Tetrahymena Thermophila Intużat Bħala Il-Materjal Sperimentali

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

F'dan l-esperiment, Tetrahymena thermophila intuża bħala l-materjal sperimentali. T. thermophila huwa ċiljat li jgħix ħieles li jeżisti b'mod wiesa 'fl-ekosistemi akkwatiċi globali u huwa simili għal ċelloli metażoan fl-istruttura u l-kumplessità funzjonali5. L-iskoperta ta 'ribozynnel6 u telomerasel7 f'Tetrahymena tat spinta kbira fir-riċerka dwar il-mekkaniżmu ta' kontra t-tixjiħ, li ġiet ippremjata żewġ Premjijiet Nobel18. Minħabba ċ-ċiklu ta 'tkabbir qasir tiegħu, il-kultura faċli, u l-isfond ġenetiku ċar, T. thermophile jista 'jipprovdi riċerka doppja in vivo u in vitro f'disinn sperimentali wieħed. T. thermophila intuża b'suċċess fl-iskrinjar tad-droga u l-mekkaniżmi farmakoloġiċi20. Aktar importanti minn hekk, informazzjoni dwar l-evoluzzjoni molekulari tal-familja ta 'T. thermophila glutathione peroxidase ġiet mikxufa l9-2. Il-profil tal-informazzjoni ta 'T.cistanche genghis khanġeni thermophila GPX jistgħu jinkisbu mill-Tetrahymena Functional Genomics Database (TetraFGD) (http://tfgd.ihb.ac.cn/) u TGD (http://ww. ciliate.org) 22. Għaxar mit-tnax-il GPX putattiv ġew identifikati bħala phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase (PHGPx) fid-database komparattiva tal-ġenoma Tetrahymena. PHP, GPX dipendenti mis-selenju, jista' speċifikament inaqqas l-idroperossidu tal-fosfolipidi biex jipproteġi liposomi u bijofilms tal-leċitina minn ħsara ossidattiva23.PHGPxin T. thermophila għandu massa molekulari medja ta' madwar 21.7 kDa22, li hija simili għall-massa molekulari (20-22 kDa) tal-proteina monomeru PHGPx deskritta fil-mammiferi24. Barra minn hekk, għadd kbir ta’ rapporti wrew li l-espressjoni GPX ta’ Tthermophila kienet kwantitattivament differenti u dipendenti fuq is-sors tal-istress (ossidant, induttur tal-apoptożi jew metall)2122 u l-ħin tal-espożizzjoni20-24

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Billi tqabbel l-effetti ta 'l-estratt milwiema u l-monomeri prinċipali ta' G.lucidum fuq il-kurva tat-tkabbir u d-densità massima ta 'T. thermophila, dan l-istudju kiseb l-aħjar estratt ta' G. lucidum kontra t-tixjiħ. Il-mekkaniżmu kontra t-tixjiħ ta 'G. lucidum, speċjalment id-determinazzjoni tat-tip ta' azzjoni tal-familja GPX, ġie investigat fil-livelli molekulari, ċellulari u individwali. Ir-riżultati ta 'dan l-istudju huma mistennija li jikkontribwixxu għall-applikazzjoni klinika tal-prodotti G. lucidum.

materjali u metodi

Ganoderma lucidum estratt milwiema u monomeri. B'referenza għar-rapport ta 'Cuong25,20 g ta' G. lucidum imnixxef (Changbai Mountain Senbao Specialty Store, Jilin) ​​ġie mitħun u estratt f'1000 mL ta 'ddHO. L-estratt milwiema nġabar biċ-ċentrifugazzjoni, ikkonċentrat għal 100 mL bit-tnixxif bil-vakwu, u maħżun fi grad -20 sakemm jintuża.

