Effetti Antiossidanti, Anti-Aging U Protettivi ta 'l-Organi Ta' Saponini Totali Minn Cistanche
May 19, 2023
Konklużjoni: TSAT huwa prodott naturali ta 'kwalità għolja bi proprjetajiet anti-ossidanti u kontra t-tixjiħ li jistgħu jtaffu l-ħsara li tixjieħ indotta minn D-gal fil-firien.
Kliem ewlieni:Cistanche totali saponins, D-galattożju, antiossidant,kontra t-tixjiħ
Ikklikkja Hawnhekk Biex Ikseb Supplimenti Cistanche Għall-Anti-aging
Introduzzjoni
Sa mis-seklu 21, bit-tendenza globali tat-tixjiħ u t-titjib tal-istandards tal-għajxien madwar id-dinja, il-problemi tas-saħħa kkawżati mit-tixjiħ u l-mard relatat mat-tixjiħ saru dejjem aktar prominenti.1 Għalhekk, kif tinżamm is-saħħa tal-anzjani u tittardja l- l-okkorrenza ta 'tixjiħ u mard relatat mat-tixjiħ saret suġġett ta' riċerka popolari. It-tixjiħ huwa proċess fiżjoloġiku deġenerattiv irriversibbli u kumpless li jseħħ fil-partijiet kollha tal-ġisem, li jwassal għad-deterjorament strutturali u funzjonali tat-tessuti u l-organi u jżid ir-riskju ta’ diversi mard kroniku, bħal pressjoni għolja, dijabete, mard newrodeġenerattiv, u melanosis tal-ġilda. .2 Diversi rapporti wrew li t-teorija radikali ħielsa tat-tixjiħ, waħda mit-teoriji l-aktar popolari, tista 'tispjega l-ħsara lill-organiżmu kkawżata mill-proċess tat-tixjiħ.3 Waqt il-metaboliżmu aerobiku, speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) huma prodotti fiċ-ċelloli, inklużi l-ossiġnu singlet (1 O2), l-anjoni superossidu (•O2-), ir-radikali hydroxyl (HO•), u l-perossidu idroġenu (H2O2).4,5 Ladarba dawn ir-radikali ħielsa, li fihom elettroni mhux imqabbla u reattivi ħafna, huma prodotti f'eċċess, iwasslu direttament għal stress ossidattiv u risponsi proinfjammatorji, segwiti minn żbilanċ redox, li jwassal għal perossidazzjoni tal-proteini u tal-lipidi, kif ukoll ħsara mitokondrijali u tad-DNA, li fl-aħħar iwassal għal funzjoni mibdula taċ-ċelluli u tat-tessuti u kundizzjonijiet patoloġiċi biex iħaffu t-tixjiħ. .6,7 Interessanti, jeżistu sistemi antiossidanti endoġeni naturali fis-sistema tal-bniedem/mammiferi, inklużi dawk li jinvolvu SOD, CAT u GSH-Px, kif ukoll antiossidanti mhux enżimatiċi bħal aċidu askorbiku u karotenojdi, iddisinjati biex iżommu bilanċ xieraq bejn radikali ħielsa. u antiossidanti.8,9 Madankollu, is-sistema ta 'difiża antiossidanti mhix biżżejjed biex tipprevjeni kompletament il-ħsara ossidattiva kkawżata minn radikali ħielsa żejda, u supplimentazzjoni b'antiossidanti tista' mill-inqas tnaqqas il-firxa tat-tixjiħ u ħsara ossidattiva relatata.10 Meta mqabbla ma 'antiossidanti naturali, sintetiċi antiossidanti (eż., BHT u BHA) intwerew li jikkawżaw tfixkil endokrinali, disturbi riproduttivi u anke karċinoġenesi f'użu fit-tul.11,12 Għalhekk, it-tfittxija għal kenniesa radikali ħielsa naturali, sikuri u effettivi hija ta 'importanza kbira għas-saħħa tal-bniedem. protezzjoni.
