Astratt:L-għan ewlieni tal-istudju preżenti huwa li jistma, permezz ta 'analiżi differenzjali, diversi attivitajiet bijoloġiċi ta' kontenut fenoliku totali f'estratti alkoħoliċi ta 'tliet varjetajiet ta' palm tad-data sensittivi jew reżistenti għal Fusarium oxysporum. sp Albidinis. Hawnhekk, prodotti stilbene b'kapaċitajiet antiossidanti u bijoattivi ġew evidenzjati fil-varjetà reżistenti Taabdount (TAAR). Barra minn hekk, il-frazzjoni metanolika tal-varjetà tal-palm tad-data reżistenti għal TAAR fiha prodott sinifikanti, iddeterminat minn LCMS/MS u 1H, 13C NMR, li jappartjeni għall-familja ta 'hydroxy stilbenes, li juri kapaċitajiet antiossidanti, jinibixxi l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ, u jattiva. u jeżerċita effett protettiv fuq il-ħsara indotta mill-ipoklorit fil-proteasome 20S ta 'ċelluli tal-età tal-fibroblast tal-ġilda tal-bniedem. B'kollox, ir-riżultati preżenti jindikaw li l-hydroxytoluene preżenti f'Phoenix dactylifera L. reżistenti għandu jiġi studjat biex jifhem il-mod li l-istilbene jista 'jeżerċita kapaċità kontra t-tixjiħ.

Glycoside ta 'cistanche jista' wkoll iżid l-attività ta 'SOD fit-tessuti tal-qalb u tal-fwied, u jnaqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta' lipofuscin u MDA f'kull tessut, li jneħħi b'mod effettiv diversi radikali reattivi tal-ossiġnu (OH-, H₂O₂, eċċ.) u jipproteġi kontra ħsara fid-DNA kkawżata. minn OH-radikali. Cistanche phenylethanoid glycosides għandhom kapaċità qawwija ta 'scavenging ta' radikali ħielsa, kapaċità ta 'tnaqqis ogħla minn vitamina C, itejbu l-attività ta' SOD fis-sospensjoni ta 'l-isperma, inaqqsu l-kontenut ta' MDA, u għandhom ċertu effett protettiv fuq il-funzjoni tal-membrana ta 'l-isperma. Cistanche polysaccharides jistgħu jtejbu l-attività ta 'SOD u GSH-Px fl-eritroċiti u tessuti tal-pulmun ta' ġrieden senescent sperimentali kkawżati minn D-galactose, kif ukoll inaqqsu l-kontenut ta 'MDA u kollaġen fil-pulmun u fil-plażma, u jżidu l-kontenut ta' elastin, għandhom effett tajjeb għat-tħaffir fuq DPPH, itawwal iż-żmien ta 'ipoksja fil-ġrieden senescent, itejjeb l-attività ta' SOD fis-serum, u jdewwem id-deġenerazzjoni fiżjoloġika tal-pulmun fi ġrieden senescent b'mod sperimentali B'deġenerazzjoni morfoloġika ċellulari, esperimenti wrew li Cistanche għandu l-abbiltà antiossidant tajba u għandu l-potenzjal li jkun mediċina biex jipprevjeni u jikkura mard tal-ġilda li qed tixjieħ. Fl-istess ħin, echinacoside f'Cistanche għandu kapaċità sinifikanti li jneħħi r-radikali ħielsa DPPH u għandu l-abbiltà li jneħħi speċijiet ta 'ossiġnu reattiv u jipprevjeni d-degradazzjoni tal-kollaġen indotta minn radikali ħielsa, u għandu wkoll effett tajjeb ta' tiswija fuq il-ħsara ta 'anjoni radikali ħielsa tat-timina.

Ikklikkja fuq rou cong rong benefiċċji

【Għal aktar informazzjoni:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Kliem ewlieni:Phoenix dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (FoA); attivitajiet antiossidanti; attività kontra t-tirosinażi; attivazzjoni tal-proteasome; Analiżi LC-MS/MS; derivattivi stilbene

1. Introduzzjoni

Il-palm tad-data (Phoenix dactylifera L.) huwa monocot perenni mill-familja Arecaceae. Din is-siġra hija ta’ importanza kbira fil-ħajja tal-popolazzjonijiet tas-Saħara tan-Nofsinhar u tax-Xlokk tal-Marokk, kemm ekonomikament kif ukoll soċjalment. Il-marda Bayoud, li hija miġjuba mill-fungus tal-ħamrija Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1], naqqas b'mod sinifikanti l-produzzjoni tal-palm tad-datil Marokkini f'dawn l-aħħar snin [2]. Huwa stmat li FoA sparixxa minn żewġ terzi tal-wirt phoenicicole Marokkin iżda jkompli jeqred bejn 4.5 fil-mija sa 12 fil-mija tal-kultivari kummerċjali tal-ogħla kwalità tal-palm tad-data [2]. Saru ħafna sforzi biex tiġi miġġielda din il-marda u jiġu spjegati xi mekkaniżmi ta’ difiża tal-palm tad-data [3]. L-ewwel studji dwar il-mekkaniżmi ta 'difiża possibbli tal-palm tad-data enfasizzaw ir-rwol tal-komposti fenoliċi u l-kapaċità antiossidanti fit-tolleranza għal FoA [4,5]. L-analiżi bijokimika tal-kultivari tal-kompost fenoliku tal-għeruq reżistenti u sensittivi kienet l-ewwel studju bijokimiku li eluċidata l-benefiċċju tal-mekkaniżmi ta 'difiża tal-palm tad-data. Tabilħaqq, il-letteratura tindika li l-kultivari tal-għeruq reżistenti huma aktar sinjuri fl-5-caffeoyl shikimic acid u l-iżomeri tal-pożizzjoni tiegħu mill-kultivari tal-għeruq sensittivi [5]. Dawn il-komposti wrew b'mod effettiv attività antifungali potenzjali in vitro kontra FoA [6].

Il-kapaċità kbira tal-antiossidanti naturali li jneħħu r-radikali ħielsa hija dak li qed imexxi l-popolarità dejjem tikber tagħhom fl-ikel u l-istudji mediċi [7–10].

Pereżempju, speċijiet reattivi tal-ossiġnu huma fatturi aggravanti fil-ħsara ċellulari u l-proċessi tat-tixjiħ [11] u għalhekk huma konnessi ma 'ħafna mard. Bħala riżultat, molekuli antiossidanti jistgħu jgħinu lis-saħħa tal-bniedem billi jipprevjenu mard deġenerattiv u jnaqqsu l-konsegwenzi tat-tixjiħ [12]. F'dan l-istudju, aħna huma interessati fil-kapaċità ta 'antiossidanti li jippromwovu l-attivazzjoni tal-proteasome 20S u jipproteġu kontra l-ħsara ossidattiva tiegħu. Il-proteasome tabilħaqq jikkontribwixxi għaż-żamma tal-omeostasi ċellulari billi jippermetti l-proċess taċ-ċellula ta 'tneħħija ta' proteini bil-ħsara u l-qerda kkontrollata ta 'proteini ta' ħajja qasira [13]. Għalhekk, l-attivazzjoni tal-proteasome b'antiossidanti tista 'tkun strateġija ġdida kontra t-tixjiħ [14]. Barra minn hekk, dan ix-xogħol għandu l-intenzjoni li jesplora l-potenzjal tal-kontenut fenoliku ta 'għeruq reżistenti għal FoA bħala komposti bijoloġiċi attivi.

2. Materjali u Metodi

2.1. Kampjun tal-Pjanti

L-istudju sar għal kull kampjun b'materjal minn 10 kultivari adulti tal-palm tad-data (Phoenix dactylifera L.) imkabbra minn ħbula jew ikkontaminati jew mhux ikkontaminati li jinsabu fil-Palmaria Figuig, ix-Xlokk tal-Marokk. L-għeruq ewlenin (inklużi l-għeruq tagħhom li jieħdu n-nifs ta 'l-arja) għandhom dijametru minn 0.5 sa 2 ċm ta' varjetajiet suxxettibbli, bħal charas Bouffegous infettati (BI) jew dawk mhux infettati (BNI). Barra minn hekk, inġabret il-kultivar ta 'Taabdount reżistenti għal FoA (TAAR), u l-weraq ta' żewġ pjanti mediċinali ntużaw lokalment bħala trattament filattiku kontra FoA. Barra minn hekk, ir-rosmarin (R, Rosmarinus officinalis) u r-rummien (G, Punica granatum L.) [15] inġabru wkoll fl-istess pakkett mhux ikkontaminat fejn ġew analizzati u użati bħala l-kontroll. Il-kampjuni ttieħdu matul żewġ perjodi tas-sena, f'Settembru u fl-aħħar ta' Jannar (bejn l-2013 u l-2015), u nħażnu ermetikament f'temperatura ambjentali. Peress li l-kampjuni ġew akkwistati minn palmer, huma debitament iċċertifikati (identifikazzjoni u klassifikazzjoni) mill-Ministru tal-Agrikoltura tal-Marokk [16].

2.2. Preparazzjoni ta' l-Estratti

Wara ħasla estensiva bl-ilma, l-għeruq jew il-weraq ġew imnixxfa fid-dell, imbagħad mitħunin fi blender. Għal kull kampjun (BI, BNI, TAAR, R, u G), ġew miżjuda 10 mL ta’ metanol ma’ 1 g ta’ materjal niexef u mbagħad tħallew tħawwad għal 4 sigħat f’temperatura tal-kamra. Imbagħad, ġew iffiltrati u evaporati f'37 ◦C minn rotary-vap. L-estratt niexef tqiegħed f'soluzzjoni ta 'metanol f'konċentrazzjoni finali ta' 10 mg/mL jew 50 mg/mL (aktar tard użat biex jiġu analizzati attivitajiet bijoloġiċi in vitro). Twettqu tliet estrazzjonijiet indipendenti għal kull kampjun għall-analiżi tal-attività bijoloġika.

2.3. Attivitajiet Bijoloġiċi

2.3.1. Kontenut Fenoliku u Attivitajiet Antiossidanti

Il-proċedura deskritta minn Nacoulma et al. ġie applikat biex jiġi evalwat il-fenoliċi totali u l-kontenut totali ta’ flavonojdi ta’ kull estratt [17], b’adattament finali ta’ volumi f’200 µL biex jintuża fuq microplate reader. L-assorbanza f'760 nm u 510 nm, rispettivament, ġiet determinata kontra blank metanol. Kurvi ta’ kalibrazzjoni standard ta’ aċidu galliku (0–300 mg/L) (y=0.0083x flimkien ma’ 0.9106, r2=0.978) u quercetin (0–100 mg/L) (y {{14 }}.0008x flimkien ma' 0.0597, r2=0.994), rispettivament, intużaw.

Bl-użu tar-radikali ħielsa 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, ġiet investigata attività antiossidanti (DPPH). Bl-użu ta 'adattament finali ta' volumi f'300 µL u 275 µL, rispettivament, biex jimpjega qarrej tal-mikroplate, ġiet ivvalutata l-kapaċità tal-estratti li jnaqqsu l-ħadid (III), kif deskritt minn Nacoulma et al. [17]. Meta mqabbel ma 'vojt tal-metanol, l-assorbanza tkejjel f'517 nm u 700 nm, rispettivament. Imbagħad, bl-użu ta 'l-ekwazzjoni li ġejja, l-attività ta' tneħħija tar-radikali ħielsa ta 'kull soluzzjoni ġiet stmata bħala perċentwal ta' inibizzjoni:

Inkisbet kurva ta 'kalibrazzjoni standard bl-użu ta' aċidu askorbiku ({{0}}–100 mg/L) bħala standard antiossidant (y=0.0014x flimkien ma '0.0875, r2=0.998).

2.3.2. Assaġġ ta 'Inibizzjoni tat-Tkabbir tal-elju FoAMyc

B'modifika żgħira, il-metodu deskritt minn Neri et al. [18] intuża biex jiddetermina l-grad sa liema kimiċi puri inibixxu t-tkabbir tal-miċelju FoA. 7-Kultura ta' FoA ta' ġurnata kellha ħames millimetri ta' diski miċeljali mqiegħda fuq dixxijiet Petri b'medja PDA supplimentata bil-kimiċi puri elenkati hawn fuq f'50, 75, u 100 µg/mL. Il-pjanċi ġew inkubati għal 5 ijiem f'28 ◦C. Id-dijametru medju tal-kolonja mkejjel f'żewġ angoli retti ntuża biex jevalwa l-inibizzjoni tat-tkabbir tal-miċelju FoA. Kull trattament kien jikkonsisti fi tliet testijiet li jużaw tliet razez FoA differenti: FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, il-Belġju), u FoA Lokali (Palemeraie ta’ Figuig, il-Marokk), kif ukoll kontroll negattiv bl-użu ta’ mezz li ma kienx miżjud.

2.3.3. Vijabilità taċ-Ċelluli u Attività Proteasome 20S

Intużaw fibroblasti dermali umani normali minn raġel ta' {{0}}sena (NHDF) (Promocell, Heidelberg, il-Ġermanja) fejn iċ-ċelluli tqiegħdu f'densità ta' 100,{{3 }} ċelluli/mL f'RPMI 10 fil-mija supplimentati b'10 fil-mija (w/v) FBS, 1 fil-mija (w/v) L-glutamina, 100 unità/mL peniċillina, u 100 µg/mL streptomycin. Inżammu fi pjanċi 96-microwell bojod jew trasparenti għal 24 siegħa f'37 ◦C f'inkubatur b'ambjent umidifikat ta' 5 fil-mija CO2. Għall-assaġġ tal-attività tal-proteasome, kif ukoll għall-evalwazzjoni tal-effetti protettivi fuq il-ħsara indotta mill-ipoklorit, iċ-ċelloli mbagħad ġew ittrattati b'materjali tat-test (kompost pur minn 5 sa 50 µg/mL, kontroll pożittiv f'0.5 u/jew 1 µM, u estratti tal-pjanti metanoliċi minn 15 sa 50 µg/mL) għal 24 siegħa b'massimu ta' 0.3 fil-mija ta' DMSO fil-konċentrazzjoni finali, simultanjament, mingħajr bidliet, fir-rigward tal-kontroll negattiv. L-investigazzjoni tal-effetti protettivi tal-estratt TAAR jew il-komposti puri fuq l-attività tal-proteasome fisser li ċ-ċelloli tal-fibroblasti ġew aktar tard soġġetti għal 50 µM OCl− għal 35 min (magħżula bħala ottimali, mingħajr tossiċità taċ-ċelluli, inibitur-ossidant tal-kundizzjoni tal-proteasome 20S) [19]. L-istadji sperimentali li ġejjin tlestew bil-metodoloġija tal-fornitur (Assaġġ Ibbażat fuq Ċelluli Bħal Proteasome-Glo Chymotrypsin, Promega Corporation, USA): L-ewwel, esperiment ta’ vijabbiltà taċ-ċelluli fl-istess ħin li juża analiżi kolorimetrika jew MTT tal-vjola kristall li twettqu taħt kundizzjonijiet assolutament simili. intuża biex jinnormalizza dan l-assaġġ tal-bijoluminixxenza taċ-ċelloli. Id-devjazzjonijiet standard u l-fluworexxenza medja f'kampjuni triplikati minn żewġ testijiet separati (n=6) huma murija. Il-kejl u l-esperimenti indipendenti kollha (n=2) saru darbtejn.

2.3.4. Effett inibitorju fuq Tyrosinase tal-faqqiegħ mingħajr Ċelloli

Biex jiġi investigat l-effett fuq l-attività tal-enzima, il-materjali tat-test (antiossidanti puri jew estratti tal-pjanti metanoliċi) ġew inkubati minn qabel b'enzimi f'buffer tal-fosfat f'temperatura tal-kamra. Fil-qosor, 300 mL ta’ soluzzjoni ta’ 5 mM L-DOPA f’50 mM buffer tal-fosfat (pH 6.5) bi jew mingħajr materjali tat-test f’diversi konċentrazzjonijiet ġew miżjuda ma’ 96-mikroplate sew flimkien ma '100 mL ta' soluzzjoni milwiema ta 'faqqiegħ tyrosinase (20 unità). Għal 40 min, it-taħlita tal-assaġġ ġiet inkubata f'25 ◦C. Wara l-inkubazzjoni, il-livell ta 'produzzjoni ta' dopachrome tat-taħlita ta 'reazzjoni tkejjel spettrofotometrikament f'492 nm [20]. Kurva ta 'kalibrazzjoni standard ġiet impinġi bl-użu ta' aċidu galliku (0–1000 µg/mL) (y=-0.087 × flimkien ma '0.45; r2=0.97). Kull kejl u esperiment indipendenti (n=2) twettqu darbtejn.

2.4. Analiżi, iżolament, u Proċeduri ta' Eluċidazzjoni ta' Struttura

L-għerq mitħun (20 g) ġie estratt b'200 mL ta' metanol, aġitat għal 24 siegħa f'temperatura ambjentali, iffiltrat, ċentrifugat f'10,000× g għal 15-il minuta, u mbagħad evaporat f'35 ◦C permezz ta' rotary apparat għall-evaporazzjoni bil-vakwu. L-estratt mhux raffinat ġie dilwit b'20 mL ta 'ilma distillat, estratt mill-ġdid b'2 × 20 mL ta' aċetat etiliku, u mbagħad ikkonċentrat bl-użu ta 'sistema ta' evaporazzjoni bil-vakwu rotanti f'35 ◦C. Il-prodott ewlieni ġie ppurifikat permezz ta’ HPLC preparattiv bl-użu ta’ kolonna Waters C18 (SymmetryPrep 150 × 19 mm, daqs tal-partiċelli ta’ 7 µm) bl-istess kundizzjonijiet ta’ gradjent LC użati hawn fuq u rata ta’ fluss ta’ 5 mL/min. Il-quċċata f'RT kienet bejn 38.8 u 40.8 min, miġbura bejn 39.2 u 40.2 min; il-ġbir tal-volum totali ġie lajofilizzat biex jagħti 27 mg tal-kompost. MS u NMR 1H u 13C imbagħad identifikawha.

L-analiżi saru b'sistema ta 'serje LC 1200 b'riżoluzzjoni rapida bl-użu ta' diode array detector (DAD) użat għall-monitoraġġ tal-ispettri UV f'320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Is-separazzjoni tal-komposti saret fuq kolonna Beckman C18 (ULTRASPHERE 250 mm × 4.6 mm, 5 µm daqs tal-partiċelli) bl-użu ta’ gradjent ta’ 47 min ta’ 10 mM aċetat tal-ammonju/0.2 fil-mija aċidu formiku fl-ilma (v/v), pH 2.9 ({{{ 13}}solvent A), u 30/70 taħlita aċetonitrile/metanol (=solvent B). Ir-rata tal-fluss kienet ta '0.8 mL/min, u s-solvent B żdied minn 5 għal 35 fil-mija f'45 min u jerġa' ekwilibrat għal 2 min. F'serje ma 'DAD, intużat serje ESI-QTOF 6520 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) għal analiżi ta' MS b'riżoluzzjoni għolja u tandem MS (MS/MS) immirati. L-ispettri ġew akkwistati f'modi ta 'akkwist negattivi u b'riżoluzzjoni għolja (4 GHz).

L-ispettri 1H NMR u 13C NMR ġew irreġistrati fuq spettrometru Bruker Avance 300 li jaħdem fi 300 MHz. Tħassir ta 'induzzjoni b'xejn ġie pproċessat bil-MestreNova 5.3.2 NMR suite minn MestreLab Research SL.

2.5. Analiżi Statistika

L-esperimenti indipendenti kollha saru fi tliet kopji. Id-dejta kollha ġiet ippreżentata bħala l-valuri medji ± SD. Bl-użu tal-verżjoni 6 tal-programm GraphPad Prism, ir-riżultati ġew analizzati bl-użu tat-test Kruskal–Wallis mhux parametriku flimkien mat-test ta 'paragun multiplu ta' Dunn. p-Valuri 0.05 u inqas huma meqjusa bħala sinifikanti.

3. Riżultati u Diskussjoni

3.1. Kontenut totali ta 'Fenoliċi u Flavonojdi ta' Estratti Metanoliċi

Minħabba l-proprjetajiet redox tagħhom, il-komposti fenoliċi tal-pjanti nstabu li għandhom varjetà ta 'impatti bijoloġiċi, inkluża attività antiossidanti [21]. Tabella 1 turi l-kontenut fenoliku totali ta 'estratti ta' għeruq metanol (500 µg/mL) ta 'varjetajiet suxxettibbli ta' ghagras Bouffegous infettati (BI) u mhux infettati (BNI) mill-FoA jew reżistenti bħala Taabdount (TAAR). Il-konċentrazzjoni tagħhom varjat minn 171 ± 14 sa 253 ± 47 mg ta 'aċidu galliku eq./g. L-ogħla ammont ta 'dawn il-komposti nstabu fil-varjetà BNI, filwaqt li l-inqas konċentrazzjoni ġiet mill-estratt tal-għerq tal-metanol ta' BI. In-numru ta 'flavonoids f'dawn l-istess estratti (Tabella 1)) varja minn 240 ± 25 sa 406 ± 66 mg ta' quercetin eq./g, u, għal darb'oħra, l-ogħla ammont ġie attribwit lill-varjetà BNI. Hemm telf ta 'madwar 1/3 tal-ammont ta' numru totali ta 'polifenoli u flavonoids bejn varjetajiet mhux infettati (BNI) u varjetajiet infettati (BI) jew reżistenti (TAAR) għall-FoA. Għalhekk, ta 'min jinnota li tivverifika kif it-telf ta' komposti, deskritt bħala kritiku għall-kapaċità antiossidant tal-pjanta, jista 'jaffettwa l-attivitajiet bijoloġiċi li aħna interessati fihom.

3.2. Potenzjal Antiossidanti ta' Estratti Metanoliċi

L-attività ta 'scavenging radikali tad-DPPH hija metodu użat ħafna biex tiġi skrinjata l-attività antiossidant tal-estratti tal-pjanti [22]. Dan it-test jiddetermina jekk il-kimiċi antiossidanti misjuba fl-estratti humiex kapaċi jneħħu l-ispeċi radikali stabbli DPPH. Id-dejta sperimentali (Figura 1) turi li l-estratti metanoliċi kollha (f'100 jew 500 µg/mL) x'aktarx li jkollhom l-effett li jtellgħu s-radikali ħielsa bl-ogħla attivitajiet ta' tkessiħ ta' DPPH osservati fl-għeruq TAAR (87.0 fil-mija tal-inibizzjoni tad-DPPH). L-attività antiossidanti tidher li ma tiddependix fuq il-preżenza tal-ammont totali ta 'komposti polifenoliċi jew flavonojdi. Madankollu, l-attività aħjar tal-estratti metanoliċi tal-għeruq TAAR tista 'tkun dovuta għal aktar komponenti li jagħtu l-idroġenu li jinsabu fl-estratt.

Il-qawwa tat-tnaqqis hija evalwata mill-abbiltà tal-estratt metanoliku li jittrasforma l-Fe (III) għal Fe (II). Din il-kapaċità li tnaqqas il-Fe (III) tista' tiġi attribwita għan-numru u l-pożizzjoni tal-gruppi hydroxyl preżenti f'komposti fenoliċi u l-kapaċità tagħhom li jagħtu l-idroġenu [23]. Tabella 2 wriet l-attivitajiet ta 'tnaqqis ta' estratti metanoliċi tal-kampjuni tal-pjanti tagħna meta mqabbla ma 'aċidu askorbiku bħala standard. Estratti metanoliċi ta 'għeruq TAAR fihom tnaqqis għoli (95 ± 1 mg ta' aċidu askorbiku eq./g), filwaqt li l-inqas kontenut inkiseb minn estratti ta 'għeruq BNI (27 ± 2 mg ta' aċidu askorbiku eq./g).

Twettqet analiżi ta 'rigressjoni biex tikkorrelata r-riżultati miksuba (koeffiċjent ta' korrelazzjoni (R)). Instabu korrelazzjonijiet lineari sinifikanti bejn il-kontenut totali fenoliku u flavonojdi (R {{0}}.849, p <0}.05) u bejn DPPH u l-assaġġ tal-qawwa tat-tnaqqis (R=0. 816, p <0.05), iżda ma kien hemm xejn bejn il-kontenuti fenoliċi jew flavonojdi tal-estratti metanoliċi u l-attivitajiet antiossidanti tagħhom. Fl-aħħarnett, l-estratti metanoliċi kollha wrew attivitajiet antiossidanti sinifikanti kontra l-attività ta 'scavenging radikali DPPH u l-analiżi tal-qawwa tat-tnaqqis, iżda dawn l-attivitajiet antiossidanti jidhru mhux relatati mal-kontenut totali fenoliku jew flavonoid. Għalhekk, dawn is-sejbiet jimplikaw li tip partikolari ta 'kimika, aktar milli l-kwantità ta' komposti fenoliċi jew flavonojdi misjuba fl-estratti diversi tagħna, huwa x'aktarx responsabbli għall-attività antiossidanti tal-estratti tal-pjanti taħt reviżjoni. Ftit komponenti fenoliċi li kienu deskritti qabel u huma individwi attivi ħafna jista 'jkollhom ukoll impatt fuq l-attività anti-ossidanti ta' estratti tal-pjanti: Indipendentement mill-konċentrazzjoni tagħhom, il-komposti fenoliċi misjuba fl-inbid aħmar maturat jistgħu juru diversi proprjetajiet anti-radikali konnessi mal-aspetti strutturali tagħhom. 24].

Il-varjetà TAAR reżistenti għal FoA turi l-ogħla attività antiossidant fost il-varjetajiet differenti ta 'palm tad-data. B'referenza għal-letteratura, l-iżvilupp ta 'reżistenza f'dawn il-palm tad-data partikolari jista' jiġi attribwit għal żieda fl-ammont ta 'isomeri pożizzjonali differenti ta' caffeoyl shikimic acid [5].

3.3. Attività Tyrosinase tal-faqqiegħ

L-attività tat-tyrosinase diphenolase tal-faqqiegħ tikkatalizza l-ossidazzjoni ta 'żewġ derivattivi ta' dopaquinone li jwasslu għal sinteżi ta 'melanin. Ir-riżultati ppreżentati fit-Tabella 3 juru l-abbiltà tal-komposti preżenti fl-estratti metanoliċi ta 'TAAR, BI, u BNI li jinterferixxu ma' l-idrossilazzjoni ta 'l-DOPA permezz ta' inibizzjoni ta 'l-attività tyrosinase tal-faqqiegħ. Barra minn hekk, dawn ir-riżultati juru li l-estratt metanoliku ta 'TAAR huwa statistikament aktar attiv minn estratti ta' BI (p < 0.0 5) u BNI (p < 0.05) fuq l-attività tyrosinase tal-faqqiegħ. Għalhekk, il-kapaċità tal-estratti tal-għeruq tad-dati tal-palm li jinibixxu l-attività tat-tyrosinase tidher li ssegwi l-istess tendenza bħall-abbiltajiet antiossidanti.

Tyrosinases huma primarjament assoċjati mal-ġilda, l-għajnejn, u l-pigmentazzjoni tax-xagħar. Tabilħaqq, tyrosinases huma enzimi tal-melanoġenesi involuti fl-ewwel passi tal-bijosintesi tal-melanin, u l-melanin huwa assoċjat ma 'protezzjoni kontra radjazzjoni ultravjola (UV), solari, jew gamma, suxxettibilità ċellulari mnaqqsa, u reżistenza tal-ħajt taċ-ċelluli kontra enzimi idrolitiċi [20]. Bil-maqlub, produzzjoni żejda ta 'melanin jista' jkollha rwol f'anomaliji tal-ġilda jew mard aktar serju bħall-kanċer (eż. Melanoma), u eċċess ta 'dopaquinone jista' jwassal għal mard newrodeġenerattiv (eż., marda ta 'Parkinson) [20,25]. Barra minn hekk, il-melanoġenesi ġiet irrappurtata li tipproduċi perossidu tal-idroġenu u ROS oħra, li jesponu melanoċiti umani għal livelli għoljin ta 'stress ossidattiv [26]. Diversi komposti antiossidanti naturali (fenoliċi, flavonoids, u oħrajn) miksuba minn pjanti inibixxu l-attività tyrosinase phenolase [27,28]. Hawnhekk, l-estratt TAAR jidher li fih kompost(i) suxxettibbli li jinibixxi t-tixjiħ tal-ġilda u l-melanoġenesi.

