Cistanche għall-kura ta 'infjammazzjoni u mard tal-kliewi: X'inhi l-kawża tar-rwol patoġeniku ta' l-infjammazzjoni fl-involviment tal-kliewi fiċ-ċistinopatija?
Mar 13, 2022
Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com
L-interazzjoni bejn galectin-3 u cystinosin tikxef rwol patoġeniku ta' infjammazzjoni fl-involviment tal-kliewi taċ-cystinosis
Tatiana Lobry1,2 et al
Infjammazzjonihuwa involut fil-patoġenesi ta 'ħafna disturbi. Madankollu, il-mekkaniżmi sottostanti ħafna drabi mhumiex magħrufa. Hawnhekk, aħna nittestjaw jekkċistożi, il-proteina involuta fiċistożi, huwa regolatur kritiku tal-galectin-3, membru tal-familja tal-proteini li torbot b-galactosidase, matulinfjammazzjoni. Ċistinożihija disturb tal-ħażna liżosomali u, minkejja l-espressjoni kullimkien taċ-ċistinosi, il-kliewihuwa l-organu primarju milqut mill-marda.Ċistinożiinstab li jtejjeb il-lokalizzazzjoni lisosomali u d-degradazzjoni tal-galectin-3. Fi Ctns–/–ġrieden, mudell tal-ġurdien taċistożi, galectin-3 hija espressa żżejjed fil-kliewi. In-nuqqas ta' galectin-3 fil-ġrieden cystinotic ittejjeb il-funzjoni u l-istruttura patoloġika tal-kliewi u jnaqqas l-infiltrazzjoni tal-makrofagi/monoċiti fil-kliewi tas-Ctns–/–Gal3–/–ġrieden meta mqabbla ma 'Ctns–/– ġrieden. Din id-dejta tissuġġerixxi bil-qawwa li l-galectin-3 jimmedjainfjammazzjoniinvolut filkliewiprogressjoni tal-marda fiċ-ċistinosi. Barra minn hekk, galectin-3 instab li jinteraġixxi maċ-ċitokin pro-infjammatorju MonocyteChemoattractant Protein-1, li jistimula r-reklutaġġ ta’ monoċiti/makrofaġi, u wera li żdied b’mod sinifikanti fis-serum tal-ġrieden Ctns–/– u wkoll pazjenti biċistożi. Għalhekk, is-sejbiet tagħna jenfasizzaw rwol ġdid għall-interazzjoni taċ-ċistinosi u l-galectin-3 fl-infjammazzjoni u jipprovdu spjegazzjoni mekkanistika addizzjonali għall-kliewimarda taċ-ċistinosi. Dan jista' jwassal għall-identifikazzjoni ta' miri ġodda ta' drogi biex jittardjawċistożiprogressjoni.
KELMI EWLENIN:mard kroniku tal-kliewi; ċistożi; galectin-3;infjammazzjoni; proteina chemoattractant tal-monoċiti–1
cistanche jista 'jikkura mard kroniku tal-kliewi u cystinosis
Il-kawża ewlenija tal-infjammazzjoni hija li l-ossidu nitriku jista 'jwassal għall-produzzjoni ta' ċelloli infjammatorji.Cistanchehija mediċina prezzjuża tal-ħxejjex Ċiniża. L-ingredjenti attivi tiegħu jistgħu jinibixxu s-sekrezzjoni ta 'ossidu nitriku u għandhom rwol fil-prevenzjoni u t-trattament ta' infjammazzjoni u mard tal-kliewi.
Dikjarazzjoni Translazzjonali
Minkejja t-trattament, il-pazjenti għadhom jimxu lejn insuffiċjenza tal-kliewi fl-aħħar stadju. F'dan l-istudju, urejna li n-nuqqas ta 'ċistożijirriżulta f'degradazzjoni liżosomali ta' galectin-3 (Gal-3) indebolita, li twassal għalinfjammazzjoniu l-progressjoni tamard kroniku tal-kliewifiċistożi. Dawn is-sejbiet jiftħu perspettivi ġodda dwar miri terapewtiċi potenzjali li jistgħu jillimitaw jew idewmu d-deġenerazzjoni tal-kliewi f’pazjenti b’ċistożi. Bħala tali, mediċini anti-infjammatorji u inibituri ta' Gal-3 bħal mediċini anti-infjammatorji mhux sterojdi jew indomethacin jistgħu jtejbu l-patoġenesi renali fiċ-ċistinosi.
Infjammazzjonihija rispons akut normali ta' organiżmu għal korriment jew infezzjoni,1iżda kronikainfjammazzjonihija assoċjata ma' ħsara fit-tessut. Fil-każ ta 'mard kroniku, bħad-dijabete, tessuti bil-ħsara jattivaw is-sistema immuni, li jwasslu għal rispons infjammatorju kontinwu u, eventwalment, deġenerazzjoni tat-tessuti.2 Iċ-ċitokini huma modulaturi ewlenin ta'infjammazzjoniu huma kapaċi li jattivaw jew isolvu l-infjammazzjoniproċess.3 F’pazjenti bimard kroniku tal-kliewi(CKD), konċentrazzjoni għolja ta’ ċitokini fil-plażma (interleukin [IL]-6 u fattur ta’ nekrożi tat-tumur-a) uinfjammazzjonimarkaturi (proteina C-reattiva, IL-6, hyaluronan, u neopterin) huma assoċjati mal-progressjoni għal mard tal-kliewi fl-aħħar stadju.4 Il-fehim tal-medjaturi speċifiċi li jqanqlu risponsi infjammatorji jiffaċilita l-iskoperta ta’ miri tad-droga xierqa biex tiġi evitata ħsara deġenerattiva .
