Studju dwar l-effetti terapewtiċi u l-mekkaniżmi tal-estratt ta' Cistanche Deserticola fuq Sarkopenja Indotta minn Dexamethasone fil-ġrieden

Astratt:Dan l-istudju esplora l-effett terapewtiku tal-estratt ta' Cistanche deserticola (CdE)fuq sarkopenja indotta minn dexamethasone (Dex) fil-ġrieden u l-mekkaniżmu possibbli ta 'azzjoni.L-ewwelnett, il-komponenti farmakodinamiċi u miri importanti ta' Cistanche ġew studjati mill-farmakoloġija tan-netwerk, u l-mogħdijiet ġew arrikkit biex ibassru l-mekkaniżmu ta 'azzjoni ta' CdE. F'esperimenti fuq l-annimali, ġrieden 50 KM ġew maqsuma b'mod każwali f'5 gruppi (grupp ta 'kontroll, grupp mudell Dex, grupp ta' doża għolja CdE, grupp ta 'doża medja CdE, u grupp ta' doża baxxa CdE). Ħlief għall-grupp ta 'kontroll, il-gruppi l-oħra ġew injettati taħt il-ġilda biex jinduċu sarkopenja wara 42 jum, u t-tliet gruppi ta' trattament ingħataw dożi differenti ta 'CdE oralment fl-istess ħin. Matul l-esperiment, il-piż tal-annimali, il-kapaċità tal-eżerċizzju u l-kompożizzjoni tal-ġisem ġew ittestjati regolarment. Wara li l-annimali ġew sagrifikati, ġie kkalkulat il-koeffiċjent tal-muskoli tar-riġlejn ta 'wara, u twettqu istoloġija u testijiet relatati tal-espressjoni tal-ġeni. Ir-riżultati tal-farmakoloġija tan-netwerk juru li CdE jista' jikkura s-sarkopenja billi jirregola l-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni relatati ma' IGF-1. Ir-riżultati ta 'esperimenti fuq l-annimali juru li CdE ireġġa' lura b'mod sinifikanti t-tnaqqis tal-kontenut ta 'laħam dgħif u l-koeffiċjent tal-muskoli ikkawżat minn Dex, ittejjeb il-kapaċità ta' eżerċizzju, tnaqqas il-kontenut ta 'xaħam, ittejjeb l-istatus istoloġiku tal-muskoli, IGF-1, MyoD u MyoG regolata 'l isfel, u rregola l-espressjoni ta' Atrogin-1 u MuRF-1. CdE għandu effett terapewtiku fuq l-atrofija tal-muskoli indotta minn Dex u jista 'jtejjeb il-morfoloġija istoloġika tal-muskoli, u l-mekkaniżmu ta' azzjoni tiegħu jista 'jkun l-attivazzjoni tal-mogħdija ta' sinjalazzjoni IGF-1.

Kliem ewlieni: Estratt ta' Cistanche deserticola; dexamethasone; sarkopenija; farmakoloġija tan-netwerk; IGF-1 mogħdija

 

 

benefiċċju echinacoside

 

1. Materjali u Metodi

1.1 Reaġenti

Ir-reaġenti li ġejjin intużaw f'dan l-istudju:

Injezzjoni ta' Dexamethasone sodium phosphate(Lott Nru. 040191147) – Shanxi Ruicheng Kelong Veterinary Medicine Co., Ltd.

Salina normali(Lott Nru L220092407) - Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.

Etanol anidru, xylene, paraformaldehyde, uglutaraldehyde– Grupp Farmaċewtiku Nazzjonali taċ-Ċina

Aċidu idrokloriku(CAS: 7647-01-0) - Chengdu Kelon Chemicals Co., Ltd.

Soluzzjoni għat-tbajja' ta' ematossilin– Wuhan Servicebio Biological Technology Co., Ltd.

Soluzzjoni taż-żebgħa tal-eosina– Hefei Bomei Biological Technology Co., Ltd.

