-ċitotossiċità. [23]. Il-proċedura sperimentali segwiet l-istruzzjonijiet tal-kit kummerċjali fornuti mill-kit tal-assaġġ LDH (Jiancheng, iċ-Ċina). L-assorbiment ta 'kull kampjun ġie skopert f'440 nm b'qarrej tal-mikroplate. Il-perċentwal tal-mewt taċ-ċelluli ġie kkalkulat bl-użu tal-formula li ġejja: Vijabilità ( fil-mija )=(Trattament OD - ODTreatment vojt)/(OD Max LDH attività - OD Max LDH attività vojta) × 100 fil-mija .

2.5. Sejbien ta 'Ca2 intraċellulari flimkien ma' konċentrazzjoni

Il-konċentrazzjoni intraċellulari ta' Ca2 plus kienet imkejla bi Fluo-3/AM [15]. Iċ-ċelloli PC12 ġew maħsula b'PBS tliet darbiet u mbagħad inkubati b'2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, iċ-Ċina) għal 30 min f'37 grad fid-dlam. Iċ-ċelloli mbagħad ġew maħsula bil-PBS tliet darbiet għat-tisfija taż-żebgħa extraċellulari. L-intensità tal-fluworexxenza tal-Fluo-3/AM ġiet iddeterminata fuq mikroskopju konfokali tal-iskannjar bil-lejżer (Olympus, il-Ġappun). Pakkett tas-softwer Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer u ImageJintużaw għall-kalkolu tal-valuri fuq skala griża

2.6. Kejl ta' MMP

JC-1 (5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine;Beyotime, iċ-Ċina) hija sonda konvenjenti sensittiva għall-vultaġġ ġeneralment użata għat-tbajja ċelluli u l-valutazzjoni tal-MMP [24]. Iċ-ċelloli PC12 ġew maħsula darbtejn b'PBS kiesaħ u mbagħad inkubati b'taħlita li fiha 50 fil-mija medju u 50 fil-mija likwidu tax-xogħol għal 15-il minuta fi 37 grad fid-dlam. Imbagħad, it-taħlita ġiet mormija u sostitwita b'mezz frisk. Immaġini ta 'fluworexxenza aħmar u aħdar inqabdu permezz ta' mikroskopija konfokali ta 'skannjar bil-lejżer. Il-proporzjon relattiv ta 'sinjali ta' fluworexxenza ħomor u ħodor intuża għall-kejl MMP [25]. Pakkett tas-softwerOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer u ImageJ intużaw għall-kalkolu tal-valuri fuq skala griża.

2.7. Assaġġ għall-iskoperta tal-apoptożi, Hoecest33342, u analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss

Hoechst33342, żebgħa li torbot id-DNA, intuża għall-eżami tal-apoptożi taċ-ċelluli [26]. Wara r-riperfużjoni, iċ-ċelluli PC12 ġew maħsula bil-PBS tliet darbiet u inkubati b'Hoechst33342 (Beyotime, iċ-Ċina) b'konċentrazzjoni ta '5 ug/ml għal 15-il minuta f'37 grad fid-dlam. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew osservati taħt mikroskopju konfokali tal-iskannjar bil-lejżer. Iċ-ċelloli teapoptotiċi wrew fluworexxenza blu intensa u kondensazzjoni tan-nukleu. Għal kull esperiment ta 'tbajja', ġew maqbuda u kwantifikati tliet oqsma każwali. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer u ImageJintużaw għall-kalkolu tal-valuri fuq skala griża. Il-perċentwali taċ-ċelloli apoptotiċi ġew ikkalkulati permezz tal-formula li ġejja: ammont apoptotiku / ammont totali × 100 fil-mija [27].

2.8. Kejl tal-ġenerazzjoni ROS

Is-sonda fluworexxenti 2′,7′- dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA;Jiancheng, iċ-Ċina) tista 'tippenetra membrani taċ-ċelluli u tista' tiġi idrolizzata għal DCFH mhux fluworexxenti. DCFH huwa ossidizzat minn ROS intraċellulari tofluworexxenti DCF [29]. Wara r-riperfużjoni, iċ-ċelloli ġew maħsula darbtejn b'PBS u mbagħad inkubati b'DCFH-DA f'konċentrazzjoni finali ta '10 μM għal 45 min f'37 grad fid-dlam. Il-fluworexxenza kienet osservata minn spettrofotometru tal-afluworexxenza b'tul ta 'mewġ ta' eċċitazzjoni ta '485 nm u wavelength ta' emissjoni ta '535 nm.

Cistanche deserticola polysaccharidesgħandhom aEffett newroprotettiv

2.9. Determinazzjoni ta 'indikaturi ta' stress ossidattiv: CAT, GSH-Px, u T-AOClevels

Iċ-ċelloli ġew mibruxa u sospiżi mill-ġdid fil-PBS. Is-sospensjonijiet taċ-ċelluli miksuba ġew ivvibrati 45 darba fuq is-silġ u ċentrifugati f'1000r/min għal 10 min f'4 gradi. Is-supernatanti nżammu u ntużaw għall-iskoperta [24]. Il-kontenut totali tal-proteina tas-supernatant taċ-ċellula tkejjel b'kitt tar-reaġent tal-assaġġ tal-proteina BCA (KeyGEN, iċ-Ċina). L-attivitajiet tal-livelli CAT, GSH-Px, u T-AOC ġew imkejla skond l-istruzzjonijiet tal-manifatturi (Jiancheng, iċ-Ċina). L-assorbiment ta' kull kampjun ġie skopert b'microplate reader.

