Effetti Ta 'Xiaoyaosan Fuq Il-Passaġġ tas-Sinjali tal-KAMP fil-Cortex Ċerebrali Ta' Firien Depressi
Nov 26, 2025
Astratt
Għan:Biex tevalwa bidliet fis-serum prostaglandin E2 (PGE2) u sustanza P (SP) u l-espressjoni mRNA ta 'cyclic adenosine monophosphate (cAMP) u cAMP rispons element-binding protein 1 (CREB1) fil-kortiċi ċerebrali ta' firien depressi, u biex tesplora l-mekkaniżmu molekulari li bih Xiaoyaosan jeżerċita effett antidepressant.
Metodi: Tmienja u erbgħin firien maskili SD ġew assenjati b'mod każwali għal erba 'gruppi (n=12 kull wieħed): normali, mudell, Xiaoyaosan, u fluoxetine. Ġie stabbilit mudell ta 'depressjoni bl-użu ta' stress ta 'immobilizzazzjoni kronika (CIS). Xiaoyaosan ingħata permezz ta 'gavage 30 minuta qabel l-immudellar ta' kuljum għal 21 jum. Effetti li jixbħu l-antidipressanti ġew evalwati b'osservazzjoni makroskopika tal-imġieba, test tal-preferenza tas-sukrożju, test tal-post miftuħ u test tal-għawm sfurzat. Il-livelli tal-cAMP kortikali u l-mRNA CREB1 ġew ikkwantifikati b'qPCR ta' fluworexxenza f'ħin reali. PGE2 u SP tas-serum ġew imkejla b'assaġġ immunosorbenti marbut ma' enżimi (ELISA).
Riżultati: Meta mqabbel mal-grupp mudell, kemm Xiaoyaosan kif ukoll fluoxetine attenwaw b'mod sinifikanti l-imġieba bħal dipressjoni; żieda fil-konsum ta 'sukrożju, għadd ta' trobbija vertikali, qsim orizzontali, u grooming fit-test fuq il-post miftuħ; u tnaqqis fil-ħin ta' immobilità kumulattiv fit-test tal-għawm sfurzat. Iż-żewġ trattamenti tejbu l-istopatoloġija kortikali, espressjoni elevata ta 'cAMP u CREB1 mRNA fil-kortiċi ċerebrali, u naqqsu l-livelli tas-serum PGE2 u SP (P <0.01).
Konklużjoni:Xiaoyaosan jeżerċita effetti antidipressanti ċari fil-firien depressi, potenzjalment permezz tar-regolamentazzjoni tal-mogħdija ta 'sinjalazzjoni tal-cAMP kortikali.
Kliem ewlieni: Xiaoyaosan; Dipressjoni; cAMP; CREB1; Prostaglandin E2 (PGE2); Sustanza P (SP)
Introduzzjoni
Id-dipressjoni hija kawża ewlenija ta' morbożità u diżabilità madwar id-dinja, u tfixkel ħafna l-kwalità tal-ħajja. Xiaoyaosan, formula klassika ta 'mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM) b'ħafna ħxejjex aromatiċi, wriet utilità klinika f'preżentazzjonijiet depressivi komuni, li tappoġġja l-iżvilupp kontinwu tagħha bħala terapija botanika.
Mekkanikament, il-kaskata tas-sinjalar cAMP–protein kinase A (PKA)–CREB hija ċentrali għar-regolazzjoni tal-burdata u l-imġieba affettiva. Ir-regolazzjoni baxxa ta 'din il-mogħdija tista' tippreċipita fenotipi depressivi. CREB huwa implikat fil-patofiżjoloġija tad-dipressjoni, u l-attivazzjoni minn cAMP ittejjeb it-traskrizzjoni tal-ġeni downstream; il-polimorfiżmi u t-tnaqqis funzjonali f'dan l-assi ġew ikkunsidrati bħala fatturi ta' suxxettibilità għad-dipressjoni.