Ċistinożihija marda metabolika awtosomali-reċessiva li tappartjeni għall-familja tad-disturb tal-ħażna lisosomali u hija kkaratterizzata mill-akkumulazzjoni ta 'cystine fl-organi kollha.5 Il-ġene difettuż fiċistożi, CTNS, tikkodifika ċ-ċistina liżosomali/ko-trasportatur tal-protoni, cystinosis.6,7 Għalkemm CTNS huwa espress kullimkien, il-kliewihuwa l-ewwel organu affettwat f’persuni biċistożi. Pazjenti tipikament preżenti fl-ewwel sena tal-ħajja tagħhom bis-sindromu Fanconi, ikkaratterizzat minn disturbi severi ta 'fluwidu u elettroliti, tkabbir fqir, u rickets.8Sussegwentement tiżviluppa CKD, li tavvanza għal mard renali fl-aħħar stadju u teħtieġkliewitrapjant. L-akkumulazzjoni taċ-ċistina fit-tessuti kollha eventwalment twassal għal disfunzjoni multiorgani; pazjenti jesperjenzaw fotofobija u għama, ipotirojdiżmu, ipogonadiżmu, dijabete, mijopatija, u deterjorament tas-sistema nervuża ċentrali.9 Fl-isfond C57BL/6, mudell tal-ġurdien knockout (Ctns–/–) 10 tirreplika l-fenotip tal-kliewi ta 'pazjenti cystinotic,11 kif ukoll depożizzjoni ta 'kristalli cystine fil-kornea12u disfunzjoni tat-tirojde.13
Fl-istudju preżenti, aħna jiżvelaw rwol ġdid għalċistożifiinfjammazzjonipermezz tal-interazzjoni tagħha ma' Gal-3. Gal-3 huwa membru tal-familja tal-proteini li jorbtu mal-lectin u b-galactoside 21 u huwa involut f'funzjonijiet bijoloġiċi multipli, inklużinfjammazzjoni.22Fil-kuntest ta’kliewimard, l-inibizzjoni Gal-3 intwera li tnaqqas l-espressjoni tal-markatur pro-infjammatorju u l-fibrożi renali u tipprevjeni t-tnaqqis tar-rata ta 'filtrazzjoni glomerulari f'mudelli ta' iperaldosteroniżmu, pressjoni għolja, jew obeżità.23–26Hawnhekk nipprovdu evidenza li, fiċistożi, in-nuqqas taċistożitwassal għal espressjoni żejda ta' Gal-3 fikliewi, ittejjeb l-infiltrazzjoni tal-makrofagi u l-progressjoni tas-CKD. Barra minn hekk, aħna nidentifikaw monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) bħala medjatur potenzjali, li tiżvela miri tal-ġeni ġodda għat-terapija tad-droga. RIŻULTATI Gal-3 jinteraġixxi maċ-ċistinosi permezz tad-dominju ta’ rikonoxximent tal-karboidrati tiegħu Biex tidentifika interazzjoni speċifika imsieħba li jużaw spettrometrija tal-massa kwantitattiva, Madin-Darby kliebkliewi(MDCK) ċelluli ġew trażdotti b'kostrutt lentivirali biex jesprimu b'mod stabbli l-proteina tal-fużjoni taċ-ċistinosi-green FL fluworexxenti proteina (GFP). Minbarra d-9 subunitajiet ta’ Hþ adenosine triphosphatase tat-tip vakuolari ppubblikati qabel,19Gal-3 ġie identifikat bħala waħda mill-proteini li jinteraġixxu magħhomċistożi(Figura 1a). Din l-interazzjoni ġiet ikkonfermata aktar minn ko-immunopreċipitazzjoni segwita minn Western blotting (Figura 1b u c). Barra minn hekk, urejna dik l-interazzjoni bejn Gal-3 uċistożikienet medjata mid-dominju ta' rikonoxximent tal-karboidrati Gal-3 (CRD) lokalizzat fid-denb C-terminal tal-proteina. L-interazzjoni ġiet inibita minn thiodigalactoside, inibitur qawwi ta 'interazzjonijiet galectin-karboidrati (Figura 1d). Bħall-galectins kollha, Gal-3 għandu affinità għal proteini glikosilati,21 għalhekk huwa probabbli li l-interazzjoni ma' Gal-3 isseħħ permezz tal-parti glikosilata taċ-ċistinosi li tinsab fid-denb N-terminal intralysosomal tal-proteina.27
Cystinosin isaħħaħ il-lokalizzazzjoni u d-degradazzjoni liżosomali Gal-3
Biex tivverifika l-lokalizzazzjoni lisosomali potenzjali ta' Gal-3 meta jinteraġixxi ma'ċistożi, urejna li Gal-3, bħal cathepsin D (protease intralysosomal), kien protett mid-diġestjoni mill-proteinażi K, filwaqt li ż-żewġ proteini ġew diġeriti meta l-lysosomes ġew permeabilizzati bi Triton X- 100 (Figura 2a u Supplimentari Figura S1). Dejta simili nkisbet f'liżosomi iżolati mill-fwied tal-ġrieden, li tikkonferma l-lokalizzazzjoni liżosomali ta' Gal-3 in vivo (Figura 2b u c). Minħabba n-nuqqas ta 'antikorp affidabbli biex jinstabċistożi, Twettqet immunostaining fuqċistożi-GFP-linji ta' ċelluli MDCK li jesprimu b'antikorp anti-Gal-3. Hija kkonfermat il-preżenza ta 'Gal-3 fil-lumen tal-liżosomi, filwaqt li ċ-ċistinosi-GFP u Lamp-2 (proteina transmembrana liżosomali) instabu biss fil-membrana tal-vesikoli (Figura 2d).
Biex tinvestiga jekkcystinosinkien involut fit-traffikar ta' Gal-3, analizzajna d-dinamika tat-tnejnċistożiu Gal-3-vesikuli pożittivi bl-użu ta' mikroskopija ta' fluworexxenza FL ta' riflessjoni interna totali ta' ċelluli ħajjin b'kulur doppju f'fibroblasti embrijoniċi tal-ġurdien (MEFs) minn wild-type (WT) u Ctns–/–ġrieden li jesprimu kemm CTNS-DsRed kif ukoll Gal-3–GFP. L-analiżi tagħna kkonfermat danċistożiu Gal-3 jgħaddu minn colocalization vera f'Ctns–/– MEFs kif ivvalidat mid-distribuzzjoni spazjotemporali simili ta 'dawn il-molekuli fiż-żona tal-mikroskopija tal-fluworexxenza FL ta' riflessjoni interna totali (Figura 2e). Id-dejta f'WT MEFs kienet simili (dejta mhux murija). Barra minn hekk, meta ġew analizzati MEFs trasfettati biss b'Gal- 3-GFP, Gal-3-GFP instab fiċ-ċitoplasma u ma ġiet osservata l-ebda struttura vesikulari distinta, kuntrarjament għall-ko-trasfezzjoni b'CTNS-DsRed ( data mhux murija).
Din id-dejta ġiet ikkonfermata f'ċelloli 293T, li fihom sinjal GFP qawwi fiċ-ċitoplasma kien osservat f'ċelloli li jesprimu biss Gal-3–GFP, filwaqt li fiċ-ċelloli li jesprimu kemm Gal{-3–GFP kif ukollcystinosin-DsRed, Gal-3-GFP kien prinċipalment lokalizzat fi ħdan liżosomi li jesprimu cystinosis-DsRed (Figura 3a). Barra minn hekk, kwantifikazzjoni tal-espressjoni tal-proteina Gal-3 f'ċelloli trasfettati b'Gal-3-GFP waħdu jew Gal{- 3-GFP u CTNS-DsRed, u Gal{-3-GFP u DsRed bħala kontroll, wera ħafna inqas proteini Gal-3-GFP f'ċelloli ko-trasfettati b'CTNS-DsRed meta mqabbla ma 'ċelloli trasfettati b'Gal{-3-GFP waħdu jew ko-trasfettati b'DsRed (Figura 3b). B'kollox, dawn ir-riżultati jissuġġerixxu licystinosinittejjeb il-lokalizzazzjoni lisosomali u d-degradazzjoni ta' Gal-3. Cystinosin intwera li huwa involut f'CMA.28 Proteina ta 'xokk tas-sħana 70 kDa (Hsc70) tipparteċipa f'CMA billi tgħin l-iżvolġiment u t-traslokazzjoni ta' proteini sottostrat madwar il-membrana fil-lumen liżosomali b'mod dipendenti fuq LAMP2A.29,30 Minħabba li Gal{ {8}} ġie propost li jiġi degradat minn CMA,31 aħna investigajna l-lokalizzazzjoni ta' Gal-3 relattiva għal Hsc70 f'MEFs cystinotic. L-analiżi tal-mikroskopija konfokali kkonfermat il-kolokazzjoni ta' Gal-3–GFP fi strutturi pożittivi Hsc70- kemm f'WT (dejta mhux murija) kif ukoll f'Ctns–/–ċelluli (Figura 3c), li jappoġġjaw il-ko-trasport ta' Gal-3 ma' Hsc70 u jissuġġerixxu li l-internalizzazzjoni liżosomali iżda mhux ir-rikonoxximent ta' Gal-3 mill-chaperone hija difettuża f'ċistożi.