812 kit għall-inkorporazzjoni tar-reżina epoxy, aċetat uranil– Kumpanija SPI

Molpure® RNA Estrazzjoni Kit, Kit PrimeScript RT, TB Green™ Premix Ex Taq™ II– YEASEN Biotechnology u Takara Biomedical Technology Co., Ltd.

3 ingredjenti attivi ta' cistanche

 

1.2 Strumenti

Tagħmir ewlieni użat:

NK-10 gauge analogu tal-push-pull– Wenzhou Weidu Instrument Co., Ltd.

Analizzatur tal-kompożizzjoni tal-ġisem QMR06-060H– Korporazzjoni Niumag

Mikroskopju trinokulari diġitali BA 210– Motic Group

JEM-1400 Mikroskopju elettroniku ta' trażmissjoni FLASH– JEOL, il-Ġappun

Sistema PCR f'ħin reali QuantStudio™ 3– ThermoFisher Xjentifiku

 

1.3 Analiżi Farmakoloġija tan-Netwerk

Biex tinvestiga l-komposti attivi u l-mekkaniżmi potenzjali ta 'Cistanche tubulosafit-trattament tasarkopenja, a farmakoloġija tan-netwerkapproċċ ġie użat:

Komposti attivitaCistanche tubulosaġew skrinjati bl-użu tal-Database tas-Sistemi tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża Farmakoloġija (TCMSP), b'limiti ta':

Bijodisponibilità Orali (OB) Iktar minn jew ugwali għal 30%

Tixbh tad-Droga (DL) Ikbar minn jew ugwali għal 0.18

Kompost addizzjonali uinformazzjoni fil-miraġie rkuprat minn:

PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)

SwissTargetPrediction(http://www.swisstargetprediction.ch)

Ġeni relatati mal-mard għas-sarkopenijankisbu minn:

DisGeNET(http://www.disgenet.org)

GeneCards(https://www.genecards.org)

Analiżi tal-interazzjoni proteina-proteina (PPI).twettqet permezz tal-database STRING(https://string-db.org).

A netwerk ta' interazzjoni kompost-mira-ġeneinbniet bl-użuCytoscape 3.2.1.

Arrikkiment funzjonalitwettqet bl-użu ta’:

DAVID(https://david.ncifcrf.gov) għalOntoloġija tal-Ġene (GO)

KEGG(https://www.kegg.jp/kegg/pathway.html) għall-analiżi tal-mogħdija

Ir-riżultati ġew viżwalizzati permezzGħodda online tal-bijoinformatika(https://www.bioinformatics.com.cn/)

cistanche tubulosa

1.4 Preparazzjoni taCistanche tubulosaEstratt (CdE)

Il-Cistanche tubulosaestratt ġie ppreparat kif ġej:

Flieli tal-ħaxix mhux raffinat (Lott Nru Y221217) inxtraw minnSichuan TCM Decoction Pieces Co., Ltd., u awtentikata mill-Prof Yang Wenyu tal-Università Xihua.

1 kg imnixxefCistanche tubulosakien pulverizzat u mgħoddi minn aGħarbiel 40-malji.

A 1:20 proporzjon materjal-likwiduintuża ma'Soluzzjoni ta' 50% etanol-ilma.

It-taħlita kienetmxarrba għal 30 min, segwit minnestrazzjoni ultrasonikafi55 grad, 250 W, għal40 min.

Estratti kienuċentrifugati, iffiltrati, u kkonċentrati taħt pressjoni mnaqqsaf'60 grad għal pejst oħxon (densità 1.2) bl-użu ta 'evaporatur li jdur.

L-estratt ikkonċentrat kienimnixxef bil-friża taħt vakwu, li tagħti finalieffiċjenza ta 'estrazzjoni ta' 40%.

