Acteoside Itejjeb l-Osteoporożi Fil-ġrieden Billi Jirregola l-Formazzjoni tal-Osteoblasti U Jinibixxi r-Risorbiment tal-Għadam medjat mill-Osteoclast
Sep 04, 2026
Astratt
Għan:
Biex tinvestiga l-effetti ta 'acteoside fuq l-attività ta' osteoblast u osteoclast fil-ġrieden ovariectomized (OVX).
Metodi:
Mudell ta' ġrieden ta' l-osteoporożi wara l-menopawża ġie stabbilit permezz ta' ovariectomy (OVX). Ħamsin ġrieden C57BL/6 ġew maqsuma b'mod każwali f'ħames gruppi: grupp imħaddem b'mod fint, grupp mudell, grupp ta 'estroġenu, grupp ta' acteoside b'doża baxxa, u grupp ta 'acteoside b'doża għolja, b'10 ġrieden f'kull grupp.
Il-piż tal-ġisem ġie rreġistrat. Analiżi istomorfometrika tal-għadam saret bl-użu ta 'tomografija mikro-kompjuterizzata (mikro-CT). Il-livelli tas-serum ta' estradiol (E2), CTX-1, PINP, u ALP ġew imkejla bl-użu ta' kits ta' analiżi korrispondenti. Il-piż tal-utru ġie rreġistrat. It-tbajja’ TRAP intużat biex jiġi osservat in-numru ta’ osteoklasti. L-immunoistokimika ntużat biex tiskopri l-espressjoni tal-proteina Runx2. Intużaw analiżi kwantitattiva RT-PCR (qRT-PCR) u Western blot f'ħin reali biex jevalwaw l-espressjoni ta 'markaturi relatati mal-formazzjoni tal-għadam u r-riassorbiment tal-għadam.
Riżultati:
Meta mqabbla mal-grupp imħaddma b'mod falz, ġrieden fil-grupp mudell urew żieda sinifikanti fil-piż tal-ġisem, naqsu b'mod sinifikanti l-piż tal-utru u l-livelli tas-serum E2, PINP, u ALP, u żdiedu b'mod sinifikanti l-livelli tas-serum CTX-1. Parametri tal-għadam inklużi BMD, BV/TV, Tb.N, Tb.Th, PINP, ALP, Runx2, OCN, u Col1 tnaqqsu b'mod sinifikanti, filwaqt li Tb.Sp żdied b'mod sinifikanti. Fit-tessut femorali, l-espressjoni tal-mRNA ALP, OCN u Col1 naqset b'mod sinifikanti, filwaqt li l-espressjoni tal-mRNA NFATc1 u c-fos, kif ukoll l-espressjoni tal-proteini Runx2, p-IκB u p-Akt, żdiedu b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05). The number of osteoclasts was also increased.
Meta mqabbla mal-grupp mudell, il-gruppi kollha ta 'trattament urew tnaqqis sinifikanti fil-piż tal-ġisem, żdiedu b'mod sinifikanti l-livelli ta' PINP u ALP fis-serum, u naqsu b'mod sinifikanti l-livelli tas-serum CTX-1. BMD, BV/TV, Tb.N, Tb.Th, PINP, ALP, Runx2, OCN, u Col1 żdiedu b'mod sinifikanti, filwaqt li Tb.Sp naqas b'mod sinifikanti. Fit-tessut femorali, l-espressjoni tal-mRNA ALP, OCN u Col1 żdiedet b'mod sinifikanti, filwaqt li l-espressjoni tal-mRNA NFATc1 u c-fos, kif ukoll l-espressjoni tal-proteini Runx2, p-IκB u p-Akt, naqsu b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05). The number of osteoclasts was reduced.
Konklużjoni:
Acteoside jeżerċita effett regolatorju doppju fuq it-tibdil tal-għadam fil-ġrieden OVX. Jista 'jtejjeb it-telf tal-għadam ikkawżat mill-OVX billi jinibixxi r-riassorbiment tal-għadam medjat mill-osteoclast permezz ta' soppressjoni tal-mogħdija NF-κB/Akt/NFATc1/c-fos, filwaqt li jippromwovi l-formazzjoni tal-għadam immexxija mill-osteoblasti permezz tal-attivazzjoni tal-assi Runx2/OCN/Col1.
Kliem ewlieni:
Acteoside; osteoporożi wara l-menopawża; osteoblasts; osteoklasti
X'inhi l-osteoporożi?
L-osteoporożi (OP) hija marda skeletrika komuni u spiss siekta kkaratterizzata minn densità minerali tal-għadam mnaqqsa, deterjorazzjoni tal-mikrostruttura tal-għadam, fraġilità akbar tal-għadam u riskju ogħla ta 'ksur. Globalment, madwar 18.3% tal-popolazzjoni hija affettwata, b'nisa wara l-menopawsa huma speċjalment vulnerabbli. Din il-kundizzjoni hija magħrufa bħala osteoporożi postmenopawża (PMOP) [1].
L-estroġenu għandu rwol regolatorju ewlieni fit-tibdil tal-għadam permezz ta 'mekkaniżmi multipli. Waqt it-tibdil tal-għadam, l-osteoclasts u l-osteoblasts iżommu bilanċ dinamiku bejn l-assorbiment mill-ġdid tal-għadam u l-formazzjoni tal-għadam. Meta l-attività tal-osteoblast tonqos u/jew l-attività tal-osteoclast issir eċċessiva, dan il-bilanċ jiġi mfixkel, li jwassal għal telf serju tal-matriċi tal-għadam [2].
