Tranżizzjoni Attiva tal-Fażi tal-Memorja tal-Biża 'Mir-Rikonsolidazzjoni Sa l-Estinzjoni Permezz ta' Prevenzjoni tar-Rikonsolidazzjoni Mmedjata mill-ERK

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Il-irkupru tal-memorja tal-biżajinduċi żewġ proċessi ta 'memorja opposti, jiġifieri, rikonsolidazzjoni u estinzjoni. L-irkupru fil-qosor jinduċi rikonsolidazzjoni biex jinżamm jewittejjeb il-memorja tal-biża',filwaqt li l-irkupru fit-tul jitfi din il-memorja. Għalkemm il-mekkaniżmi ta 'rikonsolidazzjoni u estinzjoni ġew investigati, għadu mhux magħruf kif il-fażijiet tal-memorja tal-biża' jinqalbu minn rikonsolidazzjoni għal estinzjoni waqt l-irkupru tal-memorja. Hawnhekk, aħna nuru li proċess ta 'transizzjoni tal-memorja li jiddependi minn kinażi regolat mis-sinjal extraċellulari (ERK) wara l-irkupru jirregola l-bidla tal-fażijiet tal-memorja minn rikonsolidazzjoni għal estinzjoni billi jipprevjeni l-induzzjoni ta' rikonsolidazzjoni f'kompitu ta 'evitar inibitorju (IA) fil-ġrieden maskili. L-ewwel, il-fażi tal-memorja ta 'tranżizzjoni, li tikkanċella l-induzzjoni tar-rikonsolidazzjoni, iżda hija insuffiċjenti għall-akkwist tal-estinzjoni, ġiet identifikata wara r-rikonsolidazzjoni, iżda qabel il-fażijiet ta' estinzjoni. It-tieni, il-fażijiet ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid, tranżizzjoni u estinzjoni wara l-irkupru tal-memorja wrew firem molekulari u ċellulari distinti permezz ta' proteina li torbot l-element li tirreaġixxi għal cAMP (CREB) u fosforilazzjoni ERK fl-amigdala, l-ippokampus u l-kortiċi prefrontali medjali (mPFC). Il-fażi ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid uriet żieda fil-fosforilazzjoni CREB, filwaqt li l-fażi ta' estinzjoni wriet diversi popolazzjonijiet newrali b'kombinazzjonijiet varji ta 'fosforilazzjoni CREB u/jew ERK, f'dawn ir-reġjuni tal-moħħ. Interessanti, it-tliet fażijiet tal-memorja, inkluża l-fażi ta 'tranżizzjoni, wrew attivazzjoni temporanja ERK immedjatament wara l-irkupru. L-aktar importanti, l-imblokk ta 'ERK fl-amigdala, l-ippokampus, jew l-mPFC fil-fażi tal-memorja tat-tranżizzjoni iddiżinibixxa t-titjib indott mir-rikonsolidazzjoni tal-memorja IA. Dawn l-osservazzjonijiet jissuġġerixxu li l-mogħdija tas-sinjalar ERK tirregola b'mod attiv it-tranżizzjoni tal-fażi tal-memorja mir-rikonsolidazzjoni għall-estinzjoni u dan il-proċess jiffunzjona bħala swiċċ li jikkanċella r-rikonsolidazzjoni tal-biża 'memorja.

Kliem ewlieni: ERK; estinzjoni;memorja biża; rikonsolidazzjoni; transizzjoni

1Dipartiment tal-Bijoxjenza, Fakultà tax-Xjenzi tal-Ħajja, Università tal-Agrikoltura ta' Tokjo, Tokjo 156-8502, il-Ġappun, u

2Iskola tal-Gradwati tal-Agrikoltura u x-Xjenzi tal-Ħajja, L-Università ta' Tokyo, Tokyo 113-8657, il-Ġappun

Dikjarazzjoni ta' Sinifikat

Irkupru tal-memorja tal-biżajinduċi żewġ proċessi ta 'memorja opposti; rikonsolidazzjoni u estinzjoni. Ir-rikonsolidazzjoni żżomm/isaħħaħ il-memorja tal-biża, filwaqt li l-estinzjoni ddgħajjef il-memorja tal-biża. Għadu mhux magħruf kif il-fażijiet tal-memorja jinqalbu minn rikonsolidazzjoni għal estinzjoni waqt l-irkupru. Hawnhekk, identifikajna proċess ta 'transizzjoni tal-memorja attiva li jaħdem bħala swiċċ li jinibixxi r-rikonsolidazzjoni. Din il-fażi ta 'transizzjoni tal-memorja wriet żieda temporanja ta' fosforilazzjoni ta 'kinase regolata b'sinjal extraċellulari (ERK) fl-amigdala, l-ippokampus u l-kortiċi prefrontali medjali (mPFC). Interessanti, l-inibizzjoni ta 'ERK f'dawn ir-reġjuni fil-fażi ta' tranżizzjoni iddiżinibixxa t-titjib medjat mir-rikonsolidazzjoni tal-memorja ta 'evitar inibitorju (IA). Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-proċess tal-memorja tat-tranżizzjoni jirregola b'mod attiv il-bidla tal-fażijiet tal-memorja tal-biża 'tal-memorja tal-biża' billi jipprevjeni l-induzzjoni ta 'rikonsolidazzjoni permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar tal-ERK.

Introduzzjoni

Irkupru tal-memorjamhuwiex proċess passiv iżda huwa pjuttost proċess dinamiku li jippermetti l-manutenzjoni, it-tisħiħ, id-dgħajjef, jew il-bidla/aġġornar ta’ memorja oriġinali (Misanin et al., 1968; Schneider and Sherman, 1968; Lewis, 1979; Mactutus et al. , 1979; Gordon, 1981; Nader et al., 2000; Nader u Hardt, 2009; Dudai, 2012; Fukushima et al., 2014). Importanti, memorja tal-biża' kondizzjonata rkuprata permezz ta' espożizzjoni mill-ġdid qasira għall-istimolu kondizzjonat (CS) issir labile u teħtieġ rikonsolidazzjoni dipendenti fuq l-espressjoni tal-ġeni għall-manutenzjoni jew it-titjib tagħha (Nader et al., 2000; Dudai, 2002; Kida et al., 2002; Suzuki et al., 2004; Tronel et al., 2005; Fukushima et al., 2014). Bil-maqlub, espożizzjoni mill-ġdid kontinwa jew ripetuta għas-CS tinduċi estinzjoni tal-memorja, li ddgħajjef il-memorja tal-biża' (Pavlov, 1927; Rescorla, 2001; Myers u Davis, 2002). Għalhekk, il-irkupru tal-memorja tal-biżajinduċi żewġ proċessi ta 'memorja opposti, jiġifieri, rikonsolidazzjoni u estinzjoni, għalkemm iż-żewġ proċessi huma indotti minn espożizzjoni mill-ġdid għal CS identiku, iżda jvarjaw skond it-tul ta' espożizzjoni mill-ġdid għas-CS.