 

1.5 Disinn Sperimentali tal-Annimali

Total ta'Ġrieden KM maskili ta 'grad SPF 50, 6 ġimgħat u jiżnu(22 ± 2) g, intużaw f'dan l-istudju (Liċenzja għall-Annimali Nru.SCXK [Chuan] 2023-030). Il-proċeduri kollha tal-annimali segwew ilRegolamenti dwar l-Amministrazzjoni ta' Annimali tal- Laboratorjumaħruġa mill-Ministeru tax-Xjenza u t-Teknoloġija tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina u kienuapprovat mill-Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Università Xihua(Nru ta' Approvazzjoni: XH-2023-02-01).

Kundizzjonijiet tad-djar:Temperatura (26 ± 1 grad), umdità (50 ± 10%), ċiklu ta 'dawl/dlam ta' 12-il siegħa, aċċess ħieles għall-ikel u l-ilma.

Wara 7 ijiem ta 'akklimatizzazzjoni, ġrieden kienuassenjat b'mod każwali f'5 gruppiibbażat fuq il-piż tal-ġisem.

Il-piż tal-ġisem ġie rreġistrat kuljum, u l-kundizzjonijiet ġenerali tas-saħħa bħall-imġieba, il-kundizzjoni tal-pil, u t-teħid tal-ikel ġew immonitorjati.

Gruppi ta 'trattament u dożaġġihuma dettaljati fiTabella 1.

Fuqjiem 40–42, testijiet tal-funzjoni tal-mutur(saħħa tal-qabda u għawm) saru.

Fuqjum 43, wara 12-il siegħa sawm, il-piż tal-ġisem u l-kompożizzjoni tal-ġisem ġew irreġistrati. Ġrieden imbagħad ġew anestetizzati bl-etere u sagrifikati. Muskoli skeletriċi bilaterali tar-riġlejn ta 'wara ġew dissected u miżun malajr.

Il-gastroknemius tax-xellugkien maqtugħ lonġitudinali u mwaħħla fil3% glutaraldehydeu4% paraformaldehyde, rispettivament.

Il-gastroknemius drittkien iffriżat f'-80 grad għalAnaliżi qPCR.

Keywords SEO:mudell ta 'annimali ta' sarkopenja, ġrieden KM, esperiment ta 'atrofija tal-muskoli, valutazzjoni tal-funzjoni tal-muskoli, riċerka etika fuq l-annimali

benefiċċji acteoside

1.6 Kompożizzjoni tal-ġisem u Kejl tal-Indiċi tal-Muskoli

Piż tal-ġisemġie rreġistrat kuljum matul l-esperiment.

Qabel is-sagrifiċċju,kompożizzjoni tal-ġisem(massa dgħif u massa tax-xaħam) ġiet imkejladarbtejn, u l-valur medjuġie rreġistrat.

Wara sagrifiċċju,muskolu skeletriku tar-riġlejn ta’ warakien miżun.

Il-indiċi tal-massa tal-muskoliġie kkalkulat bl-użu tal-Formula Cuadros [11]:

Indiċi tal-Muskoli (%)=Massa Muskolari / Piż tal-Ġisem × 100
(Ekwazzjoni 1)

Keywords SEO:massa tal-ġisem dgħif fil-ġrieden, kalkolu tal-indiċi tal-muskoli, analizzatur tal-kompożizzjoni tal-ġisem, bijomarkaturi tas-sarkopenja

 

1.7 Testijiet tal-Funzjoni tal-Mutur

Biex tevalwafunzjoni tal-muskoli, it-testijiet li ġejjin saru bejn il-ġranet 40 u 42:

Test tal-Għawm:

Kull ġurdien kienmiżun, u atagħbija (5% tal-piż tal-ġisem f'fojl taċ-ċomb)kien iffissat mat-terz distali tad-denb.

Ġrieden tqiegħdu fi akontenitur b'ilma ta '25 grad, f'fond Ikbar minn jew ugwali għal 30 ċm.

Ħin tal-għawmkien irreġistrat mid-dħul sakemm il-ġurdien ma setax jibqa’ f’wiċċ l-ilma u beda jegħreq.