G. lucidum polysaccharide, Ganoderic Acid A, Ganoderal A, u G. lucidum ergosterol inxtraw minn Chengdu Must Biotechnology Co., Ltd. Dawn it-tliet standards ġew maħlula fil-metanol skond id-disinn uniformi u miżjuda mal-medja SPP. Kultura taċ-ċelluli u trattament tad-droga. Tetrahymenathermophila (SB210) ġiet ipprovduta mill-Istitut tal-Idrobijoloġija, Akkademja tax-Xjenzi Ċiniża, Wuhan, IPR Ċina. T. thermophila ġie kkultivat f'inku-batur ta' 28 grad. Il-mezz SPP kien fih 2 fil-mija (w/v) proteose peptone, 0.1 fil-mija estratt tal-ħmira (Oxoid), 0.2 fil-mija glukożju, u 0.003 fil-mija sequestrene. Skond id-disinn uniformi (Tabelli Supplimentari S1 u S2), G. lucidum estratt milwiema,G. lucidum polysaccharide, Aċidu Ganoderiku A, Ganoderal A u G. lucidum ergosterol ġew miżjuda mal-medium tal-kultura. Il-grupp ta 'kontroll ġie sostitwit bl-istess volum ta' ilma distillat doppju, bi 3 kampjuni paral-lel f'kull grupp. Wara li daħlu fil-fażi logaritmika, ittieħdu kampjuni kull sagħtejn sal-fażi ta 'tnaqqis. Id-densità ta 'T. thermophila kienet magħduda mill-bord tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm, u r-relazzjoni bejn id-densità ta' T. thermophila u l-ħin ġiet imfassla.

Analiżi traskrizzjonali. L-esperiment sar bi pjanċa tal-{0}}bir, u kull bir kien magħmul minn 900 μL SPP. Fil-grupp sperimentali, ġie miżjud 100 μL ta '200 mg/mL G. lucidum estratt milwiema. Il-grupp ta 'kontroll kien ittrattat b'100 μL ddH O minflok. Tliet kampjuni paralleli ġew stabbiliti f'kull grupp.estensjoni tal-ħajja ta' cistancheIl-grupp ta 'kontroll u l-grupp sperimentali kienu t-tnejn f'fażi logaritmika (20 h), u l-fażi ta' tnaqqis (27h) inġabret għall-analiżi traskriptomika. Kull grupp kien bijoloġikament duplikat, u l-kampjuni kollha ġew soġġetti għal assaġġ tal-mikroarray tat-traskrizzjoni sħiħa (Biomarker Technologies, Beijing, iċ-Ċina). Il-profil tal-espressjoni tal-ġene ġie skopert minn Affymetrix 3'IVT Expression Array Biex jitnaqqas l-effett tal-espressjoni tal-ġeni tal-valur, RPKM Greater than or equal to 5 u FC(Fold Change) Greater than or equal to 2 intużaw bħala l-kriterja għall-iskrin ġeni espressi b'mod differenzjat (DEGs)KOBAS intuża biex jirrealizza l-analiżi tal-mogħdija ta 'GeneOntology (GO) u Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG). Il-mogħdija ta 'arrikkiment ġiet iddeterminata mill-valur P-adj ikkoreġut Inqas minn jew ugwali għal 0.05.Ir-riżultati tat-traskriptome ġew ivverifikati bl-użu ta' traskrizzjoni inversa kwantitattiva PCR (RT-qPCR) (Metodu ara fajl Supplimentari). Imbagħad, in-netwerk ta 'interazzjoni proteina-proteina (PPI) ġie stabbilit ibbażat fuq id-database STRING, u l-ġene ċentrali ġie skrinjat bl-użu ta' CytoHubla biex jidentifika n-nodu ċentrali fis-softwer Cytoscape.