Il-karatteristika bijokimika komuni u kritika tar-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni hija r-rekwiżit għall-espressjoni tal-ġeni medjata mill-proteina li torbot l-element (CREB) li tirrispondi għal cAMP (Mamiya et al., 2009). Interessanti, urejna firem molekulari, anatomiċi u komportamentali kontrastanti bejn il-fażijiet ta 'konsolidazzjoni u estinzjoni tal-memorja tal-biża' kuntestwali (Suzuki et al., 2004; Mamiya et al., 2009). L-imblukkar tas-sinteżi tal-proteini matul il-fażi ta 'rikonsolidazzjoni jfixkel il-memorja tal-biża' oriġinali, filwaqt li l-imblukkar tas-sinteżi tal-proteini matul il-fażi ta 'estinzjoni jonqos milli jagħmel dan, għalkemm il-memorja tal-biża' kuntestwali ġiet riattivata. Ir-rekwiżit tar-reġjuni tal-moħħ li juru l-attivazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni medjata minn CREB tvarja bejn rikonsolidazzjoni u estinzjoni; rikonsolidazzjoni tiddependi fuq l-amigdala u l-ippokampus, filwaqt li l-estinzjoni tiddependi fuq l-amigdala u l-kortiċi prefrontali medjali (mPFC). Madankollu, il-kors taż-żmien tal-attivazzjoni tal-amygdaloid CREB ivarja bejn il-fażijiet tal-memorja ta 'rikonsolidazzjoni u estinzjoni. Dawn l-osservazzjonijiet ssuġġerew li l-fażijiet ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid u estinzjoni mhumiex indipendenti, iżda pjuttost jinteraġixxu ma' xulxin. Interessanti, studji reċenti identifikaw tieqa ta 'żmien (fażi ta' tranżizzjoni) li ma turi l-ebda attivazzjoni extraċellulari tal-kinase regolata b'sinjal (ERK) fl-amigdala wara r-rikonsolidazzjoni, iżda qabel il-fażijiet ta 'estinzjoni wara l-irkupru tal-memorja tal-biża' tas-smigħ (Merlo et al., 2018). ). Meħuda flimkien, dawn is-sejbiet jissuġġerixxu l-mekkaniżmi possibbli li bihom il-fażijiet tal-memorja jinbidlu minn rikonsolidazzjoni għal estinzjoni matul il-irkupru tal-memorja tal-biża. Fi kliem ieħor, huwa possibbli li l-proċess ta 'transizzjoni tal-memorja jirregola b'mod attiv dan is-swiċċ.

F'kompitu ta 'evitar inibitorju (IA), il-ġrieden jirċievu xokk elettriku tas-saqajn wara li jidħlu f'kompartiment mudlam minn kompartiment ħafif u jiffurmawmemorjabiex tevita l-kompartiment mudlam. Preċedentement, bl-użu ta 'dan il-kompitu, urejna li l-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni u estinzjoni jistgħu jiġu diskriminati fil-punt tal-ħin meta ġurdien jidħol f'kompartiment skur minn kompartiment ħafif waqt sessjoni ta 'espożizzjoni mill-ġdid (Fukushima et al., 2014). Għalhekk, dan il-kompitu jippermettilna nikkaratterizzaw il-firem molekulari tal-perspettiva tal-fażijiet ta 'rikonsolidazzjoni u estinzjoni, b'kuntrast mal-paradigma klassika tal-kondizzjonament tal-biża' kuntestwali li fiha r-riattivazzjoni tal-memorja tal-biża' kondizzjonata permezz ta 'espożizzjoni mill-ġdid għas-CS tibda kemm rikonsolidazzjoni kif ukoll estinzjoni; espożizzjoni mill-ġdid qasira (3 min) għall-kuntest kundizzjonat jinduċi rikonsolidazzjoni, filwaqt li espożizzjoni mill-ġdid twila (30 min) jew ripetuta għal dan il-kuntest jinduċi estinzjoni (Eisenberg et al., 2003; Pedreira and Maldonado, 2003; Suzuki et al., 2004; Lee et al., 2008; Mamiya et al., 2009). Barra minn hekk, sibna li l-memorja IA rkuprata hija msaħħa permezz ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid tal-memorja f'dan il-kompitu (Fukushima et al., 2014).

Biex tifhem il-mekkaniżmu għat-tranżizzjoni minn rikonsolidazzjoni għall-estinzjoni matul il-irkupru tal-memorja tal-biża, Immirajna li nidentifikaw u nikkaratterizzaw il-firem molekulari, ċellulari u ta 'mġieba tal-fażijiet ta' konsolidazzjoni mill-ġdid, tranżizzjoni u estinzjoni tal-memorja IA. Aħna analizzajna l-attivazzjoni ta 'CREB u ERK fl-amygdala, hippocampus, u mPFC fil-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni, tranżizzjoni u estinzjoni u eżaminajna r-rwoli tal-attivazzjoni tal-ERK f'dawn il-proċessi tal-memorja.

Materjali u metodi

Ġrieden L-esperimenti kollha twettqu skont il-Gwida għall-Kura u l-Użu ta 'Annimali tal-Laboratorju (Soċjetà tan-Newroxjenza tal-Ġappun u Università ta' l-Agrikoltura ta 'Tokjo). L-esperimenti kollha fuq l-annimali mwettqa f'dan l-istudju ġew approvati mill-Kumitat għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università tal-Agrikoltura ta 'Tokjo (awtorizzazzjoni #280037). Il-proċeduri kirurġiċi kollha saru taħt anestesija Nembutal u sar kull sforz biex titnaqqas it-tbatija. Ġrieden maskili C57BL/6N inkisbu minn Charles River. Il-ġrieden kienu miżmuma f'gaġeġ ta 'ħames jew sitta, miżmuma fuq ċiklu ta' dawl/dlam ta '12/12 h, u ppermettew aċċess għall-ikel u l-ilma ad libitum. Il-ġrieden kellhom mill-inqas tmien ġimgħat meta ġew ittestjati. L-ittestjar sar matul il-fażi ħafifa taċ-ċiklu. L-esperimenti kollha saru blind għall-kundizzjoni tat-trattament tal-ġrieden.

