Effetti Anti-Allerġiċi U Anti-Infjammatorji Ta' Neferine Fuq Ċelloli RBL-2H3

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

Astratt:Iċ-ċelloli mast għandhom rwol importanti ħafna fl-allerġija u l-infjammazzjoni tal-ġilda, inklużi dermatite atopika u psorjasi. Fil-passat, instab li r-referenza għandha effetti anti-infjammatorji u anti-aging fuq il-ġilda, iżda l-effett tagħha fuq iċ-ċelluli mast għadu ma ġiex studjat fid-dettall. F'dan l-istudju, użajna ċelluli mast (ċelluli RBL-2H3) u mudelli tal-ġurdien biex nistudjaw l-effetti anti-allerġiċi u infjammatorji ta 'referenza. L-ewwel, sibna li r-referenza tinibixxi d-degranulazzjoni ta 'ċelluli mast u l-espressjoni ta' ċitokini. Barra minn hekk, osservajna li meta ċ-ċelloli mast ġew stimulati minn A23187/phorbol 12-myristate-13-acetate (PMA), l-elevazzjoni tal-kalċju intraċellulari kienet inibita b'referenza. Il-fosforilazzjoni tal-mogħdija MAPK/NF-KB titnaqqas ukoll permezz ta 'trattament minn qabel ta' referenza. Ir-riżultati ta 'studji in vivo juru li r-referenza tista' ttejjeb id-dehra tad-dermatite u l-infiltrazzjoni taċ-ċelluli mast ikkawżata minn dinitrochlorobenzene (DNCB). Barra minn hekk, l-espressjonijiet ta 'proteini barriera fil-ġilda huma wkoll restawrati.cistanchFl-aħħarnett, instab li r-referenza tista 'tnaqqas l-imġieba tal-grif ikkawżata mill-kompost 48/80. Meħuda flimkien, ir-riżultati tagħna jindikaw li r-referenza hija prodott naturali anti-allerġiku u anti-infjammatorju tajjeb ħafna. L-effett tiegħu fuq iċ-ċelluli mast jikkontribwixxi għall-mekkaniżmu farmakoloġiku tiegħu.