Osservazzjoni ta 'tbajja' tal-fidda u mikroskopija elettronika ta' trażmissjoni (TEM). Il-proċedura tat-tbajja’ tal-fidda kienet skont il-metodu ta’ Foissner26. thermophila ġiet osservata taħt mikroskopju taż-żejt. L-ultrastruttura ta 'T. thermophila ġiet osservata minn TEM. Iċ-ċelloli ttrattati bl-estratt milwiema G.lucidum u l-grupp ta 'kontroll inġabru permezz ta' ċentrifugazzjoni f'600 × g għal 2 min. Iċ-ċelloli kienu prefissati f'2.5 fil-mija glutaraldehyde u miżmuma f'4 gradi għal 8 sigħat. Il-kampjuni ġew maħsula b'PBS (pH7.5) tliet darbiet, ċentrifugati f'3000xg for5min, u mbagħad iffissati b'1 fil-mija osmium tetraoxide (4h). Minn hemm 'il quddiem, id-deidrazzjoni saret bl-użu ta' aċetun gradjent ta '15 fil-mija sa 100 fil-mija. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew inkorporati fir-reżina ta 'viskożità baxxa Embed 812(TAAB). Tqaddid wara, sezzjonijiet ultrarqiqa (60-80 nm) inqatgħu minn slicer ultrathin. L-ultrastruttura ġiet osservata permezz ta 'mikroskopju elettroniku ta' trażmissjoni (JEOL JEM-1010, Ġappun).

Determinazzjoni tal-ħsara taċ-ċelluli. LROS intraċellulari ġie skopert mis-sonda fluworexxenti sensittiva 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCFH-DA) 27.L-attività tal-malondialdehyde(MDA) ġiet determinata minn kits kummerċjali pprovduti minn Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Jiangsu, Ċina). Il-metodu biex tiġi ddeterminata l-abbiltà li jiġu eliminati r-radikali hydroxyl(·OH) kien kif deskritt minn Takemura28. L-abbiltà tal-estratt milwiema G. lucidum li jelimina r-radikali ħielsa OH kienet espressa bħala d-densità ottika tal-grupp sperimentali nieqes id-densità ottika tal-grupp ta 'kontroll.

Cistanche jista 'anti-aging

attività PHGPx. Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)/NADP* proporzjon u glutathione/glutathione disulfide (GSH/GSSG) ġew determinati bl-użu ta 'NADP*/NADPH Kwantifikazzjoni Kit (S0179, Beyotime), GSH/GSSG Assay Kit (S0053, Beyotime). Dawn kollha assaġġi saru skond il-protokoll tal-manifattur.

Riżultati

L-effetti tal-estratt milwiema G.lucidum u l-monomeri G.lucidum fuq it-tkabbir ta 'T. ther-mochila. Bħal studji preċedenti7,G. lucidum polysaccharide kien il-komponent ewlieni tal-estratt milwiema ta 'G. lucidum f'dan l-esperiment skont l-identifikazzjoni tal-ispettrofotometru (Fig. S1 Supplimentari). Is-sustanzi attivi tal-estratt milwiema ta 'G. lucidum ġew analizzati wkoll minn GC-MS. Id-dijagramma tal-jone totali tal-estratt milwiema G. lucidum wriet li ll komponenti kienu jeżistu fl-estratt milwiema (Fig. S2 Supplimentari). Fost il-komposti tal-estratt milwiema G.lucidum (Tabelli Supplimentari S3 u S4),G. lucidum acid A, Ganoderal A, u G. lucidum ergosterol intgħażlu skont il-ħin ta 'żamma tagħhom u l-grad ta' tqabbil.