Test IA L-apparat IA pass-through (OHARA Pharmaceutical) kien jikkonsisti f'kaxxa b'kompartimenti separati tad-dawl u dlam (it-tnejn 15.5 12.5 11.5 cm). Il-kompartiment tad-dawl kien imdawwal b'dawl fluworexxenti (2500 lux; Fukushima et al., 2008, 2014; Zhang et al., 2011; Ishikawa et al., 2016). Qabel il-bidu tat-taħriġ IA, il-ġrieden ġew immaniġġjati individwalment għal 2 min kuljum għal ġimgħa. Matul is-sessjonijiet ta 'taħriġ, kull ġurdien tħalla jabitwa mal-kompartiment tad-dawl għal 30 s, u l-bieb tal-giljottina tgħolli biex jippermetti aċċess għall-kompartiment skur. Il-latenza biex tidħol fil-kompartiment mudlam kienet ikkunsidrata bħala miżura ta 'akkwist. Hekk kif il-ġurdien daħal fil-kompartiment mudlam, il-bieb tal-giljottina ngħalaq. Wara 5 s, ingħatat footshock (0.2 mA) għal perjodu totali ta '2 s (taħriġ). F'24 siegħa wara s-sessjoni ta 'taħriġ, il-ġurdien tpoġġa lura fil-kompartiment tad-dawl sakemm daħal fil-kompartiment skur (medja 459 6 15.49 s). Immedjatament wara li l-ġurdien kien daħal fil-kompartiment skur, il-bieb tal-giljottina ngħalaq u l-ġurdien baqa 'fil-kompartiment dlam għal tul ta' żmien li jvarja (0, 1, jew 10 min) mingħajr xokk tas-saqajn (riattivazzjoni). Il-memorja ġiet ivvalutata 48 siegħa wara [test tal-memorja fit-tul tar-riattivazzjoni (PR-LTM)] bħala l-latency crossover biex il-ġurdien jidħol fil-kompartiment skur meta jiġi sostitwit fil-kompartiment tad-dawl, bħal fir-riattivazzjoni.

Għall-ewwel esperiment, eżaminajna l-effett tal-inibizzjoni tas-sinteżi tal-proteini wara r-riattivazzjoni (espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment skur għal 0, 1, jew 10 min; Fig. 1). L-inibitur tas-sintesi tal-proteini anisomycin (ANI; Wako) ġie maħlul fis-salina (pH aġġustat għal 7.0-7.4 b'NaOH). Il-ġrieden ġew imħarrġa kif deskritt hawn fuq, u f'24 siegħa wara, irċevew vettura (VEH) jew ANI (150 mg/kg, ip) immedjatament wara espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment skur għal 0, 1, jew 10 min mingħajr xokk tas-saqajn (riattivazzjoni). F'din id-doża, ANI jinibixxi .90 fil-mija tas-sintesi tal-proteini fil-moħħ matul l-ewwel 2 sigħat (Flood et al., 1973). Fi 48 siegħa wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni, ġrieden individwali ġew għal darb'oħra mqiegħda fil-kompartiment tad-dawl u latency crossover ġiet evalwata.

Għat-tieni esperiment [fosforilata CREB (pCREB) u immunoistokimika fosforilata ERK (pERK); Fig. 2–5], eżaminajna r-reġjuni tal-moħħ li ġew attivati ​​wara espożizzjoni mill-ġdid għad-dawl (sakemm il-ġrieden daħlu fil-kompartiment skur, esponi mill-ġdid għall-kompartiment skur għal 0 min) jew kompartiment skur (re- espożizzjoni għall-kompartiment mudlam għal 1 jew 10 min). Il-ġrieden kienu maqsuma f'erba 'Fukushima et al. · Tranżizzjoni tal-Fażijiet tal-Memorja tal-Biża wara l-Irkupru J. Neurosci., 10 ta’ Frar, 2021, • 41(6):1288–1300 • 1289gruppi. F'24 siegħa wara t-taħriġ, ġrieden individwali ġew esposti mill-ġdid għall-kompartiment tad-dawl u mbagħad baqgħu fil-kompartiment skur wara d-dħul tagħhom mill-kompartiment skur [riattivazzjoni: 0 min fil-kompartiment skur, grupp ta 'rikonsolidazzjoni (Recon); 1 min, transizzjoni (Tran) grupp; 10 min, estinzjoni (Ext) grupp]. Grupp ieħor ta 'ġrieden ma ġiex ritornat lejn il-kompartiment tad-dawl/dlam [grupp mhux riattivat (NR)]. Il-ġrieden imbagħad ġew anestetizzati b'Nembutal (750 mg/kg, ip) f'5, 15, jew 30 min wara r-riattivazzjoni.

Għat-tielet esperiment (mikroinfużjoni ta’ U{{20}}126; Figuri 6,7), aħna eżaminajna l-effetti tal-inibizzjoni tal-ERK fl-amigdala, l-ippokampus, jew l-mPFC fuq il-konsolidazzjoni mill-ġdid/it-titjib tal-memorja, it-tranżizzjoni, u estinzjoni. L-inibitur MEK U0126 (Sigma-Aldrich) ġie maħlul f'fluwidu ċerebrospinali artifiċjali li kien fih tliet qatriet ta' Tween 80 (Sigma) f'2.5 ml ta' 7.5 fil-mija dimethyl sulfoxide (Wako) u aġġustat għal pH 7.4 b'NaOH. Il-ġrieden ġew imħarrġa kif deskritt hawn fuq, u 24 siegħa wara, tpoġġew lura fil-kompartiment tad-dawl (riattivazzjoni). Il-ġrieden ġew mikroinfużi b'U0126 (1 mg) jew VEH fir-reġjuni varji tal-moħħ immedjatament wara (Figuri 6A, C, E-H, 7A-C) jew fi 30 min wara (Fig. 6B, D) riattivazzjoni. Fi 48 siegħa wara r-riattivazzjoni, ġrieden individwali reġgħu tpoġġew fil-kompartiment tad-dawl u ġiet evalwata l-latenza ta 'crossover (PR LTM). Mikroinfużjonijiet fil-hippocampus u mPFC (0.5 ml) saru b'rata ta '0.25ml/min. Mikroinfużjonijiet fl-amigdala (0.2 ml) saru b'rata ta' 0.1ml/min. Il-kannula ta 'l-injezzjoni tħalliet f'postha għal 2 minuti wara l-mikroinfużjoni u l-ġrieden imbagħad ġew ritornati fil-gaġeġ tad-dar tagħhom. L-inibitur MEK SL327 (Santa Cruz Biotechnology) ġie maħlul f'dimethyl sulfoxide u dilwit bis-salina. Il-ġrieden ġew imħarrġa kif deskritt hawn fuq, u 24 siegħa wara, ġrieden individwali tpoġġew lura fil-kompartiment tad-dawl (riattivazzjoni). Il-ġrieden ġew injettati b'mod sistemiku b'SL327 (10 jew 20 mg/kg) jew VEH immedjatament wara r-riattivazzjoni (Fig. 7D-F). Fi 48 siegħa wara r-riattivazzjoni, ġrieden individwali reġgħu tpoġġew fil-kompartiment tad-dawl u ġiet evalwata l-latency crossover (PR-LTM).