Cistanche hija speċi ta’ pjanti tal-istess ġeneru bħal Aralia elata (Miq.) Seem.13 Hija mqassma ħafna fil-Muntanji Qinba tal-punent taċ-Ċina u hija pjanta mediċinali u li tittiekel. L-estratt tal-qoxra ta 'l-għeruq ta' Cistanche ilu jintuża fiċ-Ċina bħala mediċina folkloristika għat-trattament tad-dijabete, u l-ingredjent attiv ewlieni tiegħu huwa triterpene saponin.14 Intwera li għandu effetti antiossidanti, antihyperglycaemic u antihyperlipidaemic.14-16 Ħafna studji wrew li saponins triterpene bħal asiaticoside B, madecassoside u parkside A jistgħu jirreaġixxu ma 'radikali ħielsa u jipprevjenu żvilupp ulterjuri ta' reazzjonijiet katina radikali ħielsa, u b'hekk jeżerċitaw effetti anti-ossidanti. saponins, kif ukoll kapaċità antiossidant tajba kontra l-perossidazzjoni tal-lipidi fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien, u ntwera li għandu effetti antiossidanti superjuri għal ġinseng, Schisandra u saponins oħra. firien permezz tal-effett antiossidant tiegħu.19 Studju ulterjuri tar-relazzjoni struttura-effett issuġġerixxa li d-differenzi strutturali bħall-kategorija u s-sekwenza tal-katina tal-oligosaccharide f’C-3 f’saponini bħal dawn għandhom rwol importanti f’termini ta’ dijabete mellitus relatata attivitajiet antiossidanti u antiglikazjoni.20
D-gal huwa induttur tat-tixjiħ sperimentali użat komunement. Ammonti dejjem jiżdiedu ta’ evidenza jissuġġerixxu li fenotipi relatati mat-tixjiħ bħal formazzjoni eċċessiva ta’ radikali ħielsa, disfunzjoni konjittiva, tnaqqis fir-rispons immuni u ħsara fl-organi jistgħu jiġu osservati taħt stimulazzjoni D-gal fit-tul. u memorja ta 'rikonoxximent fil-firien, kif muri minn prestazzjoni fqira f'termini ta' diffikultajiet biex jinstabu pjattaformi fil-mira u numru mnaqqas ta 'drabi li jaqsmu pjattaformi fil-mira f'esperiment tal-labirint tal-ilma Morris.22 Għalhekk, l-istimulazzjoni kronika D-gal intużat biex tistudja t-tixjiħ organiżmu u telf ta 'memorja relatat mat-tixjiħ, żbilanċ redox u ħsara fl-organi.
Fuq il-bażi ta 'studji preċedenti dwar l-attività bijoloġika tat-TSAT, hemm raġuni biex wieħed jemmen li din il-pjanta mediċinali u tad-dieta għandha potenzjal konsiderevoli għall-applikazzjoni fil-qasam tal-anti-aging. Madankollu, hemm studju wieħed biss dwar it-tneħħija in vitro ta 'radikali ħielsa minn dan l-estratt ta' saponin triterpenoid, u karatterizzazzjonijiet oħra fiżjoloġikament rilevanti ta 'scavenging ta' radikali ħielsa huma neqsin. Barra minn hekk, l-għarfien dwar l-effetti protettivi tat-TSAT kontra t-telf tal-memorja, l-iżbilanċ redox u l-ħsara fl-organi f'mudell ta 'tixjiħ subakut indott minn D-gal huwa limitat. Għalhekk, dan l-istudju kkonsolida l-proprjetajiet anti-ossidanti ta 'TSAT in vitro billi jneħħi DPPH, ABTS, HO•, •O2- u jinibixxi l-attività ta' tyrosinase. Barra minn hekk, esperimenti ta 'mġieba, kejl ta' parametri ta 'stress ossidattiv, u kundizzjonijiet istopatoloġiċi ta' organi maġġuri fil-firien ġew evalwati biex jipprovdu informazzjoni addizzjonali dwar il-kapaċità ta 'TSAT biex ittejjeb il-ħsara ossidattiva u tixjiħ subakuta indotta minn D-gal, li tikkonsolida l-proprjetajiet farmakoloġiċi antiċipati tagħha.
Materjali u metodi
Il-qoxra tal-għeruq ta 'Cistanche inġabret mill-Muntanji Qinba, Provinċja ta' Shaanxi, iċ-Ċina, u ġiet identifikata botanikament minn Dr Jitao Wang (Università ta 'Shaanxi tal-Mediċina Ċiniża). Kampjun ta 'vawċer (SUCM, Nru 20201003) ġie depożitat fl-Erbarju tal-Università ta' Shaanxi tal-Mediċina Ċiniża. Tarasaponin IV
DPPH (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), ABTS (Maclin Biochemical Co., Ltd, Shanghai, Ċina), tyrosinase tal-faqqiegħ (Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd, Shanghai, Ċina), L{{1} },4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) u D-gal (Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd, Shanghai, iċ-Ċina) inxtraw. Anjoni superossidu (Numru ta' l-oġġett: A052-1-1), Radikal ħieles ta' Hydroxyl (Numru ta' l-oġġett: A018-1-1), BCA (Numru ta' l-oġġett: A{045-4-2), SOD (Numru ta' l-oġġett: A{{ 8}}), GSH-Px (Numru tal-oġġett: A005-1-1), CAT (Numru tal-oġġett: A007-1-1), MDA (Numru tal-oġġett: A{003-1-2), T-AOC ( Numru tal-oġġett: A015-2-1), AST (Numru tal-oġġett: C010-2-1) u ALT (Numru tal-oġġett: C009-2-1) inkisbu mill-Istitut tal-Bijoinġinerija Nanjing JianCheng (Nanjing, iċ-Ċina) . Il-kimiċi kollha u reaġenti oħra użati kienu gradi analitiċi.
Il-qoxra ta 'l-għeruq ta' cistanche ġiet maħsula b'ilma distillat doppju, imnixxfa u mgħaffeġ f'60 grad. Qabel l-esperiment, it-trab tpoġġa f'post frisk u niexef. It-trab (3 kg) ġie estratt b'70 fil-mija etanol għal tliet darbiet taħt rifluss. Is-soluzzjonijiet ġew magħquda u s-supernatant inkiseb permezz ta 'ċentrifugazzjoni b'veloċità għolja u filtrazzjoni. Is-supernatant ġie purifikat billi tgħabbi f'kolonna ta 'reżina makroporuża HPD300 u mbagħad elużjoni b'70 fil-mija etanol. Is-soluzzjoni li ħarġet b'70 fil-mija etanol ġiet evaporata biex tagħti residwu (356 g) wara t-tneħħija tas-solvent fil-vakwu. Ir-rendiment ta 'TSAT kien 11.87 fil-mija (w/w) u kien ippreservat fi friġġ għal aktar użu.
kolonna grafika (4.6 ID×250 mm). Il-fażi mobbli kienet tikkonsisti f'aċetonitrile (solvent A) nd 0.1 fil-mija soluzzjoni milwiema ta 'aċidu fosforiku (V/V) (solvent B). Il-programm tal-gradjent kien kif ġej: 0–10 min, 5–20 fil-mija A; 10–25 min 20–28 fil-mija A; 25–35 min, 28–33 fil-mija A; 35–45 min, 33–38 fil-mija A; 45–55 min, 38–46 fil-mija A; 55–60 min, 46–60 fil-mija A; 60–70 min. 60–75 fil-mija A; 70–80 min, 75–45 fil-mija A; 80-90 min, 45-5 fil-mija A. Il-kundizzjonijiet operattivi ta 'l-istrument kienu temperatura ta' 30 grad u rata ta 'fluss ta' 0.8 mL/min. Il-volum tal-injezzjoni ta 'standards u kampjuni kien 10 μL. Il-wavelength ta' skoperta huwa 203 nm. Qabel l-injezzjoni, il-kampjuni kollha ġew mgħoddija minn filtru ta '0.22 μm. Wara li tqabbel mal-istandard, il-quċċata hija determinata mill-ħin ta 'żamma. Il-kurva tal-kalibrazzjoni lineari tal-istandard intużat għall-kwantifikazzjoni.
Attività antiossidanti in vitro
Assaġġ DPPH L-assaġġ DPPH ġie mmodifikat kemmxejn minn rapport preċedenti.23 Taħlita ta’ etanol anidru (100 μL), soluzzjoni DPPH (100 μL, 0.2 mM) u kampjun (100 μL, 0.01 – 1 mg/L) tħawwad bil-qawwa u nżamm (25 grad, 30 min) fid-dlam. VC intuża bħala kontroll pożittiv L-assorbanza (517 nm) ġiet imkejla. Ir-radi DPPH
ir-rata ta' tneħħija tal-kalitajiet ġiet ikkalkulata kif ġej:
fejn A0 tirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll negattiv (DPPH flimkien ma' etanol assolut); A1 jirrappreżenta s-sistema tat-test li fiha l-kampjun (DPPH flimkien ma' TSAT); u A2 hija l-assorbiment tas-sistema vojta (TSAT flimkien ma' etanol assolut). Ġie kkalkulat il-valur ta 'konċentrazzjoni ta' inibizzjoni ta '50 fil-mija (IC50) tar-rata ta' tneħħija tar-radikali ħielsa DPPH, li tirrappreżenta l-kapaċità antiossidant ta 'TSAT. L-operazzjonijiet kollha jitwettqu b'mod parallel tliet darbiet.
ABTS flimkien ma' Assay ABTS ġie ddeterminat bl-użu tal-metodu ta' Rafique et al b'modifiki ħfief.24 L-ewwel, ġew ippreparati serje ta' soluzzjonijiet TSAT (0.01– 1 mg/mL). Soluzzjoni ABTS ta '7 mM u soluzzjoni K2S2O8 ta' 2.45 mM ġiet ippreparata. Wara li tħallat fl-istess volum, ABTS plus inkisbet billi rreaġixxi (12-16 h) fid-dlam. L-ABTS plus ippreparat ġie dilwit b'ilma distillat doppju għal assorbiment ta' 0.7 ± 0.05 f'734 nm. Imbagħad, it-taħlita ta '180 μL ABTS dilwit flimkien ma' soluzzjoni u kampjun ta '20 μL ġew irreaġitti (25 grad, 10 min) fid-dlam. VC intuża bħala l-kontroll pożittiv. L-assorbanza (734 nm) kienet imkejla. L-ABTS flimkien mal-kapaċità tat-tkessiħ ġiet ikkalkulata bil-formula li ġejja:
fejn A0 tirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll negattiv (ABTS flimkien ma' ilma distillat doppju); A1 jirrappreżenta s-sistema tat-test li fiha l-kampjun (ABTS flimkien ma' TSAT); u A2 hija l-assorbiment tas-sistema vojta (TSAT flimkien ma' ilma distillat doppju). Imbagħad ġie kkalkulat il-valur IC50 tal-ABTS flimkien mar-rata ta' scavenging. L-operazzjonijiet kollha saru b'mod parallel tliet darbiet.
Determinazzjoni tal-Attività ta' Inibizzjoni tat-Tyrosinase tal-Faqqiegħ L-attività inibitorja tat-tyrosinase ġiet iddeterminata skont verżjoni kemmxejn imtejba tal-metodu rappurtat qabel minn Morais et al.25 Serje ta' 50 μL TSAT (0.01–1 mg/mL, f’50 fil-mija DMSO) ġew miżjuda soluzzjonijiet mas-sistema ta’ reazzjoni li kien fiha 100 μL ta’ buffer PBS (0.1 M, pH 6.8) u 50 μL tyrosinase (100 U/mL), rispettivament, u rreaġixxew f’25 grad għal 15-il minuta . Imbagħad, 50 μL L L-DOPA (3.5 mM) soluzzjoni ġiet miżjuda mas-sistema ta 'reazzjoni u inkubata f'37 grad għal 10 min. L-assorbanza (475 nm) ġiet iddeterminata. VC intuża bħala l-kontroll pożittiv. L-attività ta' inibizzjoni ta' TSAT ġiet ikkalkulatabil-formula li ġejja:
indika l-attività inibitorja tat-tyrosinase ta' TSAT. L-operazzjonijiet kollha saru b'mod parallel tliet darbiet.
Ir-reazzjoni Fenton hija l-aktar reazzjoni kimika komuni li tipproduċi radikali hydroxyl. Dan l-esperiment sar skont l-istruzzjonijiet tal-kit tal-assaġġ radikali tal-hydroxyl. Konċentrazzjonijiet differenti ta 'TSAT (0.01-1 mg/mL) tħalltu mar-reaġenti sekwenzjali u tħallew f'temperatura tal-kamra għal 20 min. L-assorbanza (550 nm) ġiet imkejla, u VC intuża bħala kontroll pożittiv. Ir-rata ta' tneħħija (perċentwali) ġiet ikkalkulata kif ġej:
Assaġġ ta' Tkessiħ ta' Superoxide Radical (•O2-).
is-sistema tat-test li jkun fiha l-kampjun; u A2 hija l-assorbiment tas-sistema vojta. Imbagħad ġie kkalkulat il-valur IC50. L-operazzjonijiet kollha saru b'mod parallel tliet darbiet.
Attività antiossidanti in vivo
Annimali u Trattament
Firien Sprague-Dawley maskili (200-230 g) ġew fornuti mill-Chengdu Dossy Experimental Animals co., Ltd (ChengDu, iċ-Ċina, ċertifikat Nru. SCXK 2020-030). L-esperimenti kollha fuq l-annimali twettqu skont il-Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju u ġew approvati mill-Kumitat Istituzzjonali tal-Etika tal-Annimali tal-Università ta 'Shaanxi tal-Mediċina Ċiniża. Dawn il-firien trabbew f'kamra tal-kontroll tal-klima (24-25 grad) skont skeda ta' 12-il siegħa dawl/12-il siegħa skur u kellhom aċċess liberu għall-ikel u l-ilma. Il-firien kollha tħallew jadattaw għal ġimgħa qabel ma bdew l-esperiment. Il-firien kienu bl-addoċċ
maqsum f'6 gruppi (n=8 f'kull grupp): grupp normali; grupp mudell; Grupp ta 'trattament VC (100 mg/kg); u gruppi ta' trattament ta' doża għolja (TSAT-H)-, medja (TSAT-M) u baxxa (TSAT-L) ta' TSAT (200 mg/kg, 100 mg/kg, 50 mg/kg).
Il-ħames gruppi kollha ġew injettati intraperitonealment b'D-gal (200 mg/kg) ħlief għall-grupp normali, li ġie ttrattat b'0.9 fil-mija NaCl (10 fil-mija, w/v). Il-firien fil-kura
funzjoni (3500 rpm, 15 min, 25 grad ). It-timu, il-qalb, il-fwied, il-milsa, il-pulmun, il-kliewi, u t-tessuti testikolari ġew isseparati malajr, laħlaħ b'soluzzjoni tas-silġ 0.9 fil-mija NaCl, u miżun b'mod preċiż għall-analiżi li ġejja.
Test Morris Water Maze (MWM).
L-esperiment tal-labirint tal-ilma Morris (MWM) sar skond deskrizzjoni preċedenti b'modifiki żgħar.26 Fil-qosor, il-firien ġew imħarrġa għal ħamest ijiem ta' ġiri (6 provi/kuljum) biex isibu l-pjattaforma maħruba, li kienet moħbija 1 ċm fl-ilma. (temperatura ta 'l-ilma, 25 ±1 grad) bl-użu ta' firxa fissa ta 'indikazzjonijiet barra l-pixxina (dijametru 160 ċm, għoli 60 ċm). Il-pixxina kienet maqsuma f’erba’ kwadranti ugwali. L-indikazzjonijiet tal-vleġġa madwar il-pool inżammu fl-istess post matul il-ħin kollu tat-taħriġ u l-ittestjar. Wara taħriġ ta 'ħamest ijiem, kull ġurdien tħalla jgħum għal 120 s. Wara li sabu l-pjattaforma, il-firien tħallew jibqgħu hemm għal 15 s. Lil hinn minn dan, il-far li naqas milli jsib il-pjattaforma fil-perjodu stipulat (120 s) tpoġġa fuqha għal 15 s. Il-latenzi tal-ħarba ta 'dawn il-firien ġew irreġistrati bħala 120 s. Aktar tard, il-pjattaforma tneħħiet, u l-firien tqiegħdu fil-kwadrant, li kien kuntrarju għall-kwadrant fil-mira, u tħallew jgħumu liberament għal 120 s. In-numru ta' qsim tal-kwadrant tal-pjattaforma ġie rreġistrat fil-kwadrant fil-mira. Id-dejta ġiet analizzata b'sistema ta' traċċar awtomatizzata.
Analiżi Bijokimika
It-tessuti tal-moħħ, tal-pulmun, tal-fwied, tal-milsa, tal-qalb u tal-kliewi ġew omoġenizzati malajr f'soluzzjoni ta' NaCl kiesħa fis-silġ 0.9 fil-mija (10 fil-mija, w/v). Wara ċ-ċentrifugazzjoni (3500 rpm, 15 min, 25 grad), is-supernatant inġabar għal analiżi bijokimika. Bl-użu tal-albumina tas-serum bovin bħala l-istandard, ġiet iddeterminata l-konċentrazzjoni tal-proteina tat-tessut. Il-livelli ta' SOD, GSH-Px, CAT, MDA, u T-AOC fis-serum tal-firien u l-omoġenati tal-moħħ, tal-qalb, tal-pulmun, tal-milsa u tal-kliewi ġew determinati skont il-proċeduri standard tal-kit, u l-livelli tal-fwied ALT u AST ġew determinati skont l-istruzzjonijiet tal-kit.
Analiżi istopatoloġika
It-tessuti tal-moħħ, tal-qalb, tal-pulmun, tal-kliewi, tal-fwied u tal-milsa tneħħew malajr u ġew iffissati f'4 fil-mija paraformaldehyde. 24 siegħa wara, twettqet l-inkorporazzjoni tal-paraffin.
It-taqsimiet ġew sezzjoni lonġitudinali għal ħxuna ta '4 µm, idratati u mtebbgħin b'ematossilin-eosina (H&E). L-istomorfoloġija ġiet osservata mikroskopikament.
Analiżi StatistikaIr-riżultati tat-testijiet tal-imġieba, l-indiċi tal-organi u l-attivitajiet tal-enzimi huma espressi bħala l-mezzi ± SD. Id-dejta ġiet analizzata b'analiżi one-way tal-varjanza (ANOVA) segwita mit-test ta' Tukey għal analiżi post hoc. Għal rikonoxximent ta 'oġġett ġdid, evalwazzjoni statistika saret permezz ta' test ta 'kampjuni f'pari. Is-sinifikat statistiku ġie stabbilit f'p<0 05.
