Proprjetajiet Kimiċi Ta' Mannoglucan Minn Cistanche Deserticola

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materjali

Intużaw pejsts orali għaż-żwiemel minn żewġ manifatturi differenti li fihom 10 mg/g (A) jew 20 mg/g (B) ta 'ivermectin, rispettivament. L-assaġġ kwantitattiv għall-ivermectin sar u l-kontenut kien 104.4- 107.7 fil-mija tal-konċentrazzjoni ddikjarata.

2. Test ta 'dissoluzzjoni

It-test sar b'Ph. Eur. apparat jaqdfu (Pharma Test, Heinberg, il-Ġermanja), f'aġitazzjoni ta' 75 rpm jew 50 rpm, f'37 -0.5 C. Sodium lauryl sulfate (BDH Chemicals, Poole, l-Ingilterra) 0.5 fil-mija (w /v) soluzzjoni milwiema kienet użata bħala mezz ta 'dissoluzzjoni (900 ml). Il-pejst (4 g ta 'A jew 2 g B) tqiegħdet fil-bastiment b'siringa b'kannula (A) jew twaqqa' l-kampjun fil-wiċċ tal-mezz ta' dissoluzzjoni (B). Wara l-intervalli tal-ħin (15, 30, 45, 60 min, u 2 sigħat), kampjun tal-mezz ta 'dissoluzzjoni ġie rtirat (2 ml), iffiltrat minn filtru tal-ħġieġ, u analizzat.

3. Analiżi HPLC

Id-determinazzjoni ta 'ivermectin saret b'metodu HPLC modifikat kif deskritt fil-Ph. Eur. Is-soluzzjonijiet analizzati ġew dilwiti bil-metanol (1: 10). Is-sistema HPLC kienet tikkonsisti f'kolonna octadecyl (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integratur D-12500 A, detector UV-Vis L{{7} }, pompa L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, il-Ġermanja). Taħlita ta 'acetonitrile: metanol: ilma (64: 24: 16) intużat bħala l-fażi mobbli b'rata ta' fluss ta '1.9 ml/min. Il-volum tal-kampjun injettat kien 20 ml u l-iskoperta saret f'254 nm.

4. Studji tas-solubilità

Aċċess tas-sustanza tħawwad fi fliexken tal-ħġieġ magħluqin sewwa b'solvent adattat (Tabella 1) għal 20 siegħa f'{2}}.1 C. Is-sospensjonijiet ġew iffiltrati u l-filtrat, wara dilwizzjoni fil-metanol, ġie analizzat permezz tal-HPLC .

5. Stabbiltà f'soluzzjoni aċiduża

Soluzzjonijiet ta 'ivermectin f'HCl {{0}}.1 M ġew maħżuna f'kunjetti tal-ħġieġ magħluqin sewwa f'20 C u 37 C. Il-kromatogrammi tas-soluzzjonijiet ġew irreġistrati f't ¼ 0 u wara 1, 2 u 6 sigħat. L-erja tal-ivermectin (ħin ta 'ritenzjoni 10.5 min) u l-qċaċet addizzjonali ġew ikkalkulati.

Referenzi

Gwida tal-FDA għall-industrija: Forom tad-dożaġġ semisolidi mhux sterili SUPAC-SS. Tibdil fuq skala u wara l-approvazzjoni: kimika, manifattura, u kontrolli; ittestjar tar-rilaxx in vitro u dokumentazzjoni tal-bijoekwivalenza in vivo. Mejju 1997. Linji gwida tal-FIP għall-ittestjar ta' dissoluzzjoni ta' prodotti orali solidi (1997) Dissolut. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Linji gwida FIP/AAPS għal ttestjar ta 'rilaxx in vitro ta' dissoluzzjoni ta 'forom ta' dożaġġ ġodda / speċjali, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artikolu 7 Ċentru ta 'Riċerka Moderna għall-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, Skola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, iċ-Ċentru tax-Xjenza tas-Saħħa tal-Università ta 'Peking, Beijing, iċ-Ċina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Riċevuti fit-13 ta 'Frar, 2004, aċċettati fl-4 ta' April, 2004, Prof Dr Pengfei Tu, Ċentru ta 'Riċerka Moderna għall-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, Skola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, Ċentru tax-Xjenza tas-Saħħa tal-Università ta' Peking, Nru 38, Triq Xueyuan , Distrett ta' Haidian, Beijing 100083, iċ-Ċina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Mannoglucan ġdid minnCistanche deserticolamiċ-Ċina hija kkaratterizzata. Il-kompost huwa responsabbli għal stimulazzjoni ħafifa tal-proliferazzjoni tal-limfoċiti T u B indotta minn mitoġenu.

Cistanche deserticolaYC Ma huwa holoparasite li qed jikber fuq l-għeruq tal-pjanta dikotiledona Haloxylon ammodendron Bunge li hija mqassma b'mod wiesa 'fil-majjistral taċ-Ċina. Peress li huwa toniku importanti fil-mediċina orjentali, ġew iddikjarati ħafna komponenti attivi u attivitajiet farmakoloġiċi (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Dawn il-proprjetajiet jistgħu jkunu assoċjati ma 'xi wħud mill-komponenti tal-polisakkaridi ta'Cistancheli għadhom ma ġewx investigati. Polisakkaridi pektiċi mitoġeniċi u polisakkaridi newtrali ġew iżolati u kkaratterizzati minnCistanche deserticolamill-Mongolja (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Hawnhekk nirrapportaw il-proprjetajiet kimiċi ta 'mannoglucan ġdid minnCistanche deserticolamiċ-Ċina, li hija responsabbli għall-istimulazzjoni ħafifa tal-proliferazzjoni tal-limfoċiti T u B indotta minn mitoġenu. Wara l-zkuk taCistanche deserticolaYC Ma ġew estratti b'95 fil-mija etanol, ilma distillat kiesaħ intuża biex jiġi estratt ir-residwu. L-estratt ta 'l-ilma kiesaħ ġie preċipitat b'EtOH, il-proteina tneħħiet u ddijalizzata, u kiseb il-polisakkarid mhux raffinat CCDP. Il-polisakkarid mhux raffinat ġie frazzjonat fuq kolonna DEAE u kolonna Sephadex G-150 biex jagħti polysaccharide ħieles mill-proteini (CDP-6), li kien jinkludi glukożju (89.2 fil-mija) u mannożju (1{{58} }.4 fil-mija ), u li minnhom il-medja tas-Sur kien stmat li kien 6.8 -104. Il-polysaccharide CDP-6 wera [a 20 D 42 (c 1, H2O). Il-konfigurazzjonijiet assoluti taz-zokkor ġew determinati minn GC ta' TMS (– )-2-butil glycosides. CDP-6 ġie methylated (Needs et al. 1993), idrolizzat, konvertit għall-alditol acetates, u analizzat b'GC u GC-MS (Tabella). Dan ir-riżultat flimkien mad-dejta tal-proporzjon molari mill-analiżi tal-metilazzjoni ssuġġeriet li CDP-6 għandu Glcp konness b'mod predominanti 1,6- u sinsla 1,6- marbuta sa ċertu punt ramifikata f'O{{ 24}} tal-mannożju. L-analiżi tal-metilazzjoni ta' żewġ polimeri (CDP-6-1, CDP-6-2) minn idroliżi parzjali kkonfermat li CDP-6 għandu sinsla li tikkonsisti f'1,6-residwi ta' glukosil marbutin u 1,6-residwi ta' mannosyl marbuta, li huma sostitwiti f'O-3 ta' mannożju b'fergħat li jikkonsistu mit-terminali, 1,6- residwi ta' glukosil marbutin, u 1,3,{{38} }residwi mannosyl marbuta. Skont il-proporzjonijiet molari u l-letteratura (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), l-ispettru 13C NMR ta’ CDP-6 wera sinjali minħabba karbonji anomeriċi tal-a- d-Glcp (C{{45} }} f'98.4 ppm), bd-Map (C-1 f'104.3–104.9 ppm) u ad-Map (C-1 f'100.0 ppm). L-ispettru 1 H NMR ta' CDP-6-2 fid-D2O wera sinjali tal-protoni li jikkorrispondu mal-ad-Glcp (H-1 f'4.94–4.95 ppm) u a-d-Map (H-1 f' 4.96–5.00 ppm). L-ispettru 13C NMR ta' CDP-6-2 f'D2O wera sinjali tal-protoni li jikkorrispondu għall-aD-Glcp (C-1 f'98.6 ppm) u ad-Map (C-1 f'98.4ppm). Mannoglucans huma rrappurtati li għandhom 1,4-glukopyrannan konness u 1,4-sinsla mannopyrannan marbuta (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 għandu xi karatteristiċi strutturali differenti mill-a-1,6-Glcp u b-1,6-konnessi tal-Mappa tiegħu, u huwa sostitwit minn fergħat ta' mannoglucan (Fig.). Sabiex jiġi investigat l-użu taCistanche deserticolafil-mediċina folkloristika, l-effett ta' CDP-6 fuq is-sistemi taċ-ċelluli T u B ġie evalwat. Instab li jistimula b'mod ħafif il-proliferazzjoni tal-limfoċiti T u B indotta minn mitoġenu.

Sperimentali

1. Proċeduri ġenerali

Ir-rotazzjoni ottika tkejjel b'polarimetru awtomatiku W22-1S. L-ispettri IR ġew determinati fuq spettrometru Perkin-Elmer 599B. L-analiżi GC saret fuq strument Agilent HP6890N, mgħammar b'ditekter FID. GC-MS sar fuq strument Finnigan Trace GC-MS. L-omoġeneità u s-Sur ta' CDP-6 ġew stmati mill-kurva tal-kalibrazzjoni tal-volum ta' elużjoni ta' dextrans standard, li twettqet fuq

apparat Agilent 1100 serje b'kolonna Shodex KS-805.1 H NMR u 13C NMR spettri ġew irreġistrati bi strument INOVA-500. Il-kontenut ta 'proteini ġie analizzat bil-metodu ta' Bradford (Andre et al. 1975). Monsaccharides ġew analizzati fir-rigward tal-alditol acetate tagħhom wara li kienu ġew idrolizzati (2 M TFA, 2 h, 110 C), imnaqqsa u aċetati. L-idrolisati ġew analizzati bl-użu ta' TLC fuq pjanċa tal-ġel tas-silika li fiha 5 fil-mija sodium dihydrogen phosphate f'BuOH-EtOAc-isopropyl alcohol-HOAC––H2Opyridine (3.5: 10: 6: 3.5: 3: 3) u z-zokkor ġew skoperti bil-bexx bl-orċinol -H2SO4. L-alditol acetates li rriżultaw ġew analizzati bil-GLC bl-użu ta' kolonna kapillari HP-5 (30 m 0.32 mm). CDP-6 ġie methylated bil-metodu Ciucanu, segwit minn idroliżi, u ġie analizzat bħala alditol acetates parzjalment methylated bil-GC-MS. Wara l-idroliżi parzjali, il-prodotti ġew dijaliżi u separati, u kisbu żewġ polimeri, CDP-6-1 u CDP-6–2.

2. Materjal tal-pjanti

L-impjant inġabar mill-Provinċja ta 'Inner Mongolia fiċ-Ċina f'Awwissu 2001 u ġie identifikat minn Hu-Biao Chen, Dipartiment tal-Mediċina Naturali, Iskola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, Ċentru tax-Xjenza tas-Saħħa tal-Università ta' Peking. Eżemplari ta' vawċer [E-1-(9)] ta' dan l-impjant ġie depożitat fl-Iskola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, l-Università ta' Peking. 3. Estrazzjoni, iżolament, u purifikazzjoni ta' polysaccharide CDP-6 Iz-zokk ta'Cistanche deserticolaYC Ma (1500 g) ġew estratti b'95 fil-mija etanol (6 L) taħt rifluss. Ir-residwu imnixxef li ma jinħallx fl-etanol ġie maċerat tliet darbiet b'ilma distillat kiesaħ għal kull 12-il siegħa. L-estratt tal-ilma kiesaħ ġie ffiltrat u l-filtrat ċentrifugat. Wara preċipitazzjoni b'erba 'volumi ta' EtOH (tħawwad u wieqfa għal 24 siegħa f'4 C), il-prodott preċipitat (35.5 g) inkiseb. Il-proteina fil-preċipitat tneħħiet bil-metodu ta 'Savage. Wara x-xoljiment f'ilma distillat, ir-residwu (25.5 g) ġie djalizzat u lajofilizzat (rendiment: 10.6 g). Il-polisakkarid mhux raffinat (8 g) ġie maħlul f'ilma distillat (100 mL, 8 fil-mija w/v) u sseparat bl-użu ta 'kolonna DEAE (70 5 ċm, il-gradjent ta' 0-2 M NaCl, għal kull 1.5 L). Inkisbet frazzjoni elużita bl-ilma (600 mg). Kampjun (250 mg) ġie ppurifikat permezz ta' kromatografija ta' permeazzjoni ta' ġel tal-kolonna fuq kolonni Sephadex G- 150 (4 - 80 ċm, 1600 mL, 5 mL għal kull frazzjoni). Frazzjonijiet ta' CDP-6 (1500–1600 mL) ġew miġbura flimkien, dijalizzati, u mnixxfa bil-friża. Wara li tneħħiet il-melħ minn Sephadex G-25 (60 1 ċm). CDP-6 (110 mg) inkiseb u ġie determinat bħala quċċata waħda mill-HPSGC.

Rikonoxximent:L-awtur jirringrazzja lil Dr Baomei Shao u lill-Prof Xiaoming Gao, l-Iskola tax-Xjenzi Mediċi Bażiċi, iċ-Ċentru tax-Xjenza tas-Saħħa tal-Università ta 'Peking, talli kejlu l-attività immunomodulanti ta' CDP-6.