L-immunoistokimika saret kif deskritt qabel (Mamiya et al., 2009; Suzuki et al., 2011; Zhang et al., 2011; Fukushima et al., 2014; Ishikawa et al., 2016; Hasegawa et al., 2019). Wara l-anestetizzazzjoni, il-ġrieden kollha ġew imdewweb b'4 fil-mija paraformaldehyde. L-imħuħ tneħħew, iffissati matul il-lejl, trasferiti għal 30 fil-mija sukrożju, u maħżuna f'4 gradi. Sezzjonijiet koronali (30mm) inqatgħu fi kriostat.

Għat-tbajja’ pCREB u pERK, sezzjonijiet li jżommu f’wiċċ l-ilma ġew ittrattati b’1 fil-mija H2O2 u inkubati matul il-lejl b’antikorp poliklonali anti-phospho-CREB tal-fenek (serine 133; S133) (1:1000; #{{10) }}, Millipore) u/jew antikorp monoklonali anti-phospho-ERK1/2 (T202/Y204) tal-fenek (1:300; #4370; Cell Signaling Technology) f'soluzzjoni ta 'imblukkar (salina buffered fosfat flimkien ma' 1 fil-mija albumina tas-serum tal-mogħoż, 1 mg/ml albumina tas-serum bovin, u 0.05 fil-mija Triton X-100). Is-sezzjonijiet ġew maħsula b'salina buffered bil-fosfat u inkubati b'IgG kontra l-fenek konjugat bil-perossidasi tal-ħmar (1:500; Jackson ImmunoResearch) għal pCREB jew IgG tal-mogħoż kontra l-fenek konjugat bil-perossidasi tal-horseradish għal pERK għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Is-sinjali pCREB ġew amplifikati permezz ta 'biotin tyramide u viżwalizzati bl-użu ta' Alexa Fluor-conjugated streptavidin (Invitrogen). Is-sinjali pERK ġew amplifikati b'TSA-FCM (Invitrogen). Is-sezzjonijiet ġew immuntati fuq slides u coverslipped bl-użu ta 'mezz ta' immuntar (Millipore).

Il-kwantifikazzjoni saret kif deskritt qabel (Frankland et al., 2006; Fukushima et al., 2014; Mamiya et al., 2009; Zhang et al., 2011; Suzuki et al., 2008). L-istrutturi ġew definiti anatomikament skont l-atlas ta 'Franklin u Paxinos (1997). In-newroni immunoreattivi kollha ġew magħduda minn esperimentatur blind għall-kundizzjoni tat-trattament

Riżultati

Karatterizzazzjoni tal-fażijiet tal-memorja wara l-irkupru fil-kompitu IA

Il-kompitu tal-IA jippermettilna niddiskriminaw il-fażijiet ta 'rikonsolidazzjoni u estinzjoni fil-punt tal-ħin meta ġurdien jidħol f'kompartiment skur minn kompartiment ħafif (Fukushima et al., 2014). Biex nifhmu l-mekkaniżmu sottostanti għall-bidla tal-fażijiet tal-memorja mir-rikonsolidazzjoni għall-estinzjoni, aħna kkaratterizzajna l-fażijiet tal-memorja IA wara l-irkupru tal-memorja billi eżaminajna l-effetti tal-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini li hija meħtieġa għar-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni tal-memorja IA (Fukushima et al., 2014). Il-ġrieden tpoġġew l-ewwel fil-kompartiment tad-dawl. F'5 s wara li daħlu fil-kompartiment mudlam, ingħatat footshock elettriku qasir (taħriġ). Il-ġrieden reġgħu ġew esposti għall-kompartiment tad-dawl 24 siegħa wara t-taħriġ (sessjoni ta 'riattivazzjoni; Fig. 1A) u l-latenza crossover tagħhom biex jidħlu fil-kompartiment skur ġiet evalwata (Fig. 1B). Il-ġrieden ġew ritornati fil-gaġeġ tad-dar tagħhom immedjatament wara li daħlu fil-kompartiment skur mill-kompartiment tad-dawl (0-min mill-ġdid ta' espożizzjoni għall-kompartiment skur; fażi ta' konsolidazzjoni mill-ġdid) jew qagħdu fil-kompartiment skur għal 1, 3, jew 10 min mingħajr ma tirċievi footshock (fażi ta' estinzjoni; Fig. 1C–E). Immedjatament wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni, il-ġrieden irċevew injezzjoni sistemika ta' VEH jew l-inibitur tas-sintesi tal-proteini ANI. Fi 48 siegħa wara, il-latency crossover ġiet evalwata PR-LTM.

B'mod konsistenti ma 'l-istudju preċedenti tagħna (Fukushima et al., 2014), l-espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment tad-dawl (0 grupp min) ikkawża rikonsolidazzjoni u titjib tal-memorja IA. ANOVA f'żewġ direzzjonijiet żvelat effetti sinifikanti taż-żmien (F(1,24)=10.433, p=0.{{20}}036), droga (F(1) ,24)=23.197, p , 0.0001) u l-interazzjoni tal-mediċina tal-ħin (F(1,24)=25.022, p , 0.0001; Fig. 1B). It-test ta' Bonferroni post hoc u t-test paired wrew li l-gruppi VEH u ANI, wrew żdiedu jew naqsu b'mod sinifikanti, rispettivament, crossover latency fi PR-LTM meta mqabbel mas-sessjoni ta' riattivazzjoni (ps , 0.05; VEH, t (6) {{28 }} 5.134, p=0.0021, ANI, t(6)=4.804, p=0.003; Fig. 1B). Dawn l-osservazzjonijiet jindikaw li l-irkupru tal-memorja IA fil-kompartiment tad-dawl saħħaħ il-memorja, filwaqt li l-inibizzjoni tas-sinteżi tal-proteini ħarbat il-memorja rkuprata, u tikkonferma l-osservazzjoni preċedenti li l-irkupru tal-memorja IA ttejjeb il-memorja permezz ta 'rikonsolidazzjoni b'mod dipendenti fuq is-sinteżi tal-proteini.

B'kuntrast, l-espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment skur indotta estinzjoni fit-tul [ANOVA f'żewġ direzzjonijiet, ħin (Fig. 1C, F(1,28)=9.575, p=0.{ {50}}04; Fig. 1D, F(1,36)=11.699, p=0.0016), droga (Fig. 1C, F(1,28)=4.674, p=0.039; Fig. 1D, F(1,36)=12.285, p {{29 }}.0012), interazzjoni tal-mediċina tal-ħin (Fig. 1C, F(1,28)=7.916, p=0.009; Fig. 1D, F(1,36) {{41 }}.915, p=0.0079)], kif osservat qabel (Fukushima et al., 2014). Il-gruppi VEH li qagħdu fil-kompartiment mudlam għal 3 jew 10 min urew tnaqqis sinifikanti fil-cross over latency fi PR-LTM meta mqabbla mas-sessjoni ta’ riattivazzjoni, filwaqt li l-gruppi ANI wrew crossover latency komparabbli fi PR-LTM meta mqabbla mas-sessjoni ta’ riattivazzjoni u mal- Gruppi VEH (test ta' Bonferroni post hoc, ps , 0.05; test t paired, Fig. 1C, VEH, t(7)=4.976, p=0.0016, ANI, t(7) { {59}}.796, p. 0.05; Fig. 1D, VEH, t(9)=10.211, p, 0.0001, ANI, t (9)=1.02, p. 0.05 ). Dawn l-osservazzjonijiet jindikaw li l-esponiment mill-ġdid għall-kompartiment skur għal 3 jew 10 min intefa l-memorja IA u li l-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini imblukkat l-estinzjoni fit-tul. Għalhekk, l-irkupru tal-memorja IA fil-kompartiment skur jitfi l-memorja IA b'mod dipendenti mill-espressjoni tal-ġeni.