Kliem ewlieni:referenza; prodott naturali; ċellola mast; dermatite; ħakk

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

1. Introduzzjoni

Bosta studji kkonfermaw li l-mard allerġiku huwa r-riżultat mhux biss ta 'attivazzjoni immuni intrinsika iżda wkoll attivazzjoni adattiva. Fost dawn, iċ-ċelluli mast għandhom rwol importanti ħafna f'varjetà ta 'mard allerġiku bħal rinite allerġika, ażma, u dermatite allerġika. Iċ-ċelloli mast jesprimu riċetturi IgE (FceRI) fuq il-membrani taċ-ċelluli tagħhom, u r-riċetturi FceRI għandhom affinità għolja għall-antikorpi IgE [1,2]. Meta IgE speċifika għall-antiġen jeħel ma' FceRI, isseħħ interazzjoni u sseħħ reazzjoni allerġika. L-aggregazzjoni ta 'FceRI tista' tattiva riċetturi tyrosine kinases, tibda reazzjonijiet downstream, u tippromwovi l-fosforilazzjoni ta 'diversi proteini ewlenin (bħal proteina kinase attivata minn mitoġenu; MAPKs), li finalment twassal għall-influss ta' joni tal-kalċju (Ca2 plus ), li hija avveniment ewlieni fid-degranulazzjoni taċ-ċelluli mast [3].cistanche AwstraljaIċ-ċelluli mast attivati ​​jiddegranulaw u jirrilaxxaw medjaturi kimiċi. Dawn il-medjaturi kimiċi użati f'reazzjonijiet allerġiċi jistgħu jikkawżaw infjammazzjoni [4], għalhekk it-trattament tas-sintomi allerġiċi jinvolvi inibituri tad-degranulazzjoni taċ-ċelluli mast. Għalhekk, l-inibizzjoni tad-degranulazzjoni taċ-ċelluli mast medjata minn IgE spiss tintuża biex tidentifika komposti ġodda biex jipprevjeni u jikkura mard allerġiku. Ġie stabbilit li l-antikorpi u l-antiġeni anti-dinitrophenyl (DNP)IgE jistgħu jinduċu reazzjonijiet passivi ta’ sensittività eċċessiva tal-ġilda (PCA) bħala mudell tipiku in vivo ta’ sensittività eċċessiva immedjata u bħala mediċina ta’ riċerka għall-potenzjal ta’ allerġiji anti-antiġeniċi [5,6] ]. Barra minn hekk, id-degranulazzjoni taċ-ċelluli mast tista 'tkun ikkawżata wkoll minn stimulanti mhux immuni, bħal komposti 48/80 u A23187. A23187 ionophore tal-kalċju, ilu magħruf li jistimula s-sekrezzjoni taċ-ċelluli mast bir-rilaxx ta 'medjaturi preformati, bħall-istamina mill-granuli tagħhom, li jservu bħala eżempju [4]Il-kompost 48/80 huwa polimer imħallat ta' p-methoxy-N-methylphenethylamine cross-linked mill-formaldehyde, li huwa użat ħafna għall-istimulazzjoni indipendenti ta 'ċelluli mast [7,8]Għalhekk, ammonti xierqa ta' kompost 48/80 u A23187 intużaw komunement bħala reaġenti biex jistudjaw il-mekkaniżmu ta 'reazzjonijiet allerġiċi. Skont evalwazzjonijiet statistiċi, madwar 15-20 fil-mija tal-popolazzjoni tbati minn dermatite atopika. Kemm jekk huma tfal jew adulti li jbatu minn din il-marda, mingħajr trattament xieraq, id-dermatite atopika tista 'tikkawża tbatija psikoloġika lill-pazjenti u tgħabbi l-ispejjeż tas-saħħa tal-familja u soċjali tagħhom [9]. Sfortunatament, m'hemm l-ebda metodu ta 'trattament xieraq biex tfejjaq dermatite allerġika. L-għażliet ta 'trattament attwali għadhom jevitaw allerġeni li jikkawżaw il-mard, u l-użu kontinwu ta' sterojdi huwa l-istandard tad-deheb tat-trattament. L-allerġeni inevitabbli u l-effetti sekondarji tad-drogi wasslu għall-iżvilupp urġenti ta 'mediċini terapewtiċi ġodda. Komposti naturali iżolati minn ħxejjex u pjanti mediċinali huma sorsi potenzjali ta 'aġenti terapewtiċi biex jipprevjenu u jittrattaw mard infjammatorju u jtejbu l-kwalità tal-ħajja għal pazjenti b'disturbi allerġiċi.

Cistanche jista 'anti-aging

Ir-referenza ġejja mill-qalba tal-lotus (l-embrijun taż-żerriegħa) tal-pjanta Nelumbo nucifera u hija alkaloid bisbenzylisoquinoline maġġuri. Hemm evidenza li r-referenza għandha firxa wiesgħa ta' proprjetajiet farmakoloġiċi, bħal effetti kontra l-kanċer, anti-ossidanti, anti-infjammatorji, u newroprotettivi, f'ħafna mard [10-15].benefiċċji cistancheKhan et al. sabet li r-referenza tipproduċi effetti anti-photoaging billi tinibixxi ż-żieda medjata mill-UV fil-livelli ta’ ROS u malondialdehyde(MDA) f’keratinoċiti u fibroblasti umani[16,17]Riċentement, sibna li r-referenza għandha potenzjal bħala mediċina alternattiva għat-trattament ta’ atopiċi. dermatite jew mard infjammatorju ieħor relatat mal-ġilda[18]. Madankollu, jekk ir-referenza għandhiex effett ta 'allerġija kontra l-ġilda fiċ-ċelluli mast għadha inċerta. F'dan l-istudju, immirajna li ninvestigaw l-effetti ta' referenza fuq mard allerġiku medjat miċ-ċelluli mast, bl-użu ta' linji ta' ċelluli mast umani (ċelluli RBL-2H3) u anafilassi indotta minn kompost 48/{80-u DNCB mudell tal-ġrieden.

