Livell ta' Eżerċizzju Approprjat Jitnaqqas id-Diżbijożi tal-Imsaren u Żieda fl-Aċidu Valeriku Biex Ittejjeb in-Newroplasticity U l-Funzjoni Konjittiva Wara Kirurġija fil-ġrieden Parti 3

MATERJALI U METODI

Il-protokolli u l-proċeduri sperimentali ġew approvati mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università ta 'Virginia (Charlottesville, VA, USA; numru tal-protokoll: 3114).

Il-memorja hija waħda mill-abbiltajiet li spiss għandna bżonn nużaw fil-ħajja tagħna ta’ kuljum. Jista 'jagħmel lin-nies aktar intelliġenti, aktar sensittivi, u aktar li jwasslu għal karriera u relazzjonijiet interpersonali. Għalhekk, ħafna nies iridu jtejbu l-memorja tagħhom. Hemm relazzjoni bejn protokolli sperimentali u memorja. Ejja nesploraw din il-kwistjoni jmiss.

L-ewwel, protokolli sperimentali jistgħu jgħinu lin-nies itejbu l-memorja tagħhom. Fl-esperiment, in-nies jeħtieġ li jsegwu ċerti passi biex itemmu l-operazzjoni sperimentali. Din l-attività pass pass tista 'tpoġġi l-moħħ tal-bniedem fi stat ta' attenzjoni u konċentrazzjoni għolja, u b'hekk tippromwovi l-prestazzjoni tal-funzjonijiet tal-moħħ. Fl-istess ħin, għandek bżonn tiftakar xi dejta sperimentali u passi sperimentali matul l-esperiment, li se jeżerċitaw ukoll il-funzjoni tal-memorja tal-moħħ. Billi tipprattika b'dan il-mod ripetutament, il-memorja tiegħek titjieb gradwalment.

It-tieni nett, l-esperjenza sensorja matul il-proċess tal-memorja hija wkoll relatata mill-qrib mad-disinn tal-pjan sperimentali. Fl-esperimenti, id-disinjaturi ħafna drabi jistabbilixxu ċerti kompiti speċifiċi matul l-esperiment, sabiex il-parteċipanti jeħtieġu jirrepetu l-istess operazzjoni diversi drabi, bħall-memorja u l-kitba tan-numri, il-memorja u r-rikonoxximent ta 'blokki tal-kulur, eċċ Din l-esperjenza ripetittiva tista' ssaħħaħ in-nies's kapaċitajiet ta 'attenzjoni u memorja, li jagħmilha aktar faċli għan-nies biex jipproċessaw din l-informazzjoni f'memorja fit-tul.

Barra minn hekk, fl-esperimenti, l-użu ta 'materjali ta' stimolu rappreżentattivi (bħal immaġini, ħsejjes, irwejjaħ, eċċ.) Jista 'wkoll jipproduċi riżultati tajbin. Minħabba li dawn l-istimoli jistgħu jikkawżaw l-eċċitament tal-moħħ u l-proċessi tal-memorja, u b'hekk itejbu l-kapaċità tal-memorja tan-nies. Fl-istess ħin, dawn l-istimoli jistgħu wkoll jiġu akkoppjati mal-ambjent u s-sitwazzjonijiet fil-ħajja, u b'hekk titnaqqas l-okkorrenza tad-diżakkoppjar u tagħmel l-informazzjoni aktar faċli biex tiftakar u aktar koeżiva.