Għalhekk, ir-regolazzjoni tal-funzjoni u l-formazzjoni ta 'osteoblasts u osteoclasts tista' tkun strateġija effettiva għat-trattament ta 'osteoporożi relatata ma' defiċjenza ta 'estroġenu.
Għaliex Ħares lejn Komposti Veġetali għall-Osteoporożi?
Medikazzjonijiet prinċipali kurrenti għall-osteoporożi jinkludu bisfosfonati, teriparatide, raloxifene, u modulaturi selettivi tar-riċetturi tal-estroġenu. Dawn il-mediċini jistgħu jkunu effettivi, iżda jistgħu wkoll jikkawżaw effetti avversi bħal skumdità gastrointestinali u, f'każijiet rari, osteonekrożi tax-xedaq. Dan it-tħassib jista' jillimita l-użu fit-tul.
F'dawn l-aħħar snin, attenzjoni dejjem akbar ġiet diretta lejn il-mediċina tal-ħxejjex tradizzjonali għall-appoġġ tas-saħħa tal-għadam, speċjalment fl-osteoporożi wara l-menopawża.
L-għerq ta’ Rehmannia, herb tradizzjonali Ċiniża, hija magħrufa biex iżżomm il-kliewi u tippromwovi ċ-ċirkolazzjoni tad-demm. Ħafna drabi jintuża f'formuli erbali għall-osteoporożi [3]. Diversi studji kliniċi rrappurtaw li formuli veġetali Ċiniżi li fihom Rehmannia jistgħu jgħinu biex itejbu d-densità minerali tal-għadam, itaffu l-uġigħ, u jtejbu s-sintomi kliniċi f'pazjenti bl-osteoporożi [4].
Acteoside huwa phenylethanoid glycoside li jinħall fl-ilma misjub f'Rehmannia, Cistanche, żerriegħa Plantago, u pjanti mediċinali oħra. Ġie rrappurtat li għandu attivitajiet antiossidanti, anti-infjammatorji, antidijabetiċi u li jippromwovu l-formazzjoni tal-għadam [5].
Studju bbażat fuq reviżjoni sistematika u tħaffir tad-dejta ta 'databases multipli issuġġerixxa li l-acteoside jista' jkun wieħed mill-komponenti attivi ewlenin fil-formuli tal-ħxejjex Ċiniżi għall-osteoporożi ta 'wara l-menopawża [6]. Studji farmakoloġiċi tan-netwerk indikaw ukoll li l-acteoside jista 'jkun ingredjent attiv ewlieni f'formuli tal-ħxejjex bħal Qigu Capsule u Zuogui/Yougui Pills għat-trattament tal-osteoporożi ta' wara l-menopawża [7,8].
Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-acteoside jista 'jkun kompost naturali promettenti għas-saħħa tal-għadam. Madankollu, il-mekkaniżmu preċiż ta' azzjoni tiegħu għadu ma ġiex iċċarat għal kollox.
Dan l-istudju kien iddisinjat biex jinvestiga l-effetti tal-acteoside fuq l-attività tal-osteoblast u l-osteoclast f'mudell tal-ġurdien ovariectomized, bil-għan li jipprovdi bażi xjentifika għal aktar żvilupp tal-acteoside fir-riċerka relatata mal-osteoporożi.
1. Materjali u Strumenti
1.1 Annimali Sperimentali
Ħamsin ġrieden femminili C57BL/6 ta 'grad SPF ta' 6 ġimgħat inxtraw miċ-Ċentru Sperimentali tal-Annimali Hebei, numru tal-liċenzja SCXK (Hebei) 2022-001. Il-ġrieden kienu jiżnu 20-23 g.
Il-ġrieden kollha nżammu taħt ċiklu ta 'dawl/dlam ta' 12-il siegħa, b'temperatura tal-kamra kkontrollata f'22±3∘C22 \\pm 3^\\circ C22±3∘C, umdità f'55±5%55 \\pm 5\\%55±5%, u ikel u ilma adegwati pprovduti. Wara ġimgħa ta 'tmigħ adattiv, l-esperiment sar.
1.2 Drogi u Reaġenti
Acteoside, b'purità ta '98% u numru tal-lott CFN97048, inxtara minn Wuhan ChemFaces.
Pilloli ta 'Valerat ta' Estradiol, speċifikazzjoni 1 mg × 21 pilloli, inxtraw minn Bayer Healthcare Co., Ltd., Guangzhou.
Estradiol tas-serum tal-ġrieden (E2), alkaline phosphatase (ALP), telopeptide C-terminal cross-linked (CTX-1) tal-kollaġen tat-tip I (CTX-1), u kits tal-assaġġ tal-procollagen tip I N-terminal propeptide (PINP) inxtraw minn Beyotime Biotechnology, Shanghai.
RIPA lysis buffer inkiseb minn Sigma, l-Istati Uniti. Il-Bio-Rad DC Protein Assay Kit inkiseb minn Bio-Rad Laboratories, l-Istati Uniti. Antikorpi anti-phospho-Akt, anti-Akt, anti-phospho-IκB, u anti-IκB inxtraw minn Cell Signaling Technology, l-Istati Uniti. Fattur ta 'traskrizzjoni 2 (Runx2) relatat ma' Anti-Runt inxtara minn Santa Cruz Biotechnology, l-Istati Uniti. Il-kit tat-tbajja’ TRAP inxtara minn Sigma, l-Istati Uniti. Ir-reaġent TRIzol u RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit inxtraw minn Thermo Fisher Scientific, l-Istati Uniti.