3.4. Attività Proteasome ta' Estratti tal-Palm tad-Data tal-Għerq Metanoliku

Ġie rrappurtat li livelli elevati tal-proteasome 20S iwasslu għal żieda fit-tolleranza għall-istress ossidattiv [13]. Għalhekk, ġiet investigata r-regolamentazzjoni tal-attività tal-proteasome minn estratti ta 'għeruq ta' kultivari BI, BNI, u TAAR. L-attività mkejla tal-proteasome 20S hija relatata mal-attività simili għall-kimotripsina (CT-L) f'ċelloli ta' età NHDF (ara Materjali u Metodi). Kif muri fil-Figura 2A, ċelloli ttrattati b'50 µg/mL ta 'estratti metanoliċi għal 24 siegħa urew attivazzjoni sinifikanti tas-CT-L għal estratti BI u TAAR u inibizzjoni għal BNI mingħajr ma ġġeneraw aktar minn 30 fil-mija ta' tossiċità taċ-ċelluli. L-estratt ta 'l-għeruq TAAR wera attivazzjoni ta' proteasome ingaġġanti meta mqabbla ma 'dik ta' 1µM ta 'aċidu lipoiku (Ct plus) (212 fil-mija u 248 fil-mija, rispettivament). Il-proteasome huwa kumpless proteinase ċilindriku li fih qalba ta 'erba' ċrieki f'munzelli responsabbli għat-tneħħija ta 'proteasome degradati anormalment (26S) u proteini bil-ħsara b'mod ossidattiv (20S proteolytic core complex) (Ciechanover, 1998). Kif ippreżentat fix-xogħol ta 'Hwang [29], disfunzjoni tal-proteasome tista' tkun kontributur għat-tixjiħ tal-ġilda tal-bniedem. Tabilħaqq, intwera li ċ-ċelluli senescent li qed tixjieħ u replikattivi naqsu l-attività tal-proteasome kif ukoll il-livelli tal-proteini tas-subunitajiet tal-proteasome. Il-fatt li kemm il-proteini ċellulari ossidizzati kif ukoll/jew bil-ħsara akkumulaw aktar spiss f'dawn iċ-ċelloli jissuġġerixxi li l-mogħdija ubiquitin-proteasome tad-degradazzjoni tal-proteini hija implikata fi proċessi intrinsiċi ta 'tixjiħ. Il-Figuri 2B, u C juru l-abbiltà tal-estratt metanoliku TAAR li jipproteġi ċ-ċelloli ta 'età NHDF mill-inibizzjoni tal-attività tal-proteasome 20S mill-ossidant OCl-. Tabilħaqq, l-ossidant OCl− jinibixxi f'50 fil-mija l-attività tal-proteasome taċ-ċelluli ta 'kontroll (Ct), filwaqt li l-ogħla attivatur ta' 20S-proteasome (aċidu lipoic f'1 µM, Ct plus ) b'aktar minn 50 fil-mija ta 'attività ta' inibizzjoni jonqos milli jreġġa' lura l-inibizzjoni tal-attività tal-proteasome 20S mill-OCl−, filwaqt li l-konċentrazzjonijiet l-oħra kollha ttestjati (15, 50, u 75 µg/mL) tal-estratt metanoliku TAAR jidhru li jreġġgħu lura din l-inibizzjoni (0 sa 19 fil-mija tal-inibizzjoni). Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-estratti tal-għeruq TAAR jista 'jkun fihom molekuli li jistgħu jdewmu t-tixjiħ tal-ġilda mhux biss billi jagħtu spinta lill-attività tal-proteasome iżda wkoll billi jikkontrobattu l-effetti ta' inibizzjoni tal-aġenti ossidanti. Fost dawn il-molekuli, l-aċidu caffeoyl shikimic huwa l-aktar probabbli li jkun preżenti, kif ukoll komposti oħra. Barra minn hekk, saru analiżi LC-DAD-MS (MS) u NMR biex jidentifikaw il-komposti ewlenin tal-estratti u huma b'dan diskussi fit-taqsima li jmiss.

3.5. Analiżi Spettrometriċi

3.5.1. LC-DAD-MS Analiżi ta' Estratti Metanoliċi

L-istudju komparattiv tal-għeruq tal-palm tad-data ma żvela l-ebda differenzi kwalitattivi, iżda, minflok, differenzi semi-kwantitattivi (f'kromatogrammi DAD u MS) bejn il-kultivari (Figura 3A, D) ġew innutati sa ċertu punt. Tabilħaqq, ir-riżultati preżenti ma jippermettux rabta bejn ir-reżistenza tal-palm tad-data għal żieda fl-ammont ta 'isomeri pożizzjonali differenti ta' caffeoyl shikimic acid minħabba li l-kultivar reżistenti (TAAR) juri l-inqas abbundanza relattiva ta 'dawn il-komposti (Figura 3C). It-tliet isomeri pożizzjonali ta' caffeoyl shikimic acid (m/z=335.0768 bi żball ta' 1.2 ppm) ġew identifikati mill-ispettri MS/MS tagħhom (Figura S6) bi framment f'm/z 179.0340, li jikkorrispondi għal framment ta 'aċidu caffeic A (C9H7O4) u framment f'm/z 135.0443, li jikkorrispondi għad-dekarboxilazzjoni ta' aċidu kaffejku (C8H7O2). Madankollu, kompost ieħor li ma jikkorrispondix ma 'aċidi caffeoyl shikimic (Figura 3C) u li l-ħin ta' żamma tiegħu huwa 29 min b'm/z=259.0607 (jew 373.0543 għal adduct TFA), jidher li huwa distint b'mod ċar bejn kultivari differenti. (Figura 3D). Id-differenza fl-akkumulazzjoni ta 'dan il-kompost fl-għeruq ta' kultivari sensittivi u reżistenti (0.135 fil-mija), bi proporzjon madwar 1:35 (minn m/z=259.06, dejta tal-MS), tista 'tispjega l-bijoloġika prominenti. attivitajiet osservati għall-estratt metanoliku ta' dan l-għerq.

【Għal aktar informazzjoni:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】