Fil-qosor, il-pjan sperimentali għandu rwol kruċjali fit-titjib tal-memorja umana. Billi jagħmlu esperimenti, in-nies jistgħu jeżerċitaw l-abbiltajiet konjittivi tagħhom, itejbu l-livelli tal-memorja tagħhom, u fl-istess ħin jippromwovu l-funzjoni tal-moħħ. Għalhekk, għandna nkomplu nitgħallmu metodi sperimentali ġodda u nipparteċipaw f'aktar esperimenti biex intejbu l-livelli tal-memorja tagħna u nagħmlu kontributi akbar għall-karrieri, ir-relazzjonijiet u s-saħħa tagħna. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche deserticola jista' jtejjeb b'mod sinifikanti l-memorja, minħabba li Cistanche deserticola għandu effetti antiossidanti, anti-infjammatorji u kontra t-tixjiħ, li jistgħu jgħinu jnaqqsu l-ossidazzjoni u r-reazzjonijiet infjammatorji fil-moħħ, u b'hekk jipproteġu l- saħħa tas-sistema nervuża. Barra minn hekk, Cistanche deserticola tista 'wkoll tippromwovi t-tkabbir u t-tiswija taċ-ċelloli tan-nervituri, u b'hekk ittejjeb il-konnettività u l-funzjoni tan-netwerks newrali. Dawn l-effetti jistgħu jgħinu biex itejbu l-memorja, il-ħila tat-tagħlim, u l-veloċità tal-ħsieb, u jistgħu wkoll jipprevjenu l-iżvilupp ta 'disfunzjoni konjittiva u mard newrodeġenerattiv.

Ikklikkja Know Short-term Memory kif ittejjeb

L-esperimenti kollha tal-annimali saru mill-Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju (pubblikazzjonijiet NIH numru 80-23) riveduti fl-2011. Is-sorsi tal-materjali ewlenin ġew elenkati fit-Tabella tar-Riżorsi Ewlenin fil-Materjali Supplimentari.

Annimali u Disinn Sperimentali

Ġrieden maskili C57BL/6 J ta’ tmien ġimgħat li jiżnu 19–22 g kienu miżmuma f’kamra miżmuma f’kundizzjonijiet ambjentali kostanti (temperatura 22–24 grad, ċiklu ta’ dawl/dlam ta’ 12-il siegħa, u 50 ± 10% umdità) b’aċċess liberu għall-ikel u ilma.

Kollha kemm huma tħallew jakklimataw għal ġimgħa qabel l-esperimenti. Kienu assenjati b'mod każwali lill-gruppi li ġejjin fl-ewwel esperiment: (1) grupp ta 'kontroll (li ma kienx espost għal anestesija u kirurġija), (2) grupp ta' eżerċizzju (eżerċitat f'kapaċità massima ta '35-40%, iżda mhux espost għal anestesija u kirurġija) , (3) grupp ta 'kirurġija (espożizzjoni ta' l-arterja karotide tax-xellug għal 15-il minuta taħt anestesija isoflurane għal 2 sigħat), u (4) sa (6) gruppi Exe-l+Sur, Exe-m+Sur u Exe-h+Sur: eżerċitati f'35 –40%, 55–60% u 75–80% tal-kapaċità massima, rispettivament, u kienu soġġetti għal anestesija u kirurġija.

L-annimali ntużaw għal testijiet ta' tagħlim u memorja li bdew 4 ijiem wara l-operazzjoni (n=20) jew il-imħuħ tagħhom inħasdu għal analiżi bijokimiċi f'6 sigħat, 24 siegħa, 48 siegħa, 72 siegħa, 96 siegħa, u 7 ijiem wara l-operazzjoni. (n=9 jew 14), għal tbajja immunofluworexxenti fi 48 siegħa u 19-il jum wara l-kirurġija (n=6), u għal tbajja ta' Golgi fi 19-il jum wara l-operazzjoni (n=8).

Demm u ħmieġ mill-ġrieden tal-ewwel 4 gruppi nħasdu biex jitkejlu l-SCFAs fi 7 ijiem wara l-operazzjoni (n=7) u għal 16 S analiżi fi 3 u 7 ijiem wara l-kirurġija (n=8) jew fi it-tmiem tal-protokoll ta' eżerċizzju ta' 4-ġimgħa (n=8) ​​jew fil-ħin korrispondenti fl-ewwel 2 gruppi (n=16). Ġrieden għall-ħsad tat-tessuti kienu koorti differenti ta 'ġrieden li ntużaw għal testijiet ta' tagħlim u memorja. Fit-tieni esperiment, ġrieden ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp Transcontrol + Sur u (2) il-grupp Trans-exe + Sur.