Il-medjaturi infjammatorji jikkontribwixxu wkoll għad-dipressjoni. Prostaglandin E2 (PGE2) jimmedja risponsi infjammatorji, u PGE2 elevat jista 'jikkaġuna imġieba depressiva. Is-sustanza P (SP), newropeptide marbuta mal-istress u l-effett, ħafna drabi hija elevata fis-serum ta 'pazjenti bid-dipressjoni. Għalhekk, espressjoni tal-cAMP kortikali mibdula u CREB1 mRNA flimkien ma 'PGE2 u SP tas-serum elevati jistgħu jirrappreżentaw mekkaniżmu molekulari sottostanti korriment kortikali fid-dipressjoni.
Għalkemm bosta formuli komposti TCM ġew investigati għal mekkaniżmi antidipressanti, l-influwenza tal-biċċa l-kbira tal-formuli fuq il-mogħdija tal-cAMP għadha mhux ċara. Bl-użu ta 'paradigma ta' stress ta 'immobilizzazzjoni kronika (CIS) biex jinduċi imġieba bħal dipressjoni fil-firien, dan l-istudju jinvestiga aktar il-mekkaniżmu antidepressant ta' Xiaoyaosan u jqabbilha ma 'fluwoxetine, bil-għan li jinforma l-iżvilupp futur ta' terapewtiċi botaniċi u jipprovdi għarfien azzjonabbli għal nies li qed ifittxu għajnuna għad-dipressjoni.
KIF IS-SUPPLIMENTI TAL-ĦXIEĠ GĦAT-TCM IĦELSU S-SINTOMI TAL-PROSTATITE
Materjali
Annimali
Tmienja u erbgħin firien adulti b'saħħithom Sprague–Dawley (8 ġimgħat, 200-220 g) inxtraw minn Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd [Nru tal-Liċenzja: SCXK (Beijing) 2016-0006]. Il-firien kienu miżmuma fil-faċilità tal-annimali tal-barriera tal-Università ta 'Guizhou tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża f'22 ± 2 grad, umdità relattiva 35%-55%, 12 h dawl / 12 h skur (7:00-19:00), erba' firien għal kull gaġġa, b'7 ijiem ta 'akklimatizzazzjoni. Approvazzjoni tal-etika: Guizhou University of TCM (Nru. 20210142).
KIF IS-SUPPLIMENTI TAL-ĦXIEĠ GĦAT-TCM IĦELSU S-SINTOMI TAL-PROSTATITE
TCM SUPPLIMENTI TAL-ĦWAWA GĦALL-BEJGĦ
Drogi
Il-formula Xiaoyaosan segwiet il-proporzjonijiet Taiping Huimin Heji Ju Fang. Ħwawar mhux raffinati nxtraw minn Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), White Peony (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), Atractylodes moqlija (Baizhu), Poria (Fuling), Licorice moqli għall-għasel (Zhigancao), proporzjon ta’ Menthaang (Boohed), Menthaang (Boohed), u proporzjon ta’ Menthaang 5:5:5:5:5:4:1:5. Id-decoction u l-konċentrazzjoni tħejjew skont l-edizzjoni tal-2020 tal-Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina minn Hunan Jiuzhitang, li sservi bħala l-intervent tat-TCM. Dożi ġew konvertiti għall-firien, maħlula f'ilma dejonizzat, u ppreparati bħala sospensjoni.
Fluoxetine hydrochloride kapsuli (Patheon France; ippakkjati minn Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; lott Nru . 6663B; 20 mg/kapsula) intużaw bħala l-antidipressant ta 'referenza.
Reaġenti
ExTaq (TAKARA, Cat. DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, Cat. #K0242); primers (Qingke Bio); Kitts ta' Rat PGE2 u SP ELISA (Ċentru tal-Bijoteknoloġija ta' Shanghai Yuanju, Cat. CK-E30697 u CK-E30122).
Strumenti
7900 sistema qPCR ta' fluworexxenza f'ħin reali (Applied Biosystems, USA); mikropipetti (Eppendorf); mikrotomu tal-paraffin (HY1508, Jinhua Huiyou); Sistema ta' ilma ultrapur Aquapro (AJY-0501, Aikepu).