1.3 Strumenti Ewlenin
L-istrumenti ewlenin użati kienu jinkludu:
SKYSCAN 1276 skaner tat-tomografija mikro-kompjuterizzata, Bruker Technology, Beijing
SpectraMax M microplate reader, Apparat Molekulari, Shanghai
FA2004N bilanċ analitiku elettroniku, Sailun Instruments, Beijing
WMP-6105 mikroskopju ottiku, Wumo Optical Instruments, Shanghai
Sistema PCR kwantitattiva f'ħin reali VeritiPro u apparat tal-elettroforeżi PowerEase, Thermo Fisher Scientific, Shanghai
2. Metodi
2.1 Stabbiliment Mudell u Raggruppament
Il-ġrieden C57BL/6 ġew maqsuma b'mod każwali f'ħames gruppi:
Grupp imħaddem minn sham
Grupp mudell
Grupp ta' estroġenu, 1 mg/kg1 \\text{ mg/kg}1 mg/kg
Grupp ta' acteoside b'doża baxxa, 50 mg/kg50 \\text{ mg/kg}50 mg/kg
Grupp ta' acteoside b'doża għolja, 150 mg/kg150 \\text{ mg/kg}150 mg/kg
Kull grupp kien fih 10 ġrieden.
L-annimali kollha ġew anestetizzati b'2% sodium pentobarbital. Saret inċiżjoni żgħira biex tikxef l-ovarji. L-ovarji ġew lokalizzati u mneħħija bil-mod biex jiġi stabbilit il-mudell OVX. Fil-grupp imħaddem b'mod simulat, tneħħa biss it-tessut tax-xaħam ħdejn l-ovarji.
Wara l-kirurġija, il-ġrieden kollha rċevew peniċillina ġol-muskoli f'50,000 U / jum għal 3 ijiem konsekuttivi.
Wara l-kirurġija:
Il-grupp tal-estroġenu rċieva estradiol valerate f'1 mg/kg1 \\text{ mg/kg}1 mg/kg b'gavage darba kuljum.
Il-gruppi ta' acteoside b'doża baxxa u għolja rċevew acteoside permezz ta' gavage darba kuljum.
Il-gruppi mħaddma b'mod falz u mudell irċevew ilma purifikat f'10 mg/kg10 \\text{ mg/kg}10 mg/kg bil-gavage.
Ġrieden ġew sagrifikati 4 ġimgħat wara l-kirurġija. Inġabru kampjuni tat-tessut femorali u tad-demm. Femuri ġew iffissati f'4% paraformaldehyde għal 48 siegħa u evalwati bl-użu ta 'mikro-CT.
2.2 Sejbien ta 'Mikro-CT
Il-wirk tax-xellug ta 'kull ġurdien ġie skennjat bl-użu ta' mikro-CT b'riżoluzzjoni għolja. Il-parametri tal-iskannjar kienu:
Vultaġġ: 50 kV
Kurrent: 55 μA
Riżoluzzjoni iżotropika: 6 μm
L-iskannjar femorali sar f'2 mm prossimali mal-pjanċa tat-tkabbir, b'720 sezzjoni skennjati kull darba.
Id-dejta tal-mikro-CT ġiet analizzata bl-użu tas-softwer INFINITT-Xelis. Il-parametri strutturali evalwati kienu jinkludu:
Densità minerali tal-għadam (BMD)
Volum tal-għadam/volum totali (BV/TV)
Ħxuna Trabekulari (Tb.Th)
Separazzjoni trabekulari (Tb.Sp)
Numru Trabekulari (Tb.N)
2.3 Indikaturi Bijokimiċi tad-Demm
Inġabru kampjuni tad-demm u ġew ċentrifugati f'1,300 r/min għal 15-il minuta f'4∘C4^\\circ C4∘C. Intużaw kits ELISA biex ikejlu l-livelli fis-serum ta’:
CTX-1, markatur tar-riassorbiment tal-għadam
PINP, markatur tal-formazzjoni tal-għadam
ALP, markatur tal-formazzjoni tal-għadam
2.4 Tbajja tan-NASSA
Wara l-iffissar, il-wirk tal-ġrieden ġew dekalċifikati f'EDTA għal 10 ijiem. Imbagħad ġew deidrati, inkorporati fil-paraffin, u ppreparati f'sezzjonijiet ta '6 μm.
Is-sezzjonijiet kienu soġġetti għal dewaxing tal-xylene, riidratazzjoni ta 'l-etanol, u tbajja' TRAP. Sussegwentement, is-sezzjonijiet ġew deidratati, ikklerjati, u mmuntati.
2.5 Tbajja 'Immunohistochemistry (IHC).
Għall-immunoistokimika Runx2, sezzjonijiet ta '5 μm inqatgħu bl-użu ta' mikrotomu, imbagħad dewaxed u idratati.
Peroxidase endoġenu ġie mblukkat b'0.3% idroġenu perossidu f'PBS għal 30 minuta.
Biex titnaqqas it-tbajja' mhux speċifika, is-sezzjonijiet ġew inkubati għal siegħa f'PBS li kien fih 10% serum normali taż-żiemel u 0.1% Triton X-100.
Is-sezzjonijiet ġew inkubati matul il-lejl f'4∘C4^\\circ C4∘C b'antikorp primarju anti-Runx2 f'dilwizzjoni ta '1:1,000.
Sussegwentement, is-sezzjonijiet ġew maħsula b'PBS u inkubati b'IgG anti-mogħoż tal-fenek bijotinilat f'dilwizzjoni ta '1:200 għal sagħtejn, segwit minn inkubazzjoni b'kumpless avidin-biotin-peroxidase għal siegħa.
