Liema ħwawar iżid id-densità tal-għadam? Cistanche (CPhGs) Isaħħaħ l-Osteoġenesi permezz tal-Pathway SIRT2–C/EBP –AREG

 

 

Osteoporożihija marda ortopedika komuni li taffettwa s-saħħa ta 'individwi ta' età medja u anzjani, u l-inċidenza tagħha wriet xejra 'l fuq f'dawn l-aħħar snin [1]. Fl-2015, kien hemm 2.69 miljun pazjent bi ksur osteoporotiku fiċ-Ċina, u dan in-numru mistenni jaqbeż l-4.8 miljun sal-2035. L-ispejjeż tat-trattament se jilħqu għexieren ta 'biljuni ta' wan, li jimponu piż sinifikanti fuq il-familji u s-soċjetà [2]. Ir-riċerka [3] tindika li l-osteoporożi hija relatata mad-differenzazzjoni tal-osteoblast. Il-bilanċ bejn il-formazzjoni tal-għadam u l-assorbiment mill-ġdid tal-għadam huwa fundamentali biex tinżamm ir-riġenerazzjoni tat-tessut tal-għadam u l-kwalità tal-għadam. Osteoġenesi mnaqqsa u assorbiment mill-ġdid tal-għadam aċċellerat huma mekkaniżmi patoloġiċi li jwasslu għall-osteoporożi. L-osteoblasti huma responsabbli għas-sintesi, is-sekrezzjoni u l-mineralizzazzjoni tal-matriċi tal-għadam, u għalhekk għall-formazzjoni, it-tkabbir, ir-riassorbiment u l-metaboliżmu tal-għadam [4]. It-trattament tal-osteoporożi jeħtieġ il-promozzjoni tad-divrenzjar u l-proliferazzjoni tal-osteoblasti u t-titjib tal-funzjoni tagħhom. Għalhekk, l-eluċidazzjoni tal-mekkaniżmi tad-divrenzjar tal-osteoblast hija partikolarment importanti. Bħalissa, it-trattament kliniku primarjament jimpjega interventi farmakoloġiċi, bħal mediċini antiresorbtive (bisfosfonati, modulaturi selettivi tar-riċetturi tal-estroġenu, calcitonin, supplimenti ta 'vitamina D) u aġenti anaboliċi (analogi tal-ormoni tal-paratirojde). Madankollu, medikazzjoni fit-tul tista' twassal għal reazzjonijiet avversi dipendenti fuq id-doża. Reazzjonijiet gastrointestinali komuni jinkludu dardir, rimettar u dijarea. Notevolment, għalkemm l-inċidenza ġenerali ta 'kumplikazzjonijiet severi bħall-osteonekrożi tax-xedaq u l-ħsara akuta fil-kliewi hija baxxa, il-kliniċi għandhom jimmonitorjaw mill-qrib ir-riskju tagħhom f'popolazzjonijiet speċifiċi (eż., pazjenti b'metastasi fl-għadam tat-tumur) [5].

Cistanche (Cistanche deserticola/tubulosa) għandha l-funzjonijiet tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża ta 'tonifying kidney yang u nutrizzjoni essenza u demm. Studji farmakoloġiċi moderni [6] wrew li Cistanche jista 'jirregola l-metaboliżmu tal-għadam billi jippromwovi l-attività tal-osteoblasti u jinibixxi l-attività tal-osteoklasti. Għandu tossiċità baxxa u ftit reazzjonijiet avversi. Fil-firien ovariectomized, l-estratt ta 'Cistanche jista' jaqleb it-telf tal-għadam u jipprevjeni l-osteoporożi. Ir-riċerka [7] sabet li Cistanche phenylethanoid glycosides (CPhGs), bħala kostitwenti attivi ewlenin fi ħdan il-glycosides totali ta 'Cistanche, jippossjedu effetti uniċi fuq ir-regolazzjoni tal-metaboliżmu tal-għadam, it-tisħiħ tal-attività tal-osteoblast, u s-soppressjoni tal-attività tal-osteoclast. Madankollu, ma kien hemm l-ebda rapporti dwar jekk CPhGs jirregolawx id-divrenzjar osteoġeniku permezz tal-assi SIRT2–C/EBP –AREG. Dan l-istudju jinvestiga l-effetti u l-mekkaniżmi ta 'CPhGs fuq id-divrenzjar osteoġeniku, bil-għan li jipprovdi appoġġ teoretiku u bażi applikata għall-użu ta' CPhGs fit-trattament tal-osteoporożi.