La referenza proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) tal-pjanta Nelumbo nucifera u hija un alcaloide importanti ta' bisbencilisoquinolina. Teżisti evidenza ta' referenza għandha firxa wiesgħa ta' proprjetajiet farmacoloġiċi, bħala effetti kontra l-kanċer, antiossidanti, antiinfjammatorji u neuroprotectores, f'ħafna mard [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan et al. sab li r-referenza produce effetti anti-fotoenvejecimiento al inhibir it-tkabbir tal-livelli ta' ROS u malondialdehído (MDA) medjat by UV en queratinocitos y fibroblastos human [16,17] Recientemente, discovermos that the reference has potential as medicine alternative for the treatment. de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. F'dan l-istudju, l-għan tagħna jinvestiga l-effetti ta' referenza fil-mard alérġiku medjat minn mastoċiti, billi juża linji ta' mastoċiti umani (células RBL-2H3) u un modelo ta' ratones b'anafilaxia inducida minn komposti 48/80 u DNCB. .

2. Riżultati

2.1.Test taċ-Ċitotossiċità tan-Neferine fuq Ċelloli Mast tal-Firien (RBL-2H3)

Peress li ċ-ċelluli tal-lewkimja basophilic tal-firien (RBL)-2H3, analogu taċ-ċelluli mast li jirrilaxxa l-istamina, huma ċelluli adattati biex jeżaminaw l-effetti tal-infjammazzjoni medjata miċ-ċelluli mast [19], użajna dawn iċ-ċelluli biex ninvestigaw l-anti-allerġiċi. effetti ta' referenza. L-ewwel, aħna ttestjajna jekk ir-referenza tistax tipproduċi ċitotossiċità fiċ-ċelloli mast. Meta ċ-ċelloli jiġu ttrattati minn qabel b'referenza minn 1 sa 30 μM għal 24 siegħa, il-vijabbiltà taċ-ċelluli taċ-ċelloli mhux se tiġi affettwata mit-trattament ta 'referenza (Figura 1).

2.2.Neferine Inaqqas l-Effett ta' Degranulazzjoni ta' RBL -2H3 Stimolat minn Attivaturi Differenti

Iċ-ċelloli RBL-2H3 huma komunement utilizzati għal studji in vitro ta' degranulazzjoni [20-22]Stimolazzjoni taċ-ċelluli RBL-2H3 b'anti-dinitrofenol (DNP)IgE u albumina tas-serum uman konjugat mad-DNP (HSA) iqanqal degranulazzjoni. Barra minn hekk, iċ-ċelloli mast huma magħrufa li jiddegranulaw bi tweġiba għal komposti sintetiċi, bħall-kompost 48/80 u l-jonofor tal-kalċju A23187, u dawn il-komposti ntużaw bħala reaġenti konvenjenti għal studji diretti tal-mekkaniżmi ta 'risponsi allerġiċi in vitro [23, 24]. Ir-riżultati wrew li ċ-ċitoplasma ta' RBL-2H3 li ma ġietx attivata mill-attivatur kien fiha granuli sekretorji limitati.kolesterol cistancheTrattament ta 'referenza （10μM） waħdu ma affettwax l-attività ta' RBL -2H3 (Figura 2A, B). Madankollu, iż-żieda ta 'attivaturi differenti, inkluż il-kompost 48/80, A23187, u anti-DNP/IgE flimkien ma' DNP/HSA, imliet b'mod ċar iċ-ċitoplasma b'granuli sekretorji. Taħt il-mikroskopju elettroniku, wieħed jista 'jara li hemm numru kbir ta' granuli sekretorji fiċ-ċitoplasma, u xi granuli sekretorji saħansitra jingħaqdu mal-membrana taċ-ċellula, li jwasslu għal degranulazzjoni (Figura 2C-E). Wara trattament minn qabel b'referenza 10 uM, il-granuli sekretorji fiċ-ċitoplasma tnaqqsu b'mod sinifikanti (Figura 2F-H). Dawn ir-riżultati jindikaw li r-referenza tista' effettivament tinibixxi l-attivazzjoni u d-degranulation ta' RBL-2H3 stimulati mill-attivatur.