Importanti, il-grupp VEH wera cross over latency komparabbli f'PR-LTM meta mqabbel mas-sessjoni ta' riattivazzjoni u mal-grupp ANI meta qagħdu fil-kompartiment mudlam għal 1 min [two-way ANOVA, time (F(1,36) {{ 5}}.03, p. 0.05), droga (F(1,36)=0.019, p. 0.05), interazzjoni tal-mediċina tal-ħin (F(1,36)=0.011, p. 0.05); post hoc test Bonferroni, ps . 0.05; t-test imqabbad, VEH, t(9)=0.091, p. 0.05, ANI, t(9)=0.328, p. 0.05; Fig. 1E]. Dawn l-osservazzjonijiet jindikaw li l-grupp VEH la wera titjib u lanqas estinzjoni tal-memorja IA u li l-grupp ANI ma wera l-ebda tfixkil tal-memorja IA. Għalhekk, l-espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment skur għal 1 min imblukkat kemm it-titjib kif ukoll it-tfixkil indott mill-ANI tal-memorja IA riattivata, iżda mhux il-memorja IA estinta, li tissuġġerixxi li din l-espożizzjoni mill-ġdid 1-min tikkanċella l-induzzjoni tar-rikonsolidazzjoni , iżda mhix biżżejjed biex titfi l-memorja IA.

Fil-qosor, dawn ir-riżultati indikaw li l-espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment tad-dawl jinduċi l-fażi ta 'rikonsolidazzjoni, filwaqt li espożizzjoni mill-ġdid itwal għall-kompartiment skur (3 jew 10 min) tinduċi l-fażi ta' estinzjoni. Aktar importanti minn hekk, li toqgħod għal 1 min fil-kompartiment mudlam jinduċi l-fażi ta 'tranżizzjoni mir-rikonsolidazzjoni għall-estinzjoni, li, tinibixxi r-rikonsolidazzjoni tal-memorja tal-biża' mingħajr ma tinduċi estinzjoni.

Firem molekulari tal-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni, tranżizzjoni u estinzjoni fl-amigdala, l-ippokampus u l-mPFC wara l-irkupru tal-memorja IA

Ir-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni tal-memorja tal-biża' kuntestwali juru żidiet fil-fosforilazzjoni CREB f'S133, markatur tal-attivazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni meħtieġa għar-rikonsolidazzjoni u estinzjoni fit-tul, iżda juru dinamika distinta tal-fosforilazzjoni CREB (Mamiya et al., 2009). ). Interessanti, studji reċenti wrew li m'hemm l-ebda żieda fil-fosforilazzjoni ta 'ERK, regolatur upstream ta' CREB (Impey et al., 1998; Wu et al., 2001), fir-reġjun basolaterali tal-amigdala fit-tranżizzjoni mir-rikonsolidazzjoni. għall-estinzjoni ta 'memorja tal-biża' cued, għalkemm din il-fosforilazzjoni tiżdied fir-reġjun basolaterali meta memorja tal-biża 'kudjata tiġi kkonsolidata mill-ġdid u mitfija (Merlo et al., 2014, 2018). Studju ieħor indika li l-ERK tal-hippocampal huwa attivat biss meta l-memorja tal-biża' kuntestwali tintefa, iżda mhux ikkonsolidata mill-ġdid (Tronson et al., 2009). Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-fażijiet ta’ rikonsolidazzjoni, tranżizzjoni u estinzjoni juru firem molekulari u ċellulari distinti. Għalhekk, aħna kejlu u qabblu l-livelli ta 'pCREB u pERK fil-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni, tranżizzjoni u estinzjoni bl-użu ta 'immunoistokimika. Aħna wettaqna skedi sperimentali simili bħal fil-Figura 1B, D, E bl-użu ta 'erba' gruppi sperimentali. Il-ġrieden reġgħu ġew esposti għall-kompartiment tad-dawl f'24 siegħa wara t-taħriġ u mbagħad baqgħu fil-kompartiment skur [riattivazzjoni: 0 min fil-kompartiment skur, grupp ta 'rikonsolidazzjoni (Recon); 1 min, transizzjoni (Tran) grupp; 10 min, estinzjoni (Ext) grupp]. Grupp ieħor ta 'ġrieden ma ġiex ritornat lejn il-kompartiment tad-dawl/dlam (mhux riattivat, grupp NR). Aħna magħduda newroni pCREB-pożittivi (pCREB1), newroni pERK-pożittivi (pERK1), u newroni doppji pożittivi (pCREB1/pERK1) fl-amigdala, ippokampus, u mPFC fi 30 min wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni.

Amygdala (reġjun laterali) CREB ġie attivat fil-fażijiet ta 'estinzjoni u rikonsolidazzjoni, filwaqt li ERK ġie attivat biss fil-fażi ta' estinzjoni (Fig. 2A-C). ANOVA one-way żvelat effett sinifikanti tal-grupp (Fig. 2B, F(3,29)=14.85, p , 0.0001). Simili għal sejbiet preċedenti (Mamiya et al., 2009), it-test post hoc Newman-Keuls wera li l-gruppi Recon u Ext wrew b'mod sinifikanti aktar newroni pCREB1 mill-gruppi l-oħra (p, 0.05). Dawn l-osservazzjonijiet indikaw li simili għall-osservazzjonijiet fil-livelli ta 'mġieba (Fig. 1), l-espożizzjoni għall-kompartiment skur għal 1 min (fażi ta' tranżizzjoni) tikkanċella l-"tixgħel" ta 'fosforilazzjoni CREB li tiżdied fil-fażi ta' rikonsolidazzjoni. B'kuntrast, ġew osservati b'mod sinifikanti aktar newroni pERK1 fil-grupp Ext milli fil-gruppi l-oħra, għalkemm kien hemm ħafna inqas newroni pERK1 minn newroni pCREB1 fil-grupp Ext (F(3,29)=3.793, p { {23}}.0207; Fig. 2C).