L-iżvilupp tal-kulur ta 'l-antiġenu sar bl-użu ta' soluzzjoni ta '3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride li fiha 0.003% perossidu ta' l-idroġenu. Is-soluzzjoni ta 'Hematoxylin intużat għall-countertein.
2.6 RT-PCR kwantitattiv f'ħin reali (qRT-PCR)
L-RNA ġie estratt bl-użu ta 'reaġent TRIzol. L-ammont ta 'RNA f'kull kampjun kien normalizzat għal 1 ug għas-sintesi ta' cDNA.
cDNA ġie sintetizzat bl-użu tar-RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit.
qRT-PCR twettqet bl-użu tal-Exicycler-96 ċiklu termali kwantitattiv f'ħin reali.
Il-parametri tal-amplifikazzjoni kienu:
Denaturazzjoni inizjali f'95∘C95^\\circ C95∘C għal 5 minuti
40 ċiklu ta' PCR fi tliet stadji:
Denaturazzjoni f'95∘C95^\\circ C95∘C għal minuta
Ittemprar f'60∘C60^\\circ C60∘C għal 30 sekonda
Estensjoni finali f'72∘C72^\\circ C72∘C għal minuta
Id-dejta ġiet normalizzata bl-użu ta' GAPDH u evalwata bħala bidliet medji ta' darbiet. L-espressjoni tal-ġeni relattiva ġiet ikkalkulata bl-użu tal-metodu 2−ΔΔCt2^{-\\Delta\\Delta Ct}2−ΔΔCt.
2.7 Analiżi Western Blot
Iċ-ċelloli ġew lysed bl-użu ta ' RIPA lysis buffer li kien fih inibituri tal-protease u inibituri tal-phosphatase I u II.
Il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet iddeterminata bl-użu tal-Bio-Rad DC Protein Assay Kit.
Ammonti ugwali ta 'proteina, 20ug20 \\mu g20ug għal kull korsija, ġew mgħobbija fuq ġels ta' elettroforesi tal-ġell ta '10% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) u trasferiti għal membrani tal-fluworidu tal-poliviniliden Immobilon-P.
Il-membrani ġew imblukkati b'5% ħalib xkumat għal siegħa u mbagħad inkubati matul il-lejl f'4∘C4^\\circ C4∘C b'antikorpi primarji.
Wara li nħaslu tliet darbiet b'salina buffered Tris li fiha 0.1% Tween-20 (TBST), membrani ġew inkubati b'antikorp sekondarju IgG kontra l-ġurdien jew kontra l-fenek konjugat bil-perossidasi tal-horseradish f'dilwizzjoni ta '1:3,000 għal siegħa.
Proteini ġew viżwalizzati permezz ta 'kimiluminixxenza bl-użu ta' kit ECL.
2.8 Analiżi Statistika
It-testijiet sperimentali kollha saru mill-inqas tliet darbiet.
Twettqu paraguni fost gruppi multipli bl-użu ta 'analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda. Paraguni f'pari bejn il-gruppi saru bl-użu tat-test ta' tqabbil multiplu ta' Tukey.
Is-softwer SPSS 14.0 intuża għall-analiżi statistika. Valur ta' P<0.05P < 0.05P<0.05 was considered statistically significant.
3. Riżultati
3.1 Effetti ta' Acteoside fuq il-Livell E2 tas-Serum, il-Piż tal-Utru, il-Piż tal-Ġisem u l-Indiċi tal-Utru fil-Ġrieden Osteoporotiċi OVX
Kif muri fil-Figura 1, meta mqabbla mal-grupp imħaddem b'mod falz, il-ġrieden fil-grupp mudell kellhom livelli ta' E2 fis-serum, piż tal-utru u indiċi tal-utru b'mod sinifikanti aktar baxxi, filwaqt li l-piż tal-ġisem żdied b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Meta mqabbel mal-grupp mudell, il-ġrieden fil-gruppi ta 'trattament kollha wrew piż tal-ġisem imnaqqas b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Figura 1. Effetti tal-acteoside fuq il-livell tas-serum E₂, il-piż tal-utru, il-piż tal-ġisem, u l-indiċi tal-utru fil-ġrieden osteoporotiċi OVX
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Nota:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0.05 vs grupp mudell;
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.
3.2 Effetti ta' Acteoside fuq Parametri istomorfometriċi ta' l-għadam fil-ġrieden osteoporotiċi OVX
Kif muri fil-Figura 2, meta mqabbel mal-grupp imħaddem b'mod falz, il-ġrieden fil-grupp mudell wrew tnaqqis sinifikanti fil-BMD, BV/TV, Tb.N, u Tb.Th, filwaqt li Tb.Sp żdied b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Meta mqabbel mal-grupp mudell, il-gruppi ta 'trattament kollha wrew żieda sinifikanti fil-BMD, BV/TV, Tb.N, u Tb.Th, filwaqt li Tb.Sp naqas b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Figura 2. Effetti tal-acteoside fuq il-parametri istomorfometriċi tal-għadam fil-ġrieden osteoporotiċi OVX
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Nota:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0.05 vs grupp mudell;
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.