2.3.Neferine Inibixxi PMA/A23187-Elevazzjoni Indotta tal-Kalċju Intraċellulari f'RBL-2H3

Il-joni tal-kalċju għandhom ir-rwol ta 'messaġġier sekondarju fil-proċess ta' attivazzjoni taċ-ċelluli. A23187 huwa l-aktar mod effettiv biex tiżdied il-penetrazzjoni tal-joni tal-kalċju permezz tal-membrani taċ-ċelluli u tistimula l-attivazzjoni taċ-ċelluli mast. Phorbol myristate acetate (PMA) jista 'jattiva proteina kinase Cand u jżid joni tal-kalċju intraċellulari biex itejjeb l-effett ta' A23187. Iż-żieda fil-jonji tal-kalċju fiċ-ċelluli mast ġiet ukoll ikkunsidrata bħala fattur importanti biex tinduċi l-attivazzjoni taċ-ċelluli mast sabiex taffettwa d-degranulazzjoni taċ-ċelluli mast u tirrilaxxa aktar ċitokini u chemokines infjammatorji.effetti sekondarji cistanche deserticola,Għalhekk, dan l-istudju fittex li jesplora jekk ir-referenza tistax tinibixxi l-konċentrazzjoni tal-jone tal-kalċju fl-RBL-2H3 meta tinibixxi l-infjammazzjoni. Il-grupp sperimentali kien maqsum bi jew mingħajr trattament minn qabel ta 'referenza għal 20 min, u 1 mM CaClz u PMA/A23187 ġew miżjuda biex jistimulaw u jattivaw RBL -2H3. Ir-riżultati sperimentali wrew li t-trattament ta 'RBL-2H3 b'konċentrazzjonijiet differenti ta' referenza waħdu ma affettwax iż-żieda fil-konċentrazzjoni intraċellulari tal-jone tal-kalċju. Fil-grupp ta 'influss ta' Ca2t indott PMA/A23187-, il-konċentrazzjoni intraċellulari tal-jone tal-kalċju żdiedet b'mod sinifikanti. Iċ-ċelloli RBL-2H3 ġew ittrattati minn qabel għal 20 min b'referenza (3 μM u 10 μM), u l-konċentrazzjoni tal-jone tal-kalċju tnaqqset b'mod sinifikanti (Figura 3).

2.4.Neferine Naqqas l-Espressjoni tal-mRNA ta' Ċitokini Pro-Infjammatorji f'PMA/A23187 Stimolat minn RBL -2H3

Ir-rispons immuni tal-ġilda se jżid in-numru ta 'ċelluli mast fil-ġisem, u ċ-ċelluli mast imbagħad jipproduċu ċitokini pro-infjammatorji u jaċċelleraw il-progress tal-marda. Ċitokini pro-infjammatorji, speċjalment TNF-a, IL-6, IL-1, u IL{-8, mhux biss jinduċu infjammazzjoni iżda wkoll jikkawżaw infiltrazzjoni ta' lewkoċiti, formazzjoni ta' granuloma, u fibrożi tat-tessut. PMA/A23187 jaġixxi fuq iċ-ċelluli mast u jinduċihom jipproduċu IL-16, IL-6, TSLP, u TNF- , u jikkawżaw infjammazzjoni relatata mal-allerġija. Għalhekk, ittrattati minn qabel RBL-2H3 b'referenza għal 20 min u stimulat b'PMA/A23187 għal 6 sigħat biex niskopri jekk ir-referenza tistax tirregola 'l isfel l-espressjoni tal-mRNA ta' IL-1, IL{{ 19}}, TSLP, u TNF-a. Ir-riżultati wrew li fil-grupp ittrattat b'referenza waħdu, l-espressjoni ta 'mRNA ta' cytokine ma ġietx affettwata, u l-espressjoni ta 'mRNA fil-grupp li indotta infjammazzjoni minn PMA/A23187 żdiedet b'mod sinifikanti. Fil-grupp ittrattat b'referenza, ġie osservat li l-livelli ta' espressjoni tal-mRNA ta' IL-1, IL-6, TSLP, u TNF-a kienu mrażżna b'mod sinifikanti (Figura 4).