Gal-3 huwa involut fl-infjammazzjoni tal-kliewi f'Ctns–/–ġrieden
Biex tistudja r-rwol ta' Gal-3 fiċistożiin vivo, aħna ġġeneraw mudell ta 'ġrieden knockout doppju defiċjenti fit-tnejncystinosinu Gal-3 (Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden). WT, Ctns–/–, u Gal-3–/–ġrieden kienu użati bħala suġġetti ta 'kontroll. Fil-C57BL/6 Ctns–/–ġrieden, anomaliji renali jidhru madwar 10 xhur.11 Għalhekk, studji saru minn 8 sa 9 xhur, metakliewianomaliji jibdew jiġu skoperti, u minn 12 sa 15-il xahar meta l-anomaliji tal-kliewi jkunu mexxew. Minħabba li l-kontenut taċ-ċistina nstab li kien differenti f'Ctns maskili u femminili–/– kliewi, ġew analizzati separatament. Jekk il-kontenut taċ-ċistina jiżdied bl-età fiż-żewġ ġenotipi, ma ġiet osservata l-ebda differenza sinifikanti fil-kliewi maskili u femminili bejn il-ġrieden Ctns–/– Gal{-3–/– u Ctns–/– ġrieden ta 'età ta' 8 sa 9 xhur u 12 sa 15-il xahar (Figura 4a).
Il-funzjoni renali ġiet evalwata fis-serum u l-awrina u ma ġiet osservata l-ebda differenza sinifikanti bejn WT u Ctns–/–ġrieden minn 8 sa 9 xhur (dejta mhux murija), iżda minn 12 sa 15-il xahar, Ctns–/–il-ġrieden urew livelli ogħla ta' kreatinina u urea fis-serum meta mqabbla mal-ġrieden WT. Interessanti, Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden urew funzjoni renali mtejba meta mqabbla ma 'Ctns–/–ġrieden minn 12 sa 15-il xahar, b'krejatinina fis-serum aktar baxxa (P <0.05) u urea (P < 0.05; Tabella 1).
Studji istoloġiċi ta' 8- sa 9-xhar u ġurdien ta' 12- sa 15-xaharkliewisezzjonijiet żvelaw il-preżenza ta 'anomaliji severi f'Ctns–/– kliewi, inklużi atrofija tubulari, glomeruli miġbuda lura, u infiltrati mononukleari. L-analiżi blind tas-sezzjonijiet tal-kliewi varjat il-firxa tal-ħsara kortikali minn 1 (struttura tat-tessut ippreservata) għal 6. Il-punteġġ medju għal Ctns–/–ġrieden kien 2.64 - 0.36 ta’ 9 xhur (n ¼ 7) u 4.12 0}.37 ta’ 12 sa 15-il xahar (n ¼ 16). Fil-kliewi tas-Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden fl-istess età, dawn l-anomaliji kienu sinifikament inqas estensivi: 1.62 - 0.11 f'9 xhur (n ¼ 21; P < 0.05,="" mann-whitney="" t-="" test)="" u="" 3.04="" -="" 0.22="" fi="" 12="" sa="" 15-il="" xahar="" (n="" ¼="" 33;="" p="">< 0.05,="" mann-whitney="" t-test)="" (figura="" 4b="" u="" figura="" supplimentari="" s2).="" barra="" minn="" hekk,="" persentaġġ="" ta="" 'atrofija="" tubulari="" ġie="" assenjat="" għal="" kull="" tessut,="" u="" l-medja="" għal="">–/–ġrieden u Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden kienu 66 fil-mija u 42 fil-mija, rispettivament, fi 12 sa 15-il xahar (P ¼ 0.01). Barra minn hekk, differenza impressjonanti bejn Ctns–/–u Ctns–/– Gal-3–/– kliewisezzjonijiet kienet il-preżenza ta 'ftit infiltrati mononukleari fis-Ctns–/–Gal-3–/–sezzjonijiet, filwaqt li infiltrati tqal kienu osservati b'mod konsistenti fis-Ctns–/– kliewi(Figura 4b).
Aħna kkaratterizzajna l-infiltrati mononukleari osservati minn eżami istoloġiku f'Ctns ta' 8- sa 9-xahar.–/– kliewibħala makrofaġi/monoċiti permezz ta' ko-immunotezzjoni ma' CD68 u CD45 u ma' CD68 u klassi ta' istokompatibilità ewlenija II (Figura Supplimentari S3), iżda mhux ma' CD68 u CD163, li jissuġġerixxi li dawn il-makrofaġi għandhom profil proinfjammatorju bħal M1-.32 ,33 Il-kwantifikazzjoni taċ-ċelluli CD68- pożittivi żvelat ferm inqas makrofaġi/monoċiti f'WT, Gal-3–/–, u Ctns–/–Gal-3–/– kliewimeta mqabbla ma 'Ctns–/– kliewi(Figura 4c), li tikkonferma d-dejta istoloġika (Figura 4b).
B'kollox, dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li Gal-3 huwa involut fir-reklutaġġ ta' makrofaġi/monoċiti fiċ-ċistinotiċikliewiu li n-nuqqas tagħha ttejjeb il-mard tal-kliewi inCtns–/–ġrieden. Għalhekk jissuġġerixxi liinfjammazzjonihuwa responsabbli, għall-inqas parzjalment, għad-deterjorazzjoni tal-kliewi f'Ctns–/– ġrieden.
Kliewi defiċjenti tas-Ctns juru Gal-3 espressjoni żejda
Bl-użu tal-analiżi Western blot, sibna li l-espressjoni Gal-3 żdiedet b'mod sinifikanti fikliewita' Ctn ta' 12-xahars–/–ġrieden meta mqabbla mal-ġrieden WT (Figura 5a u b). Biex tinvestiga jekk din l-espressjoni miżjuda ta' Gal-3 hijiex speċifika għal Ctns–/– kliewi, aħna kkwantifikajna l-espressjoni ta' Gal-3 fil-livelli ta' traskrizzjoni u proteina fikliewiminn ġrieden b'CKD indotta minn operazzjoni standard ta' nefrectomija subtotal 2-pass u mill-annimali li għaddew minn operazzjoni finta. WT u Ctns–/–ġrieden kienu użati bħala suġġetti ta 'kontroll. It-traskrizzjonijiet ta' Gal-3 żdiedu b'mod sinifikanti fil-kliewi Ctns–/– u sham iżda żdiedu ħafna fis-CKDkliewimeta mqabbla mal-ġrieden WT (Figura 5c). B'kuntrast, fil-livell tal-proteina, Gal-3 ġie skopert biss f'Ctns–/–kliewi, jissuġġerixxi bil-qawwa li Ctns biss–/–il-kliewi ma setgħux jiddegradaw il-proteina Gal-3 (Figura 5d). Tbajja immunofluworexxenti ta' Gal-3 fil-marienikliewifi 8 sa 9 xhur wera wkoll espressjoni żejda ta' Gal-3 fis-Ctns–/– kliewimeta mqabbla ma 'WTkliewi(Figura 5e). Barra minn hekk, Gal-3 kien espress minn makrofaġi CD68þ, kif ukoll ċelloli renali f'Ctns–/– kliewifi 8 sa 9 xhur (Figura Supplimentari S4). B'kollox, din id-dejta hija konsistenti ma' tnaqqis fid-degradazzjoni ta' Gal-3 fin-nuqqas ta'ċistożikif muri in vitro (Figura 3a u b), li jwassal għal akkumulazzjoni ta' proteina Gal-3 f'Ctns–/– kliewi.