1 Materjali u Metodi

1.1 Materjali u Strumenti

CPhGs (echinacoside akbar minn jew ugwali għal 40%, acteoside/verbascoside akbar minn jew ugwali għal 15%, phenylethanoid glycosides totali akbar minn jew ugwali għal 80%, lott Nru. 20240211) inxtraw minnXinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. Ammont xieraq ta 'CPhGs ġie maħlul f'10 mL ta' medium tal-kultura taċ-ċelluli. Wara xoljiment komplut, is-soluzzjoni ġiet iffiltrata darbtejn permezz ta 'membrana mikroporuża ta' 0.22 μm. Mezzi ta 'induzzjoni osteoġeniċi jew osteoklastiċi li fihom CPhG ġew ippreparati f'konċentrazzjonijiet ta' 50, 100, u 200 μmol / L. Il-midja kollha li fiha CPhGs ġew ippreparati friski qabel l-użu.

Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd Speċifikazzjoni ta 'l-estratt ta' Cistanche

Calcein-AM, proteina kinażi B (AKT), proteina kinażi fosforilata B (p-AKT), proteina CCAAT/enhancer-binding (C/EBP), Sirtuin 2 (SIRT2), osteopontin (OPN), fattur ta 'traskrizzjoni relatat ma' Runt 2 (RUNX2), u osteocalcin (OCN) kienu xiri minn (OCN) antibohanghai Ċina). Inkubatur tas-CO2 u strument PCR kwantitattiv f'ħin reali nxtraw minn Bio-Rad (USA). Inxtara iMark microplate reader minn Eppendorf (il-Ġermanja). Ir-reaġent tat-trasfezzjoni Lipofectamine 3000 inxtara minn Thermo Fisher Scientific (USA). Il-kit tal-mutaġenesi dirett lejn is-sit QuikChange Lightning inxtara minn Agilent (USA).

Cistanche Proporzjon u listi għall-bejgħ

 

1.2 Annimali Sperimentali u Gruppi

Sittin ġrieden C57BL/6 mara nxtraw miċ-Ċentru tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Università ta 'Sichuan. Il-protokolli kollha tal-annimali ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Università Medika tal-Lbiċ (20230718-022).

Biex jiġu ċċarati l-effetti ta 'intervent tas-CPhGs fuq l-osteoporożi, ġie stabbilit mudell ta' ovariectomija klassika (OVX). Ġrieden ta 'tmien ġimgħat ġew assenjati b'mod każwali fi tliet gruppi: Sham (tneħħija ta' tessut xaħmi ta 'volum ugwali madwar l-ovarji biss), OVX (ovarjuectomija bilaterali), u OVX + CPhGs (ovarjiktomija bilaterali + CPhGs permezz ta' gavage). Wara anestesija intraperitoneali b'sodium pentobarbital (50 mg/kg), saret kirurġija finta jew ovariectomy bilaterali taħt kundizzjonijiet sterili. L-interventi bdew 24 siegħa wara l-operazzjoni. Il-grupp OVX + CPhGs irċieva CPhGs permezz ta 'gavage (maħlul f'soluzzjoni ta' 0.5% sodium carboxymethyl cellulose, 300 mg·kg-1·d-1); il-gruppi OVX u Sham irċevew volumi ugwali ta 'vettura permezz ta' gavage. L-interventi komplew għal 8 ġimgħat. Il-piż tal-ġisem kien immonitorjat kull ġimgħa. Xahrejn wara l-operazzjoni, ir-rata tal-formazzjoni tal-għadam ġiet evalwata bl-użu ta 'tikkettar ta' calcein doppju, u l-wirk ġew soġġetti għal skanjar mikro-CT (parametri: 50 kV, 200 μA, riżoluzzjoni ta '10 μm) biex janalizzaw kwantitattivament il-frazzjoni tal-volum tal-għadam (BV/TV), ħxuna trabekulari (Tb.Th), u separazzjoni trabekulari (Tb.Sp). Fil-jum ta 'wara l-operazzjoni 60 (intervent totali ta' 8 ġimgħat), il-ġrieden kollha ġew ewtanizzati.