Ġrieden fl-ewwel grupp irċevew 500 ul soluzzjoni ippurgar mill-grupp ta 'kontroll permezz ta' gavage gastriku u 600 ul b'enema darba kuljum għal 7 ijiem konsekuttivi wara trattament antibijotiku biex jeliminaw il-mikrobijota indiġena tal-musrana fir-riċevituri. Ġrieden fit-tieni grupp irċevew 500 ul soluzzjoni ippurgar minn ġrieden ta 'eżerċizzju permezz ta' gavage gastriku u 600 ul b'enema darba kuljum għal 7 ijiem konsekuttivi wara t-trattament antibijotiku. Ħmieġ mir-riċevituri nħasdu 14-il jum wara t-trapjant tal-ippurgar għal analiżi 16 S. Il-ġrieden imbagħad ġew soġġetti għal kirurġija.

It-tagħlim u l-memorja ġew evalwati minn 4 ijiem wara l-kirurġija (n=15). Il-moħħ inħasad għal studji bijokimiċi bħal fl-ewwel esperiment (n=10). Fit-tielet esperiment, ġrieden ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp Transcontrol, u (2) il-grupp Trans-control+Sur. Ġrieden fiż-żewġ gruppi rċevew trapjant ta 'ħmieġ minn ġrieden ta' kontroll. It-tieni grupp kellu kirurġija 14-il jum wara t-trapjant tal-ippurgar. L-ippokampus inħasad 2 ijiem wara l-kirurġija biex ikejjel il-GDNF (n=10). Fir-raba' esperiment, il-ġrieden ġew assenjati b'mod każwali lil (1) il-grupp ta' kontroll (ġrieden naïve li ma kinux esposti għal xi kundizzjonijiet sperimentali deskritti f'dan l-istudju), (2) il-grupp antibijotiku li rċieva antibijotiċi għal 7 ijiem, u (3) grupp ta 'kontroll trans li rċieva trapjant ta' ħmieġ minn ġrieden ta 'kontroll.

It-tagħlim u l-memorja ġew evalwati 19-il jum wara t-tlestija tat-trapjant tal-ħmieġ (26 jum wara t-tlestija tat-trattament antibijotiku fil-grupp tal-antibijotiċi) (n=12). Fil-ħames esperiment, il-ġrieden ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp ta' kontroll, (2) il-grupp Trans-kontroll li rċieva trapjant ta 'ħmieġ mill-ġrieden ta' kontroll, u (3) il-grupp Trans-surgery li rċieva l-offes tat-trapjant minn ġrieden tal-kirurġija. 

It-trapjant tal-ħmieġ sar kif deskritt fit-tieni esperiment. Ħmieġ mir-riċevituri nħasdu 14-il jum wara t-trapjant tal-ippurgar għal analiżi 16 S (n=10). It-tagħlim u l-memorja ġew evalwati 4 ijiem wara li l-kampjun tal-ħmieġ kien maħsud (n=17). Fis-sitt esperiment, il-ġrieden ġew assenjati b'mod każwali għal (1) surgeryplus grupp salin normali li rċevew 200 µl salina normali (NS) b'injezzjoni intraperitoneali darba ġimgħa għal 4 ġimgħat u mbagħad kirurġija, (2)eżerċizzju flimkien ma' salina normali flimkien ma' grupp ta' kirurġija li rċieva 200 µl NS b'injezzjoni intraperitoneali darba fil-ġimgħa matul il-{10}}ġimgħa ta' eżerċizzju b'kapaċità massima ta' 35–40% u mbagħad kirurġija, (3 ) jeżerċita aċidu plusvaleriku flimkien ma' grupp ta' kirurġija li rċieva aċidu valeriku (200 mg/kg f'200 µl) b'injezzjoni intraperitoneali darba fil-ġimgħa matul l-eżerċizzju ta' 4-ġimgħa b'kapaċità massima ta' 35–40% u mbagħad kirurġija.