In-nuqqas ta' cystinosin iwassal għal żieda fis-serum MCP-1 permezz ta' regolazzjoni 'l fuq ta' Gal-3
Gal-3 jirregolainfjammazzjonipermezz ta’ mekkaniżmi differenti.34 Għalhekk, biex tikseb aktar għarfien dwar il-mekkaniżmu flċistożi, investigajna l-espressjoni ta' ċitokini pro-infjammatorji jew anti-infjammatorji differenti fis-serum ta' 12- sa 15-WT ta' xahar, Ctns–/–, Gal-3–/–, u Ctns–/–Gal- 3–/–ġrieden. Sitt livelli ta' ċitokini tkejlu permezz ta' firxa ta' żibeġ ċitometriċi tal-ġurdien, MCP-1, interferon-g, fattur tan-nekrożi tat-tumur, u IL-10, IL-6, u IL-12p70. L-espressjoni ta' MCP-1 biss żdiedet b'mod sinifikanti fis-serum tal-ġrieden Ctns–/– meta mqabbla ma' ġrieden WT u Gal{-3–/– u wkoll ma' Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden, li l-livelli tas-serum MCP-1 tagħhom kienu komparabbli mal-ġrieden WT (Figura 6a). L-MCP-1 huwa prodott minn tipi differenti ta' ċelluli, bis-sors ewlieni ta' MCP-1 ikun il-makrofaġi u l-monoċiti,35 u qed jaġixxi bħala chemoattractant għal monoċiti u makrofaġi li jirregolaw il-migrazzjoni u l-infiltrazzjoni tagħhom. B'kuntrast, fl-istess età, l-espressjoni Gal-3 instabet li kienet simili fis-serum tal-ġrieden Ctns–/– (44.33 9.81 ng/ml; n ¼ 5) u ġrieden WT (40.{{12} }.41 ng/ml;n ¼ 7).
Ir-relazzjoni bejn Gal-3 u MCP-1 ġiet investigata aktar permezz ta' ko-immunopreċipitazzjoni bl-użu ta' Gal-3–GFP u MCP-1–DsRed– jew Gal-3– GFP u CTNS-DsRed– (bħala kontroll pożittiv) li jesprimu ċelluli 293T. Ġiet osservata interazzjoni bejn Gal-3 u MCP-1 (Figura 6b), li tissuġġerixxi induzzjoni diretta ta' MCP-1 minn Gal-3. L-inkubazzjoni b'N-Acetyl-D-lactosamine (LacNAc), inibitur ta' Gal-3 CRD, uriet li, b'kuntrast ma'cystinosininterazzjoni, is-CRD mhix involuta fl-interazzjoni bejn Gal-3 u MCP-1 (Figura 6c).
Biex nevalwaw jekk din is-sejba hijiex rilevanti fil-bnedmin, kejlna l-livelli ta’ Gal-3 u MCP-1 f’pazjenti biċistożili ma kinux qed jagħmlu terapija immunosoppressiva jew qed jieħdu mediċini anti-infjammatorji. Għalkemm il-livell Gal-3 instab li żdied kemmxejn fis-serum ta' pazjenti b'cystinosis meta mqabbel ma' donaturi b'saħħithom, id-differenza ma kinitx sinifikanti (Figura 6e), li tikkonferma r-riżultati tagħna miksuba f'Ctns–/–ġrieden. 2 pazjenti biss kellhom livell għoli ta' Gal-3 (25.34 u 39.54 ng/ml); kienu kkunsidrati outliers u għalhekk ma ġewx inklużi fil-Figura 6e. B'kuntrast, bl-użu ta' analiżi immunosorbenti marbuta ma' enżimi diretti kontra MCP uman-1 (Figura 6d), il-livelli ta' MCP-1 fis-serum instabu li żdiedu b'mod sinifikanti f'pazjenti b'ċistożi(252.1 - 18.4 pg/ml; n ¼ 19; medda ta’ età 1–23 sena) minkejja t-trattament b’cysteamine meta mqabbel ma’ suġġetti ta’ kontroll b’saħħithom (166.9 -13.5 pg/ml; n ¼ 1) 0; medda ta' età 8-63 sena) (P < 0.001).="" ma="" nstabet="" l-ebda="" korrelazzjoni="" bejn="" l-età="" u="" l-livell="" ta'="" mcp-="" 1="" fiż-żewġ="" pazjenti="">ċistożiu donaturi b'saħħithom (dejta mhux murija).
Cistanchegħandhaanti-infjammatorjiproprjetajiet
DISKUSSJONI
Minkejja l-fatt li cystine jakkumula fit-tessuti kollha fil-pazjenti affettwati bilċistożi, il-kliewi huma l-organi li huma l-aktar vulnerabbli għall-ħsara. Għalhekk nemmnu li l-akkumulazzjoni taċ-ċistina mhijiex biss responsabbli għad-deġenerazzjoni tal-kliewi. Hawnhekk, niddeskrivu rwol ġdid għalcystinosinfir-regolament ta’infjammazzjoniinvoluti fil-progressjoni tal-mard kroniku tal-kliewi fiċistożi. Dan l-istudju jista' jispjega għaliex il-pazjenti jevolvu għal insuffiċjenza renali fl-aħħar stadju minkejja li jkunu għaddejjin minn terapija b'cysteamine.
L-istudju tas-sħab molekulari taċ-ċistinosi żvela interazzjoni diretta ma' Gal-3, li tista' tiġi inibita minn inibituri ta' Gal-3 CRD. Studji riċenti wrew li Gal-3 jista' jinteraġixxi ma' glycans li jinsabu fil-lumen liżosomali wara ħsara liżosomali bħall-akkumulazzjoni tal-kristall.36 Fl-istudju tagħna, l-interazzjoni bejn Gal-3 ucystinosinġie studjat f'ċelluli b'saħħithom li jesprimucystinosinu, għalhekk, ma jakkumulawx cysteine jew kristalli cystine. Barra minn hekk, espressjoni żejda kemm ta’ Gal-3 kif ukoll ta’ cystinosin f’ċelloli b’saħħithom immodifikat il-lokalizzazzjoni subċellulari ta’ Gal-3, li mbagħad ġiet lokalizzata fil-liżosomi, meta mqabbla ma’ espressjoni żejda ta’ Gal-3 biss, li kien jinsab fiċ-ċitoplasma. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu bil-qawwa li l-interazzjoni bejn Gal-3 u ċ-cystinosin qed isseħħ indipendentement mill-ħsara liżosomali u li ċ-cystinosin hija attivament responsabbli għall-lokalizzazzjoni liżosomali ta' Gal-3. Preċedentement Gal-3 intwera li jiġi degradat permezz ta' proteolysis dipendenti mill-lysosomal fin-nuqqas ta' Abl u Arg, 2 tyrosine kinases.31
Barra minn hekk, urejna liċistożiu Gal-3 jikko-lokalizza fi strutturi vesikulari dinamiċi u huma flimkien mobilizzati b'mod spazjotemporali.Cystinosinpreċedentement kien assoċjat mal-mekkaniżmi tat-traffikar tal-LAMP2A lisosomali, l-uniku riċettur CMA magħruf, li huwa lokalizzat ħażin f'ċistożi.28Id-degradazzjoni tal-gal-3 qabel intweriet li hija medjata mis-CMA.31L-analiżi tal-mikroskopija konfokali kkonfermat il-kololizzazzjoni ta' Gal-3 fi strutturi pożittivi Hsc70- fiż-żewġ Ctns–/– u ċelluli WT, li jappoġġjaw il-ko-trasport ta 'Gal-3 ma' Hsc70 għall-preżentazzjoni fil-liżosoma u degradazzjoni minn CMA peress li Hsc70 jgħin fit-traslokazzjoni ta 'proteini sottostrat madwar il-membrana fil-lumen liżosomali.29,30Interpretazzjoni possibbli tar-riżultati tagħna hija dikcystinosinjirregola t-traffikar u l-kunsinna ta' Gal-3 lill-liżosomi attivi għas-CMA għad-degradazzjoni.