Sabiex jitqabblu l-effetti tal-estratt milwiema ta 'G. lucidum u dawn il-monomeri ewlenin fuq it-tkabbir ta' T. thermophila, l-estratt milwiema ta 'G. lucidum u s-soluzzjoni ta' monomeri ta 'G. lucidum ġew miżjuda mal-mezz tal-kultura ta' T. thermophila. Ir-riżultati ġew murija f'Fig.1. Id-densità massima tal-grupp ta 'kontroll kienet 6 × 104 ċelluli / mL f'24 siegħa. Id-densità taċ-ċelluli tal-grupp ta 'estratt milwiema G. lucidum minn 12 sa 20 siegħa kienet kważi l-istess bħal dik tal-grupp ta' kontroll, iżda minn 20 sa 25 siegħa kienet ogħla b'mod sinifikanti mid-densità taċ-ċelluli tal-grupp ta 'kontroll.cistanche nzFl-istess ħin, il-fażi logaritmika ġiet imtawla b'1 siegħa, id-densità massima kienet 1.15 × 105 ċelluli / mL. Għalkemm id-densità massima tal-grupp tal-polisakkarid G. lucidum kienet ogħla minn dik tal-grupp ta 'kontroll b'9.7 × 104 ċelluli/mL, kienet inqas mill-grupp ta' estratt milwiema G.lucidum. Id-densità massima ta 'G. lucidum acid A, Ganoderal A u G. lucidum ergosterol ma qabżetx dik tal-grupp ta' kontroll, li wriet li s-soluti ta 'l-alkoħol ta' dawn il-monomeri ma kinux iwasslu għat-tkabbir ta 'T. thermophila. Jista 'jiġi konkluż li l-estratt akweju G.lucidum li fih varjetà ta' sustanzi attivi jista 'jippromwovi t-tkabbir ta' T. thermophila aktar mill-monomeri tiegħu.

Effett kontra t-tixjiħ tal-estratt milwiema G. lucidum. Bil-ħin tal-kultura jiżdied, l-intensità tad-dawl ta 'ROS fil-fażi ta' tnaqqis (Fig. 2b) kienet ogħla minn dik fil-fażi logaritmika (Fig. 2a). Wara li żiedet l-estratt milwiema G. lucidum, għalkemm l-intensità tal-fluworexxenza tal-fażi ta 'tnaqqis (Fig. 2d) kienet għadha mtejba meta mqabbla ma' dik tal-fażi logaritmika (Fig. 2c), kienet sinifikament aktar baxxa minn dik tal-grupp ta 'kontroll. Il-kontenut ta 'MDA fil-grupp ta' kontroll kien ukoll ogħla fil-fażi ta 'tnaqqis milli fil-fażi logaritmika (Fig.2e). Sadanittant l-abbiltà tat-tkessiħ ta 'OH fil-fażi ta' tnaqqis kienet inqas minn dik fil-fażi logaritmika (Fig. 2e). Il-bilanċ bejn l-ossidazzjoni u t-tnaqqis intilef u l-ġisem xjaħ. Wara li żiedet l-estratt milwiema ta 'G. lucidum, il-kontenut ta' MDA kien aktar baxx minn dak fil-grupp ta 'kontroll (kolonna tax-xellug f'Fig. 2e), u l-ammont ta' OH miġbur minn ċelloli fil-fażi logaritmika u l-fażi ta 'tnaqqis kien ogħla minn dak fil- grupp ta' kontroll (kolonna tal-lemin f'Fig. 2e). It-tkabbir ta 'T[ thermophila jista' jitqabbel mal-proċess ta 'tixjiħ ta' organiżmi multiċellulari permezz tal-ħsara ċellulari tiegħu. Hekk kif ROS u MDA akkumulaw, it-tkabbir ġie inibit u d-densità ta 'T. thermophila tnaqqset. Iż-żieda ta 'estratt milwiema ta' G. lucidum tista 'żżomm il-bilanċ redox f'T. thermophila u tikseb effetti kontra t-tixjiħ.

