Xinjiang Cistanche Polysaccharides: Kapaċi Jikklerjaw Speċijiet Reattivi Ossiġenu U Radikali Ħieles

astratt

L-attività antiossidanti ta 'Cistanche deserticola polysaccharide in vitro ġiet studjata. Meta tieħu l-aċidu askorbiku bħala l-kontroll, tieħu r-reazzjoni bħal Fenton biex tipproduċi radikali hydroxyl, ir-reazzjoni ta 'awtossidazzjoni ta' dopamine biex tipproduċi radikali anjoniċi superossidi, ir-reazzjoni ta 'ipoklorit tas-sodju b'perossidu ta' l-idroġenu biex tipproduċi ossiġnu singlet, radikali diphenyl morr hydrazine bħala l-mudell sperimentali, l-effetti ta 'radikali sperimentali ta' Cistanche deserticola fuq superoxide radicali deserticola DPPH · radikali ħielsa (diphenyl morr hydrazine radikali), l-effett scavenging ta ' l-ossiġnu singlet. Ir-riżultati wrew li l-polysaccharides minn Cistanche deserticola kellhom effetti ovvji ta 'kenis fuq ir-radikali ħielsa ta' hawn fuq, u l-effett ta 'skavenging kien korrelatat b'mod pożittiv mal-konċentrazzjoni ta' polysaccharides.

Kliem ewlieni :Cistanche deserticola; Polysaccharide; Radikali ħielsa

1 . Introduzzjoni

Il-ġisem jipproduċi kontinwament diversi radikali ħielsa mill-ossiġnu reattivi (ROS) fil-proċess ta 'metaboliżmu ossidattiv ta' attivitajiet tal-ħajja, li huma l-prodotti intermedji tar-reazzjoni ta 'ossidazzjoni-tnaqqis tal-metaboliżmu aerobiku.Ir-riċerka sabet li radikali ħielsa żejda se jattakkaw makromolekuli tal-ħajja u organelli varji, li jikkawżaw diversi ħsarat fil-livell molekulari, livell taċ-ċelluli, tessut, u livell ta 'organi, jaċċelleraw il-proċess ta' tixjiħ tal-ġisem u jinduċu mard bħal trombożi, dijabete, aterosklerożi, tumuri, eċċ.. [1]. Minħabba t-tossiċità ta 'antiossidanti sintetizzati kimikament għall-ġisem tal-bniedem, it-tiftix għal antiossidanti naturali b'effiċjenza għolja u tossiċità baxxa li jistgħu jneħħu r-radikali ħielsa mill-ossiġnu saret suġġett ta' riċerka jaħraq fl-oqsma tal-mediċina, ikel, inġinerija kimika, u oqsma oħra f'dawn l-aħħar snin.

Cistanche deserticola (Y.C...)hija mediċina tradizzjonali Ċiniża rari u hija magħrufa bħala "ġinseng tad-deżert" [2]. Cistanche deserticola mapolysaccharide huwa wieħed mill-komponenti bijoattivi ewlenin ta 'Cistanche deserticola, iżda m'hemm l-ebda rapport dwar jekk il-polisakkarid ta 'Cistanche deserticola għandux l-effett li jneħħi r-radikali ħielsa. F'dan id-dokument, l-effetti ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide fuq superoxide anion radical, hydroxyl radical, DPPH · radikali ħielsa, u singlet ossiġenu ġew determinati b'analiżi spettrali biex tevalwa l-attività antiossidant tagħha u tipprovdi bażi xjentifika għall-iżvilupp sħiħ u l-utilizzazzjoni ta 'din ir-riżors naturali.

Cistanche tal-ħaxix Ċiniż

2. Parti sperimentali

2.1 Strumenti u reaġenti

UV-2401 Spettrofotometru UV-viżibbli (Shimadzu, il-Ġappun); LumatLB9507 tubu luminometru ultra-sensittiv (il-Ġermanja

BertholdTechnologies); RE-52CS evaporatur li jdur (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); Banju ta 'l-ilma termostatiku elettroniku HW-SY (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C Miter tal-pH (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 forn tat-tnixxif bil-vakwu (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: mixtrija minn Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamine (Istitut taċ-Ċina għall-Kontroll tal-Prodotti Farmaċewtiċi u Bijoloġiċi), FeSO4, EDTA, vitamina C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, eċċ., Huma kollha reaġenti analitiċi domestiċi. L-ilma sperimentali huwa ilma distillat bi skambju joniku.

2.2 Metodu sperimentali

2.2.1 Metodu ta' estrazzjoni ta' Cistanche deserticola polysaccharide

Ħu 30g trab ta’ Cistanche deserticola u poġġiha fi flixkun koniku ta’ 500 mL. Għaddasha f'etere tal-pitrolju (60-90 grad), etere, u 80% etanol soluzzjoni sħuna (30 grad) għal 6h, rispettivament, u r-residwu jiġi volatilizzat biex jinxef is-solvent. Xarrab ir-residwu tal-filtru fl-ilma fi proporzjon ta '1:10 għal 24 siegħa, saħħan fi 30 grad, u estrattha għal 100min. Wara l-estrazzjoni, ċentrifuga biex tikseb is-supernatant. Wara li s-supernatant jiġi kkonċentrat taħt pressjoni mnaqqsa, jiġi preċipitat b'95% etanol ta' 3 darbiet il-volum. Huwa jitħalla joqgħod għal 24 siegħa f'4 gradi. Wara ċ-ċentrifugazzjoni, huwa miġbur u preċipitat. Wara t-tnixxif bil-vakwu, jista 'jinkiseb il-polisakkarid mhux raffinat ta' Cistanche deserticola. Iżen 1.00g ta’ polysaccharide mhux raffinat, dewweb bl-ilma, u poġġih fi flixkun volumetriku ta’ 50 mL għal standby.

Ġinseng tad-deżert-Antiossidant

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti tat-trab Cistanche

【Staqsi għal aktar】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.2.2 Test dwar il-kapaċità ta' tneħħija ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal O2 · radikali ħielsa

L-abbiltà tat-tkessiħ ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal O-2 · ġiet ittestjata bil-produzzjoni ta' radikali ħielsa superoxide (O-2 ·) mill-awtossidazzjoni tad-dopamina [3]. Żid 3.0mL ta' 0.1mmol/LpH=10.12 soluzzjoni buffer tal-karbonat, 3.0mL ta' ilma, u 0.5mL ta' soluzzjoni ta' kampjun ta' polysaccharide ta' konċentrazzjonijiet differenti fit-tubu tat-test tat-tnixxif bi skala min-naħa tagħhom. Wara li ssaħħan minn qabel f'banju ta 'l-ilma ta' 30 grad għal 5min, żid 1.0mL ta '2.0mmol/L dopamine imsaħħan minn qabel f'banju ta' l-ilma ta '30 grad, immedjatament ħawwad u ħin, żomm ir-reazzjoni fi 30 grad għal 5min, u immedjatament waqqaf ir-reazzjoni b'2 qatriet ta' 10mol/L HCl. Uża s-soluzzjoni buffer bħala referenza, kejjel l-assorbiment (kampjun A) f'221 nm, ibdel il-kampjun (blank A) b'0.5 mL ta 'ilma fil-grupp vojt, u ibdel il-kampjun b'0.5 mL ta' aċidu askorbiku fil-grupp ta 'kontroll, kejjel kull kampjun tliet darbiet b'mod parallel, u ħu l-valur medju. O-2 · rata ta' tneħħija (%)=(A vojt - A kampjun)/A vojt × 100%

2.2.3 Test dwar il-kapaċità ta' tneħħija ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal · OH radikali ħielsa

Desert living cistanche-Antiossidant

EDTA-Fe (Ⅱ) - methylene blu - sistema H2O2 intużat biex tiġi ttestjata l-abbiltà tat-tkessiħ tal-polisakkarid Cistanche deserticola fuq radical hydroxyl. Il-prinċipju huwa li EDTA-Fe (Ⅱ) jirreaġixxi mal-perossidu tal-idroġenu biex jipproduċi · radikali ħielsa OH, li jnaqqas il-quċċata tal-assorbiment karatteristika tas-soluzzjoni blu tal-metilin f'660 nm.

Żid 1.0mL ta’ 5mmol/L LFeSO4 soluzzjoni, 1.2mL ta’ 5mmol/L soluzzjoni LEDTA, 2.0mL ta’ 0.03mol/L NaH2PO4-Na2HPO4 (pH=7.4) soluzzjoni buffer, u 1.3mL ta’ 20mmol/L soluzzjoni LEDTA f’soluzzjoni ta’ perossidu tat-test ta’ l-idroġenu f’serje ta’ perossidu10 ħawwad sew, żid 0.7mL ta '0.2mmol/L soluzzjoni blu tal-metilen, u mbagħad żid 1.0mL tas-soluzzjoni li għandha tiġi ttestjata u vitamina C1.0 ta' konċentrazzjonijiet differenti rispettivament, iddilwixxi sa 10.00mL bl-ilma, ħawwad sew, żomm f'37 grad għal 30min, u kejjel il-valur ta 'assorbiment ta' kull soluzzjoni vojta ta 'l-ilma 660 sostitwit b'soluzzjoni vojta. Kull kampjun għandu jitkejjel tliet darbiet b'mod parallel, u għandu jittieħed il-valur medju. · OH ir-rata ta ' scavenging radikali tal-kampjun (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × Fil-formula ta' 100%: A0 -- valur ta 'assorbiment ta' tubu mhux bil-ħsara; A1 - valur ta' assorbiment ta' tubu bil-ħsara; A2 -- Valur fotometriku wara li żżid il-kampjun.

2.2.4 Test fuq DPPH · kapaċità ta' tneħħija ta' polisakkarid ta' Cistanche deserticola

Ħu 0.1mL ta 'soluzzjoni ta' polysaccharide Cistanche deserticola u żidha f'5.0mL DPPH · soluzzjoni, ħawwadha malajr, u toqgħod għal 10min f'temperatura tal-kamra,

Iddetermina l-bidla fl-assorbiment tagħha f'wavelength ta '517nm [4]. Kull kampjun għandu jitkejjel tliet darbiet b'mod parallel, u għandu jittieħed il-valur medju. Ir-rata ta 'tneħħija tal-kampjun ta' DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Fil-formula ta '100%: A0 -- valur ta' assorbiment ta 'DPPH · (1.9mLDPPH · +0.1mL50% etanol) mingħajr kampjun; A - valur ta 'assorbiment tal-kampjun wara reazzjoni ma' DPPH ·; B -- valur ta' assorbiment tal-kampjun vojt (kampjun 0.1mL+1.9mL 50% etanol).

2.2.5 Cistanche deserticola polysaccharide scavenging singlet oxygen 1O2 test

L-ossiġnu b'linja waħda (1O2) huwa prodott mir-reazzjoni kimika ta 'NaClO u H2O2 f'37 grad [5]. Is-soluzzjoni użata għad-determinazzjoni ta '1O2 hija 100 μ L2.8mmol/L soluzzjoni NaClO, 400 μL 5 mmol/soluzzjoni NaOH, 300 μL 10 mmol/H2O2 soluzzjoni, u 50 μL 1 mmol/L/soluzzjoni Luminol. Matul ir-reazzjoni, is-soluzzjoni ta 'reazzjoni hija miżjuda mas-soluzzjoni tal-kampjun, u l-istrument tal-kimiluminixxenza awtomatikament jirreġistra l-proċess ta' reazzjoni fl-istess ħin. Ħu NaClO-H2O2-NaOH-Luminol bħala l-kontroll vojt. Ibda r-reazzjoni, u żid is-soluzzjoni tar-reazzjoni fit-tubu tal-kampjun mill-flixkun tal-ħażna tal-istrument tal-kimiluminixxenza skont l-ammont stabbilit mill-proċedura. Imbagħad l-intensità tal-kimiluminixxenza tat-taħlita tar-reazzjoni tiġi rreġistrata fuq il-karta tar-reġistrazzjoni kull 5s, kull kampjun jitkejjel tliet darbiet b'mod parallel, u jittieħed il-valur medju.

Ir-rata ta' tneħħija hija kkalkulata skond il-formula li ġejja: rata ta' tneħħija (%)=(intensità luminuża ta' kontroll - intensità luminuża tal-kampjun)/intensità luminuża ta' kontroll × 100%

3 Riżultati u diskussjoni

3.1 Effett ta' tneħħija ta' Cistanche deserticola polysaccharide fuq O-2 ·

Benefiċċji ta' cistanche tubulosa-Antioxidant

Il-proprjetà kimika ta 'O-2 · hija attiva, li tista' tagħmel l-aċidi grassi fuq il-bijofilm jipproduċu perossidu, u mbagħad jeqirdu ċ-ċelloli [6]. F'dan id-dokument, il-metodu tad-dopamine intuża biex tiddetermina l-abbiltà tat-tneħħija ta 'O2 ·. Il-kapaċità ta 'tkessiħ ta' Cistanche deserticola għal O2 · hija murija fil-Figura 1. Ir-riżultati wrew li Cistanche deserticola polysaccharide jista 'jinibixxi l-O2 · prodott mill-awtossidazzjoni ta' dopamine, u żdied biż-żieda tal-konċentrazzjoni fil-medda ta 'konċentrazzjoni mkejla (0-8mg/mL), iżda l-abbiltà ta' tkessiħ kienet inqas minn dik ta 'aċidu askorbiku.

