Mediċina Ċiniża Cistanche Kompożizzjoni Kimika U Analiżi ta 'Komponenti Fil-Korp Ⅲ

Kapitolu 2 Studju kwalitattiv dwar il-kompożizzjoni kimika ta' Cistanche deserticola

Cistanche huwa iz-zokk imlaħħam tal-werqa bil-qoxra niexfaCistanche deserticola YC.Mau Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Hija waħda mill-kidney-yang nutrizzjoni famużi mediċini tradizzjonali Ċiniżi. Għandu l-funzjonijiet tanutrizzjoni tal-kliewi-yang, riforniment ta 'essenza u demm, u niedja Għandu effett lassattiv u spiss jintuża biex jikkura impotenza, infertilità, uġigħ fil-qadd u l-irkopptejn, dgħjufija tal-muskoli u l-għadam, nixfa intestinali u stitikezza, eċċ Għandu effetti farmakoloġiċi bħal anti- dimenzja, marda ta 'kontra l-Parkinson, protezzjoni minn iskemija ċerebrali, u titjib tal-abbiltajiet ta' tagħlim u memorja. Sabiex tiġi ċċarata l-bażi materjali għall-effettività ta' Cistanche deserticola, dan il-kapitolu juża HPLC u LC-IT-TOF-MS biex jikkaratterizza b'mod komprensiv il-komponenti kimiċi ta' Cistanche. Ibbażat fuq sommarju sistematiku tar-regoli tal-qsim ta 'diversi tipi ta' komponenti kimiċi, il-proprjetajiet ta 'Cistanche deserticola huma analizzati b'mod sistematiku. Kompożizzjoni kimika, biex tipprovdi data rikka minn sorsi affidabbli għaliluċidazzjoni fil-fondtal-proprjetajiet mediċinali ta 'Cistanche deserticolain vivo.

KEMM JIEĦU BIEX TAĦDEM ĊISTANCHE?

Taqsima 1 Materjali Sperimentali

1.Strument

Spettrometru tal-massa likwida Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (mgħammar b'2 ​​pompi LC-20ADXR, kampjunatur awtomatiku SIL-20AC, forn tal-kolonna CTO-20AC, detector UV SPD-M20A, Magna tal-gass ta' dekontaminazzjoni DGU-20A3R, CBM-20Kontrollur, sors ta' jone ESI, Shimadzu Company, Ġappun), sistema ta' purifikazzjoni tal-ilma ultrapur Milli-Q (Milipore Company, USA): Mettler ME204 bilanċ analitiku elettroniku ( Mettler Toledo Company, l-Isvizzera).

2. Reaġenti

Grad ta 'kromatografija u grad ta' spettrometrija tal-massa metanol, aċetonitrile u aċidu formiku ta 'grad spettrometrija tal-massa nxtraw minn Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA). L-ilma kien ilma ultrapur Milli-Q magħmul fil-laboratorju (Millipore, Bedford, MA, USA). Ir-Reaġenti tal-bqija huma kollha tal-grad analitiku.

Salidroside, 6-deoxycatalpol, 8-epi-loganic acid, echinacoside, acteoside, isoside Verbascoside (isoacteoside,) u pinoresinol- -D-glucopyranoside (pinoresinol- -D-glucopyranoside) it-tnejn kienu pprovduti mill-grupp ta 'riċerka tal-Professur Tu Pengfei fil-Laboratorju Ewlenin tad-Drogi Naturali u Bijomimetiċi fl-Università ta' Peking. Sarcoside F (cistanosideF) inxtara minn Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanoside A (cistanoside A), 2'-acetylacteoside (2'-acetylacteoside), 2'-acetylpoliumoside (2'-acetylpoliumoside), cistanoside Polyglucoside (poliumoside) ), cistanoside E (cistanosideE), isocistanoside E (isocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (isocistanosideC) u cistanoside D (cistanosideD) kollha nxtraw minn Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A (tubulosideA) u tubuloside B (tubulosideB) inxtraw minn Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Taqsima 2 Kontenut sperimentali

1. Preparazzjoni tal-kampjun

1.1 Preparazzjoni tas-sustanza ta' referenza

Iżen preċiżament ammonti xierqa ta’ diversi sustanzi ta’ referenza fit-“Taqsima 1 Materjali Sperimentali” ta’ hawn fuq u pprepara soluzzjonijiet ta’ stokk ta’ 10 mM bid-DMSO. Pipetta preċiżament 2 mL ta 'kull soluzzjoni stokk u ħallat b'25% acetonitrile biex tagħmel soluzzjoni ta' kontroll imħallat 2 μM. 1.2 Preparazzjoni tas-soluzzjoni tat-test

L-estratt milwiema ta 'Cistanche deserticola sar mil-laboratorju tagħna, u l-kampjun huwa maħżun fiċ-Ċentru ta' Riċerka tal-Modernizzazzjoni tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, l-Iskola tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, l-Università ta 'Beijing tal-Mediċina Ċiniża. Ħu 20 mg ta 'Cistanche deserticola trab, żid 40 mL ta' ilma biex dewweb, vortex u ħawwad, ċentrifuga f'10000 rpm għal 10 min, u ħu s-supernatant. Jiġifieri, tinkiseb is-soluzzjoni tat-test.

3. Kundizzjonijiet tal-ispettrometrija tal-massa

Sors tal-jone tal-Electrospray (ESI), il-modalità tal-iskannjar huwa li tiskennja jonji pożittivi u negattivi simultanjament u awtomatikament iqanqal spettrometrija tal-massa b'ħafna livelli. Il-firxa tal-iskannjar tal-massa ta 'MS'~MS' għal joni pożittivi hija m/z50 ~ 800, u għal joni negattivi hija m/z100 ~ 1000. Il-vultaġġi tal-kamra tal-isprej huma 4.5kV u -3.5kV rispettivament: ir-rata tal-fluss tal-gass atomizzanti (Nz) hija 1.5Lmin; il-pressjoni tal-gass tat-tnixxif hija 110MPa; il-vultaġġ ta 'skoperta huwa 1.55 kV; it-temperaturi tat-tubu desolventizer mgħawġa (CDL) u l-modulu tat-tisħin huma t-tnejn 200 grad. Il-pressjoni tal-kamra tal-ħabta hija 1.5e-Pa; il-pressjoni tan-nassa tal-joni hija 2.8e-Pa; in-numru ta 'repetizzjonijiet tal-ewwel stadji pożittivi u negattivi huwa 1, u l-ħin tal-akkumulazzjoni tal-joni huwa ta' 30 ms; in-numru ta 'repetizzjonijiet tat-tieni stadji pożittivi u negattivi huwa 2, u l-ħin tal-akkumulazzjoni tal-joni huwa 20ms. ; L-enerġija tad-dissoċjazzjoni indotta mill-ħabtiet (CID) hija 50%.

Taqsima 3 Riżultati u Diskussjoni

Għażla tal-kolonna

Sabiex tinkiseb separazzjoni kromatografika aħjar, aħna skrijnajna b'mod estensiv kolonni kromatografiċi minn manifatturi u speċifikazzjonijiet differenti, bħal kolonna kromatografika ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, l-Iskozja), Shiseido Capcell Core Ci8 ( 2.1 mm x 150mm, 2.7μm), kolonna Waters Acquity UPLC HSS T3 (2.1 x 100 mm, 1.8 μm, Milford, MA, USA) u kolonna Capcell Core ADME (2.1x150mm, 2.7μm, Shiseido Corporation, Ġappun). Permezz ta 'tqabbil sistematiku, instab li meta tintuża l-kolonna kromatografika Capcell Core ADME (2.1x150mm, 2.7μm, Shiseido Co., Ltd., Ġappun), kull sinjal kromatografiku jista' jiġi separat aħjar (Figura 3-1).

2. Għażla tal-kundizzjonijiet tal-fażi likwida

Peress li l-komponenti kimiċi ewlenin ta 'Cistanche deserticolahuma phenylethanol glycosides, lignans, iridojdi u komposti oħra, ġeneralment jirrispondi aħjar taħt kundizzjonijiet ta 'jone negattiv. Sabiex jiġu identifikati komponenti kimiċi ta 'livell baxx fl-estratt ta' l-ilma ta 'Cistanche deserticola, huwa spekulat li l-aċidi jista' jkollhom bżonn jiżdiedu mal-fażi mobbli biex itejbu l-qawwa. Għalhekk, dan l-esperiment uża ilma-metanol, ilma-acetonitrile, 0.1% aċidu formiku ilma-metanol u 0.1% aċidu formiku ilma-acetonitrile bħala sistemi ta 'fażi mobbli għall-investigazzjoni. Instab li 0.1% aċidu formiku ilma-acetonitrile kellu l-aħjar effett ta 'separazzjoni, b'forma ta' quċċata tajba u kapaċità ta 'quċċata kbira, għalhekk 0.1% ilma ta' aċidu formiku u aċetonitrile ġew magħżula bħala l- fażi mobbli. 3. Analiżi kwalitattiva ta 'komponenti kimiċi. Uża 19-il sustanza ta' referenza eżistenti biex tesplora r-regoli tal-frammentazzjoni tal-ispettrometrija tal-massa ta' diversi tipi ta' komposti f'Cistanche deserticola. Is-sustanzi ta' referenza mħallta huma kromatogrammi PDA f'340 nm fuq il-kolonna ADME u charts BPC f'modi ta' joni pożittivi u negattivi. Ara l-Figura 3-1. Aħna rrevejna l-letteratura rilevanti permezz ta 'PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP, u Wanfang, eċċ., U bnejna database magħmula minnha nfisha ta' komponenti kimiċi ta 'Cistanche deserticola. Ibbażat fuq it-tqabbil tar-regoli tal-frammentazzjoni tal-ispettrometrija tal-massa u l-ħinijiet ta 'żamma ta' komposti magħrufa, identifikajna b'mod preliminari 45 kompost f'Cistanche deserticola. komposti, inklużi 31 phenylethanol glycosides, 9 iridojdi, 3 benzyl glycosides, u 2 lignans, kif muri fit-Tabella 3-1.

Billi tqabbel il-ħin ta' kunfidenzjalità, l-ispettru tal-SM u l-ispettru tal-SM tas-sustanza ta' referenza, il-komposti 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 ġew identifikati b'mod sekwenzjali b'mod preċiż bħala genipin, cistanchein F, cistancheoside E, echinaceaside, chrysantoside, cistanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D glucoside, mullein Glycosides, isocannabinoid glycoside, pinoresin monomethyl ether glycoside, cistanchein glycoside, cistanchein glycoside, cistanchein glycoside C, isocistancoside C, tuberosin B, u cistanche glycoside D.

Dan l-esperiment juża t-teknoloġija HPLC-IT-TOF-MS biex janalizza sistematikament b'mod rapidu u preċiż il-komponenti kimiċi kumplessi fl-estratt tal-ilma ta 'Cistanche deserticola, li jipprovdi bażi għal analiżi komprensiva tal-kwalità ta' Cistanche deserticola u riċerka dwar sustanzi farmakoloġiċi in vivo.

Figura 3-1 Kromatogramma ta' sustanza ta' referenza mħallta Fuq: Ċart BPC fil-modalità tal-jone pożittiv: Ta' taħt: Ċart BPC fil-modalità tal-jone negattiv

Figura 3-1 Kromatogramma ta' sustanza ta' referenza mħallta Fuq: Ċart BPC fil-modalità tal-jone pożittiv: Ta' taħt: Ċart BPC fil-modalità tal-jone negattiv