3.3 Effetti ta' Acteoside fuq Indikaturi Relatati mal-Metaboliżmu tal-Għadam fis-Serum fil-Ġrieden Osteoporotiċi OVX
Kif muri fil-Figura 3, meta mqabbel mal-grupp imħaddem b'mod falz, il-ġrieden fil-grupp tal-mudell urew tnaqqis sinifikanti fil-livelli tas-serum PINP u ALP, filwaqt li l-livelli CTX-1 żdiedu b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Meta mqabbla mal-grupp mudell, il-gruppi kollha ta 'trattament urew żieda sinifikanti fil-livelli tas-serum PINP u ALP, filwaqt li l-livelli ta' CTX-1 naqsu b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Figura 3. Effetti tal-acteoside fuq indikaturi relatati mal-metaboliżmu tal-għadam fis-serum fil-ġrieden osteoporotiċi OVX
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Nota:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0.05 vs grupp mudell;
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.
Figura 4. Effetti ta 'acteoside fuq in-numru ta' osteoklasti fil-wirk ta 'ġrieden osteoporotiċi OVX (tbajja' TRAP)
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Figura 5. Effetti ta 'acteoside fuq l-espressjoni tal-proteina Runx2 fit-tessut femorali ta' ġrieden osteoporotiċi OVX (IHC, × 400)
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Figura 6. Effetti tal-acteoside fuq l-espressjoni tal-mRNA ALP, OCN, Col1, NFATc1 u c-fos fit-tessut femorali tal-ġrieden osteoporotiċi OVX
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Nota:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0.05 vs grupp mudell;
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.
3.4 Effetti ta' Acteoside fuq in-Numru ta' Osteoklasti fit-Tessut Femorali ta' Ġrieden Osteoporotiċi OVX
Kif muri fil-Figura 4, meta mqabbel mal-grupp imħaddem b'mod falz, in-numru ta 'osteoclasts pożittivi għal TRAP fil-grupp mudell żdied.
Meta mqabbel mal-grupp mudell, in-numru ta 'osteoklasti pożittivi għal TRAP naqas fil-gruppi kollha ta' trattament.
3.5 Effetti ta' Acteoside fuq l-Espressjoni tal-Proteina Runx2 fit-Tessut Femorali tal-Ġrieden Osteoporotiċi OVX
Kif muri fil-Figura 5, meta mqabbel mal-grupp imħaddem b'mod falz, l-espressjoni pożittiva tal-proteina Runx2 fit-tessut femorali tnaqqset fil-grupp tal-mudell.
Meta mqabbel mal-grupp mudell, l-espressjoni pożittiva għall-proteina Runx2 fit-tessut femorali żdiedet fil-gruppi kollha ta 'trattament.
3.6 Effetti ta 'Acteoside fuq Espressjoni ta' ALP, OCN, Col1, NFATc1, u c-fos mRNA fit-Tessut Femorali ta 'Ġrieden Osteoporotiċi OVX
Kif muri fil-Figura 6, meta mqabbel mal-grupp imħaddem b'mod falz, l-espressjoni tal-mRNA femorali ALP, OCN, u Col1 naqset b'mod sinifikanti fil-grupp mudell, filwaqt li l-espressjoni tal-mRNA NFATc1 u c-fos żdiedet b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Meta mqabbel mal-grupp mudell, il-gruppi kollha ta 'trattament urew żieda sinifikanti fl-espressjoni tal-mRNA ALP, OCN, u Col1, filwaqt li l-espressjoni tal-mRNA NFATc1 u c-fos naqset b'mod sinifikanti (P<0.05P < 0.05P<0.05).
Figura 7. Effetti tal-acteoside fuq l-espressjoni tal-proteina p-IκB u p-Akt fit-tessut femorali tal-ġrieden osteoporotiċi OVX
A. Grupp imħaddem minn sham
B. Grupp mudell
C. Grupp ta 'estroġenu
D. Grupp ta 'acteoside b'doża baxxa
E. Grupp ta 'acteoside b'doża għolja
Nota:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0.05 vs grupp mudell;
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.
4. Diskussjoni
L-osteoporożi hija marda metabolika komuni tal-għadam ikkaratterizzata minn densità minerali tal-għadam mnaqqsa, qerda tal-mikrostruttura tal-għadam, fraġilità tal-għadam miżjuda, u riskju għoli ta 'ksur.
Madwar 200 miljun ruħ madwar id-dinja huma affettwati mill-osteoporożi. Bit-tixjiħ tal-popolazzjoni, l-inċidenza għolja u l-mortalità tagħha jpoġġu piż kbir fuq is-soċjetà.
L-osteoporożi ta 'wara l-menopawża hija prinċipalment ikkawżata minn defiċjenza ta' estroġenu u hija l-aktar tip komuni ta 'osteoporożi. Il-karatteristiċi tipiċi tiegħu jinkludu tnaqqis fil-livelli ta 'estroġenu u telf kontinwu ta' kalċju mat-tixjiħ.
Il-mekkaniżmu patoloġiku tal-osteoporożi huwa kkaratterizzat minn tnaqqis fil-massa tal-għadam u l-qerda tal-mikrostruttura trabekulari. Dan jirriżulta direttament minn żbilanċ bejn il-formazzjoni tal-osteoklasti u l-formazzjoni tal-osteoblasti [9].
Minħabba l-influwenza importanti ta 'defiċjenza ta' estroġenu fuq l-osteoporożi, dan l-istudju uża mudell tal-ġurdien indott mill-ovarjiktomija biex jevalwa l-effetti anti-osteoporotiċi ta 'acteoside.
L-ewwel, dan l-istudju kkonferma li l-OVX ikkawża defiċjenza tal-estroġenu, atrofija tal-utru u telf tal-għadam fil-ġrieden, filwaqt li s-supplimentazzjoni E2 eżoġena tejbet l-atrofija tal-utru u t-telf tal-għadam fil-ġrieden OVX.
Barra minn hekk, dan l-istudju sab li l-acteoside ma biddilx il-livelli tas-serum E2 jew il-piż tal-utru fil-ġrieden OVX, iżda tejjeb b'mod sinifikanti d-densità minerali tal-għadam u l-mikrostruttura tal-għadam, u b'hekk tejjeb it-telf tal-għadam.
Dan kien rifless minn żieda fil-BMD femorali, BV/TV, Tb.N, u Tb.Th, kif ukoll tnaqqis fit-Tb.Sp.
Fost dawn il-parametri:
BMD jevalwa b'mod effettiv il-grad ta 'telf ta' għadam.
BV/TV tirrifletti l-massa tal-għadam kanċellali.
Tb.N, Tb.Sp, u Tb.Th jintużaw prinċipalment biex jevalwaw il-morfoloġija spazjali tal-għadam trabekulari [10].
Kif Acteoside Jista' Jappoġġja r-Remodeling tal-għadam
Żbilanċ bejn il-formazzjoni tal-għadam u l-assorbiment mill-ġdid tal-għadam huwa meqjus bħala mekkaniżmu ewlieni tal-osteoporożi.
It-terapiji attwali tal-osteoporożi jinkludu prinċipalment:
Mediċini kontra l-assorbiment, bħal bisfosfonati, li jinibixxu l-attività tal-osteoklasti
Aġenti anaboliċi, bħall-ormon tal-paratirojde, li jippromwovu l-funzjoni tal-osteoblast
Għalkemm dawn il-mediċini għandhom benefiċċji ċari għas-saħħa tal-għadam, jistgħu wkoll ikunu assoċjati ma 'reazzjonijiet avversi, inklużi dardir, rimettar, uġigħ fl-istonku, u riskji akbar relatati mal-kanċer tas-sider u l-kanċer endometrijali [11].
Strateġija ideali tal-osteoporożi tkun kompost b'attività regolatorja doppja u inqas effetti sekondarji: waħda li tista 'tinibixxi d-divrenzjar tal-osteoklasti filwaqt li ttejjeb l-attività tal-osteoblasti.
Dan l-istudju sab li l-acteoside naqqas il-livelli ta' CTX-1 fis-serum u żied il-livelli ta' PINP u ALP fis-serum.
Serum ALP u PINP huma markaturi tal-formazzjoni tal-għadam, filwaqt li CTX-I huwa markatur tar-riassorbiment tal-għadam [12].
Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-acteoside jista 'jirregola l-metaboliżmu tal-għadam fil-ġrieden OVX billi jippromwovi l-formazzjoni tal-għadam u jinibixxi r-riassorbiment tal-għadam, li juri effett regolatorju doppju potenzjali fuq it-tibdil tal-għadam.
Acteoside Jista' Jgħin Inaqqas ir-Risorbiment tal-għadam medjat mill-Osteoclast
Analiżi istoloġika wriet li t-trattament b'acteoside naqqas in-numru ta 'ċelluli pożittivi għal TRAP, jiġifieri osteoclasts, fl-għadam trabekulari ħdejn il-pjanċa tat-tkabbir femorali tal-ġrieden OVX.
Dan jissuġġerixxi li l-acteoside jista' jinibixxi l-attivazzjoni tal-osteoclast indotta minn OVX.
Fil-mikroambjent tal-għadam, l-osteoclasts huma makrofagi multinukleati speċjalizzati ffurmati mid-divrenzjar ta 'monoċiti indotti minn RANKL u fattur li jistimula l-kolonji tal-makrofagi.
Il-kaskata tas-sinjalar indotta minn RANKL għandha rwol ewlieni fir-regolazzjoni tal-attività tal-osteoklasti. Wara li RANKL jingħaqad mar-RanK tar-riċettur tiegħu, jirrekluta l-fattur 6 assoċjat mar-riċettur TNF, li jattiva aktar il-passaġġ NF-κB 'l isfel.
Fil-passaġġ klassiku NF-κB, IκB jorbot ma 'NF-κB u jipprevjeni t-traslokazzjoni nukleari tiegħu. Matul id-divrenzjar tal-osteoklasti, IκB huwa fosforilat u degradat, li jirriżulta fl-attivazzjoni tal-mogħdija NF-κB.
Barra minn hekk, Akt għandu rwol importanti fid-differenzjazzjoni tal-osteoklasti [13]. L-istimulazzjoni RANKL u M-CSF jistgħu jattivaw Akt, li jippromwovi l-lokalizzazzjoni nukleari NFATc1 permezz ta 'fosforilazzjoni ta' glycogen synthase kinase 3, u b'hekk jinduċi l-formazzjoni ta 'osteoclast.
L-attivazzjoni ta' NF-κB u Akt tixpruna l-espressjoni tal-fatturi ewlenin ta' differenzjazzjoni tal-osteoklasti c-fos u NFATc1. Dawn iż-żewġ regolaturi ewlenin jinfluwenzaw id-differenzjazzjoni tal-prekursuri tal-osteoklasti f'osteoklasti maturi billi jirregolaw l-espressjoni ta 'ġeni speċifiċi għall-osteoklasti.
Dan l-istudju sab li t-trattament ta 'acteoside inibixxi d-degradazzjoni ta' IκB fit-tessut femorali tal-ġrieden OVX, u b'hekk imblokka l-attivazzjoni tal-mogħdija NF-κB. Naqqas ukoll speċifikament il-fosforilazzjoni Akt u inibixxa l-espressjoni tal-proteina c-fos u NFATc1.