 

1.3 Esperimenti taċ-Ċelloli u Raggruppament

Il-linja taċ-ċelluli ta 'qabel l-osteoblast tal-ġurdien MC3T3-E1 inxtrat minn Guangzhou CytoNiche Biotechnology Co., Ltd. Ċelloli ġew ikkultivati ​​f'DMEM li kien fih 10% serum tal-fetu bovin u 1% penicillin-streptomycin.

Biex tanalizza l-effetti ta 'CPhGs fuq id-divrenzjar osteoġeniku MC3T3-E1 u l-assi SIRT2–C/EBP –AREG, xi ċelloli MC3T3-E1 kkultivati ​​ġew maqsuma b'mod każwali fi grupp ta' kontroll (NC) u grupp CPhGs. Il-grupp NC kien ikkultivat f'medja ta 'induzzjoni osteoġenika standard, filwaqt li l-grupp CPhGs kien ikkultivat f'medja osteoġenika li fiha 50 μmol / L CPhGs.

Biex tivverifika jekk SIRT2 jinfluwenzax l-espressjoni C/EBP fiċ-ċelloli MC3T3-E1, lott ieħor ta 'ċelluli MC3T3-E1 ġie maqsum b'mod każwali f'Kontroll (MC3T3-E1 selvaġġ mingħajr CPhGs), SIRT2 KD (knockdown stabbli SIRT2 MC3T3-E1 mingħajr CPhGs Control), (+wild-CPhGs) MC3T3-E1 ittrattat b'50 μmol/L CPhGs), u SIRT2 KD + CPhGs (SIRT2 knockdown MC3T3-E1 ittrattat b'50 μmol/L CPhGs). Għall-gruppi SIRT2 KD u SIRT2 KD + CPhGs, SIRT2 knockdown inkiseb bit-trasfettazzjoni ta 'siRNA mħallta ma' Lipofectamine 3000; Il-livelli ta' mRNA SIRT2 ġew imkejla bil-qRT-PCR. Għal gruppi ta 'Kontroll u Kontroll + CPhGs, NC-siRNA ġie trasfettat u l-livelli ta' mRNA SIRT2 ġew imkejla.

Biex tikkonferma r-rwol tad-deacetylation C/EBP fil-promozzjoni tad-divrenzjar osteoġeniku, iċ-ċelluli MC3T3-E1 li fadal ġew assenjati lil WT (kontroll), mutant K102R, mutant K211R u gruppi ttrattati b'CPhGs (EX). Iċ-ċelloli WT inżammu f'medja ta 'induzzjoni osteoġenika standard. Għall-gruppi K102R u K211R, primers mutanti tas-sit tal-aċetilazzjoni ġew iddisinjati bbażati fuq is-sekwenza ta 'kodifikazzjoni ta' C/EBP. Bl-użu ta 'pcDNA3.1-FLAG-C/EBP tat-tip selvaġġ bħala mudell u l-kit QuikChange Lightning, inbnew mutanti pcDNA3.1-FLAG-C/EBP (K102R u K211R). Il-grupp EX ġie kkultivat f'medju osteoġeniku li fih 50 μmol/L CPhGs.