Metodi
Raggruppament u mmudellar
Il-firien ġew assenjati b'mod każwali għal gruppi normali, mudell, Xiaoyaosan, u fluoxetine (n=12 kull wieħed). Ħlief għall-grupp normali, il-gruppi kollha għaddew minn CIS għal 3 sigħat / jum f'ħinijiet randomised għal 21 jum. Il-firien normali ma ġewx imrażżna iżda kienu mċaħħda mill-ikel u l-ilma matul l-istess ħin twieqi biex jaqblu mal-immaniġġjar.
Amministrazzjoni tad-droga
Ibbażat fuq studji preċedenti, Xiaoyaosan ingħata permezz ta 'gavage f'2.22 g mediċina mhux raffinata · kg-1 · jum-1; fluoxetine f'2.0 mg·kg-1·jum-1. Id-drogi ġew maħlula f'ilma dejonizzat. Id-dożi ġew ikkalkulati bil-konverżjoni tal-erja tas-superfiċje tal-ġisem; volum gavage kien 10 mL/kg, mogħti 30 minuta qabel kull sessjoni ta 'trażżin ta' kuljum. Gruppi normali u mudell irċevew volumi ugwali ta 'ilma dejonizzat.
Miżuri u proċeduri ta' riżultat
3.1 Osservazzjonijiet makroskopiċi
Osservazzjonijiet ta 'kuljum irreġistraw status mentali, lokomozzjoni, u dehra ġenerali.
3.2 Test tal-preferenza tas-sukrożju
Il-firien ġew imħarrġa għal 3 ijiem. Jum 1: żewġ fliexken ta '1% sukrożju għal kull gaġġa. Jum 2: flixkun wieħed mibdul b'ilma ddistillat doppju ta' volum ugwali. Wara 24 siegħa ta 'privazzjoni ta' ikel u ilma, kull far irċieva flixkun wieħed ta '1% sukrożju u wieħed ta' ilma distillat doppju għal siegħa. Fliexken ġew miżun biex tiġi kkalkulata l-preferenza ta 'sukrożju (%): konsum ta' sukrożju / (konsum ta 'sukrożju + ilma) × 100%.
3.3 Test fil-miftuħ
F'kamra kwieta intuża kamp miftuħ b'ħitan iswed (125 cm × 125 cm × 50 cm). Il-firien tpoġġew fiċ-ċentru; fuq 5 minuti, ġew irreġistrati għadd ta' trobbija vertikali, qsim ta' grilja orizzontali, u avvenimenti ta' grooming. L-arena tnaddfet b'75% etanol u ilma bejn il-provi.
3.4 Test tal-għawm sfurzat
Il-firien tpoġġew individwalment f'ċilindri tal-ħġieġ b'35 ċm ilma f'20 ± 2 grad. Mill-immersjoni, l-imġieba ġiet irreġistrata għal 5 min b'kamera b'riżoluzzjoni għolja. Tkejjel il-ħin ta 'immobbiltà kumulattiv fuq 5 min (immobilità definita bħala moviment minimu biex iżomm l-imnieħer 'il fuq mill-ilma, flessjoni żgħira tal-ġisem għall-bilanċ). L-ilma nbidel bejn l-annimali.
3.5 Istopatoloġija
Il-firien ġew anestetizzati bi 3% sodium pentobarbital (0.15 mL/100 g). Sitt firien għal kull grupp għaddew minn perfużjoni transkardijaka b'4% paraformaldehyde segwit minn 0.9% salina għal fissazzjoni, dekapitazzjoni u estrazzjoni tal-moħħ. L-imħuħ kienu mgħaddsa f'4% paraformaldehyde (4 gradi) għal 72 siegħa, inkorporati fil-paraffin, mirqum, u sezzjoni f'~5 μm. Is-sezzjonijiet ġew imqiegħda f'wiċċ l-ilma fi 48 grad, immuntati, moħmija f'60 grad għal 4 sigħat, deparaffinizzati u idratati mill-ġdid, imtebba 'b'ematossilin, differenzjati, imlaħlaħ, counterstained bl-eosin, deidratati, ikklerjati, u coverslipped għal eżami mikroskopiku. Is-sitt firien li fadal għal kull grupp ġew ewtanizzati; Il-kortiċi ċerebrali ġie mqassam malajr fuq is-silġ u maħżun f'-80 grad għall-estrazzjoni tal-RNA.