L-injezzjoni ingħatat filgħodu tal-ewwel jum ta' eżerċizzju tal-ġimgħa. Injezzjoni oħra saret fil-ġurnata tal-kirurġija. Ir-riżultati komportamentali (n=13) u bijokimiċi (n=10) ġew evalwati bħal fit-tieni esperiment. Fis-seba' esperiment, 13- ta' ġimgħa (li jiżnu 23–27 g) maskili C57BL/ Ġrieden 6 J ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp ta 'kontroll, (2) il-grupp NS li rċieva 4 µl NS b'injezzjonijiet intraċerebroventrikulari darba kuljum għal 4 ijiem konsekuttivi, u (3) grupp ta' aċidu valeriku li rċieva 4 mg/kg f'4 µlby intraċerebroventrikulari. injezzjoni darba kuljum għal 4 ijiem konsekuttivi. Iċ-ċerebroventrikoli tax-xellug u tal-lemin ġew injettati fuq skeda alternata. It-tagħlim u l-memorja ġew evalwati 4 ijiem wara l-injezzjoni (n=15).

Fit-tmien esperiment, ġrieden ġew assenjati b'mod każwali għal (1) kirurġija flimkien ma 'dimethyl sulfoxide (DMSO) grupp li rċevew DMSO b'injezzjoni intracerebroventrikulari darba kuljum għal 4 ijiem konsekuttivi li jibdew fil-ġurnata tal-kirurġija, (2) kirurġija flimkien ma' grupp ta 'antagonisti C3ar li rċieva antagonist C3ar (SB72) ) b'injezzjoni intraċerebroventrikulari darba kuljum għal 4 ijiem li jibdew fil-ġurnata tal-kirurġija, (3) eżerċizzju flimkien ma' DMSO flimkien ma' grupp ta' kirurġija li rċieva DMSO b'injezzjoni intraċerebroventrikulari darba kuljum għal 4 ijiem konsekuttivi li jibdew fil-ġurnata tal-kirurġija wara l-4-ġimgħa eżerċizzju f'35 –40% kapaċità massima, u(4) eżerċizzju flimkien ma' agonist C3ar flimkien ma' grupp ta' kirurġija li rċieva C3aragonist b'injezzjoni intraċerebroventrikulari darba kuljum għal 4 ijiem konsekuttivi li jibdew fil-ġurnata tal-kirurġija wara l-4-ġimgħa ta' eżerċizzju f'kapaċità massima ta' 35–40% . It-testijiet tal-imġieba bdew minn 4 ijiem wara l-operazzjoni kif iddikjarat hawn fuq (n=15).

Fid-disa' esperiment, il-ġrieden ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp ta' kontroll, (2) il-grupp tal-kirurġija, (3) il-grupp tal-kirurġija flimkien ma' GDNF li rċevew GDNF b'injezzjoni intraċerebroventrikulari meta kellhom kirurġija, u (4) surgeryplus GDNF inattivat bis-sħana. grupp li rċieva GDNF inattivat bis-sħana b’injezzjoni intraċerebroventrikulari meta kellhom kirurġija. L-ippocampi nħasdu fi 48 siegħa wara l-kirurġija għal studju ELISA (n=12). Wara ġimgħa ta’ akklimazzjoni, ġrieden qodma (18-ġrieden maskili ta’ xahar C57BL/6 J) li jiżnu 30–36 g intużaw fi tliet studji. Fl-ewwel esperiment, ġrieden qodma ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp ta 'kontroll, (2) il-grupp ta' eżerċizzju li fih il-ġrieden kellhom eżerċizzju ta '4-ġimgħa b'kapaċità massima ta' 35-40%, (3) il-grupp tal-kirurġija, u (4) il-grupp Exe+Sur li fih il-ġrieden kellhom eżerċizzju ta' 4-ġimgħa b'kapaċità massima ta' 35–40% qabel l-operazzjoni. L-annimali ntużaw għal testijiet ta' tagħlim u memorja li bdew 4 ijiem wara l-operazzjoni (n=12) jew imħuħ inħasdu għal testijiet bijokimiċi fi 48 siegħa wara l-operazzjoni (n=10 jew 12), għal kulur immunofluworexxenti fi 48 siegħa u 19-il jum wara l-operazzjoni (n=6), u għal Golgistaining fi 19-il jum wara l-kirurġija (n=8).

Demm u ħmieġ mill-ġrieden tal-4 gruppi nħasdu għall-kejl SCFA fi 7 ijiem wara l-operazzjoni (n=7) u għal 16-il analiżi S fi 3 u 7 ijiem wara l-kirurġija (n=8) jew fl-aħħar. ta' 4-protokoll ta' eżerċizzju ta' ġimgħa jew fil-ħin korrispondenti fl-ewwel 2 gruppi (n=16). Il-ġrieden għall-ħsad tat-tessuti kienu koorti differenti li ntużaw għat-testijiet tat-tagħlim u tal-memorja. Fit-tieni esperiment, ġrieden qodma ġew assenjati b'mod każwali għal (1) il-grupp Trans-Old Control + Sur, u (2) il-grupp Trans-Old Exe + Sur. Dawn il-ġrieden ġew soġġetti għal kirurġija 14-il jum wara trapjant tal-ħmieġ kif deskritt fil- it-tieni esperiment ta' ġrieden adulti żgħar. It-tagħlim u l-memorja ġew evalwati minn 4 ijiem wara l-kirurġija (n =10).

Fit-tielet esperiment, ġrieden qodma ġew assenjati b'mod każwali għal (1) kirurġija flimkien mal-grupp NS; (2) eżerċizzju flimkien NS flimkien ma 'grupp ta' kirurġija; u (3)eżerċizzju flimkien ma' aċidu valeriku flimkien ma' grupp ta' kirurġija. Dawn il-ġrieden irċevew kondizzjonament għall-eżerċizzju u aċidu valeriku kif deskritt fis-sitt esperiment ta 'ġrieden adulti żgħar. Ir-riżultati tal-imġieba ġew ittestjati li jibdew 4 ijiem wara l-kirurġija (n=11). Id-daqsijiet tal-kampjun (n) deskritti hawn fuq irrappreżentaw in-numru ta' annimali li ġew randomised f'kull grupp/kundizzjoni. Dawn in-numri ta 'annimali kienu s-somma ta' mill-inqas 3 repliki ta 'kull esperiment. L-annimali kienu mqassma b'mod każwali fi gruppi bbażati fuq tabelli ta' randomizzazzjoni ġġenerati mill-kompjuter f'kull esperiment.

Determinazzjoni tal-kapaċità massima ta 'eżerċizzju u taħriġ ta' eżerċizzju

Qabel l-operazzjoni, ġrieden ta' {{0}}ġimgħat u 18-xahar kienu esposti għal eżerċizzju aerobiku ta' 4-weektreadmill wara determinazzjoni tal-kapaċità massima ta' eżerċizzju ta' ġrieden individwali. Din id-determinazzjoni twettqet b'mod simili għal dawk deskritti qabel [47, 48]. Fil-qosor, il-ġrieden ġew akklimatizzati mat-treadmill fl-ewwel jum b'settings inizjali ta 'grid ta' xokk f'25 V, 0.3mA, u 2 Hz u l-veloċità u l-inklinazzjoni f'żero għal 10 min. Il-veloċità tat-treadmill imbagħad żdiedet għal 10 ċm/s b'inklinazzjoni ssettjata għal 50 għal 10 min. Sussegwentement, il-veloċità u l-inklinazzjoni tat-treadmill żdiedu għal 15 ċm/ramel 100 għal 5 min.