Analiżi ta 'ġeni espressi b'mod differenzjali u verifika permezz ta' RT-qPCR. Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, l-espressjoni ta' 11,519 ġene fil-fażi logaritmika ta 'T. thermophila inbidlet b'mod sinifikanti wara li żżid estratt milwiema ta' G. lucidum ma 'SPP. Fosthom, 6201 ġeni kienu regolati 'l fuq u 5318 ġeni kienu regolati 'l isfel.daqs tal-pene cistancheL-espressjoni ta '8772 ġene nbidlet b'mod sinifikanti matul il-fażi ta' tnaqqis, fosthom 4721 ġene kienu regolati 'l fuq u 4051 ġeni kienu regolati 'l isfel. Fi studji preċedenti fil-laboratorju tagħna, il-

effett kontra t-tixjiħ ta 'G.lucidum fuq Stylonychia kien rifless fl-indiċi antiossidanti, għalhekk 10 ġeni (Tabella Supplimentari S5) relatati ma' antiossidanti ġew magħżula b'mod każwali minn fost id-DEGs, u l-eżattezza tad-dejta RNA-seq ġiet ivverifikata minn RT- qPCR. Il-mudelli ta 'espressjoni ta' dawn l-10 ġeni fil-fażi logaritmika u l-fażi ta 'tnaqqis kienu konsistenti mat-tendenza tad-dejta RNA-seq (Figura Supplimentari S3). Ir-riżultat indika li d-dejta tal-RNA-seq kienet affidabbli u setgħet tintuża għal analiżi sussegwenti.

Arrikkiment GO u analiżi tal-mogħdija KEGG. Id-DEGs fil-fażi logaritmika kienu involuti f'14-il proċess bijoloġiku (BP) b'6 tipi ta 'funzjonijiet molekulari (MF) u kienu jeżistu fil-komponenti taċ-ċelluli kollha (CC) (Fig. 3a). Id-DEGs fil-fażi ta 'tnaqqis kienu involuti fi 12 BP b'4 tipi ta' MF u kienu jeżistu fi 12 CC L-aktar BP involut fiż-żewġ fażijiet kien il-proċess metaboliku, MF kien vinkolanti, u CC kien membrana. Fost il-proċess metaboliku, l-irbit u l-membrana, il-ġeni up-regolati ammontaw għal 70 fil-mija fil-fażi logaritmika (Fig. 3b) u 75 fil-mija fil-fażi ta 'tnaqqis (Fig. 3c). Dawn ir-riżultati juru li l-estratt milwiema ta 'G. lucidum jista' jippromwovi ż-żamma tal-integrità tal-membrana taċ-ċellula fiż-żewġ fażijiet.

Twettqet analiżi tal-arrikkiment tal-mogħdija KEGG biex tanalizza aktar id-DEGs bejn iż-żewġ fażijiet. Fil-fażi logaritmika, 94 mogħdija kienu kkonċentrati, fosthom 68 fil-mija tal-ġeni totali kienu involuti fil-metaboliżmu. Fil-fażi ta 'tnaqqis, 91 mogħdija ġew arrikkit, fosthom il-metaboliżmu kien għadu l-akbar mogħdija, li jammonta għal 68 fil-mija. L-aqwa 20 mogħdija fil-fażi logaritmika (Fig. 3d) u l-fażi ta 'tnaqqis (Fig. 3e) intużaw biex tfassal chart tal-bużżieqa u wrew li irrispettivament mis-sinifikat jew in-numru ta' ġeni involuti, l-effett tal-G.cistanche trabestratt milwiema lucidum iffukat primarjament fuq il-mogħdija tal-metaboliżmu tal-glutathione. Fil-fażi logaritmika, 38 ġeni espressi b'mod differenzjali ġew arrikkit f'din il-mogħdija, li jammontaw għal 45 fil-mija. Fil-fażi tat-tnaqqis, 43 ġeni espressi b'mod differenzjali ġew arrikkit f'din il-mogħdija, li jammontaw għal 50 fil-mija.

