Xinjiang Cistanche Deserticola Polysaccharide Scavenging Radikali Ħieles mill-Ossiġenu Attiv

Wang Guowei Zhao Fang

(Kulleġġ tal-Kimika u l-Inġinerija Kimika, Università ta 'Shihezi, 832000, Triq Beisi, Belt ta' Shihezi, Xinjiang)

astratt

L-attività antiossidanti ta 'Cistanche deserticola polysaccharide in vitro ġiet studjata. Meta tieħu l-aċidu askorbiku bħala l-kontroll, tieħu r-reazzjoni bħal Fenton biex tipproduċi radikali hydroxyl, ir-reazzjoni ta 'awtossidazzjoni ta' dopamine biex tipproduċi radikali anjoniċi superossidu, ir-reazzjoni ta 'ipoklorit tas-sodju b'perossidu tal-idroġenu biex tipproduċi ossiġnu singlet, radikali diphenyl morr hydrazine bħala l-mudell sperimentali , l-effetti ta 'Cistanche deserticola polysaccharides fuq radikali anjoni superoxide, radikali hydroxyl DPPH · radikali ħielsa (diphenyl morr hydrazine radikali), l-effett scavenging ta' ossiġnu singlet. Ir-riżultati wrew li l-polysaccharides minn Cistanche deserticola kellhom effetti ovvji ta 'tkessiħ fuq ir-radikali ħielsa ta' hawn fuq, u l-effett ta 'skavenging kien korrelatat b'mod pożittiv mal-konċentrazzjoni ta' polysaccharides.

Kliem ewlieni :Cistanche deserticola; Polysaccharide; Radikali ħielsa

1 .Introduzzjoni

Il-ġisem jipproduċi kontinwament diversi radikali ħielsa mill-ossiġnu reattivi (ROS) fil-proċess ta 'metaboliżmu ossidattiv tal-attivitajiet tal-ħajja, li huwa l-prodott intermedju tar-reazzjoni ta' ossidazzjoni-tnaqqis tal-metaboliżmu aerobiku.Ir-riċerka sabet li radikali ħielsa żejda se jattakkaw makromolekuli tal-ħajja u organelli varji, li jikkawżaw diversi ħsarat fil-livell molekulari, livell taċ-ċelluli, tessut, u livell ta 'organi, jaċċelleraw il-proċess ta' tixjiħ tal-ġisem u jinduċu mard bħal trombożi, dijabete, aterosklerożi, tumuri, eċċ. [1]. Minħabba t-tossiċità ta 'antiossidanti sintetizzati kimikament għall-ġisem tal-bniedem, it-tiftix għal antiossidanti naturali b'effiċjenza għolja u tossiċità baxxa li jistgħu jneħħu r-radikali ħielsa mill-ossiġnu sar suġġett ta' riċerka jaħraq fl-oqsma tal-mediċina, ikel, inġinerija kimika, u oqsma oħra f' snin riċenti.

Cistanche deserticola(YCMa.)hija mediċina tradizzjonali Ċiniża rari u hija magħrufa bħala "ġinseng tad-deżert" [2]. Cistanche deserticola mapolysaccharide huwa wieħed mill-komponenti bijoattivi ewlenin ta 'Cistanche deserticola, iżda m'hemm l-ebda rapport dwar jekk Cistanche deserticola polysaccharide għandux l-effett li jneħħi r-radikali ħielsa. F'dan id-dokument, l-effetti scavenging ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq superoxide anion radical, hydroxyl radical, DPPH · radikali ħielsa, u singlet ossiġenu ġew determinati permezz ta' analiżi spettrali, biex jevalwaw l-attività antiossidant tiegħu u jipprovdu bażi xjentifika għall-iżvilupp sħiħ u l-utilizzazzjoni ta ' din ir-riżors naturali.

Cistanche tal-ħaxix Ċiniż

2. Parti sperimentali

2.1 Strumenti u reaġenti

UV-2401 spettrofotometru UV-viżibbli (Shimadzu, il-Ġappun); LumatLB9507 tubu luminometru ultra-sensittiv (il-Ġermanja

BertholdTechnologies); Evaporatur rotatorju RE-52CS (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); Banju ta 'l-ilma termostatiku elettroniku HW-SY (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C pH meter (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF -6020 forn tat-tnixxif bil-vakwu (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: mixtrija minn Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamine (Istitut taċ-Ċina għall-Kontroll tal-Prodotti Farmaċewtiċi u Bijoloġiċi), FeSO4, EDTA, vitamina C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, eċċ huma kollha reaġenti analitiċi domestiċi. L-ilma sperimentali huwa ilma distillat ta 'skambju joniku.

2.2 Metodu sperimentali

2.2.1 Metodu ta' estrazzjoni ta'Cistanche deserticolapolisakkarid

Ħu 30g trab ta' Cistanche deserticola u poġġih fi flixkun koniku ta' 500 mL. Għaddasha f'etere tal-pitrolju (60-90 grad ), etere, u 80 fil-mija etanol soluzzjoni sħuna (30 grad ) għal 6 sigħat rispettivament, u r-residwu jiġi volatilizzat biex jinxef is-solvent. Xarrab il-fdal tal-filtru fl-ilma fil-proporzjon ta '1 ∶ 10 għal 24 siegħa, saħħan fi 30 grad, u estrattha għal 100min. Wara l-estrazzjoni, ċentrifuga biex tikseb is-supernatant. Wara li s-supernatant jiġi kkonċentrat taħt pressjoni mnaqqsa, jiġi preċipitat b'95 fil-mija etanol ta' 3 darbiet il-volum. Huwa jitħalla joqgħod għal 24 siegħa f'4 gradi. Wara ċ-ċentrifugazzjoni, huwa miġbur u preċipitat. Wara t-tnixxif bil-vakwu, jista 'jinkiseb il-polisakkarid mhux raffinat ta' Cistanche deserticola. Iżen 1.00g ta’ polysaccharide mhux raffinat, dewweb bl-ilma, u poġġih fi flixkun volumetriku ta’ 50 mL għal standby.

Ġinseng tad-deżert—Antiossidant

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti tat-trab Cistanche

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.2.2 Test dwar il-ħila ta' scavenging ta'Cistanche deserticolapolysaccharide għal O-2 · radikali ħielsa

Il-kapaċità ta' scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal O{{0}} · ġiet ittestjata bil-produzzjoni ta' radikali ħielsa superoxide (O-2 ·) mill-awtossidazzjoni tad-dopamina [3]. Żid 3.0mL ta' {{10}}.1mmol/LpH=10.12 soluzzjoni buffer tal-karbonat, 3.0mL ta' ilma, u {{18 }}.5mL ta 'soluzzjoni tal-kampjun tal-polisakkarid ta' konċentrazzjonijiet differenti fit-tubu tat-test tat-tnixxif bi skala min-naħa tagħhom. Wara li ssaħħan minn qabel f'banju ta' l-ilma ta' 30 gradi għal 5min, żid 1.0mL ta' 2.0mmol/L dopamine imsaħħan minn qabel f'banju ta' l-ilma ta' 30 grad, ħawwad immedjatament u ħin, żomm ir-reazzjoni fi 30 grad għal 5min, u immedjatament waqqaf ir-reazzjoni b'2 qatriet ta '10mol/L HCl. Uża s-soluzzjoni buffer bħala referenza, kejjel l-assorbiment (kampjun A) f'221 nm, ibdel il-kampjun (blank A) b'0.5 mL ta' ilma fil-grupp vojt, u ibdel il-kampjun b'0.5 mL ta' aċidu askorbiku fil-grupp ta' kontroll , kejjel kull kampjun tliet darbiet b'mod parallel, u ħu l-valur medju. O-2 · rata ta' tneħħija ( fil-mija )=(A vojt - A kampjun)/A vojt × 100 fil-mija

2.2.3 Test dwar il-ħila ta' scavenging ta'Cistanche deserticolapolysaccharide għal · OH radikali ħielsa

Desert living cistanche—Antiossidant

EDTA-Fe (Ⅱ) - methylene blu - sistema H2O2 intużat biex tiġi ttestjata l-abbiltà tat-tkessiħ ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq hydroxyl radical. Il-prinċipju huwa li EDTA-Fe (Ⅱ) jirreaġixxi mal-perossidu ta 'l-idroġenu biex jipproduċi · radikali ħielsa OH, li jnaqqas il-quċċata ta' assorbiment karatteristika ta 'soluzzjoni blu tal-metilin f'660 nm.

Żid 1.0mL ta' 5mmol/L soluzzjoni LFeSO4, 1.2mL ta' 5mmol/L soluzzjoni LEDTA, 2.0mL ta' 0.03mol/L NaH2PO{{ {12}}Na2HPO4 (pH=7.4) soluzzjoni buffer, u 1.3mL ta' 20mmol/L soluzzjoni ta' perossidu tal-idroġenu f'serje ta' 10mL test tubes b'tapp, ħawwad sew, żid 0.7mL ta' 0.2mmol/L soluzzjoni blu tal-metilin, u mbagħad żid 1.0mL tas-soluzzjoni li trid tiġi ttestjata u vitamina C1.0 ta' konċentrazzjonijiet differenti rispettivament, iddilwixxi għal 10.00 mL bl-ilma, ħallat sew, żomm f'37 grad għal 30min, u kejjel il-valur ta 'assorbiment ta' kull soluzzjoni f'660nm, Il-grupp vojt issostitwixxa s-soluzzjoni tal-kampjun bl-ilma. Kull kampjun għandu jitkejjel tliet darbiet b'mod parallel, u għandu jittieħed il-valur medju. · OH ir-rata ta' tneħħija radikali tal-kampjun ( fil-mija )=[(A2-A1)/(A{0-A1) × Fil-formula ta' 100 fil-mija : A0 -- assorbanza valur ta 'tubu mhux bil-ħsara; A1 - valur ta' assorbiment ta' tubu bil-ħsara; A2 -- Valur fotometriku wara li żżid il-kampjun.

2.2.4 Test fuq DPPH · kapaċità ta 'tqaxxir ta'Cistanche deserticolapolisakkarid

Ħu {{0}}.1mL ta 'soluzzjoni ta' polisakkarid Cistanche deserticola u żidha f'5.0mLDPPH · soluzzjoni, ħawwadha malajr, u toqgħod għal 10min f'temperatura tal-kamra,

Iddetermina l-bidla fl-assorbiment tagħha f'wavelength ta '517nm [4]. Kull kampjun għandu jitkejjel tliet darbiet b'mod parallel, u għandu jittieħed il-valur medju. Ir-rata ta' tneħħija tal-kampjun ta' DPPH · ( ​​fil-mija )=1 - [(AB)/A0] × Fil-formula ta' 100 fil-mija : A{{6} } valur ta 'assorbiment ta' DPPH · (1.9mLDPPH · flimkien ma '0.1mL50 fil-mija etanol) mingħajr kampjun; A - valur ta' assorbiment tal-kampjun wara reazzjoni b'DPPH ·; B -- valur ta' assorbiment tal-kampjun vojt (kampjun 0.1mL flimkien ma' 1.9mL 50 fil-mija etanol).

2.2.5Cistanche deserticolaPolysaccharide scavenging singlet oxygen 1O2 test

L-ossiġnu b'linja waħda (1O2) huwa prodott mir-reazzjoni kimika ta 'NaClO u H2O2 f'37 grad [5]. Is-soluzzjoni użata għad-determinazzjoni ta '1O2 hija 100 μ L2.8mmol/L soluzzjoni NaClO, 400 μ L5mmol/LNaOH soluzzjoni, 300 μ L10mmol/LH2O2 soluzzjoni, 50 μ L1mmol/Luminol soluzzjoni. Matul ir-reazzjoni, is-soluzzjoni ta 'reazzjoni hija miżjuda mas-soluzzjoni tal-kampjun, u l-istrument tal-kimiluminixxenza awtomatikament jirreġistra l-proċess ta' reazzjoni fl-istess ħin. Ħu NaClO-H2O2-NaOH-Luminol bħala l-kontroll vojt. Ibda r-reazzjoni, u żid is-soluzzjoni tar-reazzjoni fit-tubu tal-kampjun mill-flixkun tal-ħażna tal-istrument tal-kimiluminixxenza skont l-ammont stabbilit mill-proċedura. Imbagħad l-intensità tal-kimiluminixxenza tat-taħlita tar-reazzjoni tiġi rreġistrata fuq il-karta tar-reġistrazzjoni kull 5s, kull kampjun jitkejjel tliet darbiet b'mod parallel, u jittieħed il-valur medju.

Ir-rata ta' clearance hija kkalkulata skond il-formula li ġejja: rata ta' clearance ( fil-mija )=(kontroll intensità luminuża - kampjun intensità luminuża)/kontroll intensità luminuża × 100 fil-mija

3 Riżultati u diskussjoni

3.1 Effett ta 'scavenging ta'Cistanche deserticolapolisakkarid fuq O-2 ·

Benefiċċji ta' cistanche tubulosa—Antioxidant

Il-proprjetà kimika ta 'O-2 · hija attiva, li tista' tagħmel l-aċidi grassi fuq il-bijofilm jipproduċu perossidu, u mbagħad jeqirdu ċ-ċelloli [6]. F'dan id-dokument, il-metodu tad-dopamine intuża biex tiddetermina l-abbiltà tat-tneħħija ta 'O-2 ·. Il-ħila ta' tneħħija ta' Cistanche deserticola għal O-2 · hija murija fil-Figura 1. Ir-riżultati wrew li Cistanche deserticola polysaccharide jista' jinibixxi l-O-2 · prodott mill-awtossidazzjoni tad-dopamina, u żdied biż-żieda ta' konċentrazzjoni fil-medda ta' konċentrazzjoni mkejla (0-8mg/mL), iżda l-abbiltà tat-tneħħija kienet inqas minn dik tal-aċidu askorbiku.

3.2 Effett tat-tħaffir ta 'Cistanche deserticolapolisakkarid · OH

·OH huwa wieħed mill-aktar radikali ħielsa mill-ossiġnu attivi fl-ispeċi tal-ossiġnu attiva. Jista 'jirreaġixxi ma' kważi kull makromolekula bijoloġika fiċ-ċelloli ħajjin u jista 'jwassal għal proċessi bijokimiċi bħal perossidazzjoni tal-lipidi, polimerizzazzjoni tal-proteini, u depolimerizzazzjoni, ksur ta' aċidu nuklejku, eċċ. diversi mard u tħaffef it-tixjiħ tal-ġisem [7]. L-abbiltà ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal · OH hija murija fil-Figura 2. Ir-riżultati wrew li Cistanche deserticola polysaccharide kellu effett tajjeb ta 'scavenging fuq · OH, u żdied biż-żieda tal-konċentrazzjoni.

3.3 Il-ħila tat-tneħħija ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal DPPH ·

DPPH · (diphenyl morr hydrazine radikali) huwa radikali ħielsa stabbli, li huwa vjola f'solvent organiku u għandu assorbiment qawwi qrib 517nm. Wara ż-żieda ta 'antiossidanti, jitneħħew xi radikali ħielsa, li jdgħajjef l-assorbiment, li jista' jintuża biex jevalwa l-attività antiossidanti ta 'din is-sustanza [8]. Ara l-Figura 3 għal DPPH · kapaċità ta' tkessiħ ta' Cistanche deserticola polysaccharide. Ir-riżultati sperimentali wrew li l-kapaċità tat-tkessiħ ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq DPPH · kienet korrelatata b'mod pożittiv mal-konċentrazzjoni tagħha, u l-kapaċità ta' kennies kienet akbar minn dik ta 'aċidu askorbiku.

3.4 Kapaċità ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal 1O2

L-ossiġnu b'linja waħda huwa ossiġnu molekulari eċċitat bi proprjetajiet kimiċi attivi. Minħabba li l-elettroni mhux imqabbda għandhom it-tendenza li jingħaqdu, ir-radikali ħielsa juru proprjetajiet kimiċi aktar attivi [9]. Il-kapaċità ta' scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide għal 1O2 hija murija fil-Figura 4. Ir-riżultati sperimentali wrew li l-kapaċità ta 'scavenging ta' Cistanche deserticola polysaccharide kienet inqas minn dik ta 'aċidu askorbiku fil-medda ta' 0-4.0mg. /mL, u l-kapaċità ta' tneħħija ta' Cistanche deserticola polysaccharide kienet ogħla minn dik ta' aċidu askorbiku meta l-konċentrazzjoni kienet akbar minn 4.0mg/mL.

4. Konklużjoni

L-attività anti-ossidanti tal-polisakkaridi Cistanche deserticola in vitro ġiet studjata fid-dettall permezz ta 'sistemi differenti ta' radikali reattivi ħielsa mill-ossiġnu.Mir-riżultati sperimentali, wieħed jista 'jara li fi ħdan il-medda ta' konċentrazzjoni sperimentali, l-estratt tal-polisakkarid ta 'Cistanche deserticola għandu effetti ta' scavenging fuq O-2 ·, · OH, DPPH · u 1O2, u l-effetti ta 'kenis huma differenti għal differenti sistemi.Ir-riżultati wrew liCistanche deserticola polysaccharide huwa antiossidant naturali eżoġenu effettiv, li jistħoqqlu aktar riċerka, żvilupp u utilizzazzjoni komprensiva.

Cistanche 200mg—Antioxidant

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

referenza

[1] Ling Guanting. Ikel u saħħa antiossidanti [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, et al. Estrazzjoni ta' alkali u analiżi kimika ta' polysaccharide minn Cistanche deserticola [J]. Xjenza u Teknoloġija Agrikola u ta' l-Ikel, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. L-awtossidazzjoni tad-dopamina [J]. Ġurnal tal-Università Normali ta' Hebei, 1997,21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Studju dwar l-attività anti-ossidanti ta 'Fangfeng polysaccharide [J]. Mediċina Ċiniża, 2008,31 (2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Studju dwar l-attività antiossidanti tal-lentinan [J]. Riċerka u Żvilupp tal-Ikel, 2008,29 (4): 56-60.

[6] Mo Jian. Introduzzjoni għall-Bijoloġija Radikali Ħielsa Medika [M]. Beijing: People's Health Publishing House, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374—377.

[8]MatsudaM,NagahamaY,SatoTetal.DMYisaSpecificDMDomainGeneRequiredforMake DevelopmentintheMedakaFish[J].Natura,2002,30:559—563.

[9]KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournalofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991—5993.