2.5.Neferine Inibixxi PMA/A23187-Fosforilazzjoni Indotta tal-Pathway MAPK f'RBL-2H3

Studji preċedenti rrimarkaw li ċ-ċelloli mast jeħtieġ li jirrilaxxaw joni tal-kalċju intraċellulari biex jattivaw MAPK. Barra minn hekk, il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni MAPK tirregola l-espressjoni ta' monoċiti, limfoċiti T, limfoċiti B, ċitokini u chemokines, u tinduċi awtoimmunità. Dan il-mekkaniżmu huwa simili għall-mogħdija ta 'attivazzjoni ta' PMA/A23187. F'dan l-istudju, esplorajna jekk ir-referenza tistax tipparteċipa fir-regolamentazzjoni tal-mogħdijiet MAPK. Aħna ttrattati konċentrazzjonijiet differenti ta 'referenza (1,3, u 10 uM) għal RBL-2H3 għal 20 min u mbagħad stimulati b'PMA/A23187 għal 30 min biex jinduċu infjammazzjoni. Ir-riżultati wrew li meta RBL-2H3 ġie ttrattat b'konċentrazzjonijiet differenti ta' referenza waħdu, l-attivazzjoni tal-proteini p38, JNK, u ERK ma ġietx affettwata. Fil-grupp ittrattat b'PMA/A23187 waħdu, sibna li l-proteini p38, JNK, u ERK kienu attivati ​​u għandhom fosforilazzjoni sinifikanti. Fil-grupp ittrattat minn qabel b'referenza, ġie osservat li għal konċentrazzjonijiet ogħla ta 'referenza, il-fosforilazzjoni tal-proteini p38, JNK, u ERK tnaqqset b'mod sinifikanti (Figura 5A-C).

2.6.Neferine Inibixxi PMA/A23187-Fosforilazzjoni Indotta tal-Pathway NF-B f'RBL-2H3

L-espressjoni ta 'ċitokini pro-infjammatorji tiddependi fuq l-attivazzjoni tal-fattur ta' traskrizzjoni NF-kB fiċ-ċelloli mast. Meta l-proteina IKB ġiet fosforilata u degradata, NF-kB ġie rilaxxat u emigrat fin-nukleu, jorbot mal-elementi korrispondenti tiegħu li jirrispondu għad-DNA u jippromwovi t-traskrizzjoni ta 'medjaturi proinfjammatorji. Ġew prodotti ħafna ċitokini u chemokines, li jirregolaw ir-rispons immuni, id-divrenzjar u l-infjammazzjoni. Għalhekk, esplorajna jekk it-trattament minn qabel b'referenza jaffettwax il-fosforilazzjoni tal-proteini indotta minn PMA/A23187. Aħna ttrattati konċentrazzjonijiet differenti ta 'referenza (1,3, u 10 μM) għal RBL -2H3. Wara 20 min, PMA/A23187 stimula RBL-2H3 għal siegħa jew sagħtejn biex jinduċi infjammazzjoni. Ir-riżultati wrew li t-trattament ta' RBL-2H3 b'konċentrazzjonijiet differenti ta' referenza waħdu ma affettwax il-fosforilazzjoni ta' IKBa u NF-KB. Meta PMA/A23187 intuża għall-istimulazzjoni, ġiet osservata żieda sinifikanti fil-fosforilazzjoni ta 'IkBo u NF-KB. Fil-grupp ittrattat minn qabel b'referenza, instab li l-fosforilazzjoni ta 'IkBa (Figura 6A) u NF-KB (Figura 6B) tnaqqset b'mod sinifikanti.

2.7.Effett ta' Neferine fuq Dermatite Atopika Indotta minn 2,4-Dinitrochlorobenzene (DNCB)

Mudell tal-annimali għar-riċerka tal-mard, DNCB huwa irritant rappreżentattiv li jikkawża dermatite atopika[25]. L-esperiment tagħna juża 1 fil-mija dinitrochlorobenzene (DNCB) maħlul f'75 fil-mija alkoħol biex jinduċi l-ewwel stadju ta 'rispons ta' sensitizzazzjoni. Referenza (3mg/kg u 10 mg/kg) u dexamethasone (Dexa,{{0}}.2 mg/kg) maħlul f'DMSO ġew amministrati intraperitonealment fil-ħames jum għal għaxart ijiem . Fit-8, l-1 u l-14-il jum, 0.5 fil-mija DNCB ġie applikat bħala t-tieni stadju ta 'induzzjoni ta' infjammazzjoni. Il-ġrieden kienu maqsuma f'erba 'gruppi—grupp ta' kontroll, grupp DNCB, grupp ittrattat b'referenza u grupp trattat b'dexamethasone—u mbagħad, wara t-tqabbil bejn il-gruppi, id-differenzi ġew innutati. Aħna osservajna li DNCB indotta reazzjoni ta 'infjammazzjoni tal-ġilda atopika fuq il-ġilda tal-ġrieden. Wara li applikat DNCB, instab li l-ġilda tal-ġrieden żiedet il-ħmura u l-iskala. Dawn huma kollha minħabba proliferazzjoni anormali ta 'keratinoċiti, infiltrazzjoni u aggregazzjoni ta' ċelloli immuni. Il-grupp ikkurat b'referenza 3 mg/kg u dexamethasone 0.2mg/kg għal erbat ijiem kien ttaffi l-ħmura. Komplejna nosservaw il-kundizzjoni tal-ġilda dorsali tal-ġrieden sal-jum 15. Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-grupp DNCB kellu kundizzjonijiet tal-ġilda ħomor u minfuħin ħafna, u kien hemm dander u feriti li dehru li kienu kkawżati minn ħakk u uġigħ . Nistgħu nsibu tendenza ta 'grad li jonqos wara trattamenti ta' referenza u dexamethasone (Figura 7A). It-tebgħa blu ta' Toluidine intużat biex tosserva n-numru ta 'ċelluli mast aggregati. Iċ-ċelloli mast dehru vjola meta osservati taħt mikroskopju. Jista 'jintwera b'mod kwantitattiv li ħafna ċelluli mast infiltraw u akkumulaw fid-dermis fil-grupp sperimentali DNCB, żdiedu b'mod sinifikanti meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll. Fil-grupp ittrattat b'referenza u dexamethasone, l-infiltrazzjoni, l-aggregazzjoni, u n-numru ta 'ċelluli mast naqsu (Figura 7B, C).

2.8.Neferine Ittejjeb l-Espressjoni tal-mRNA ta' Molekuli Relatati mal-Ostakoli wara Trattament ta' DNCB

L-infjammazzjoni relatata mal-ġilda kkawżata minn AD tista 'tikkawża funzjoni anormali tal-barriera tal-ġilda. Jekk il-barriera tal-ġilda hija difettuża, huwa aktar faċli għall-antiġeni jew irritanti li jippenetraw l-epidermide tal-ġilda u jidħlu fil-ġisem biex jinduċu reazzjonijiet relatati mal-immunità. Fl-istess ħin, il-produzzjoni ta 'proteini ta' differenzjazzjoni, inklużi filaggrin, loricrin, u involucrin, se tiġi mrażżna. Għalhekk, ir-restawr tal-barriera tal-ġilda bil-ħsara huwa importanti ħafna għall-prevenzjoni u t-trattament tal-AD [26]. Fl-istudju tagħna, użajna referenzi biex nintervjenu fil-mudell tal-annimali ta 'dermatite atopika indotta minn DNCB. Wara s-sagrifiċċju tal-ġrieden, it-tessut tal-ġilda tad-dahar kien ibbażat għall-analiżi RI-qPCR biex jevalwa jekk ir-referenza tistax ittejjeb it-tnaqqis tal-espressjoni tal-mRNA f'filaggrin, loricrin, u involucrin wara t-trattament ta 'DNCB. Ir-riżultati wrew li l-grupp sperimentali DNCB kien naqqas b'mod sinifikanti l-espressjoni tal-mRNA ta 'filaggrin, loricrin, u involucrin meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll. L-espressjoni tal-mRNA ta 'filaggrin, loricrin, u involucrin żdiedet b'mod sinifikanti fil-grupp ittrattat b'referenza u dexamethasone meta mqabbel mal-grupp DNCB (Figura 8).

Aħna ppruvajna wkoll li r-referenza għandha effett ta 'grif anti-allerġiku. Aħna użajna aġent tad-degranulazzjoni taċ-ċelluli mast, kompost 48/80, biex ninduċi mġiba ta 'grif fil-ġrieden BALB/c. Kif muri fil-Figura 9, sibna li t-trattament ta 'referenza inibixxi l-imġieba tal-grif ikkawżata mill-kompost 48/80 (50 ug/sit). Amministrazzjoni ripetuta ta 'dożi aktar baxxi u ogħla ta' referenza (3 u 10 mg/kg) għal 5 ijiem konsekuttivi naqqset b'mod sinifikanti n-numru ta 'grif ikkawżat mill-kompost 48/80.