The speed was then increased by 5 cm/s every 5 min to an average maximal speed of 70 cm/s in young mice and 60 cm/s in old mice (around 65–75 cm/s and 55–65 cm/s, respectively), as they reached the criteria for exercise-induced exhaustion. These criteria were: (1) 10 consecutive seconds on the electric grid; (2) spending >50% tal-ħin fuq il-grid; u/jew (3) nuqqas ta' motivazzjoni għal prodding manwali. Il-ġurdien tneħħa immedjatament mill-korsija rispettiva ladarba wieħed jew aktar minn dawn il-kriterji ġew sodisfatti. L-għada, il-ġrieden ġrew fuq l-istess treadmill b’nofs ta’ veloċità massima medja (35 ċm/s fil-ġrieden żgħar jew 30 ċm/s fil-ġrieden qodma) u 100 ta’ inklinazzjoni sakemm laħqu wieħed mill-kriterji ta’ eżawriment mill-ġdid, u t-tul ta’ żmien ta’ eżerċizzju kontinwu ġie rreġistrat bħala l-kapaċità massima ta 'eżerċizzju ta' kull ġurdien. Wara dawn iż-żewġ protokolli, il-ġrieden kienu miżmuma separatament għal 30 minuta biex tiġi evitata mġiba aggressiva notevoli wara l-eżerċizzju.

After resting for 2 days, mice assigned to exercise training groups were subjected to a 4-week protocol of forced treadmill running at 35–40%, 55–60%, or 75–80% of the maximal capacity, respectively, for 5 days a week. Mice that were shocked for >5% of the total daily exercise time in 2 consecutive days or >3% tal-ħin totali fi 3 ijiem konsekuttivi jkunu esklużi.

Il-gruppi mhux ta 'eżerċizzju fl-istess sett ta' esperimenti bħall-gruppi ta 'eżerċizzju tpoġġew fuq treadmill li ma jiċċaqlaqx kuljum għal madwar 30-40 min. Huma rċevew 10 xokkijiet għal total ta '5 s, l-ammont medju ta' xokkijiet li l-ġrieden fi grupp ta 'eżerċizzju rċevew kuljum, matul iż-żjara tagħhom fuq treadmill li ma jiċċaqlaqx. Jekk sett ta 'esperimenti ma kellhomx grupp ta' eżerċizzju, l-ebda ġrieden fis-sett ta 'esperimenti ma rċevew xokkijiet.

Trattament antibijotiku

Biex tiffaċilita l-kolonizzazzjoni tal-mikrobijota trapjantata, il-ġrieden riċevituri ngħataw trattament antibijotiku darba kuljum għal 7 ijiem konsekuttivi biex jeliminaw il-mikrobijota oriġinali tal-musrana tagħhom kif deskritt minna u minn oħrajn [11, 36]. Fil-qosor, wara purgazzjoni b'10% sulfat tal-manjeżju (200 ul/10 g, darbtejn b'intervalli ta '3 sigħat) permezz ta' gavage gastriku fl-ewwel jum, il-ġrieden C57BL/6 J irċevew amoxicillin/clavulanic acid (200 mg/kg), metronidazole ( 200 mg/kg) u cefazolin (2 g/kg) bil-gavage gastriku andenema (fi 300 ul għal gavage gastriku u 400 ul NS għall-enema) filgħodu darba kuljum għal 7 ijiem konsekuttivi, u amoxicillin/clavulanicacid (20 mg/kg ), metronidazole (20 mg/kg) u cefazolin (300 mg/kg) f'200 ul NS kuljum b'injezzjoni intraperitoneali għall-istess 7 ijiem (fl-4 pmto 5 pm). Biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni inkroċjata tal-batterji, l-immaniġġjar tal-ġurdien u bidliet fil-gaġġa u fliexken tal-ilma ta 'kuljum saru minn tekniċi li jilbsu gown nadif u ingwanti f'barnuża ventilata. Ħmieġ minn dawn il-ġrieden inħasdu 24 siegħa wara l-aħħar trattament għal analiżi 16 S biex jiġi ddeterminat l-effett.