2.10. Kejl tal-konċentrazzjoni extraċellulari ta' DJ-1

Iċ-ċelluli PC12 (6 × 103 għal kull bir) ġew miżrugħa fi 96-pjanċi ta' kultura ta' tajjeb. Wara r-riperfużjoni, is-supernatant taċ-ċellula nġabar u ġie analizzat minn DJ-1/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, USA ) skond l-istruzzjoni tal-manifattur [9]. L-assorbiment ta 'kull kampjun ġie skopert b'Microplate Reader f'tul ta' mewġ doppju ta '450 nm jew 540 nm.

2.11. Analiżi Western blot

Proteini ċellulari ġew estratti b'buffer tal-lisi kiesaħ bis-silġ skont l-istruzzjonijiet tal-manifatturi (KeyGEN, iċ-Ċina). Il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet iddeterminata b'kitt tar-reaġent tal-assaġġ tal-proteina BCA. Ammonti ugwali ta 'proteina lisati (20 ug) minn kull grupp ġew solvuti fi 12 fil-mija sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis u sussegwentement trasferiti fuq membrana nitrocellulose. Il-membrana ġiet inkubata b'PBS li kien fih 5 fil-mija ħalib xkumat għal 2 sigħat f'temperatura tal-kamra u mbagħad ittestjata b'antikorpi anti-PARK7/DJ-1 (ab76008, Abcam; dilwizzjoni 1:1000) matul il-lejl f'4 gradi. Imbagħad, il-membrana ġiet maħsula tliet darbiet b'PBST u inkubata b'antikorp sekondarju mogħoż anti-fenek IgG (SA00001-2, Proteintech Group; dilwition1:5000) f'temperatura tal-kamra għal sagħtejn. L-antikorp anti- -Tubulina(10759-1-AP, Proteintech Group; dilwizzjoni 1:1000) tqieset bħala l-kontroll. Il-meded tal-proteini ġew viżwalizzati permezz ta' reaġenti ta' reazzjoni mtejba ta' kimiluminixxenza (ECL). Id-densitajiet tal-banda tkejlu bis-software QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. Analiżi immunoċitokimika

Iċ-ċelloli PC12 ġew iffissati f'4 fil-mija paraformaldehyde għal 15-il minuta f'temperatura tal-kamra wara t-trattament ta 'riperfużjoni [9]. Wara li tneħħa paraformaldehyde eċċessiv, iċ-ċelloli ġew inkubati f'PBS li kien fih 0.3 fil-mija Triton X-100 għal 10 min f'temperatura tal-kamra. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew maħsula bil-PBS tliet darbiet qabel ma ġew inkubati b'5 fil-mija serum normali tal-mogħoż għal siegħa. Iċ-ċelloli mbagħad ġew inkubati b'katina monoklonali anti-ATP synthase tal-ġrieden tal-fenek (MABS1304, EMD Millipore, dilwizzjoni 1:200) għat-tbajja tal-mitokondrija u sussegwentement inkubati b'antikorp anti-PARK7/DJ-1 (dilwizzjoni 1: 100) għall-istħarriġ tal-proteina DJ-1. Iċ-ċelloli ġew maħsula u inkubati bil-mogħoż kontra l-fniek IgG-Alexa 488 (aħdar; A11034, Invitrogen; dilwizzjoni 1:1000) u mogħoż kontra l-ġurdien IgG-Alexa 594 (aħmar; A11032; Invitrogen; dilwizzjoni 1:1000) min. Fl-aħħarnett, iċ-ċelloli ġew maħsula tliet darbiet b'PBS u mmuntati fuq slides tal-ħġieġ b'mezz ta 'immuntar li fih DAPI. Immaġini immunofluworexxenti ġew viżwalizzati bl-użu ta 'Laser Scanning Confocal Microscope.

Cistanche deserticola polysaccharidesgħandhom aEffett newroprotettiv

2.13. Data/analiżi statistika

Il-valuri kollha ġew murija bħala medja ± SD. Is-sinifikat kien determinat minn analiżi One-Way tal-varjanza (ANOVA), segwita mit-test multi-paragun ta' Dunnett. p < .05="" tqieset="" bħala="" sinifikat="" statistiku.="" id-dejta="" sperimentali="" ġiet="" analizzata="" bl-użu="" ta’="" softwer="" statistiku="" spss="">

3. Riżultati

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)inibit il-ħsara taċ-ċelluli indotta minn OGD/RP