3.6 kwantifikazzjoni mRNA
Is-sekwenzi fil-mira ġew irkuprati minn NCBI u primers iddisinjati bi Primer 6.0.
cAMP: Quddiem 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; Reverse 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 bp.
CREB1: Quddiem 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Reverse 5′-GGATACCTGGCTAATGTGGCA-3′; 105 bp.
GAPDH: Quddiem 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Reverse 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 bp.
Kundizzjonijiet qPCR: pre-denaturazzjoni 90 grad għal 30 s; 45 ċiklu ta '95 grad 10 s, 60 grad 30 s, 72 grad 30 s. Analiżi tal-kurva tat-tidwib: 95 grad 1 min, 55 grad 1 min, 95 grad 1 min.
3.7 Fatturi infjammatorji fis-serum
Għall-ELISA: (i) jistabbilixxu standards u kampjuni; żid 50 μL standards f'konċentrazzjonijiet gradati mal-bjar standard; (ii) żid 40 μL dilwent tal-kampjun mal-bjar vojt u tal-kampjuni, imbagħad kampjun 10 μL u ħawwad; (iii) żid 100 μL konjugat ta' l-enżima mal-blanks kollha ħlief; (iv) issiġilla u inkuba f'37 grad għal siegħa; (v) buffer tal-ħasil konċentrat dilwit 1:20; (vi) aħsel 5 darbiet u nixxef; (vii) żid 50 μL Substrat A imbagħad 50 μL Substrat B, inkuba fi 37 grad protett mid-dawl għal 15-il minuta; (viii) żid soluzzjoni ta' waqfien; (ix) aqra l-assorbiment f'450 nm bi blanks issettjati għal żero.
Analiżi statistika
Id-dejta ġiet analizzata f'SPSS 26.0 u espressa bħala medja ± SD. Wara li kkonfermat in-normalità u l-omoġeneità tal-varjanza, intużat ANOVA one-way. P <0.05 tqieset statistikament sinifikanti.
Nota tal-qarrej għal prattikanti u nies li qed ifittxu l-għajnuna
Għall-iżviluppaturi ta 'antidipressanti botaniċi/TCM: L-istudju jorbot formula klassika ma' mogħdija newrobijoloġika speċifika (cAMP–CREB) u medjaturi infjammatorji (PGE2, SP). Tali sinjalar ta 'modulazzjoni doppja-newroplastiċità flimkien ma' infjammazzjoni-allinjat mal-bijoloġija tad-dipressjoni kontemporanja u jista 'jiggwida l-ottimizzazzjoni tal-formula, l-għażla tal-bijomarkaturi, u strateġiji ta' kombinazzjoni ma 'SSRIs bħal fluoxetine.
Għal individwi li jesploraw għajnuna għad-dipressjoni: Ir-riżultati prekliniċi ma jistgħux jissostitwixxu l-kura medika, iżda jissuġġerixxu li Xiaoyaosan jista 'jtejjeb l-imġiba depressiva billi jinnormalizza s-sinjalar tal-moħħ u jnaqqas is-sinjali infjammatorji. Jekk tikkunsidra għażliet erbali, ikkonsulta kliniċista kwalifikat, speċjalment jekk inti fuq antidipressanti, biex tevita interazzjonijiet u tiżgura d-dożaġġ u l-kontroll tal-kwalità.
Takeaway transizzjonali
Xiaoyaosan tejbet l-imġieba, l-istoloġija tal-moħħ, u l-markaturi molekulari fil-firien depressi indotti minn CIS, x'aktarx permezz tar-regolazzjoni 'l fuq tas-sinjalar tal-cAMP/CREB kortikali filwaqt li tnaqqas PGE2 u SP periferali. Filwaqt li jibni fuq dan, l-istudju li jmiss se jqassam ir-regolaturi upstream ta 'cAMP (eż., isoforms adenylyl cyclase u phosphodiesterases) u jiddetermina jekk Xiaoyaosan jimmodula direttament dawn il-miri jew jaġixxix primarjament permezz ta' mogħdijiet anti-infjammatorji li jikkonverġu fuq CREB.