B'mod konsistenti, ġew osservati ħafna aktar newroni pożittivi doppji (pCREB1/pERK1) fil-grupp Ext (F(3,29)=6.698, p=0.00 14; Fig. 2D), filwaqt li ħafna aktar newroni pCREB1/ pERK– (pCREB pożittiv wieħed) ġew osservati fil-gruppi Recon u Ext (F(3,29)=13.689, p , 0 .0001; Fig. 2E). Għalhekk, il-fażi ta 'rikonsolidazzjoni wriet biss popolazzjoni waħda ta' pCREB1/pERK– newroni. B'kuntrast, il-fażi ta 'estinzjoni wriet żewġ popolazzjonijiet ta' pCREB1/pERK– u pCREB1/pERK1 newroni, li jindika li ERK huwa attivat biss f'subsett ta 'newroni pCREB1. Importanti, riżultati simili ġew osservati fir-reġjun bażolaterali tal-amigdala (Fig. 2G, F(3,29)=13.042, p , 0.0001; Fig. 2H, F (3,29) {{32} }.824, p=0.0201; Fig. 2I, F(3,29)=12.633, p , 0.0001; Fig. 2J, F(3,29)=12 .505, p , 0.0001).

Attivazzjoni bifażika ta' ERK fil-fażi ta' estinzjoni ERK hija attivatur upstream ta' CREB u b'hekk, l-attivazzjoni ta' ERK hija meħtieġa għall-konsolidazzjoni u r-rikonsolidazzjoni tal-memorja tal-biża' (Schafe et al., 200{{31 }}; Duvarci et al., 2005). Madankollu, b'mod inkonsistenti, l-ebda attivazzjoni ERK ma ġiet osservata fl-amygdala, hippocampus, jew mPFC fil-fażi ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid meta pERK tkejjel fi 3 0 min wara s-sessjoni ta' riattivazzjoni (Figuri 2-4). Għalhekk, eżaminajna l-korsijiet tal-ħin tal-fosforilazzjoni ERK u CREB. Aħna wettaqna esperiment simili bħal fil-Figuri 2-4, ħlief li l-livelli pCREB u pERK tkejlu f'5, 15, u 30 min wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni (espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment skur għal {{ 66}}, 1, jew 10 min; Fig. 5A). B'mod konsistenti mad-dejta murija fil-Figuri 2-4, żidiet sinifikanti fin-newroni pCREB1 ġew osservati fi 30 min, iżda mhux f'5 min, wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni fir-Recon (amygdala, mPFC u hippocampus) u Ext (amygdala u mPFC) ) gruppi, iżda mhux il-grupp Tran (Fig. 5E, one-way ANOVA, amygdala, 5 min, F(3,23)=0.346, p. 0.05, 30 min, F(3,23)=15.272, p , 0.0001; mPFC, 5 min, F(3,23)=1.169, p. 0.05, 30 min, F(3,23)=32. 346, p , 0.0001;ippokampus, 5 min, F(3,23)=0.154, p. 0.05, 30 min, F (3,23)=16.197, p , 0.0001; test t mhux imqabbad, amigdala, rikonsolidazzjoni, 5 vs 30 min, t(12)=7.807, p , 0.0001, estinzjoni, 5 vs 30 min, t (12)=5.405, p=5 {73}}.0002;mPFC, rikonsolidazzjoni, 5 vs 30 min, t(12)=5.727, p , 0.0001, estinzjoni, 5 vs 30 min, t(12)=4.188 , p=0.0013;reġjun ippocampal CA1, rikonsolidazzjoni, 5 vs 30 min, t(12)=2.339, p=0.0374).

Interessanti, żidiet sinifikanti fin-newroni pERK1 ġew osservati fl-amygdala, mPFC u hippocampus tal-gruppi Recon, Tran, u Ext f'5 min wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni meta mqabbla mal-grupp NR (Fig. 5F, amygdala, F (3,23)=10.961, p=0.0{0{01; mPFC, F(3,23)=7.525, p { {13}}.0011;ippokampus, F(3,23)=6.924, p=0.0017). Dawn l-osservazzjonijiet indikaw li ERK jiġi attivat immedjatament wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni fil-fażijiet kollha tal-memorja. Madankollu, dawn iż-żidiet fin-numru ta 'newroni pERK1 reġgħu lura għal livelli bażali (komparabbli mal-grupp NR) fi 15-il minuta wara s-sessjoni ta' riattivazzjoni (Fig. 5F, amygdala, F (3,20)=2.676, p. 0.05; mPFC, F(3,23)=0.683, p. 0.05; hippocampus, F(3,20)=0.74, p. 0.05). Barra minn hekk, konsistenti mas-sejbiet murija fil-Figuri 2-4, ġew osservati b'mod sinifikanti aktar newroni pERK1 fl-amygdala, mPFC, u hippocampus fi 30 min wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni biss fil-grupp Ext (Fig. 5F, amygdala, F ( 3,23)=6.616, p=0.022; mPFC, F(3,23)=8.012, p=0.0008; hippocampus, F( 3,23)=6.206, p=0.003). Għalhekk, il-fażijiet ta’ rikonsolidazzjoni u tranżizzjoni juru attivazzjoni temporanja ta’ ERK biss fil-punt ta’ ħin bikri (5 min), filwaqt li l-fażi ta’ estinzjoni turi attivazzjoni bifażika ta’ ERK fil-punti ta’ ħin bikrin (5 min) u tard (30 min) wara r-riattivazzjoni. sessjoni. Dawn l-osservazzjonijiet indikaw li l-mekkaniżmi għar-regolamentazzjoni tal-attivazzjoni tal-ERK huma differenti fil-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni/tranżizzjoni u estinzjoni. B'mod kollettiv, l-osservazzjonijiet tagħna wrew li l-fażijiet ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid, tranżizzjoni u estinzjoni juru firem molekulari distinti.

Rwoli ta 'attivazzjoni ERK fil-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni u estinzjoni tal-memorja IA

Il-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni/tranżizzjoni u estinzjoni wrew attivazzjoni ERK monofasika u bifażika, rispettivament. Wara investigajna u qabblu r-rwoli ta 'attivazzjoni ta' ERK bikrija (5 min) u tard (30 min) fl-mPFC fil-fażijiet ta 'rikonsolidazzjoni u estinzjoni billi eżaminaw l-effetti ta' inibizzjoni ta 'ERK (Fig. 6).