Iċ-ċelloli PC12 esposti għal OGD/RP urew tnaqqis sinifikanti fin-numru. Il-forma taċ-ċellula nbidlet u nkissret il-membrana taċ-ċellula. Fl-assaġġ MTT, il-vijabilità taċ-ċelluli fis-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi ({{0}}.05, 0.5 u 5 ug/ml) kienu 58.91 fil-mija ± 5.40 fil-mija, 61.13 fil-mija ± 3.81 fil-mija u 68.57 fil-mija ± 3.24 fil-mija rispettivament, p < .05="" (fig.="" 1a)="" ,="" u="" li="" bil-vettura="" kellha="" 51.68="" fil-mija="" ±="" 3.89="" fil-mija.="" dawn="" il-valuri="" indikaw="" li="">(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)ipproteġiet iċ-ċelloli kontra l-ħsara OGD/RP u naqqset il-mewt taċ-ċelluli. Barra minn hekk, il-vijabbiltà taċ-ċelluli fil-grupp Nimo kienet 77.02 fil-mija ± 5.22 fil-mija, li hija kważi ugwali għal dik fil-5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)grupp ittrattat.

Fl-assaġġ NRU, il-vijabilità taċ-ċelluli fis-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi ({{0}}.05, 0.5, u 5 ug/ml) kienu 52.03 fil-mija ± 4.72 fil-mija, 58.49 fil-mija ± 2.50 fil-mija u 69.17 fil-mija ± 3.91 fil-mija, rispettivament, (Fig. 1B) u li bil-vettura kellha 47.14 fil-mija ± 2.88 fil-mija. Il-valuri indikaw l-effett protettiv ta' CDP li jiddependi fuq il-konċentrazzjoni.

B'kuntrast ma' vettura (44.73 fil-mija ± 3.30 fil-mija), ir-rilaxx tal-LDH tnaqqset b'mod sinifikanti fis-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi. Fi CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi ({{0}}.05, 0.5 u 5 ug/ml), rati ta 'tnixxija LDH kienu 32.41 fil-mija ± 3.70 fil-mija, 27.13 ± 2.79 fil-mija u 23.13 fil-mija ± 4.59 fil-mija rispettivament, p <.01 (fig.="" .="" 1c).="" barra="" minn="" hekk,="" ir-rati="" ta="" 'tnixxija="" ldh="" fil-grupp="" nimo="" kienu="" 21.99="" fil-mija="" ±="" 4.02="" fil-mija,="" li="" kien="" kważi="" ugwali="" għal="" dak="" fil-grupp="" ikkurat="" 5="" ug/ml="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)żieda attenwata indotta mill-OGD/RP ta' [Ca2 plus ]i

Il-livelli intraċellulari ta 'Ca2 plus fiċ-ċelloli PC12 ġew imtejba għal 4146.60 ± 195.97 wara korriment OGD/RP b'kuntrast mal-grupp ta' kontroll (373.62 ± 75.69). Is-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi ({{0}}.05, 0.5 u 5ug/ml) jistgħu jnaqqsu l-livell intraċellulari ta' Ca2 plus għal 2921.25 ± 222.19, 2015.85 ± 230.53 u 1768.43 ± 426.43 ± 426.43 ± 426.53 A rispettivament (CFig. ). Barra minn hekk, il-livell ta 'Ca2 plus fil-grupp ittrattat b'5 ug/ml CDP naqas għal livell komparabbli ma' dak fil-grupp Nimo (1591.19 ± 213.21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)dissipazzjoni attenwata ta 'MMP indotta minn OGD/RP

Meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll (1.67 ± 0.89), il-grupp tal-vetturi (0.48 ± 0.1{0) wera aktar fluworexxenza fl-aħdar minn FL aħmar fluworexxenza (Fig. 2B u D). Il-proporzjonijiet bejn il-fluworexxenza FL ħamra u ħadra naqsu għal 1.11 ± 0.26 u 1.18 ± 0.16 fil-0.5 u 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi ttrattati rispettivament, p < .01.="" il-fluworexxenza="" tal-fl="" aħdar="" naqset="" b'mod="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)impedixxa l-apoptosi taċ-ċelluli indotta minn OGD/RP

Iċ-ċelloli li juru kromatin kondensati jew nuklei frammentati ġew skurjati bħala ċelloli apoptotiċi [30]. Ir-riżultati tal-assaġġ Hoechst33342 wrew id-dehra ta 'nuklei kondensati wara OGD/RP (Fig. 3A u C). Intensità għolja tal-fluworexxenza FL kienet osservata fin-nuklei fil-grupp tal-vettura. L-intensità tal-fluworexxenza FL tan-nuklei kienet imdgħajfa fil-5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)grupp ittrattat. Aħna analizzati rata apoptotic fiċ-ċelluli PC12 minn sħabi ċitometrija bl-użu FITC-Annexin V/PI tbajja doppja (Fig. 3B u D). Il-grupp ta 'kontroll kellu rata apoptotika taċ-ċelluli ta' 4.16 fil-mija ± 0.24 fil-mija, filwaqt li l-grupp tal-vetturi kellu 22.98 fil-mija ± 0.66 fil-mija. Fil-grupp ikkurat b'5 ug/ml CDP, ir-rata ta 'apoptożi taċ-ċelluli kienet 7.86 fil-mija ± 1.16 fil-mija.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)akkumulazzjoni attenwata ta' ROS intraċellulari indotta minn OGD/RP u status redox ippreservat

L-effetti tas-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)fuq stress ossidattiv ġew murija fuq il-bażi tal-ġenerazzjoni ROS, GSH-Px, attivitajiet CAT, u livelli T-AOC. Il-livelli ta 'ROS fiċ-ċelloli PC12 midruba OGD / RP żdiedu u saru ogħla b'mod sinifikanti minn dak fil-grupp ta' kontroll (p <.01). sadanittant,="" il-livelli="" ros="">(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi ({{0}}.05, 0.5 u 5 ug/ml) naqsu b'mod dipendenti mid-doża (p <.01; fig.="" 4a).="" barra="" minn="" hekk,="" cdp="" żiedet="" ukoll="" b'mod="" sinifikanti="" l-livelli="" t-aoc="" (p=""><.05; fig.="" 4b),="" cat="" (p=""><.05; fig.="" 4c)="" u="" gsh-px="" (p=""><.05; fig.="" 4d)="" meta="" mqabbla="" mal-vettura="" grupp.="" l-attivitajiet="" ta="" 'antiossidanti="" endoġeni="">(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)gruppi żdiedu.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)stimola s-sekrezzjoni ta' DJ-1 u tejbet l-espressjoni ta' DJ-1

Instabu bidliet fil-konċentrazzjoni ta' DJ-1 fis-supernatant taċ-ċellula u żvelat ir-relazzjoni possibbli bejn DJ-1 u CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi). Ġie osservat ir-rilaxx ta' DJ-1 miċ-ċelloli PC12 midruba mill-OGD/RP (Fig. 5). DJ-1 kien regolat b'mod konsiderevoli 'l fuq fis-CDP ta' 5 ug/ml(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)-grupp ittrattat (38.66 ± 8.44 pg/ml) u saret żieda sinifikanti minn dik fil-grupp tal-vettura (18.33 ± 3.80 pg/ml, p < .01) u grupp ta 'kontroll (9.67 ± 3.96 pg/ml, p < .01) .

Biex tinvestiga l-effetti tas-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)fuq l-espressjoni intraċellulari ta' DJ-1, kejlna l-livelli ta' proteina DJ-1 permezz ta' Western blotting. Il-livelli ta' espressjoni tal-proteini DJ-1 żdiedu b'mod sinifikanti 24 siegħa wara r-riperfużjoni. B'kuntrast, it-trattament ta 'wara CDP ta' 5 ug/ml tejbet b'mod sinifikanti l-espressjoni żejda ta 'DJ -1 meta mqabbla mal-grupp tal-vettura (p <.01, fig.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)traslokazzjoni mtejba ta' DJ-1 fil-mitokondrija

Iċ-ċelloli PC12 kienu mtebbgħin b'antikorpi anti-PARK7/DJ-1 u anti-ATP synthase -chain (Figuri 7 u 8). Ir-rabtiet ta 'antikorpi anti-ATP synthase - katina mal-kumpless mitokondrijali I, u l-antiġen li torbot ġew lokalizzati fil-membrana ta' ġewwa mitokondrijali. Ir-riżultati wrew li DJ-1 ittraslokat għall-membrana interna mitokondrijali wara insult OGD/RP (Fig. 8). Sadanittant, id-DJ-1 u r-riżultati tat-tbajja doppja tal-mitokondrija wrew li s-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)ffaċilitat DJ- 1 traslokazzjoni mitokondrijali u ko-lokalizzazzjoni (Fig. 8). Dawn ir-riżultati indikaw interazzjoni diretta bejn DJ-1 unewroprotettiveffett tas-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)(Fig. 9).

4. Diskussjoni

F'dan l-istudju, aħna rrapportajna direttament li CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)inaqqas b'mod effettiv il-ħsara taċ-ċelluli PC12 indotta minn OGD/RP permezz tal-upregulation tal-proteina DJ-1. CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)vijabbiltà mtejba taċ-ċelluli, ħsara fil-membrana taċ-ċelluli mnaqqsa, miżmuma Ca2 intraċellulari flimkien ma 'omeostażi, evitat it-telf ta' MMP, tnaqqis fl-apoptożi taċ-ċelluli, stress ossidattiv imrażżan, espressjoni promossa ta 'DJ-1, u traslokazzjoni DJ-1 msaħħa fil-mitokondrija. DJ-1 reċentement ġie implikat fir-regolament ta'newroprotettiveffett u integrità mitokondrijali. Dawn ir-riżultati pprovdew evidenza konvinċenti tal-newroprotettiveffetti tas-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)kontra l-iskemija. Barra minn hekk, l-interazzjoni bejn CDP u DJ-1 tilgħab anewroprotettivrwol fil-ħsara taċ-ċelluli PC12 indotta minn OGD/RP. Ir-riżultati ta 'hawn fuq jistgħu jiżviluppaw il-fehim tagħna ta' l-effett ta 'benefiċċju ta' CDP u jistgħu jipprovdu informazzjoni utli għat-terapija ta 'puplesija fil-futur.

Il-puplesija ta 'iskemija ġiet attribwita għal serje kumplessa ta' mekkaniżmi bijokimiċi u molekulari, inklużi eċċitotossiċità, tagħbija żejda tal-kalċju u stress ossidattiv [31]. OGD/RP tintuża ħafna bħala mudell in vitro ta 'iskemija-riperfużjoni u tintuża għall-esplorazzjoni ta' bidliet newroloġiċi u bijokimiċi. Il-linja taċ-ċelluli PC12 hija sensittiva għal korriment OGD/RP [2]. Tesibixxi numru ta 'proprjetajiet u karatteristiċi ta' newroni simpatetiċi [32] u għalhekk linji ta 'ċelluli newronali użati ħafna għal riċerka relatata mal-mekkaniżmi ta' ħsara newroloġika minħabba puplesija [33,34]. Bosta studji indikaw li l-istress ossidattiv għandu rwol vitali fil-puplesija u l-ħsara tal-iskemija fil-moħħ [35-37]. Il-proteina DJ assoċjata mal-marda ta' Parkinson-1 tista' tinibixxi n-newrodeġenerazzjoni iskemika u disfunzjoni fl-imġieba billi tnaqqas il-ħsara newronali medjata minn ROS [7]. Għalhekk, użajna l-mudell taċ-ċelluli OGD/RP-injury PC12 biex ninvestigaw il-newroprotettiveffett tas-CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi).

Il-grad ta 'ħsara fiċ-ċelluli PC12 indotti minn OGD/RP ġie evalwat minn analiżi tar-rilaxx MTT, NRU, u LDH. Amministrazzjoni ta' CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)({{0}}.05, 0.5, u 5 ug/ml) tejbet is-sopravivenza taċ-ċelluli u naqas ir-rilaxx ta' LDH. Effetti benefiċi tat-trattament CDP inkludew ukoll tnaqqis ta 'tagħbija żejda ta' kalċju intraċellulari u preservazzjoni ta 'MMP. Anormalitajiet ta 'konċentrazzjoni intraċellulari ta' Ca2 flimkien, speċjalment tagħbija żejda tal-kalċju mitokondrijali, ġew marbuta ma 'apoptożi newronali u mewt indotta minn puplesija iskemija [38]. MMP jista 'jirrifletti l-effiċjenza tal-katina tat-trasport tal-elettroni u ġie indikat bħala indiċi ta' disturb patoloġiku ta 'din is-sistema [39]. Iż-żewġ elevazzjonijiet tal-konċentrazzjoni intraċellulari ta 'Ca2 flimkien ma' telf ta 'MMP jistgħu jwasslu għal destabilizzazzjoni tal-istruttura tan-newron u eventwalment jirriżultaw f'ħsara taċ-ċelluli jew mewt taċ-ċelluli [21,40]. F'dan l-istudju, ir-riżultati wrew li CDP inibixxi b'mod sinifikanti l-Ca2 intraċellulari flimkien ma 'tagħbija żejda u żiedu l-livelli ta' MMP fiċ-ċelloli PC12 ta 'ħsara OGD/RP. L-apoptosi għandha rwol vitali fil-patofiżjoloġija kumplessa ta 'korriment ta' iskemija-riperfużjoni ċerebrali. Iż-żieda tad-dejta ssuġġeriet li l-apoptożi ġiet implikata f'disfunzjoni mitokondrijali; id-dissipazzjoni ta 'MMP hija avveniment bikri li jirriżulta f'apoptożi taċ-ċelluli [8,39]. L-apoptożi hija proċess ta' mewt taċ-ċelluli programmata dipendenti fuq l-enerġija biex tiddisponi minn ċelloli żejda. Ħafna newroni fil-puplesija iskemika se jgħaddu minn apoptożi [41]. F'dan l-istudju, wettaqna tbajja 'Hoechst33342 u Annexin V-FITC/PI biex neżaminaw l-effett ta' CDP fuq l-apoptożi [23,28]. Ir-riżultati wrew li CDP iżomm l-integrità tan-nukleu u jnaqqas ir-rata ta 'apoptosi taċ-ċelluli. Dawn ir-riżultati kollha indikaw li l-attività anti-apoptotika ta 'CDP ikkontribwiet għall-effett ta' benefiċċju fil-ħsara newronali fiċ-ċelloli PC12.

Ċelloli li jgħaddu minn ħsara iskemija kkawżata minn akkumulazzjoni eċċessiva ta 'ROS, li tista' twassal għal perossidazzjoni tal-lipidi, ħsara fil-membrana taċ-ċelluli, tagħbija żejda tal-kalċju u disfunzjoni mitokondrijali, li fl-aħħar mill-aħħar tirriżulta f'apoptożi taċ-ċelluli u mewt [42]. Il-konsum ta 'antiossidanti endoġeni, bħal SOD, CAT, u GSH-Px, indika wkoll l-okkorrenza Fig. 9. Mekkaniżmi possibbli għall-effetti protettivi ta' CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)kontra l-ħsara taċ-ċelluli PC12 indotta minn OGD/RP. It-trattament ta 'CDP irażżan l-istress ossidattiv, jistabbilizza Ca2 flimkien mal-konċentrazzjoni u MMP, itejjeb l-espressjoni u l-lokalizzazzjoni ta' DJ-1 fil-mitokondrija. Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678ta' stress ossidattiv waqt iskemija-riperfużjoni. F'dan l-istudju, il-grupp OGD / RP wera żieda sinifikanti f'ROS u tnaqqis fil-CAT, GSH-Px, u T-AOC meta mqabbel mal-grupp ikkurat b'5 ug/ml CDP. Madankollu, osservajna tnaqqis sostanzjali fir-rati ta 'ġenerazzjoni ROS u konsum ta' antiossidanti endoġeni (CAT, GSH-Px, u T-AOC) fil-gruppi CDP. L-effetti ta 'benefiċċju fil-grupp CDP 5 ug/ml kienu qrib dawk fil-grupp Nimo. Ir-riżultati ssuġġerew li CDP jinibixxi l-ġenerazzjoni ta 'ROS u jirrestawra d-difiża antiossidanti enżimatika.

DJ-1 huwa ewlieni redox-reattivnewroprotettivproteina implikata fir-regolamentazzjoni tal-istress ossidattiv fil-puplesija. L-effetti ta 'benefiċċju ta' espressjoni żejda ta 'DJ-1 jinkludu sopravivenza taċ-ċelluli minn iskemija-riperfużjoni u preservazzjoni tal-funzjoni u morfoloġija mitokondrijali, bħal preċipitazzjoni tal-ftuħ tal-pori tat-tranżizzjoni tal-permeabilità tal-mitokondrija [39,43]. Studji preċedenti indikaw li l-effett protettiv ta 'DJ-1 fiċ-ċelloli esposti għal OGD/RP huwa relatat mal-proprjetajiet antiossidanti tiegħu u t-traslokazzjoni tal-mitokondrija [43-45]. DJ-1 iwettaq newroprotezzjoni endoġena effiċjenti fil-mitigazzjoni tad-difetti mitokondrijali permezz tat-traslokazzjoni [46]. Diversi studji indikaw li t-traslokazzjoni ta' DJ-1 jista' jkollha effett fuq il-moviment mitokondrijali, ittejjeb l-interazzjoni bejn iċ-ċelluli u ċ-ċelluli, u tippromwovi proċessi oħra favur is-sopravivenza taċ-ċelluli.

DJ-1 jaffettwa diversi proċessi, bħall-migrazzjoni u l-adeżjoni taċ-ċelluli, il-kimotassi, il-proliferazzjoni, u l-apoptożi, kemm f'mudelli in vitro kif ukoll in vivo [6,9,47,48]. Bl-użu tal-mudell tal-puplesija taċ-ċelloli PC12 midruba OGD/RP, esplorajna relazzjoni potenzjali bejn CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)u DJ-1. L-espressjoni żejda ta' DJ- 1 ġiet identifikata b'ELISA u Western blotting. Flimkien ma' din il-funzjoni, sejba ewlenija fl-esperimenti wriet li l-espressjoni żejda sinifikanti ta' DJ-1 seħħet meta CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)(5 ug/ ml) ġie amministrat qabel ir-riperfużjoni. Dan issuġġerixxa possibblinewroprotettiveffett fir-relazzjoni ta' CDP u DJ-1. Barra minn hekk, osservajna li DJ-1 li jinsab fil-mitokondrija taħt kundizzjonijiet ta 'OGD/RP u espressjoni abbundanti ta' DJ-1 naqqas is-sensittività ċellulari għal ROS u inibixxi l-istress ossidattiv [45]. Ir-riżultati implikaw li CDP jirregola u jsaħħaħ DJ-1, li jaġixxi bħala rabta molekulari bejn disfunzjoni tal-mitokondrija u stress ossidattiv u jipprovdi progressjoni ta 'mewt taċ-ċelluli sekondarji inerenti fil-puplesija [5,47,49-51]. Flimkien mal-istabbilizzazzjoni ta' DJ-1 fil-mitokondrija, CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)it-trattament żied is-sopravivenza taċ-ċelluli, stabilizzat Ca2 flimkien ma 'omeostażi, tjiebet id-dissipazzjoni tal-MMP, u jipprevjeni l-apoptożi relatata mal-mitokondrijali [43]. B'mod ġenerali, ir-riżultati tagħna indikaw li CDP jeżerċita ġdidnewroprotettivmekkaniżmu fit-trattament ta 'puplesija iskemika.

5. Konklużjoni

Ir-riżultati tagħna indikaw li CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)jipproteġi ċ-ċelloli PC12 kontra l-ħsara kkawżata minn OGD/RP permezz tal-effetti antiossidanti tagħha, li huma parzjalment attribwiti lill-mogħdija medjata minn DJ-1. Dawn l-effetti jinkludu tnaqqis fir-rata ta 'ħsara fil-membrana taċ-ċelluli, preservazzjoni ta' [Ca2 plus ] I omeostażi, titjib tad-dissipazzjoni tal-MMP, inibizzjoni tal-apoptożi taċ-ċelluli, attenwazzjoni ta 'ROS intraċellulari, u modulazzjoni tal-livelli DJ-1. Ir-riżultati indikaw ukoll li l-interazzjonijiet bejn CDP u DJ-1 jamplifikaw in-newroprotezzjoni u jżommu l-integrità mitokondrijali. Għalhekk, newroni vulnerabbli jistgħu jiġu protetti minn CDP(Cistanchedeserticolapolisakkaridi)permezz tat-titjib tal-espressjoni ta' DJ-1 waqt puplesija ta' iskemija.

Rikonoxximenti

Dan l-istudju kien appoġġjat mill-Fondazzjoni Nazzjonali tax-Xjenza Naturali taċ-Ċina (għotja 81360649), il-Programm Nazzjonali tax-Xjenza u t-Teknoloġija (għotja 2015BAK45B01), u l-Programm ta 'Appoġġ tax-Xjenza u t-Teknoloġija tar-Reġjun Awtonomu ta' Ningxia Hui (għotja 2016BZ07).

Cistanche deserticola polysaccharidesgħandhom a Effett newroprotettiv

Referenzi

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans jipproteġi n-newroni kortikali kontra t-tossiċità kkaġunata mill-ipoksja billi jirregola HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: programm ta 'rispons rapidu għal puplesija fiċ-Ċina, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Terapewtika ġdida tal-puplesija: patofiżjoloġija tal-puplesija li tiżvela u l-impatt tagħha fuq trattamenti kliniċi, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, patofiżjoloġija relatata ma 'NADPH oxidase f'mudelli sperimentali ta' puplesija, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oxidation states of DJ{{ 1}} jiddettaw id-destin taċ-ċellula bi tweġiba għal stress ossidattiv ikkawżat minn 4-hpr: awtofaġija jew apoptożi? Sinjal Antioxid Redox. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 ittejjeb il-mewt taċ-ċelluli iskemika in vitro possibilment permezz tal-mogħdija mitokondrijali, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} jipproteġi kontra n-newrodeġenerazzjoni kkawżata minn iskemija ċerebrali fokali u riperfużjoni fil-firien, J. Cereb. Fluss tad-Demm. Iltaqa. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Ċelloli newrali primarji tal-firien mċaħħda mill-ossiġnu-glukożju juru traslokazzjoni DJ-1 f'mitokondrija b'saħħitha: mira terapewtika ta 'puplesija qawwija, CNS Neurosci. Ther. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, It-trattament ta 'Cyclosporine A jneħħi l-mewt taċ-ċelluli newronali indotta mill-iskemija billi jippreserva l-integrità mitokondrijali permezz ta' regolazzjoni 'l fuq tal-proteina assoċjata mal-marda ta' Parkinson DJ-1, CNS Neurosci. Ther. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Trattament minn qabel bis-sodium Phenylbutyrate Ittaffi l-iskemija ċerebrali/ korriment ta' riperfużjoni billi rregola l-proteina DJ-1, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Reviżjoni tan-newrofarmakoloġija, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Wieħed mill-Aħjar rigali farmaċewtiċi tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Effetti u mekkaniżmi tal-mediċina Veġetali Ċiniża fit-titjib tal-korriment ta 'iskemija-riperfużjoni mijokardijaka, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches jistimula ċ-ċikliżmu redox tal-glutathione ċellulari minn speċi reattivi ta 'ossiġnu ġġenerati minn respirazzjoni mitokondrijali f'kardjomijoċiti H9c2, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Ġinseng tad-deżert": reviżjoni, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticoladecoction ittaffi t-tossiċità testikolari indotta minn hydroxyurea fil-ġrieden maskili, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of thenewroprotettivimpatt ta 'nimodipine fuq ċelluli Neuro2a permezz ta' mudell ta 'stress bħal kirurġija, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Newroprotettiveffett ta 'noscapine fuq korriment ta' privazzjoni ta 'ossiġnu-glukożju ċerebrali, Pharmacol. Rep 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A jipproteġi kontra indeboliment iskemiku fil-kultura primarja ta 'newroni kortikali tal-firien wara deprivazzjoni ta' ossiġnu-glukożju segwita bir-riperfużjoni, J. Neurosci. Riż. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Ċelloli PC12 protetti b'Trans-cinnamaldehyde kontra deprivazzjoni ta' ossiġnu u glukożju /riperfużjoni (OGD/R)-indotta minn korriment permezz ta 'kontra l-apoptożi u stress anti-ossidattiv, Mol. Ċellula Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Effetti protettivi tal-aloin fuq l-ossiġnu u Korriment ikkawżat minn deprivazzjoni tal-glukożju fiċ-ċelloli PC12, Brain Res. Bull. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol jipproteġi ċelluli iskemiċi PC12 billi jinibixxi l-fatturi tat-traskrizzjoni assoċjati mal-ipoksja u jżidu l-livelli ta 'enzimi ta' difiża antiossidanti, ACS. Chem. Newrosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B jipproteġi ċ-ċelluli PC12 kontra mewt newronali kkaġunata minn deprivazzjoni ta' ossiġnu-glukożju billi żżomm omeostażi mitokondrijali permezz ta' induzzjoni ta' ubiquitin dipendenti degradazzjoni tal-proteina p53, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Effetti protettivi ta 'aloperine fuq far primarju tat-twelid. newroni tal-hippocampal kkultivati ​​midruba minn privazzjoni u riperfużjoni tal-ossiġnu-glukożju, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib jipproteġi n-newroni kortikali tal-ġrieden kontra n-newrotossiċità indotta minn OGD/R billi jirregola b'mod 'l fuq Bcl-2, Neurochem. Riż. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 jistabbilizza l-espressjoni HER2 u jżomm il-popolazzjoni taċ-ċelloli staminali tal-kanċer fiċ-ċelloli tal-kanċer tal-ovarji, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Jipproteġi ċ-ċelloli RGC-5 minn H(2)O( 2)-insulti ta 'stress ossidattiv indott billi jattivaw PI3K/Akt/eNOS Signaling pathway, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, L-estratti tad-Dichloromethane tal-propolis jipproteġu ċ-ċellula minn stress ossidattiv indott mid-deprivazzjoni tal-ossiġnu-glukożju Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679permezz tat-tnaqqis tal-apoptożi, Food Nutr. Riż. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Newroprotettiveffett ta 'neuroserpin fl-astroċiti tal-firien ittrattati b'deprivazzjoni ta' ossiġnu-glukożju u riossiġenazzjoni in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Il-joni tal-litju attenwaw l-apoptosi indotta mid-deprivazzjoni tas-serum fiċ-ċelloli PC12 permezz tar-regolamentazzjoni tas-sinjalar Akt/FoxO1 mogħdijiet, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Sommarju eżekuttiv tal-mard tal-qalb u l-istatistika tal-puplesija 2016 aġġornament. Rapport mill-Assoċjazzjoni Amerikana tal-Qalb, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Ir-Regolament tas-siti li jgħaqqdu l-ligand muskariniku permezz tal-fattur tat-tkabbir tan-nervituri fiċ-ċelloli PC12 phaeochromocytoma, Nature 297 (1982) 152-154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone jnaqqas l-apoptosi għolja indotta minn glukosju u jipprevjeni uġigħ newropatiku dijabetiku sperimentali: studji in vitro u in vivo, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol jipproteġi ċ-ċelluli PC12 kontra l-apoptosi indotta mill-OGD/R permezz tal-mogħdija tas-sinjalar medjata mill-mitokondrija, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidases bħala sors ta 'stress ossidattiv u mira molekulari fl-iskemija/riperfużjoni. injury, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Effetti protettivi ta 'organi ta' estratt ta 'inbid aħmar, resveratrol, f'korriment ta' riperfużjoni medjat minn stress ossidattiv, Ossidu. Med. Ċellula Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Mekkaniżmi ta’ attivazzjoni mPTP distinti f’iskemija-riperfużjoni: kontribuzzjonijiet ta’ Ca2 plus plus , ROS, pH, u polifosfat inorganiku, Cardiovasc. Riż. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Prekondizzjonament ta’ etanol ta’ doża baxxa jipproteġi kontra deprivazzjoni ta’ ossiġnu-glukożju/ korriment newronali Indott minn riossiġenazzjoni billi jattiva konduttanza kbira , Ca2 plus plus -activated K plus plus Channels In Vitro, Neurosci. Bull. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Effett ta 'inibizzjoni tal-fissjoni mitokondrijali fuq il-metaboliżmu tal-enerġija fin-newroni tal-hippocampal tal-firien waqt korriment ta' iskemija/riperfużjoni, Neurol. Riż. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., Effetti protettivi ta ' Lycium barbarum polysaccharide fuq newroni tal-hippocampal ikkultivati ​​primarji tal-firien tat-twelid imweġġgħin minn deprivazzjoni u riperfużjoni tal-ossiġnu-glukożju, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Mekkaniżmi apoptotiċi wara iskemija ċerebrali, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin jipproteġi l-astroċiti mill-ipoksja in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase jirregola l-PINK1/Parkin u DJ{{3} } mogħdijiet ta 'mitophagy waqt sepsis, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 huwa medjatur importanti ta 'risponsi ċellulari indotti mill-ipoksja, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase jirregola l-PINK1/ Parkin u DJ-1 mogħdijiet ta 'mitophagy waqt sepsis, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylation minn DJ-1 għal PTEN attenwat il-mewt taċ-ċelluli newronali fil-mudelli tal-marda ta 'Parkinson, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 jipproteġi kontra l-mewt taċ-ċelluli wara korriment akut iskemija kardijaka-riperfużjoni, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} huwa bijomarkatur affidabbli tas-serum biex jiddiskrimina kanċer endometrijali ta 'riskju għoli, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 jipproteġi n-nigrostriatal assi min-newrotossina MPTP bil-modulazzjoni tal-mogħdija AKT, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, Il-proteina tal-marda ta' Parkinson DJ-1 hijanewroprotettivminħabba lokalizzazzjoni mitokondrijali mmexxija mill-aċidu cysteine-sulfinic, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Inibizzjoni ta' DJ indotta mill-ipergliċemija-1 espressjoni kkompromettiet l-effettività tal-kardjoprotezzjoni iskemika ta 'wara l-kondizzjonament fil-firien, Oxid. Med. Ċellula Longev. (2013) (2013) 564902.