Dawn ir-riżultati jindikaw li l-acteoside jista 'jinibixxi d-differenzjazzjoni tal-osteoclast u jipprevjeni r-riassorbiment tal-għadam indott minn OVX billi jimblokka l-mogħdijiet NF-κB u Akt u jirregola l-espressjoni NFATc1 u c-fos.
Acteoside Jista' Jippromwovi Formazzjoni ta' Għadam Mmexxija mill-Osteoblast
Runx2 huwa fattur ewlieni ta' traskrizzjoni fil-formazzjoni tal-għadam. Huwa espress biss f'osteoblasti u tessuti mineralizzati u għandu rwol importanti fid-divrenzjar tal-osteoblasti billi jinduċi ġeni markaturi speċifiċi għall-osteoblasti ewlenin, inklużi ALP, OCN u Col1 [14].
Fost dawn:
ALP huwa markatur fenotipiku bikri tad-divrenzjar tal-osteoblast. L-attività tagħha tirrifletti l-istadju inizjali tad-divrenzjar tal-osteoblasti u għandha rwol importanti fil-mineralizzazzjoni tal-għadam billi tibda u/jew tippromwovi l-formazzjoni tal-kristalli ta 'hydroxyapatite fil-vesikuli tal-matriċi tal-osteoblasti.
OCN u Col1 huma espressi fl-istadji aktar tard tad-divrenzjar tal-osteoblast, li jakkumpanjaw il-bidu tal-mineralizzazzjoni tal-matriċi extraċellulari [15].
Permezz ta 'analiżi immunoistokimika, dan l-istudju sab li l-acteoside żied l-espressjoni tal-proteina tal-markatur osteoġeniku Runx2 fit-tessut femorali, li jissuġġerixxi li jista' jippromwovi l-formazzjoni tal-għadam fil-ġrieden OVX.
Fl-istess ħin, downregulation tal-ġeni markaturi speċifiċi għall-osteoblast ALP, OCN, u Col1 kienet osservata fit-tessut femorali tal-ġrieden OVX, filwaqt li t-trattament ta 'acteoside reġġa' lura parzjalment is-soppressjoni indotta mill-OVX tat-traskrizzjoni tal-ġeni speċifiċi għall-osteoblast.
Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-acteoside jista 'jippromwovi l-osteoġenesi billi jtejjeb kemm l-istadji bikrija kif ukoll l-aħħar tad-divrenzjar tal-osteoblasti, u b'hekk jappoġġaw id-divrenzjar tal-osteoblasti u d-depożizzjoni minerali.
X'Ifisser Dan għal Nies Interessati fl-Appoġġ Veġetali għall-Osteoporożi
Għal nies li qed ifittxu approċċi veġetali jew naturali biex jappoġġjaw is-saħħa tal-għadam, dan l-istudju joffri direzzjoni xjentifika sinifikanti.
Acteoside mhuwiex sempliċement "suppliment tal-kalċju." Minflok, din ir-riċerka tissuġġerixxi li tista 'taħdem aktar fil-fond billi tgħin tirregola l-bilanċ bejn żewġ tipi importanti ta' ċelluli tal-għadam:
Osteoblasts, li jibnu l-għadam
Osteoklasti, li jkissru l-għadam
Għadam b'saħħtu jiddependi fuq il-bilanċ bejn dawn iż-żewġ proċessi. Fl-osteoporożi ta 'wara l-menopawża, l-assorbiment mill-ġdid tal-għadam ħafna drabi jsir aktar b'saħħtu mill-formazzjoni tal-għadam, li jwassal għal telf gradwali tal-għadam.
Skont dan l-istudju tal-ġrieden, l-acteoside jista’ jgħin biex jerġa’ jġib dan il-bilanċ billi:
Appoġġ għall-formazzjoni tal-għadam relatata mal-osteoblast
It-tnaqqis tar-riassorbiment tal-għadam relatat mal-osteoklasti
It-titjib tad-densità minerali tal-għadam u l-istruttura tal-għadam trabekulari
Ir-regolazzjoni ta' mogħdijiet molekulari ewlenin relatati ma' remodeling tal-għadam
Għal klijenti interessati fi prodotti veġetali għas-saħħa tal-għadam, dan jipprovdi bażi ta 'riċerka promettenti għal botaniċi b'ħafna acteoside bħal Rehmannia u Cistanche.
Madankollu, huwa importanti li tkun responsabbli u realistiku: dan l-istudju sar fil-ġrieden, mhux fil-bnedmin. Għalhekk, l-acteoside m'għandux jiġi ppreżentat bħala kura ppruvata għall-osteoporożi umana. Nies iddijanjostikati bl-osteoporożi għandhom jikkonsultaw professjonist tal-kura tas-saħħa kwalifikat, speċjalment jekk diġà qed jużaw medikazzjoni bir-riċetta jew terapija relatata mal-ormoni.
Xorta waħda, għal dawk li qed ifittxu strateġija ta 'appoġġ għall-għadam naturali, l-acteoside huwa kompost li ta' min joqgħod attent għalih minħabba li huwa appoġġjat minn riċerka mekkanistika emerġenti.
Konklużjoni
Fil-qosor, l-acteoside jidher li jeżerċita effett regolatorju doppju fuq it-tibdil tal-għadam fil-ġrieden OVX.
Jista' jinibixxi r-riassorbiment tal-għadam medjat mill-osteoclast billi jrażżan l-attivazzjoni tal-mogħdija NF-κB/Akt/NFATc1/c-fos.