 

Liema Ħxejjex Iżżid id-Densità tal-għadam

1.4 Western Blotting u Immunoprecipitation għall-Espressjoni tal-Proteina

Il-membrani PVDF ġew inkubati b'antikorpi primarji matul il-lejl f'4 gradi, segwiti minn antikorp sekondarju konjugat bl-HRP (mogħoż kontra l-fenek IgG, 1:5,000) f'temperatura tal-kamra għal siegħa. Il-meded tal-proteini ġew viżwalizzati permezz ta 'sistema ta' immaġini ta 'kimiluminixxenza, u -tubulina (1:1,000) serva bħala l-kontroll intern għall-kwantifikazzjoni relattiva. Intuża softwer ImageJ għall-analiżi. Għall-immunopreċipitazzjoni, intuża Pierce IP lysis buffer. L-estratti ġew inkubati bl-antikorpi korrispondenti matul il-lejl f'4 gradi, imbagħad bi żibeġ tal-proteina A/G agarose għal 4 sigħat f'4 gradi. Il-kumplessi tal-proteina A/G żibeġ-antikorp-antiġen ġew preċipitati u maħsula, imbagħad elużi f'buffer tal-kampjun SDS f'95 grad għal 5 min. Proteini fil-mira ġew skoperti permezz ta 'Western blotting.

 

1.5 PCR kwantitattiv f'ħin reali (qRT-PCR) għall-espressjoni tal-mRNA

L-RNA totali ġie estratt bl-użu tar-reaġent TRIzol. Id-densità ottika f'260 u 280 nm ġiet imkejla bi spettrofotometru ultramicro UV-viżibbli. Il-konċentrazzjoni tal-RNA ġiet ikkalkulata mill-OD f'260 nm, u l-purità ġiet evalwata mill-proporzjon OD260/OD280. cDNA ġie sintetizzat bl-użu tal-kit ta 'sintesi ta' cDNA HiFiScript (Vazyme, Nanjing, iċ-Ċina). qRT-PCR twettqet bl-użu tat-Taħlita Ultra SYBR fuq sistema PCR f'ħin reali. Sekwenzi tal-primer:

OCN, quddiem 5'-TCTGACCTCACAGATGCCAAG-3', lura 5'-AGGGTTAAGCTCACACTGCT-3';

OPN, quddiem 5'-CACATGAAGAGCGGTGAGTCT-3', lura 5'-CCCTTTCCGTTGTTGTCCTG-3';

RUNX2, quddiem 5'-GGGACTGTGGTTACCGTCAT-3', lura 5'-ATAACAGCGGAGGCATTTCG-3';

C/EBP , quddiem 5'-CTTCAGCCCGTACCTGGAG-3', lura 5'-GGAGAGGAAGTCGTGGTGC-3';

GAPDH, quddiem 5'-TGCCTTCCGTGTTCCTAC-3', lura 5'-GAGTTGCTGTTGAAGTCGCA-3'.
GAPDH intuża bħala l-kontroll intern, u l-espressjoni relattiva ġiet ikkalkulata bl-użu tal-metodu 2-ΔΔCt.

 

1.6 Tbajja ta' Alizarin Red S (ARS).

Wara l-kultura taċ-ċelluli, iċ-ċelloli ġew mlaħalħa b'PBS u ffissati b'4% paraformaldehyde għal 30 min. Kienu mtebbgħin f'temperatura tal-kamra b'soluzzjoni ta '1% ARS (pH 4.2) għal 20 min, imbagħad maħsula ripetutament b'ilma ultrapur sakemm l-isfond kien ċar. Wara l-immaġini, noduli mineralizzati ġew maħlula b'soluzzjoni ta '10% cetylpyridinium chloride għall-kwantifikazzjoni, u l-assorbiment tkejjel f'562 nm.

 

1.7 Analiżi Statistika

Analiżi statistiċi saru bl-SPSS 25.0. Id-dejta tal-kejl hija espressa bħala medja ± devjazzjoni standard. Għal data mqassma b'mod normali, intuża ANOVA one-way għal paraguni ta 'gruppi multipli, segwit mit-test post hoc ta' Tukey għal paraguni f'pari. Għal data mhux distribwita b'mod normali, intuża t-test Mann–Whitney U. Valur AP < 0.05 kien ikkunsidrat statistikament sinifikanti.

Nota strateġika għal xerrejja B2B li jfittxu soluzzjonijiet veġetali affidabbli għall-osteoporożi

Fokus ewlieni: Estratt ta 'Cistanche, Cistanche phenylethanoid glycosides (CPhGs), echinacoside, acteoside/verbascoside, differenzjazzjoni tal-osteoblast, fornitur tal-estratt tal-ħxejjex tal-osteoporożi, nutraceuticals tas-saħħa tal-għadam, fabbrika GMP Cistanche, Xinjiang Cistanche.

Għaliex Cistanche/CPhGs: Ir-raġuni translazzjonali ta 'hawn fuq tenfasizza l-attività doppja ta' CPhGs li tippromwovi l-attività tal-osteoblasti u t-trażżin tal-attività tal-osteoklasti li tappoġġja l-użu tagħhom f'formulazzjonijiet tas-saħħa tal-għadam li jimmiraw l-osteoġenesi, il-massa tal-għadam u l-mikroarkitettura.

Akkwist u kwalità: Għal xerrejja li jeħtieġu speċifikazzjonijiet konsistenti CPhGs (eż., echinacoside Greater minn jew ugwali għal 40%, acteoside Greater minn jew ugwali għal 15%, phenylethanoid glycosides akbar minn jew ugwali għal 80%), tfittex katini tal-provvista ċertifikati GMP, fuq skala kbira u traċċabbli.

 

Introduzzjoni tal-fornitur ta 'Cistanche ewlieni fl-industrija

Jekk qed tevalwa l-fornituri għall-estratti tal-ħxejjex iffukati fuq l-osteoporożi, Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd (WECISTANCHE) hija sieħba ta 'l-ogħla livell li għandha tikkunsidra.hija l-kumpanija tal-bejgħ iddedikata ta 'Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd, u l-kwartieri ġenerali tal-grupp jinsab f'Hotan, Xinjiang. Skont il-profil tal-kumpanija tagħhom:

Skala u oriġini: Imwaqqfa fl-2003, kwartjieri ġenerali fil-Kontea ta 'Luopu, Hotan, Xinjiang (oriġini ċentrali Cistanche), b'bażi ​​ta' Cistanche ta '200,000 acre u l-akbar fabbrika tal-ipproċessar ta' Cistanche fid-dinja.

Integrated supply chain: Seed breeding base (~20,000 acres), cultivation base (>85,000 acres), 15,000 tunnellata ġbir u ħażna ta 'Cistanche frisk, u fabbrika GMP kapaċi tipproċessa 20,000 tunnellata ta' Cistanche frisk u botaniċi oħra.

Ċertifikazzjonijiet u kwalità: Workshop GMP tal-Ikel tas-Saħħa Nazzjonali, iċ-Ċina SC, HACCP, ċertifikazzjonijiet organiċi IOIA/NOP, u 14-il privattiva ta 'invenzjoni relatata ma' Cistanche (inkluża t-teknoloġija tas-separazzjoni tal-membrana).

 

Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd

Saħħa R&D:Immexxi mill-Prof Pengfei Tu (Università ta 'Peking) u kollaborazzjonijiet fit-tul ma' Peking University TCM Modern Research Center, Shanghai Jiao Tong University, Shenyang Medical University, Xinjiang Medical University, Kyoto Pharmaceutical University, u Kinki University.

Wisa 'applikazzjoni: Estratti u forom lesti adattati għal decoctions TCM, ikel funzjonali, prodotti tas-saħħa, supplimenti tad-dieta, farmaċewtiċi, u kura tal-ġilda.

Xinjiang Hotan Dicheng Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd

Responsabbiltà soċjali:Kontribuzzjonijiet rikonoxxuti għall-kontroll tad-deżertifikazzjoni u t-tnaqqis tal-faqar f'Xinjiang; donazzjonijiet fuq skala kbira ta’ prodotti Cistanche matul il-COVID-19.

Għal dokumenti tekniċi, kwotazzjonijiet, jew private-label/OEM dwar CPhGs għas-saħħa tal-għadam, ikkuntattja lil WECISTANCHE:

Websajt:https://www.xjcistanche.com/about-us

Email:wallence.suen@wecistanche.com
 

Indirizz:Nru.1, Floor 26, Unit 1, Building 6, No.133 Sheng'an Street, High-tech District, Chengdu, Sichuan, Ċina (Żona ta' Kummerċ Ħieles Pilota)