Kull ġurdien ġie ttestjat darba kuljum għal3 ijiem konsekuttivi, u l-medjattieħed bħala r-riżultat finali.

Test tas-saħħa tal-qabda:

Imwettaq bl-użu ta' agauge manwali push-pull.

Kull ġurdien ġie ttestjatħames darbiet, b'aMistrieħ ta' 150 sekondabejn it-testijiet.

Il-koeffiċjent tas-saħħa tal-qabdaġie kkalkulat biex jinnormalizza għall-piż tal-ġisem:

Koeffiċjent tas-Saħħa tal-Qabda=Forza tal-Qabda / Piż tal-Ġisem (N/kg)
(Ekwazzjoni 2)

Keywords SEO:test ta 'reżistenza għall-għawm, saħħa tal-qabda f'annimali gerriema, metriċi tal-prestazzjoni tal-muskoli, mudell tal-ġurdien sarcopenia

 

1.8 Analiżi Istoloġika

Biex tevalwa l-bidliet morfoloġiċi fit-tessut tal-muskoliwara trattament maCistanche tubulosaestratt (CdE):

Tbajja ta' Hematoxylin & Eosin (H&E).twettqet fuq tessut imwaħħal fi4% paraformaldehyde.

Sezzjonijiet ġew osservati taħt amikroskopju tad-dawl, użona trasversali tal-fibra tal-muskoliġie analizzat bl-użuImmaġniJsoftwer.

Għalanaliżi ultrastrutturali, muskoli ffissati fi3% glutaraldehydekienu post-fissati fi1% tetrossidu tal-osmju, deidratati fl-aċetun, u inkorporati filReżina Ep812.

Sezzjonijiet semifinkienu mtebbgħin bitoluidine blugħall-ippożizzjonar.

Sezzjonijiet ultrarqiqakienu mtebbgħin biaċetat uranil u ċitrat taċ-ċomb, u osservati b'aMikroskopju elettroniku ta 'trasmissjoni JEM-1400FLASH.

Wisa' tal-fibra tal-muskolitkejjel bl-użu ta' ImageJ.

Keywords SEO:Istoloġija tal-muskoli skeletriċi, protokoll tat-tbajja 'HE, mikroskopija elettronika fir-riċerka tal-muskoli, analiżi tal-morfoloġija tal-fibra tal-muskoli

lista tal-benefiċċji ta' cistanche

1.9 Analiżi tal-Espressjoni tal-Ġene

Biex tinvestiga l-mekkaniżmi molekularitas-CdE fis-sarkopenja:

Tessuti tal-muskoli ffriżatiġew imfixkla mekkanikament taħt nitroġenu likwidu.

RNA totali ġie estratt bl-użuReaġent TRIpureskond l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

cDNA ġie sintetizzat b'akit ta' traskrizzjoni inversa, uqPCRtwettqet bl-użu ta’ aThermo Xjentifiku PikoRealsistema.

GAPDHintuża bħala ġene ta' referenza interna.

Primer sekwenzi għalġeni relatati mal-muskolihuma elenkati fiTabella 2.

Keywords SEO:qPCR għall-ġeni tal-atrofija tal-muskoli, ġene ta' referenza GAPDH, estrazzjoni tal-RNA mill-muskoli, espressjoni tal-ġeni fis-sarkopenja

 

1.10 Analiżi Statistika

Id-dejta sperimentali ġiet analizzata bl-użuANOVA f'direzzjoni waħda, segwit minnTest ta 'paragun multiplu ta' Dunnett.

A Valur P < 0.05tqieset statistikament sinifikanti.

L-analiżi statistiċi kollha saru bl-użuSPSS 23.0.

Dejta istomorfometrikaġew analizzati bl-użuImmaġniJsoftwer.

Keywords SEO:analiżi statistika fi studji farmakoloġiċi, SPSS fir-riċerka bijomedika, ANOVA fi studji fuq l-annimali, analiżi tal-muskoli ImageJ