Diskussjoni

F'dan l-istudju, investigajna l-mekkaniżmi għat-tranżizzjoni tal-memorja mill-fażijiet ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid għall-estinzjoni wara l-irkupru tal-memorja IA. L-ewwel kkaratterizzajna l-firem tal-imġieba tal-fażijiet tal-memorja IA wara l-irkupru. B'mod konsistenti mal-istudju preċedenti tagħna (Fukushima et al., 2014), rikonsolidazzjoni u estinzjoni kkaġunata mill-irkupru tal-memorja IA permezz ta' espożizzjoni mill-ġdid għad-dawl (0 min fil-kompartiment skur) u dlam ( 3 jew 10 min) kompartimenti, rispettivament. Interessanti, il-memorja IA la ġiet imsaħħa u lanqas mitfija u wriet reżistenza għall-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini meta l-ġrieden reġgħu ġew esposti għall-kompartiment skur għal 1 min biss. Għalhekk, dawn l-osservazzjonijiet jissuġġerixxu li espożizzjoni mill-ġdid 1-min għall-kompartiment skur tikkanċella l-induzzjoni tar-rikonsolidazzjoni, iżda hija insuffiċjenti biex titfi l-memorja IA. Barra minn hekk, sibna li ERK ġie attivat fl-amigdala, l-ippokampus u l-mPFC f'punt ta 'żmien bikri (5 min) wara espożizzjoni mill-ġdid għall-kompartiment skur għal 0, 1, jew 10 min. B'mod konsistenti, l-inibizzjoni ta 'ERK f'dawn ir-reġjuni tal-moħħ imblukkat ir-rikonsolidazzjoni / it-titjib u l-estinzjoni tal-memorja IA. L-aktar importanti, l-inibizzjoni tal-ERK fl-amigdala, l-ippokampus, u l-mPFC wara espożizzjoni mill-ġdid 1-min għall-kompartiment skur iddiżinibixxa t-titjib medjat mir-rikonsolidazzjoni tal-memorja IA, li tissuġġerixxi li l-attivazzjoni tal-ERK wara espożizzjonijiet mill-ġdid fil-qosor (1 min) għall-kompartiment skur huwa meħtieġ għall-inibizzjoni tar-rikonsolidazzjoni tal-memorja IA. Bil-maqlub, espożizzjoni mill-ġdid ta' 1-min għall-kompartiment skur kienet insuffiċjenti biex titfi l-memorja IA, għalkemm espożizzjoni mill-ġdid estiża għall-kompartiment skur (3 jew 10 min) tefgħet din il-memorja. Għalhekk, ir-riżultati tagħna jissuġġerixxu li espożizzjoni mill-ġdid ta' 1-min għall-kompartiment skur jinduċi proċess ta' transizzjoni tal-memorja li tikkanċella r-rikonsolidazzjoni/titjib iżda ma tagħtix bidu għat-tagħlim tal-estinzjoni. B'mod kollettiv, nissuġġerixxu li l-proċess ta 'tranżizzjoni tal-memorja jikkontribwixxi għall-bidla tal-fażijiet tal-memorja minn rikonsolidazzjoni għal estinzjoni permezz ta' prevenzjoni ta 'rikonsolidazzjoni medjata mill-ERK.

Simili għall-osservazzjonijiet attwali tagħna, studju reċenti bl-użu ta 'kondizzjonament tal-biża' tas-smigħ wera li preżentazzjonijiet CS singolu (1) jew fit-tul (10) jinduċu rikonsolidazzjoni u estinzjoni tal-memorja, rispettivament, permezz ta 'żieda fil-livelli ta' pERK fir-reġjun basolaterali tal-amigdala. B'kuntrast, intermedji (4-7) preżentazzjonijiet CS ma jbiddlux livelli pERK fir-reġjun basolaterali ta 'l-amigdala. Importanti, l-inibizzjoni ta 'ERK fil-preżentazzjonijiet intermedji tas-CS ma affettwax il-memorja tal-biża'. Dan l-istudju ssuġġerixxa li hemm tranżizzjoni tal-fażi tal-memorja minn rikonsolidazzjoni għall-estinzjoni wara l-irkupru tal-memorja tal-biża '(Merlo et al., 2018). Fl-istudju preżenti, estendejna din is-sejba u ssuġġeriejna li l-fażi ta 'tranżizzjoni taqleb b'mod attiv il-fażijiet tal-memorja minn rikonsolidazzjoni għal estinzjoni permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija tat-trasduzzjoni tas-sinjali ERK. B'kuntrast ma 'sejbiet preċedenti (Merlo et al., 2018), sibna li l-fażi ta' transizzjoni tinvolvi fosforilazzjoni ERK fl-amigdala, ippokampus, u mPFC. Dawn id-diskrepanzi forsi minħabba d-differenza tal-punti tal-ħin li jeżaminaw il-fosforilazzjoni ERK; l-istudju preċedenti kejjel il-livelli ta 'pERK f';12 min wara l-preżentazzjoni CS (Merlo et al., 2018), filwaqt li l-istudju tagħna wera li l-livelli ta' pERK miżjuda reġgħu lura għal-livell bażali f'madwar dan il-punt ta 'żmien (15 min wara l-espożizzjoni mill-ġdid). Barra minn hekk, huwa importanti li wieħed jinnota li l-kompitu IA jippermetti l-osservazzjoni tat-titjib tal-memorja IA permezz ta 'konsolidazzjoni mill-ġdid, u b'hekk iwassal għas-sejba tagħna li l-inibizzjoni ta' ERK fil-fażi ta 'tranżizzjoni jiddisinibixxi t-titjib tal-memorja IA.

Studji preċedenti wrew li l-fosforilazzjoni tal-ERK tiżdied fir-reġjun bażolaterali tal-amigdala f'20-60 min wara t-tagħlim tal-estinzjoni tal-memorja tal-biża' kkurata (Herry et al., 2006; Merlo et al., 2014, 2018), filwaqt li l-hippocampus juri din l-attivazzjoni f'siegħa wara t-tagħlim tal-estinzjoni tal-memorja tal-biża' kuntestwali (Fischer et al., 2007; Tronson et al., 2009). Fl-istudju preżenti, ksibna osservazzjonijiet simili li pERK jiżdied fi 30 min wara s-sessjoni ta 'riattivazzjoni fil-fażi ta' estinzjoni. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-fosforilazzjoni ERK hija firma molekulari komuni tal-fażi ta 'estinzjoni tard (20-60 min).

Barra minn hekk, osservajna li l-attivazzjoni ERK sseħħ b'mod bifażiku f'punti ta 'żmien bikrin u tard (5 u 30 min) wara s-sessjoni ta' riattivazzjoni fil-fażi ta 'estinzjoni, filwaqt li din l-attivazzjoni sseħħ b'mod monofasiku fil-punt ta' żmien bikri fil-fażi ta 'rikonsolidazzjoni (Fig. 5) . B'mod konsistenti, l-inibizzjoni tal-ERK fir-reġjuni tal-moħħ f'dawn il-punti ta 'żmien tal-fażijiet ta' rikonsolidazzjoni u estinzjoni imblukkata rikonsolidazzjoni / titjib u estinzjoni fit-tul, rispettivament (Fig. 6A, C-H). Dawn l-osservazzjonijiet jissuġġerixxu li l-attivazzjoni ERK monofasika u bifażika hija meħtieġa għat-titjib medjat mir-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni tal-memorja IA, rispettivament. Huwa importanti li wieħed jinnota li ERK jiffunzjona bħala regolatur upstream tal-fosforilazzjoni CREB. Għalhekk, l-attivazzjoni temporanja ta 'ERK fil-fażi tal-memorja bikrija tista', għall-inqas parzjalment, tikkontribwixxi għal din il-fosforilazzjoni ta 'CREB, li jattiva l-espressjoni ta' ġeni meħtieġa għal rikonsolidazzjoni u estinzjoni fit-tul.