Trapjant tal-ħmieġ

Pritkuni tal-ħmieġ frisk miġbura fi żmien 30 minuta wara l-moviment tal-musrana mill-ġrieden tal-kontroll, ġrieden immedjatament wara t-tlestija tal-eżerċizzju tal-4-ġimgħa, jew ġrieden 2 sa 8 ijiem wara l-kirurġija ġew dilwiti b'100 mg/ml salina sterili. Il-gerbub tal-ippurgar kollha ta '7 -10 donaturi b'kull kundizzjoni sperimentali ġew imħallta u sospiżi mill-ġdid flimkien fis-salina. Fil-qosor, il-materja ippurgar tħallat bil-vortex għal 5 minuti u mbagħad għaddiet minn passatur taċ-ċelluli tan-najlon ta '70 μm biex tneħħi ikel mhux diġerit u materjali tal-partikuli. Ir-riċevitur ġrieden irċieva 500 ul soluzzjoni fekali korrispondenti permezz ta 'gavage gastriku fil-għodu u 600 ul b'enema wara nofsinhar minn 24 siegħa wara l-aħħar doża ta' antibijotiċi għal 7 ijiem konsekuttivi. Ġrieden trapjantati nżammu għal ġimgħatejn wara t-trapjant tal-ippurgar qabel ma ġew soġġetti għal ġbir tal-ippurgar għal analiżi 16 S u kirurġija.

Anestesija u kirurġija

Il-kirurġija tħalliet esponiment tal-arterja karotide kif iddeskrivejna qabel [6]. Fil-qosor, il-ġrieden ġew anestetizzati b'2% isoflurane u żammew respirazzjonijiet spontanji b'maskra tal-wiċċ fornuta b'100% ossiġnu matul il-proċedura. It-temperatura tar-rektum ġiet immonitorjata u miżmuma f'37 grad bl-għajnuna ta 'kutra tat-tisħin. Inċiżjoni ta' l-għonq tal-linja tan-nofs ta' 2-ċm u dissezzjoni tat-tessut artab b'espożizzjoni ta' arterja komuni twila ta' 1-ċm saru mingħajr ebda ħsara lin-nerv vagu wara li l-ġurdien ġie anestetizzat bl-isoflurane għal mill-inqas 20 minuta. Il-ferita mbagħad ġiet irrigata u magħluqa bl-użu ta 'sutura kirurġika 4-0. Il-proċedura kirurġika saret kundizzjonijiet taħt sterili u damet madwar 15-il minuta fil-ġrieden żgħar u 12-il minuta fil-ġrieden qodma. It-tul totali tal-anestesija ġenerali kien ta' sagħtejn. Wara l-operazzjoni, l-annimali kollha rċevew injezzjoni taħt il-ġilda ta' 3 mg/kgbupivacaine. L-ebda rispons għal toqros tas-sieq ma kien osservat waqt l-anestesija.

Injezzjonijiet intraċerebroventrikulari

Kif deskritt hawn fuq, xi gruppi ta 'ġrieden irċevew injezzjoni intracerebroventrikulari. Fil-qosor, dawn il-ġrieden tqiegħdu f'qafas tar-ras sterjotattiku fil-pożizzjoni suxxettibbli. Is-sit tal-injezzjoni kien jinsab bħala: 1.00 mm medjolaterali, -0.3 mm anteroposterior minn Bregma, u -2.5 mm fond dorsoventral. 20}} ug/kg ġrieden rikombinanti GDNF fi 3 ul phosphate-buffered saline (PBS) kif deskritt fi studji preċedenti [6, 26], u ġrieden fil-kirurġija grupp GDNF inattivat bis-sħana irċevew injezzjoni ta 'sħana denaturata (5 minat 1000C ) Soluzzjoni GDNF. Ġrieden fil-kirurġija flimkien mal-grupp ta 'antagonisti C3ar irċevew 10 ug/kg SB290157 fi 3 ul PBS li kien fihom 5% DMSO f'0 h, 24 h, 48 h, u 72 h wara l-kirurġija. Ġrieden fl-eżerċizzju flimkien ma 'agonist C3ar u grupp ta' kirurġija rċevew 1 ug/kg agonist C3ar fi 3 ul PBS li fih 5% DMSO fl-istess ħin bħal għal SB290157. Ġrieden fi grupp ta' aċidu valeriku tas-sitt esperiment irċevew 4 mg/kg aċidu valeriku f'4 µl għal 4 ijiem konsekuttivi.

Ittestjar tal-imġieba

It-tagħlim u l-memorja ġew evalwati permezz ta' rikonoxximent ta' oġġetti ġodda u t-test tal-labirint ta' Barnes. It-testijiet kollha tal-imġieba saru fl-10:00 am−5:00pm f'kamra iżolata mill-ħoss. Il-ġrieden użati fit-testijiet tat-tagħlim u l-memorja ma ntużawx għal xi studji tal-bijokimika biex jiġu evitati l-effetti ta 'dawn it-testijiet.

Test ġdid ta 'rikonoxximent ta' oġġett

Kif aħna u oħrajn iddeskrivejna qabel [20, 49, 50], il-ġrieden tpoġġew f'kamra tal-kamp miftuħ għal 5 min għall-abitazzjoni 4 ijiem wara l-kirurġija. It-test sar bil-mod li ġej. Tnejn mill-istess oġġetti tpoġġew maġenb angoli tal-kamra fil-jum tat-tagħlim. Il-ġrieden tpoġġew fil-kamra b'daharhom imdawwar lejn l-oġġetti u tħallew jesploraw il-kamra liberament għal 5 min. L-annimal ġie eliminat jekk il-ħin totali ta 'esplorazzjoni fuq żewġ oġġetti kien<5 s. One of the objects was replaced by a novel object 30 seconds or 24 hours later. The mouse was put into the chamber with their backs turned toward the objects and allowed to explore for 5 min. Animal behavior was recorded by ANY-maze behavioral tracking software (Stoelting Co., IL). Exploratory time of new (T2) and old (T1) objects within 5 min was recorded and the memorization ability of the mouse was quantified by discrimination index: DI = T2 / (T1 + T2). The DIs at 30 s and 24 hours after the training reflected the instant and long-term memory, respectively. The field was always provided with even light, and the objects and fields were cleaned with 70% ethanol after each test.

Barnes labirint

Sebat ijiem wara l-kirurġija, l-annimali ġew soġġetti għall-labirint Barnes biex jittestjaw it-tagħlim spazjali u l-memorja tagħhom kif iddeskrivejna qabel [6, 49].Barnes labirint huwa pjattaforma ċirkolari b'20 toqba spazjati b'mod ugwali (SDInstruments, San Diego, CA). Waħda mit-toqob kienet imqabbda ma’ darkchamber li kienet tissejjaħ kaxxa fil-mira. It-test beda billi tpoġġi l-annimali fin-nofs tal-labirint ta’ Barnes. Ħoss avversiv (85 dB) u dawl qawwi (200W) imxerred fuq il-pjattaforma ntużaw biex iħeġġu lill-ġrieden isibu din il-kaxxa. Wara t-taħriġ għal 4 ijiem, il-memorja ta 'referenza tagħhom ġiet ittestjata fil-jum 5 u l-jum 12. Ma sar l-ebda test matul il-perjodu mill-jum 5 sal-jum 12. Thelatency biex tidħol fil-kaxxa fil-mira matul kull prova ġiet irreġistrata minn sistema ta 'traċċar tal-vidjo ANYMaze (Strumenti SD).

For more information:1950477648nn@gmail.com