3.2 Effett ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide · OH

·OH huwa wieħed mill-aktar radikali attivi ħielsa mill-ossiġnu fl-ispeċi attiva tal-ossiġnu. Jista 'jirreaġixxi ma' kważi kull makromolekula bijoloġika fiċ-ċelloli ħajjin u jista 'jwassal għal proċessi bijokimiċi bħall-perossidazzjoni tal-lipidi, polimerizzazzjoni tal-proteini, depolimerizzazzjoni, ksur ta' aċidu nuklejku, eċċ. L-abbiltà ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal · OH hija murija fil-Figura 2. Ir-riżultati wrew li Cistanche deserticola polysaccharide kellu effett tajjeb ta 'scavenging fuq · OH, u żdied biż-żieda tal-konċentrazzjoni.

3.3 Il-ħila tat-tneħħija ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal DPPH ·

DPPH · (diphenyl morr hydrazine radical) huwa radikali ħieles stabbli, li huwa vjola f'solventi organiċi u għandu assorbiment qawwi qrib 517nm. Wara ż-żieda ta 'antiossidanti, jitneħħew xi radikali ħielsa, li jdgħajjef l-assorbiment, li jista' jintuża biex jevalwa l-attività antiossidanti ta 'din is-sustanza [8]. Ara l-Figura 3 għall-kapaċità ta' tneħħija tad-DPPH · ta' Cistanche deserticola polysaccharide. Ir-riżultati sperimentali wrew li l-kapaċità tat-tkessiħ ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq DPPH · kienet korrelatata b'mod pożittiv mal-konċentrazzjoni tagħha, u l-kapaċità ta' kennies kienet akbar minn dik ta 'aċidu askorbiku.

3.4 Kapaċità ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal 1O2

L-ossiġnu b'linja waħda huwa ossiġnu molekulari eċċitat bi proprjetajiet kimiċi attivi. Minħabba li l-elettroni mhux imqabbla għandhom it-tendenza li jingħaqdu, ir-radikali ħielsa juru proprjetajiet kimiċi aktar attivi [9]. Il-kapaċità ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal 1O2 hija murija fil-Figura 4. Ir-riżultati sperimentali wrew li l-kapaċità ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide kienet aktar baxxa minn dik ta 'aċidu askorbiku fil-medda ta' 0-4.0mg/mL, u l-kapaċità ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola kienet ogħla minn dik tal-konċentrazzjoni ta 'polisaccharide deserticola ogħla minn dik ta' konċentrazzjoni ogħla ta 'polisaccharide deserticola. 4.0mg/mL.

 

4. Konklużjoni

L-attività antiossidanti tal-polisakkaridi Cistanche deserticola in vitro ġiet studjata fid-dettall permezz ta 'sistemi radikali ħielsa mill-ossiġnu reattivi differenti.Mir-riżultati sperimentali, wieħed jista 'jara li fi ħdan il-firxa ta' konċentrazzjoni sperimentali, l-estratt tal-polisakkarid ta 'Cistanche deserticola għandu effetti ta' scavenging fuq O2 ·, · OH, DPPH ·, u 1O2, u l-effetti ta 'scavenging huma differenti għal sistemi differenti.Ir-riżultati wrew liCistanche deserticola polysaccharide huwa antiossidant naturali eżoġenu effettiv, li jistħoqqlu aktar riċerka, żvilupp u utilizzazzjoni komprensiva.

Cistanche 200mg-Antioxidant

referenza

[1] Ling Guanting. Ikel u saħħa antiossidanti [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, et al. Estrazzjoni ta' alkali u analiżi kimika ta' polisakkaridi minn Cistanche deserticola [J]. Xjenza u Teknoloġija tal-Agrikoltura u tal-Ikel, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. L-awtossidazzjoni tad-dopamina [J]. Ġurnal tal-Università Normali Hebei, 1997,21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Studju dwar l-attività anti-ossidanti ta 'Fangfeng polysaccharide [J]. Mediċina Ċiniża, 2008,31 (2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Studju dwar l-attività antiossidanti tal-lentinan [J]. Riċerka u Żvilupp tal-Ikel, 2008,29 (4): 56-60.

[6] Mo Jian. Introduzzjoni għall-Bijoloġija Radikali Ħielsa Medika [M]. Beijing: Dar tal-Pubblikazzjoni tas-Saħħa tan-Nies, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374-377.

[8]MatsudaM,NagahamaY,SatoTetal.DMYisaSpecificDMDomainGeneRequiredforMaleDevelopmentintheMedakaFish[J].Nature,2002,30:559-563.

[9]KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournalofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991-5993.