Din il-mogħdija ġdida tacystinosinIl-lokalizzazzjoni u d-degradazzjoni liżosomali dipendenti fuq Gal-3 hija appoġġjata in vivo peress li ġrieden defiċjenti minn Ctns juru espressjoni żejda ta' Gal-3 fi ħdankliewi. Barra minn hekk, filwaqt li ż-żieda ta' Gal-3 mRNA kienet limitata f'Ctns–/–kliewi meta mqabbla ma' mudell ieħor ta' CKD, kwantità kbira ta' proteina Gal-3 ġiet skoperta biss f'Ctns–/– kliewi. Din id-dejta tappoġġja bil-qawwa l-konklużjoni licystinosinhuwa involut fid-degradazzjoni tal-proteina Gal-3, li tista' tikkontrolla l-espressjoni żejda ta' Gal-3 mRNA f'kundizzjonijiet ta' stress bħal CKD.
Gal-3 għandu diversi rwoli bijoloġiċi, inklużi rwoli f'dawk akuti u kroniċiinfjammazzjonibilli tattira monoċiti u makrofaġi.37,38Fi Ctns–/– ġrieden, aħna osservati infiltrati mononukleari tqal prinċipalment fil-kliewikif deskritt qabel,11,39li kienu kkaratterizzati bħala monoċiti/makrofaġi. B'kuntrast, kliewi mill-Ctns knockout doppju–/–Gal-3–/–ġrieden urew ftit infiltrati ta’ monoċiti/makrofagi, li jissuġġerixxu bil-qawwa li Gal-3 huwa involut fiinfjammazzjonifil-kliewi tas-Ctns–/–ġrieden. Fil-kuntest ta' korriment ripetittiv tat-tessuti, Gal-3 jista' jikkawża t-tranżizzjoni għal kronikainfjammazzjoniu fibrożi.34B'mod konsistenti ma' dawn is-sejbiet, id-dejta tagħna turi l-involviment ta' Gal-3 fil-progressjoni tas-CKD f'ċistożi. Tabilħaqq, il-Knockout doppju Ctns–/– Gal-3–/–ġrieden esibiti aħjarkliewifunzjoni u struttura meta mqabbla ma 'Ctns–/–ġrieden. Bl-istess mod, ġrieden Gal-3-defiċjenti juru inqas fibrożi renali fil-kliewimeta mqabbla ma 'ġrieden WT wara ostruzzjoni unilaterali ureterika,40 u ġrieden knockout Gal-3 soġġetti għal korriment ta' iskemija-riperfużjoni kellhom funzjoni renali aħjar meta mqabbla mal-ġrieden WT soġġetti għal korriment ta' iskemija-riperfużjoni.41
Għalkemm instabet korrelazzjoni bejn il-livelli ta' Gal-3 fil-plażma u l-iżvilupp ta' CKD,42 ma ġiet osservata l-ebda differenza fl-espressjoni ta' Gal-3 fis-serum ta' ġrieden u bnedmin affettwati minnċistożiu suġġetti ta 'kontroll b'saħħithom. Billi kejlu livelli differenti ta' ċitokini fis-serum, sibna żieda sinifikanti ta' MCP-1 f'Ctns–/–ġrieden, billi Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden kellhom livelli komparabbli ma 'dawk tal-ġrieden WT. MCP-1 hija ċitokina li tista' tiġi rilaxxata fis-serum u tifforma gradjent biex tattira monoċiti u makrofaġi lejn is-sit tal-ħsara.35 Iż-żieda ta' MCP-1 fis-serum ta' Ctns–/–ġrieden meta mqabbla ma 'Ctns–/–Gal-3–/–ġrieden kien indipendenti mill-akkumulazzjoni taċ-ċistina minħabbakliewiIl-kontenut ta' cystine kien simili fiż-żewġ ġenotipi. Barra minn hekk, minkejja t-trattament taċ-ċisteamina li ppermetta l-ħruġ taċ-ċistina 'l barra mil-liżosomi, l-MCP-1 instab li żdied b'mod sinifikanti fis-serum ta' pazjenti b'ċistożimeta mqabbla ma’ donaturi b’saħħithom. Din id-dejta tissuġġerixxi bil-qawwa li n-nuqqas tacystinosin, aktar milli l-akkumulazzjoni taċ-ċistina, hija responsabbli għaż-żieda tal-MCP-1 fis-serum. Barra minn hekk, urejna interazzjoni diretta bejn Gal-3 u MCP-1, li reċentement ġiet issuġġerita minn Gordon-Alonso et al.43 iżda ma ġietx studjata aktar. Il-mekkaniżmu tal-attivazzjoni tal-MCP-1 medjat minn Gal-3 ma ġiex studjat hawn. Ipoteżi hija l-preżenza ta' peptide tas-sinjal fl-MCP-1 tal-bniedem, li jista' jinqasam biex itejjeb is-sekrezzjoni tiegħu.44 Barra minn hekk, il-plasmina tista' jaqsam it-tarf C ta' MCP-1, li jżid il-kimoattrant tiegħu. potenza.45 Barra minn hekk, b'korrelazzjoni mad-dejta tagħna, l-inibizzjoni tal-MCP-1 f'mudell tal-ġrieden ta' nefropatija dijabetika pprevjeniet l-infiltrazzjoni tal-makrofagi renali u tejbet il-funzjoni renali.46,47 Filċistożi, id-data tagħna tissuġġerixxi bil-qawwa li n-nuqqas tacystinosintwassal għal żieda ta' Gal-3, li jattiva l-mobilizzazzjoni tad-demm tal-MCP-1, li jsaħħaħ il-kliewiinfjammazzjoniu l-progressjoni tamard kroniku tal-kliewi.
Dawn is-sejbiet jiftħu perspettivi ġodda dwar miri terapewtiċi potenzjali li jistgħu jillimitaw jew idewmu d-deġenerazzjoni tal-kliewi f’pazjenti b’ċistożi. Tabilħaqq, mediċini anti-infjammatorji mhux sterojdi bħall-aspirina u l-indometaċina nstabu li jinibixxu l-espressjoni ta’ Gal-3 billi jinibixxu t-traskrizzjoni tiegħu.48 L-indometaċina fil-fatt tintuża biex tirregola l-polyuria u l-polidipsija f’ċistożi,49 u studju reċenti ta’ 307 pazjent Ewropew b’cystinosis wera riżultat renali mtejjeb f’pazjenti kkurati b’indomethacin.50 Fid-dawl tal-istudju tagħna, l-użu ta’ indomethacin jew mediċini anti-infjammatorji mhux sterojdi għalċistożipazjenti jistgħu jiġu kkunsidrati mill-ġdid.
METODI
Esperimenti fuq l-annimali
Is-C57BL/6 Ctns–/–ġrieden ġew ipprovduti minn Dr Antignac (Inserm U1163, Pariġi, Franza). C57BL/6 galectin-3 null (Gal-3–/–) ġrieden ġew ipprovduti minn Dr Fu-Tong Liu (Università ta 'Kalifornja, Davis) u Dr Jerrold M. Olefsky (Università ta' California, San Diego). L-istrateġija tat-tnissil biex tiġġenera WT, Ctns–/–, Gal-3–/–, Ctns–/– u Gal- 3–/–ġrieden huwa deskritt fil-Metodi Supplimentari.
Linji taċ-ċelluli
il-mess kien iġġenerat minn bijopsiji tal-ġilda tat-twelid ta 'WT u Ctns–/–ġrieden. Linji taċ-ċelluli MEF, 293T, u MDCK tat-tip II (ATCC, Manassas, VA) tkabbru fil-medju Eagle modifikat ta' Dulbecco li fih 10 fil-mija serum tal-għoġol tal-fetu jew serum tal-bovini tal-fetu, 100 unità/ml peniċillina, 0.1 mg/ml streptomycin , u 2 mM L-glutamina.
Ko-immunopreċipitazzjoni u analiżi tal-ispettrometrija tal-massa
Biex jiġu studjati l-interazzjonijiet proteina-proteina, iċ-ċelloli MDCK ġew trażdotti bl-użu tas-sinsla tal-vettur lentivirali pRRL.SIN.cPPT.PGK/WPRE biex jesprimu b'mod stabblicystinosin-GFP.51Il-ko-immunopreċipitazzjoni saret kif deskritt fil-Metodi Supplimentari. Proteini ko-immunoprecipitati ġew solvuti permezz ta 'elettroforesi tal-ġel tas-sodju dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) u analizzati permezz ta' spettrometrija tal-massa, LTQ Orbitrap kif diġà deskritt.19
Ċelloli 293T li jesprimu Gal-3-GFP u MCP-1-DsRed jew Gal-3-GFP u CTNS-DsRed intużaw għall-ko-immunopreċipitazzjoni kif deskritt fil-Metodi Supplimentari. Proteini ko-immunoprecipitati ġew solvuti permezz ta' SDS-PAGE, u l-MCP li torbot lil Gal{-1 ġie skopert bl-użu ta' antikorp anti-DsRed (Clontech Laboratories, Mountain View, CA).
Frazzjonament subċellulari
Inkisbu tmien fwied minn ġrieden C57BL/6 u ppreparati kif deskritt qabel.52 Il-kundizzjonijiet tal-gradjent kienu essenzjalment l-istess kif deskritti fil-pubblikazzjoni oriġinali,52 ħlief li ntuża Nycodenz minflok metrizamide.
Trattamenti ta' gal-3-inibitur u proteinase K
Lisati minncystinosin-GFP MDCK ċelluli u 293T li jesprimu Gal-3-GFP u CTNS-DsRed jew Gal-3-GFP u MCP{-1-DsRed ġew inkubati bi jew mingħajr 5 mM thiodigalactoside jew 5 mM ta 'N -Acetyl-D-Lactosamine, rispettivament, 2 inibituri ta' Gal-3 CRD. Wara 30 minuta ta 'inkubazzjoni f'4 - C b'ċaqliq kostanti, lisati ġew inkubati b'50 ml microbeads anti-GFP, u l-immunopreċipitazzjoni saret kif imsemmi qabel. Proteini preċipitati ġew solvuti minn SDS-PAGE fuq ġel 10 fil-mija.
Lisati minncystinosin-Ċelloli GFP MDCK u frazzjonijiet arrikkit bil-liżosomi tal-fwied tal-ġurdien ġew inkubati bi jew mingħajr 2 fil-mija Triton X-100 għal 10 minuti f'4 - C u mbagħad inkubati 30 minuta bi jew mingħajr 2.5 mg/ml u 25 mg /ml proteinase K, rispettivament. Wara l-inattivazzjoni tal-enżimi b'1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride għal 5 minuti f'{12}} C, il-proteini ġew solvuti b'SDS-PAGE fuq ġel 10 fil-mija.
Analiżi tal-immunofluworexxenza
Ċelloli MDCK fissi ġew inkubati b'antikorp anti-Lamp-2 (OriGeneTechnologies, Rockville, MD) u anti-Gal-3 (CedarlaneLaboratories, Burlington, Ontario, Kanada) sagħtejn f'temperatura tal-kamra, segwit minn Alexa Fluor 555 antikorp sekondarju (Invitrogen, Carlsbad, CA) għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Immaġini konfokali ttieħdu bl-użu ta 'mikroskopju Zeiss LSM 700 (Carl ZeissMicroscopy, Jena, il-Ġermanja).
Ċelloli 293T li jesprimu b'mod temporanju Gal-3–GFP waħdu, Gal-3–GFP, u DsRed jew Gal-3–GFP ucystinosin-DsRed kienu kkultivati fuq coverslip qabel ma jiġu mmuntati fuq slide. Iċ-ċelloli ġew immaġini bl-użu ta 'strument Keyence BZ-X700 (Keyence Corp., Osaka, il-Ġappun).
Fisskliewisezzjonijiet ġew inkubati matul il-lejl f'{0}} C b'antikorp anti-CD68 (BioLegend, San Diego, CA) jew anti-Gal-3 (BioLegend), segwit minn Alexa Fluor 488 antikorp sekondarju (Invitrogen), siegħa f'temperatura tal-kamra. L-immaġini ġew akkwistati bl-użu ta 'strument Keyence BZ-X700. Il-kwantifikazzjoni tal-espressjoni CD68 hija deskritta f'Metodi Supplimentari.
Il-MEFs li jesprimu Gal-3–GFP ġew imtebba' bl-użu ta' antikorp anti-Hsc70 (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) u ttieħdu immaġni kif deskritt qabel.53
Riflessjoni interna totali FL mikroskopija fluworexxenti
WT u Ctns–/–MEF li jesprimi Gal-3–GFP, u CTNS-DsRed ġew miżrugħa fuq dixx tal-qiegħ tal-borosilikat 4-chamber 35- mm (Cellvis, Mountain View, CA). Wara jumejn fil-kultura, il-MEFs ġew analizzati permezz ta' mikroskopija ta' fluworexxenza FL ta' riflessjoni interna totali kif deskritt qabel54u fil-Metodi Supplimentari. L-immaġini ġew analizzati bl-użu ta 'softwer ImageJ.
Analiżi tal-espressjoni Gal-3
Ċelloli 293T li jesprimu Gal-3–GFP, Gal-3–GFP, u DsRed, jew Gal-3–GFP u CTNS-DsRed u esplantatikliewiġew lysed f'radjuimmunoprecipitation assay buffer li fih cocktail inibitur tal-proteinażi. Il-proteini ġew separati fuq ġel ta' 4 fil-mija sa 15 fil-mija u żvelati bl-użu ta' antikorp anti-Gal-3 (Abcam, Cambridge, UK) jew anti-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) .
Kliewiġew omoġenizzati fil-buffer RLT li fih b-mercaptoethanol bl-użu ta 'Precellys 24 (Bertin Instruments, Montigny-le-Bretonneux, Franza). L-RNA kien iżolat u Gal-3– reazzjoni speċifika tal-katina tal-polimerażi diġitali tal-qtar twettqet kif deskritt fil-Metodi Supplimentari. L-espressjoni tat-traskrizzjoni Gal-3 ġiet espressa bħala proporzjon meta mqabbel mal-kontroll endoġenu 18S. Assaġġ immunosorbenti marbut ma' enzimi (Abcam) intuża biex jinstab il-livell Gal-3 fil-ġrieden u s-serum tal-bniedem, skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur.
Funzjoni renali
Il-livelli tal-fosfat tas-serum u tal-awrina, tal-krejatinina tas-serum u tal-urea ġew stmati bl-użu tal-Kit tal-Assaġġi tal-Phosfat QuantiChrom, il-Kit tal-Kreatinina Quanti Chrom, u l-Kit tal-Assaġġi tal-Urea QuantiChrom (BioassaySystems, Hayward, CA). Il-livelli tal-proteini fl-awrina tkejlu bl-użu tal-Pierce BCA Protein Assay Kit (Rockford, IL).
Istoloġija
Fiż-żmien li nqatlu l-ġrieden,kliewiġew miġbura, iffissati fil-formalin, u inkorporati fil-paraffin. Sezzjonijiet imtebba 'b'ematossilin u eosin ġew riveduti b'mod blinded minn Dr Marie Claire Gubler kif deskritt fil-Metodi Supplimentari.
Kejl tal-kontenut taċ-ċistina
Il-kejl taċ-ċistina tat-tessuti sar permezz ta' spettrometrija tal-massa (LC-ESI-MS/MS) kif deskritt qabel.39
Nefrectomija standard u operazzjoni finta
Ġrieden CKD ġiet indotta mill-operazzjoni standard ta' nefrectomija subtotal 2-stadju kif deskritt qabel.55,56Il-grupp tal-ġrieden sham għadda mill-istess proċedura iżda mingħajr ma qatgħet l-ebda waħdakliewitessut.
Livell taċ-ċitokini fis-serum
Biex tkejjel il-livelli taċ-ċitokini fis-serum tal-ġrieden, ġurdieninfjammazzjonikit ċitometriku żibeġ array (BD Biosciences, San Jose, CA) twettqet skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-konċentrazzjoni ta' MCP-1 fis-serum uman ġiet iddeterminata bl-użu ta' analiżi immunosorbenti marbuta ma' enżimi diretti kontra MCP-1 (Abcam, Cambridge, UK) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur.
Analiżi statistika
Il-valuri huma espressi bħala medja - SEM. Is-sinifikat tar-riżultat ġie vvalutat permezz ta' 2-test t ta' denb mhux imqabbad jew 2-test t ta' denb mhux imqabbad bil-korrezzjoni ta' Welch. Tqabbil tal-grupp ta '3 kundizzjonijiet jew aktar saru b'analiżi parametriċi ta' varjanza, segwiti minn test ta 'paraguni multipli Tukey għal paraguni f'pari. Il-punteġġi istoloġiċi tqabblu bl-użu tat-test Mann-Whitney. L-analiżi saru bl-użu ta 'softwer Prism 6 (GraphPad, San Diego, CA). Valur P inqas minn 0.05 kien ikkunsidrat sinifikanti.
Approvazzjoni ta' studju
L-esperimenti tal-ġrieden twettqu f'konformità mal-protokolli tal-Kumitat għall-Użu tal-Annimali Istituzzjonali. L-użu ta 'tessut uman f'dan l-istudju ġie approvat mill-Università ta' Kalifornja, San Diego, HumanResearch Protections Program.
ŻVELAR
SC huwa membru tal-Bord Xjentifiku u membru tal-Bord tat-Trustees tal-ċistożiFondazzjoni tar-Riċerka. SC huwa ko-fundatur, azzjonist, u membru kemm tal-bord xjentifiku kif ukoll tal-bord tad-diretturi ta 'GenStem TherapeuticsInc. It-termini ta’ dan l-arranġament ġew riveduti u approvati mill-Università ta’ Kalifornja–San Diego skont il-politiki tagħha dwar il-kunflitt ta’ interess. L-awturi l-oħra kollha ddikjaraw l-ebda interessi konkorrenti.
jipprovdu l-Gal-3–/–ġrieden. Nirringrazzjaw lil Lou Devanneaux u NicholeFlerchinger għall-għajnuna teknika tagħhom u lil Elizabeth Souter talli rrevedew il-manuskritt. Aħna nirrikonoxxu lil Christopher Alfonso minn BDBioscience talli pprovda l-ġurdieninfjammazzjonifirxa ta 'żibeġ ċitometriċi u għall-għajnuna tiegħu ma' l-interpretazzjoni tar-riżultati. Dan ix-xogħol kien appoġġjat mill-għotjiet tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa RO1-DK090058 u R01-DK110162, il-ĊistinożiFondazzjoni tar-Riċerka, u l-Istitut tal-Mediċina Riġenerattiva tal-Kalifornja (CIRM, CLIN-09230). TL huwa appoġġjat minn fellowship gradwat mill-Vaincre Les MaladiesLysosomales. AB u JZ huma appoġġjati minn fellowship mill-ċistożiFondazzjoni tar-Riċerka. UCSD Neuroscience MicroscopyShared Facility kienet iffinanzjata mill-għotja tal-Istitut Nazzjonali ta 'Disturbi newroloġiċi u Puplesija (NINDS) P30-NS047101.
REFERENZI
1. Medzhitov R. Oriġini u rwoli fiżjoloġiċi ta 'infjammazzjoni. Natura. 2008;454:428–435.
2. Donath MY. Immirarinfjammazzjonifit-trattament tad-dijabete tat-tip 2. Dijabete Obes Metab. 2013;15(suppl 3):193–196.
3. Jaffer U, Wade RG, Gourlay T. Cytokines fis-sindromu ta 'rispons infjammatorju sistemiku: reviżjoni. HSR Proc Kura Intensiva Cardiovasc Anesth. 2010;2:161–175.
4. Pecoits-Filho R, Heimburger O, Barany P, et al. Assoċjazzjonijiet bejn markaturi infjammatorji li jiċċirkolaw u funzjoni tal-kliewi residwu f'pazjenti CRF. Jien JKilwaDis. 2003;41:1212–1218.
5.Gahl WA, Thoene JG, Schneider JA.Ċistinożi. N Engl J Med. 2002;347: 111–121.
6.Cherqui S, Kalatzis V, Trugnan G, Antignac C. Il-mira ta'cystinosingħall-membrana lisosomali teħtieġ sinjal ibbażat fuq tyrosine u motif ta 'għażla ġdid. J Biol Chem. 2001;276:13314–13321.
7. Kalatzis V, Cherqui S, Antignac C, Gasnier B.Cystinosin, il-proteina difettuż filċistożi, huwa trasportatur taċ-ċistin liżosomali mmexxi minn H( ). EMBO J. 2001;20:5940–5949.
8. Cherqui S, Courtoy PJ. Is-sindromu ta’ Fanconi renali fiċistożi: għarfien patoġeniku u perspettivi terapewtiċi. Nat Rev Nephrol. 2017;13:115–131.
9. Nesterova G, Gahl W. Nephropathicċistożi: kumplikazzjonijiet tard ta' marda multisistemika. Pediatr Nephrol. 2008;23:863–878.
10. Cherqui S, Sevin C, Hamard G, et al. Akkumulazzjoni ta 'ċistina intralysosomal fil-ġrieden nieqsacystinosin, il-proteina difettuż filċistożi. Mol Cell Biol. 2002;22:7622–7632.
11. Nevo N, Chol M, Bailleux A, et al. Fenotip renali tal-ċistożimudell tal-ġurdien huwa dipendenti fuq l-isfond ġenetiku. Nephrol Dial Trapjant. 2010;25:1059–1066.
12. Kalatzis V, Serratrice N, Hippert C, et al. L-anomaliji okulari fi aċistożimudell tal-annimali jimita l-patoġenesi tal-mard. Pediatr Res. 2007;62:156–162.
13. Gwida Chevronnay HP, Janssens V, Van Der Smissen P, et al. Mudell tal-ġurdien jissuġġerixxi żewġ mekkaniżmi għal alterazzjonijiet tat-tirojde fit-tfalċistożi: tnaqqis fis-sintesi tat-tiroglobulina minħabba stress tar-retikulu endoplasmiku/rispons tal-proteini mhux mitwija u ipproċessar indebolit liżosomali. Endokrinoloġija. 2015;156:2349–2362.
14. Brodin-Sartorius A, Tete MJ, Niaudet P, et al. It-terapija b'cysteamine idewwem il-progressjoni tan-nefropatikaċistożifl-adolexxenti tard u fl-adulti.KilwaInt. 2012;81:179–189.
15. Cherqui S. Cysteamine terapija: trattament għalċistożi, mhux kura.KilwaInt. 2012;81:127–129.
16. Gahl WA, Balog JZ, Kleta R. Nephropathicċistożifl-adulti: storja naturali u effetti tat-terapija orali b'cysteamine. Ann Intern Med. 2007;147:242–250.
17. Cherqui S, Courtoy PJ. Is-sindromu ta’ Fanconi renali fiċistożi: għarfien patoġeniku u perspettivi terapewtiċi. Nat Rev Nephrol. 2017;13:115–131.
18. Napolitano G, Johnson JL, He J, et al. Indeboliment tal-awtofaġija medjata minn chaperone iwassal għal difetti selettivi ta' degradazzjoni liżosomali fil-marda tal-ħażna liżosomaliċistożi. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
19. Andrzejewska Z, Nevo N, Thomas L, et al.Cystinosinhuwa komponent tal-kumpless vacuolar H -ATPase-regulator-rag li jikkontrolla l-mira tal-mammiferi tas-sinjalar tal-kumpless 1 ta 'rapamicin. J Am Soc Nephrol. 2016;27: 1678–1688.
20. Rega LR, Polishchuk E, Montefusco S, et al. L-attivazzjoni tal-fattur ta 'traskrizzjoni EB ssalva anormalitajiet lisosomali f'cystinotickliewiċelloli.KilwaInt. 2016;89:862–873.
21. Dumic J, Dabelic S, Flogel M. Galectin-3: storja miftuħa. Biochim Biophys Acta. 2006;1760:616–635.
22. Sciacchitano S, Lavra L, Morgante A, et al. Galectin-3: molekula waħda għal alfabett ta' mard, minn A sa Z. Int J Mol Sci. 2018;19(2).
23. Calvier L, Martinez-Martinez E, Miana M, et al. L-impatt tal-inibizzjoni tal-galectin-3 fuq korrimenti kardijaċi u renali kkaġunati mill-aldosterone. JACC Falliment tal-Qalb. 2015;3:59–67.
24. Frenay AR, Yu L, van der Velde AR, et al. L-inibizzjoni farmakoloġika ta' galectin-3 tipproteġi kontra nefropatija ipertensiva. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F500–F509.
25. Kolatsi-Joannou M, Price KL, Winyard PJ, Long DA. Il-pektin taċ-ċitru modifikat inaqqas l-espressjoni ta' galectin-3 u s-severità tal-marda f'esperimenti akutkliewikorriment. PloS Wieħed. 2011;6:e18683.
26. Martinez-Martinez E, Ibarrola J, Clavier L, et al. L-imblokk tal-galectin-3 inaqqas il-fibrożi renali f'żewġ mudelli sperimentali normotensivi ta' ħsara renali. PloS Wieħed. 2016;11:e0166272.
27. Nevo N, Thomas L, Chhuon C, et al. Impatt ta'ċistożiglikosilazzjoni fuq l-istabbiltà tal-proteini permezz ta' tikkettjar ta' isotopi stabbli dinamiku differenzjali minn aċidi amminiċi fil-kultura taċ-ċelluli (SILAC). Proteomika taċ-Ċellola Mol. 2017;16:457–468.
28. Napolitano G, Johnson JL, He J, et al. Indeboliment tal-awtofaġija medjata minn chaperone iwassal għal difetti selettivi ta' degradazzjoni liżosomali fil-marda tal-ħażna liżosomaliċistożi. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
29. Majeski AE, Dice JF. Mekkaniżmi ta 'awtofaġija medjata minn chaperone. Int J Biochem Cell Biol. 2004;36:2435–2444.
30. Xie W, Zhang L, Jiao H, et al. L-awtofaġija medjata minn chaperone tipprevjeni l-apoptosi billi tiddegrada BBC3/PUMA. Awtofaġija. 2015;11:1623–1635.
31. Li X, Ma Q, Wang J, et al. c-Abl u Arg tyrosine kinases jirregolaw id-degradazzjoni liżosomali tal-onkoproteina Galectin-3. Mewt taċ-Ċelloli Differenti. 2010;17:1277–1287.
32. Takeuchi H, Tanaka M, Tanaka A, et al. Predominanza ta 'm2-makrofaġi polarizzati fil-kanċer tal-bużżieqa taffettwa l-anġjoġenesi, il-grad tat-tumur, u l-invażività. Oncol Lett. 2016;11:3403–3408.
33.Chavez-Galan L, Olleros ML, Vesin D, Garcia I. Ħafna aktar minn makrofaġi M1 u M2, hemm ukoll makrofaġi CD169( ) u TCR( ). Quddiem Immunol. 2015;6:263.
34. Henderson NC, Sethi T. Ir-regolament ta'infjammazzjoniminn galectin-3. Rev immunoloġiku 2009;230:160–171.
35. Deshmane SL, Kremlev S, Amini S, Sawaya BE. Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1): ħarsa ġenerali. J Interferon Cytokine Res. 2009;29:313–326.
36.Skowyra ML, Schlesinger PH, Naismith TV, Hanson PI. Reklutaġġ imqajjem ta 'makkinarju ESCRT jippromwovi tiswija endolysosomal. Xjenza. 2018;360(6384).
37.MacKinnon AC, Farnworth SL, Hodkinson PS, et al. Ir-regolamentazzjoni ta' attivazzjoni alternattiva tal-makrofagi bil-galectin-3. J Immunol. 2008;180: 2650–2658.
38. Sano H, Hsu DK, Yu L, et al. Galectin uman-3 huwa kimoattrattant ġdid għall-monoċiti u l-makrofaġi. J Immunol. 2000;165:2156–2164.