In-netwerks ta' interazzjoni proteina-proteina (PPI) tad-DEGs. L-eluċidazzjoni tad-DEGs fil-mogħdija tal-metaboliżmu tal-glutathione u l-għarfien dwar l-interazzjonijiet tagħhom ma 'proteini oħra se jgħinu biex jesploraw aktar il-mekkaniżmu regolatorju potenzjali tal-estratt milwiema ta' G. lucidum. Kemm il-fażi logaritmika (Fig.4a) kif ukoll il-fażijiet ta 'tnaqqis (Fig.4b) kellhom l-aktar effetti importanti fuq GPX1, GPX2, GPX7and GPX11. Permezz tal-mistoqsija tad-database TetraFGD, dawn l-enzimi GPX kienu jappartjenu għal PHGPx (Tabella Supplimentari S6). Għalhekk, l-enzimi antiossidanti, speċjalment PHGPx, għandhom rwol importanti fil-promozzjoni tat-tkabbir ta 'T. thermophila permezz ta' l-induzzjoni ta 'estratt milwiema ta' G. lucidum.

Attività tal-GPS u verifika tal-funzjoni. L-attività ta 'PHGPx tirreferi għar-rata ta' tnaqqis fl-assorbiment NADPH2". Il-valur NADPH/NADP* fil-fażi ta 'tnaqqis tal-grupp ta' kontroll kien aktar baxx minn dak fil-fażi logaritmika (Fig. 5a). Ir-riżultat issuġġerixxa li l-attività ta 'PHGPx naqas biż-żieda tal-ħin tal-kultura.Wara li żżid l-estratt milwiema ta 'G. lucidum, il-valur miżjud NADPH/NADP fil-fażi ta' tnaqqis kien għadu inqas minn dak fil-fażi logaritmika, iżda ogħla miż-żewġ fażijiet tal-grupp ta 'kontroll.Dan ir-riżultat indika li l-estratt milwiema G.lucidum jista 'jippromwovi l-attività ta' PHGPx.

PHP jista 'jikkatalizza speċifikament it-tnaqqis ta' idroperossidu tal-fosfolipidi permezz ta 'glutatijon imnaqqas (GSH), sabiex jikkonverti perossidu tal-lipidi tossiċi (PL-PUFA-OOH) għal aċidi grassi polyunsaturated mhux tossiċi (PL-PUFA-OH) b'mod effiċjenti30. Il-bidla tal-proporzjon GSH/GSSH tista 'tirrifletti l-bidla ta' PL-PUFA-OOH u PL-PUFA-OH Minħabba t-tnaqqis fl-attività PHGPx (Fig. 5a), il-proporzjon ta 'GSH/GSSH fil-grupp ta' kontroll naqas ukoll b' iż-żieda fil-ħin tal-kultura (Fig. 5b). Madankollu, wara li żżid G.lucidum estratt milwiema, il-proporzjon ta 'GSH/GSSH żdied fil-fażi logaritmika u l-fażi ta' tnaqqis. Il-PL-PUFA-OOH tossiku intraċellulari fil-grupp sperimentali ġie trasformat fi PL-PUFA-OH mhux tossiku, li kien aktar minn dak tal-grupp ta 'kontroll. L-osservazzjoni tal-morfoloġija mikroskopika u ultrastruttura. L-effett protettiv tal-estratt milwiema ta 'G. Luci-dum fuq il-membrana ġie viżwalizzat permezz ta' tbajja tal-fidda tal-ammonja u TEM. Billi tqabbel il-fażi logaritmika tal-grupp ta 'kontroll (Fig. 6a) u l-fażi ta' tnaqqis tal-grupp ta 'kontroll (Fig. 6c), instab li l-morfoloġija taċ-ċelluli ta' T. thermophila kienet deformata serjament bl-estensjoni tal-ħin tal-kultura, u in-nukleu kien imċajpra, li jindika li ċ-ċelloli dehru li kienu fi stat ta 'tixjiħ. Madankollu, fil-grupp ta 'estratt milwiema G.lucidum, il-morfoloġija u l-integrità taċ-ċelloli kienu protetti sew fil-fażi logaritmika (Fig. 6e) u l-fażi ta' tnaqqis (Fig. 6g). Bidliet ultrastrutturali fiċ-ċelloli ġew osservati minn TEM. Il-linja u l-kontorn tal-mitokondrijali kienu mċajpra fil-fażi ta 'tnaqqis (Fig. 6d) meta mqabbla mal-fażi logaritmika (Fig.6b) fil-grupp ta' kontroll. It-tħassir tal-mitokondrija żdied bl-estensjoni taż-żmien tal-kultura. Iż-żieda ta 'estratt milwiema ta' G. lucidum tejbet il-morfoloġija tal-mitokondrija fil-fażi logaritmika (Fig. 6f) u l-fażi ta 'tnaqqis (Fig. 6h). G. lucidum estratt milwiema garantit il-funzjoni tal-mitokondrija, li hija relatata mill-qrib mal-integrità tal-membrana. Għandu jiġi nnutat li fil-fażi logaritmika, il-mitokondrija fil-grupp sperimentali wrew bidliet morfoloġiċi (Fig. 6f, h), iżda l-integrità tal-membrana ma ġietx affettwata.

Diskussjoni

L-applikazzjoni ta 'estratti ta' G.lucidum għandha storja twila kemm fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża kif ukoll fl-Asja tal-Lvant. Numru kbir ta 'studji wrew l-effikaċja tagħhom. Rapporti preċedenti sabu li G.lucidum estratt milwiema kien fih mhux biss G. lucidum polysaccharides iżda wkoll Glucidum triterpenoids. Skond rapporti preċedenti, Ganoderma acid, Ganoderma aldehyde, u Ganoderma ergosterol huma l-ingredjenti ewlenin ta 'G. lucidum triterpene 3. Jaġixxu b'funzjonijiet ta' tiswija differenti għaċ-ċelluli (Tabella 1). L-estratt milwiema ta 'Ganoderma lucidum fih varjetà ta' sustanzi attivi, li jintegra l-funzjonijiet tal-erba 'sustanzi attivi l-oħra, li mhux biss jistgħu jirreżistu l-ossidazzjoni iżda wkoll iżommu l-integrità tal-membrana. F'dan l-istudju,

il-promozzjoni tat-tkabbir ta 'l-estratt milwiema G. lucidum fuq T. thermophila vverifikat din ir-relazzjoni ta' inklużjoni. Permezz tal-analiżi tal-estratt milwiema ta 'G. lucidum bil-kromatografija tal-fluss tal-jone totali (Fig. S2 Supplimentari), seta' jinstab li l-ħin ta 'dissoluzzjoni ta' diversi sustanzi attivi kien differenti. Allura l-estratt milwiema G. lucidum isir solvent organiku kumpless bl-estensjoni tal-ħin tat-togħlija. Aħna naħsbu li s-sustanzi attivi fl-estratt akweju G.lucidum jistgħu jaġixxu fi żminijiet differenti, li jirriżultaw f'sinerġija. Dan għandu jkun studju ulterjuri fil-futur.

L-analiżi ta 'T. thermophila transcriptome esplorat l-effett ta' G. lucidum estratt milwiema fuq l-espressjoni tal-ġeni matul it-tkabbir. Wara t-trattament b'estratt milwiema ta 'G. lucidum, PHGPx deher influwenza ewlenija fid-densità taċ-ċelluli u l-ħin tal-ġenerazzjoni. Dan ir-riżultat ikkonferma li l-estratt milwiema G.lucidum aġixxa fuq it-tip ta 'familja GPX dipendenti mis-selenju. PHP hija seleno-proteina multifunzjonali li mqassma b'mod wiesa 'fil-ġisem li tista' mhux biss tipparteċipa f'reazzjonijiet antiossidanti iżda wkoll tnaqqas direttament il-lipidi tal-membrana biex tipproteġi l-integrità tas-sistema tal-membrana40. Meta mqabbel ma 'GPXs oħra, PHGPx għandu volum iżgħar u idrofobiċità akbar. Bosta rapporti wrew li l-espressjoni żejda ta 'PHGPx fiċ-ċelloli tista' tirreżisti r-rispons taċ-ċelluli għal ħsara tal-perossidazzjoni endoġena (eż., tixjiħ) u eżoġena (eż. ambjentali) 2-45.PHP hija l-unika enzima li tista' tnaqqas direttament il-PL-PUFA- OOH tal-membrana fil-komposti hydroxyl korrispondenti, u b'hekk tippermetti t-terminazzjoni tal-perossidazzjoni u tipproteġi l-membrana bijoloġika mill-ħsara tal-perossidazzjoni4647. Iż-żieda fil-kontenut ta 'PL-PUFA-OOH kienet ir-raġuni għall-ħsara tal-membrana taċ-ċellula fil-grupp ta' kontroll matul il-fażi ta 'tnaqqis, li saret ċiklu vizzjuż u aċċellerat is-senescence taċ-ċelluli.F'dan l-istudju, il-kontenut ta' ROS u MDA (Fig.2) ta 'T.thermophila fil-grupp ta' kontroll żdied biż-żieda tal-ħin tal-kultura. Il-membrana dehret deformazzjoni serja fil-fażi ta 'tnaqqis permezz tal-osservazzjoni morfoloġika. Madankollu, meta ġie miżjud estratt milwiema ta 'G. lucidun, l-espressjoni ta' PHGPx kienet regolata 'l fuq. Għalhekk, PL-PUFA-OOH fuq il-membrana ġie trasformat f'PL-PUFA-OH mhux tossiku, u l-istabbiltà tal-istruttura tal-membrana hija msaħħa kemm fil-fażi logaritmika kif ukoll fil-fażi ta 'tnaqqis. Skont l-osservazzjoni tal-membrana bit-tbajja tal-fidda tal-ammonja u TEM, jista 'jiġi konkluż li l-estratt akweju G.lucidum ippenetra l-membrana taċ-ċellula matul il-proċess tat-tkabbir. Dan l-effett ta 'tiswija fuq il-membrana taċ-ċellula jista' jinduċi s-sustanzi attivi tal-estratt milwiema G. lucidum biex jidħlu fiċ-ċitoplasma u jipproteġu l-istruttura tal-membrana tan-nukleu u l-mitokondrija biex jippromwovu l-metaboliżmu ta 'T. thermophila u jiksbu effetti anti-aging. Kif juru r-riżultati ta 'l-arrikkiment lKEGG, numru kbir ta' ġeni differenzjali huma kkonċentrati fil-mogħdijiet metaboliċi. Dawn ir-riżultati indikaw li l-estratt milwiema G. lucidum kien ta 'benefiċċju għall-metaboliżmu tal-glutathione u l-eliminazzjoni ta' perossidi tossiċi prodotti mit-tixjiħ taċ-ċelluli.

B'mod ġenerali, l-estratt milwiema G. lucidum ippromwova l-espressjoni tal-enzima PHGPx dipendenti mis-selenju fil-familja GPX. It-titjib tal-attività PHGPx jista 'mhux biss inaqqas ir-rispons tal-istress ossidattiv in vivo iżda wkoll inaqqas speċifikament u b'mod effettiv id-depożizzjoni tal-lipidi tal-membrana bijoloġika u jżomm l-integrità tal-membrana (Fig.7). Konsegwentement, is-sustanzi attivi fl-estratt milwiema G. lucidum jidħlu fiċ-ċelloli permezz tal-membrana intatta u jippromwovu l-metaboliżmu tagħhom. Dan ħoloq ċiklu virtuż biex jinkiseb l-effett ta 'anti-aging.

Dan l-artikolu huwa estratt minn Rapporti Xjentifiċi|(2022) 12:3139|https://doi.org/10.1038/s41598-022-06985-z