Fl-istess ħin, jista 'jippromwovi l-formazzjoni tal-għadam mmexxija mill-osteoblast billi jattiva l-assi Runx2/OCN/Col1.
Permezz ta 'dawn il-mekkaniżmi, l-acteoside tejjeb iż-żidiet indotti mill-OVX fir-riassorbiment tal-għadam u t-tnaqqis fil-formazzjoni tal-għadam, u fl-aħħar mill-aħħar għen biex jitnaqqas it-telf tal-għadam fil-ġrieden.
Madankollu, din ir-riċerka saret biss f'mudell ta 'annimali. Studji futuri għandhom jistabbilixxu mudelli ta 'ċelluli korrispondenti biex jesploraw aktar kif l-acteoside jirregola l-funzjoni tal-osteoblast u l-osteoclast in vitro. Huma meħtieġa wkoll aktar studji kliniċi fuq il-bniedem qabel ma l-acteoside jista 'jiġi rakkomandat bħala għażla terapewtika għall-osteoporożi.
Għalissa, l-acteoside jirrappreżenta kompost naturali promettenti għal aktar żvilupp fil-qasam tas-saħħa tal-għadam u r-riċerka relatata mal-osteoporożi.
Referenzi
[1] Kannella JP. Trattament fit-tul ta 'osteoporożi wara l-menopawża.Endocrinol Metab (Seoul), 2021, 36(3): 544–552.
[2] Fischer V, Haffner-Luntzer M. Interazzjoni bejn l-għadam u ċ-ċelloli immuni: Implikazzjonijiet għall-osteoporożi wara l-menopawża.Semin Cell Dev Biol, 2022, 123: 14–21.
[3] Huwa Yuchi, Liu Ya. Esplorazzjoni tal-mekkaniżmu molekulari ta 'Liuwei Dihuang Pill fit-trattament ta' osteoporożi relatata mad-dijabete bbażata fuq farmakoloġija tan-netwerk u docking molekulari.Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2025, 14(7): 6.
[4] Tan Xiaoyan, Li Xinhua, Chen Guanghua, et al. Effikaċja klinika ta 'Liuwei Dihuang Pill flimkien ma' aċidu zoledronic fit-trattament ta 'osteoporożi ta' wara l-menopawża.Ġurnal taċ-Ċina tal-Ekonomija Farmaċewtika, 2024, 19(10): 47–51.
[5] Xiao Y, Ren Q, Wu L. Il-proprjetà farmakokinetika u l-attività farmakoloġika ta 'acteoside: Reviżjoni.Biomed Pharmacother, 2022, 153: 113296.
[6] Zhou Yu. Evalwazzjoni sistematika u esplorazzjoni tar-regola tal-medikazzjoni ta 'preskrizzjonijiet komposti tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża għall-osteoporożi ta' wara l-menopawża u l-mekkaniżmu ta 'terapija ta' intervent Gujindan. Dissertazzjoni. Changchun: Changchun Università tal-Mediċina Ċiniża, 2023.
[7] Wu Tingyu, Yu Pei, Liu Zhiqiang, et al. Mekkaniżmu tal-Kapsula Qigu kontra l-osteoporożi bbażat fuq il-farmakoloġija tan-netwerk.Ġurnal ta 'l-Università ta' Xinyu, 2021, 26(5): 29–37.
[8] Sun Qianhui. Studju dwar l-effetti ta 'Zuogui Pill u Yougui Pill fuq l-osteġenesi, l-adipoġenesi u l-apoptożi taċ-ċelloli staminali mesenkimali tal-mudullun tal-għadam fil-firien ovariectomized. Dissertazzjoni. Shenyang: Università ta 'Liaoning tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2017.
[9] Zhang QY, Gong HB, Jiang MY, et al. Ir-regolamentazzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi enżimatika fl-osteoblasts tipproteġi kontra l-osteoporożi ta 'wara l-menopawża.Nat Commun, 2025, 16(1): 758.
[10] Wang Dongdong, Ren Weimin, Chen Kai, et al. Valur ta 'tbassir ta' parametri mikro-CT għal rikorrenza wara kirurġija ta 'ksur tal-kompressjoni vertebrali osteoporotika.Xjenza tal-Immaġini u Fotokimika, 2022, 40(1): 22–27.
[11] Kannella JP. Trattament fit-tul ta 'osteoporożi wara l-menopawża.Endocrinol Metab (Seoul), 2021, 36(3): 544–552.
[12] Migliorini F, Maffulli N, Spiezia F, et al. Bijomarkaturi bħala monitoraġġ tat-terapija għall-osteoporożi wara l-menopawża: Reviżjoni sistematika.J Orthop Surg Res, 2021, 16(1): 318.
[13] Udagawa N, Koide M, Nakamura M, et al. Differenzjazzjoni ta' l-osteoklasti permezz ta' mogħdijiet ta' sinjalar RANKL u OPG.J Bone Miner Metab, 2021, 39(1): 19–26.
[14] Gomathi K, Akshaya N, Srinaath N, et al. Regolament ta 'Runx2 permezz ta' modifiki wara t-traduzzjoni fid-differenzjazzjoni ta 'l-osteoblast.Ħajja Sci, 2020, 245: 117389.
[15] Sharma AR, Lee YH, Gankhuyag B, et al. Effett tal-partiċelli tal-alumina fuq il-kapaċità osteoġenika tal-osteoblasts.J Funct Biomater, 2022, 13(3): 105.