Simili għas-sejbiet preċedenti tagħna bl-użu ta’ kondizzjonament tal-biża’ kuntestwali (Mamiya et al., 2009), CREB ġie attivat fil-fażijiet tal-memorja ta’ rikonsolidazzjoni (amygdala/hippocampus/mPFC) u estinzjoni (amygdala/mPFC), filwaqt li ERK ġie attivat biss fil-fażi ta’ estinzjoni. fi 30 minuta wara s-sessjoni ta’ riattivazzjoni. B'mod konsistenti, popolazzjoni waħda biss ta 'pCREB1/pERK– newroni kienu osservati fil-fażi ta' rikonsolidazzjoni, filwaqt li popolazzjonijiet distinti newroni kienu osservati fil-fażi ta 'estinzjoni: pCREB1/pERK– u pCREB1/pERK1 newroni fl-amigdala (Fig. 2); pCREB– /pERK1 newroni fl-ippokampus (Fig. 3); u pCREB1/pERK–, pCREB– /pERK1, u pCREB1/pERK1 newroni fl-mPFC (Fig. 4). Dawn l-osservazzjonijiet, speċjalment l-osservazzjoni kuntrastanti ta 'pCREB–/ pERK1 u pCREB1/pERK– newroni, jissuġġerixxu li l-attivazzjoni ta' CREB u ERK hija regolata b'mod differenti f'kull żona tal-moħħ meta l-memorja tintefa u li l-attivazzjoni tal-fażi tard ta 'ERK għandha tilgħab speċifika u distinta. rwoli għall-estinzjoni tal-memorja tal-biża 'meta mqabbla ma' proċessi oħra tal-memorja bħall-konsolidazzjoni u r-rikonsolidazzjoni kif diskuss hawn taħt. Interessanti, osservajna li n-newroni pERK1 kienu aktar abbundanti fl-mPFC meta mqabbla mal-ippokampus u l-amigdala, peress li l-mPFC wera proporzjon ogħla ta 'newroni pERK1 (fażi ta' estinzjoni) u newroni pCREB1 (fażi ta 'rikonsolidazzjoni) meta mqabbla mal-ippokampus u l-amigdala, li jissuġġerixxi li l-attivazzjoni ta 'ERK fl-mPFC għandha rwol aktar speċifiku fl-estinzjoni tal-memorja.

Għadu mhux ċar jekk l-istess jew popolazzjonijiet differenti ta 'newroni humiex attivati ​​fil-fażijiet tal-memorja ta' rikonsolidazzjoni, tranżizzjoni u estinzjoni. Studju preċedenti identifika l-attivazzjoni ta '"newroni tal-biża" u "newroni ta' estinzjoni" fl-amigdala meta l-memorja tal-biża 'taqsam tiġi attivata mill-ġdid jew mitfija, rispettivament (Herry et al., 2008). Għalhekk, huwa possibbli li ERK u CREB huma attivati ​​fil-popolazzjonijiet differenti ta 'newroni bi profili temporali differenti (jiġifieri, "newroni ta' rikonsolidazzjoni" u newroni ta 'estinzjoni). Kif diskuss hawn fuq, in-newroni pCREB1, inklużi n-newroni pCREB1/pERK1, jistgħu jirregolaw ir-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni fit-tul tal-memorja IA permezz tal-attivazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni bħala newroni ta 'rikonsolidazzjoni u estinzjoni, rispettivament. Bil-maqlub, l-attivazzjoni ERK fin-newroni pCREB– / pERK1 tista 'tikkontribwixxi għall-kanċellazzjoni ta' attivazzjoni traskrizzjoni medjata minn CREB li tkun meħtieġa għar-rikonsolidazzjoni peress li din l-attivazzjoni ERK hija osservata speċifikament fil-fażi ta 'estinzjoni tard; ERK attivat fin-newroni tar-rikonsolidazzjoni biex tikkanċella l-attivazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni fil-fażi ta 'estinzjoni. Interessanti, studju preċedenti wera li l-attivazzjoni tal-ERK tal-hippocampal timblokka l-induzzjoni ta 'c-fos meta tintefa' l-memorja tal-biża' kuntestwali (Guedea et al., 2011), u b'hekk tqajjem il-possibbiltà li din l-attivazzjoni tal-ERK tantagonizza l-mogħdija tas-sinjalazzjoni CREB. Huwa importanti li jiġu identifikati l-popolazzjonijiet newronali li jirregolaw il-konsolidazzjoni mill-ġdid, it-tranżizzjoni u l-estinzjoni u li jiġu investigati l-firem molekulari u s-sinifikat funzjonali ta 'dawk in-newroni. Barra minn hekk, l-interazzjonijiet fost popolazzjonijiet newrali identifikati f'dan l-istudju għadhom mhux magħrufa. Huwa possibbli li "newroni ta 'estinzjoni (tranżizzjoni)" jimmodulaw il-funzjoni tan-newroni ta' rikonsolidazzjoni biex jikkanċellaw il-prevenzjoni tar-rikonsolidazzjoni permezz ta 'interazzjonijiet bejniethom (Eisenberg et al., 2003; Merlo et al., 2014). Għalhekk, huwa importanti wkoll li jiġu eżaminati dawn l-interazzjonijiet fi u fost l-amygdala, mPFC, u l-ippokampus.

Preċedentement, urejna li l-ippokampus ma juri l-ebda bidla fil-fosforilazzjoni CREB u l-espressjoni tal-Ark wara t-tagħlim tal-estinzjoni tal-biża kuntestwali, u b'mod konsistenti, l-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini fl-ippokampus fil-fażi ta 'estinzjoni tonqos milli timblokka estinzjoni fit-tul (Mamiya et al. , 2009). Dawn l-osservazzjonijiet qajmu l-possibbiltà li l-hippocampus ma jkunx meħtieġ għal estinzjoni fit-tul. Madankollu, urejna li ERK huwa attivat fl-ippokampus wara t-tagħlim tal-estinzjoni tal-memorja IA, u b'mod konsistenti, l-imblukkar tal-attivazzjoni tal-ERK fl-ippokampus ifixkel estinzjoni fit-tul. Għalhekk, l-osservazzjonijiet attwali tagħna jindikaw rwoli essenzjali għall-ippokampus fl-estinzjoni tal-memorja. Meħuda flimkien mas-sejbiet preċedenti tagħna, nissuġġerixxu li l-ippokampus huwa meħtieġ għall-estinzjoni tal-memorja iżda mhux għal proċess bħal konsolidazzjoni biex jistabbilizza "memorja ta 'estinzjoni" permezz tal-attivazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni.