Studju dwar l-effett ta 'acteoside (ingredjent attiv f'Cistanche DesertIcola) fuq NAFLD billi tinduċi l-awtofagija

2 riżultati

2.1 Tqabbil tal-livelli ta 'espressjoni tal-proteina Lc 3- ⅱ fiċ-ċelloli Hepg2 trattati biAtt u ech l-espressjoni relattiva ta 'lc 3- ⅱ proteinaFiċ-ċelloli Hepg2 trattati b'BAFA1 (0. 67 ± 0. 0 4) kien sinifikament ogħla minn dak fil-grupp ta 'kontroll vojt ({0. 41 ± ± {0. 0 2). L-espressjoni relattiva ta 'lc {{1 {{2 {0}}}}} ⅱ proteina fiċ-ċelloli Hepg2 fil-grupp rapamycin + bafa1 (1.24 ± {{3 {0}} {0 6) kien ogħla minn dak (0. 28 ± {{4 {0}}}. 02). L-espressjoni ta 'lc 3- ⅱ proteina fiċ-ċelloli Hepg2 fil-grupp ECH + BAFA1 u l-grupp ACT + BAFA1 [0.43 ± 0.02 u 1.36 ± 0.11, rispettivament kienu ogħla minn dawk fil-grupp ECH u l-grupp ACT [(0.18 ± 0.01 u 0.28 ± 0.02, rispettivament<0.05).

Tcm herb cistanche għall-protezzjoni tal-fwied

2.2 Tqabbil tal-livelli ta 'espressjoni tal-proteina LC 3- ⅱ fiċ-ċelloli Hepg2 trattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' ACT

The LC3-Ⅱ protein expression levels of HepG2 cells in the CON group (0.79±0.07) were compared with those in the STA group (0.50±0.04), with no significant difference (P>{{{{{1 0}}}}. 0 5); Il-livelli ta 'espressjoni tal-proteina LC {2}} ⅱ ta' ċelloli Hepg2 fil-BAFA1 flimkien ma '25, 5 0, u 1 {0 {0 μmol / l ACT GRUPP 1.83 ± 0. 53, u 0. 97 ± 0.25, rispettivament) kienu sinifikament ogħla minn dawk fil-gruppi 25, 50, u 100 μmol / L ACT (0.38 ± 0.09, 0.35 ± 0.18, u 0.30 ± 0.15, rispettivament), b'differenzi sinifikanti (p<0.05). The LC3-Ⅱ protein expression level of HepG2 cells in the 50 μmol/L ACT group was the highest. See Figure 1.

Nota: A. Immunoblotting tal-proteina; B. Riżultati ta 'analiżi semi-kwantitattiva; Meta mqabbel mal-grupp ACT mingħajr BAFA1, AP<0.05.
Figura 1 Tqabbil tal-livelli ta 'espressjoni tal-proteina LC 3- ⅱ fiċ-ċelloli Hepg2 trattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' ACT

2.3 Tqabbil tal-vijabbiltà taċ-ċelloli Hepg2 trattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'ACT għal 24 u 48 h

Il-valuri OD taċ-ċelloli Hepg2 wara l-intervent ma '0, 2 0, 4 {{{1 {0}}, 6 {0, 8 {0, u 1 {0 0 μmol / l Att għal 24 h. 0. 98 ± 0. 17, 0. 99 ± {{{{3 {{0}}}. 15, {{0. 99 ± ± {{0. 19, 1. {00 { 0. 94 ± 0. 15, u {0. 94 ± {{0}. 20, rispettivament; u l-valuri OD taċ-ċelloli Hepg2 wara l-intervent għal 48 h kienu 3.06 ± 0.27, .96 ± 0.27, 2.88 ± 0.27, 3.08 ± 0.15, 3.01 ± 0.13, u .09 ± 0.22, rispettivament. Ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti fil-valuri OD taċ-ċelloli Hepg2 wara 24 u 48 h ta 'intervent b'konċentrazzjonijiet differenti ta' ACT (F =0. 213, 0.213, p {=0. 96, 0.36). Ara l-Figura 2.

NOTA: Iċ-ċelloli A. Hepg2 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'ACT għal 24 siegħa; Iċ-ċelloli B. Hepg2 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'ACT għal 48 siegħa.

Figura 2 Valuri OD f'570 nm wara 24 u 48 h ta 'trattament b'konċentrazzjonijiet differenti ta' ACT

2.4 Tqabbil tal-livelli tat-Tg u t-tebgħa taż-żejt aħmar o fil-mudell taċ-ċellula in vitro ta 'NAFLD wara l-Att Intervent

Il-livell Tg taċ-ċelloli Hepg2 fil-grupp mudell (34.15 ± 1.90) kien sinifikament ogħla minn dak fil-grupp ta 'kontroll vojt (14.17 ± 2.74) u l-grupp ta' intervent ACT (19.11 ± 1.68), u d-differenzi kienu statistikament sinifikanti (p<0.05). The number of stained lipid droplets in HepG2 cells in the ACT intervention group was significantly reduced (see Figure 3).

Nota: A. TG Livell; B. Żejt aħmar O tebgħa (20 ×); Meta mqabbel mal-grupp tal-mudell, AP<0.05.
Figura 3 Tqabbil tal-livell tat-Tg u t-tebgħa taż-żejt aħmar o fil-mudell taċ-ċellula in vitro NAFLD wara trattament tal-ACT

2.5 Tqabbil ta 'awtofagoġomi u qtar tal-lipidi wara trattament ta' ACT meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll vojt, il-qtar tal-lipidi taċ-ċelloli HepG2 fil-grupp ta' trattament ta 'rapamycin u l-grupp ta' intervent ACT żdied b'mod sinifikanti, u l-autofosomi LC3 taċ-ċelloli HepG2 fil-grupp ta 'intervent ACT żdiedu b'mod sinifikanti b'mod sinifikanti, u ko-lokalizzati ma' droples lipidi fl-ispazju. Ara l-Figura 4.

3 Diskussjoni

In-NAFLD hija l-iktar marda kronika komuni tal-fwied fid-dinja, li tirrappreżenta madwar 1/4 tal-popolazzjoni totali tad-dinja, u saret problema globali tas-saħħa pubblika. Overnutrition huwa l-fattur ewlieni li jsuq Nafld. It-teħid eċċessiv ta 'nutrijenti miċ-ċelloli tal-fwied jikkawża deposizzjoni eċċessiva ta' xaħam fiċ-ċelloli, li jwassal għal reazzjonijiet lipotossiċi bħall-istress taċ-ċellula (stress ossidattiv u stress tar-retikolu endoplasmiku), attivazzjoni ta 'infjammasome, u apoptożi taċ-ċelluli, u li jikkawża sussegwentement serje ta' bidliet fil-fenotipi tat-tessut tal-fwied bħal fenotilazzjoni infjammatorja, fir-reġenerazzjoni tat-tessuti, u fibrożi tat-tessuti, u fibri tal-fibri [14-15]. Fi snin reċenti, studji wrew li l-awtofagija għandha rwol importanti fil-prevenzjoni tal-iżvilupp tan-NAFLD uman. Ir-riżultati ta 'skoperta ta' indiċi relatati mal-awtofagija fil-fwied ta 'pazjenti b'mard tal-fwied xaħmi NAFLD u mhux alkoħoliku u l-fwied ta' ġrieden tad-dieta obeżi u b'ħafna xaħam urew li l-proċess ta 'l-awtofagija fl-epatokiti kien imblukkat, li wassal għall-akkumulazzjoni massiva ta' TG intraċellulari u droplets oħra tal-lipidi [16]. Studji oħra wrew li wara li l-ġene ewlieni 7 ta 'l-awtofagija ta' l-epatokiti kien speċifikament maqtugħ fil-ġrieden mitmugħa b'dieta b'ħafna xaħam, il-livell ta 'Tg fl-epatokiti tal-ġurdien żdied b'mod sinifikanti [17]. Madankollu, wara l-espressjoni żejda tal-ġene jew l-intervent Atg7 ma 'indutturi ta' l-awtofagija bħal rapamycin u carbamazepine, id-deġenerazzjoni mxaħħma fil-fwied tal-ġurdien tnaqqset b'mod sinifikanti [{18-20].
Dan jissuġġerixxi li d-deġenerazzjoni mxaħħma tal-fwied tista 'titnaqqas b'mod sinifikanti billi titjieb l-attività ta' awtofagija tal-fwied, li tipprovdi strateġija effettiva għat-trattament tan-NAFLD. Prodotti naturali, bħala sors ewlieni ta 'żvilupp ġdid ta' mediċini, huma użati ħafna fil-prevenzjoni u t-trattament ta 'diversi mard tal-fwied. Bħala prodott eċċellenti użat komunement fil-mediċina Ċiniża tradizzjonali, Cistanche DesertIcola ġibed attenzjoni mifruxa għall-effetti farmakoloġiċi tiegħu bħal newroprotettjoni, immunomodulazzjoni, antiossidant, anti-kanċer, u protezzjoni tal-fwied. S'issa, aktar minn 120 kompost ġew iżolati minn cistanche deserticola, inklużi glycosides feniletanojdi, terpenoids u l-glukożidi tagħhom, lignans u l-glukożidi tagħhom, oligosaccharides, poliols, u polysaccharides [21]. Fost dawn, il-glukożidi tal-feniletanojdi huma l-iktar klassi studjata ta 'komposti fl-ingredjenti attivi ta' Cistanche Deserticola. L-ECH u l-ACT huma komposti rappreżentattivi ta 'glukożidi ta' cistanche deserticola feniletanojdi, li għandhom effetti pożittivi fl-anti-ossidanti, li jipproteġu l-fwied, il-mijokardju, iċ-ċelloli tan-nervituri u jsaħħu l-memorja [{22-23]. Madankollu, m'hemm l-ebda rapport ta 'letteratura rilevanti dwar jekk il-glukożidi feniletanojdi Cistanche DesertIcola humiex involuti fil-proċess ta' l-awtofagija fil-ħarsien tal-fwied.

L-awtofagija hija proċess ta 'awto-degradazzjoni li huwa kullimkien fil-ġisem. Huwa proċess kataboliku li fih l-awtofagoġomi jiddegradaw l-iskart metaboliku ċellulari. Il-proċess ta 'l-awtofagija ġeneralment jinkludi tliet proċessi: bidu ta' awtofagija, estensjoni tal-membrana awtofagi u formazzjoni ta 'lisosomi awtofagi, li huma prinċipalment regolati mill-proteina fil-mira ta' rapamycin u l-fosfatidilinositol -3 mogħdijiet ta 'sinjalar kinase. L-awtofagoġomi huma markaturi ta 'awtofagija ċellulari. Fil-proċess ta 'formazzjoni ta' awtofagoġoma, serje ta 'proteini relatati mal-awtofagija inklużi Atg5 ~ 12 u LC3 għandhom rwol importanti. Għalhekk, dan l-istudju bena sistema ta 'evalwazzjoni ta' l-awtofagija, sabet il-livell ta 'espressjoni ta' proteina LC3 tal-markatur awtofagija fil-livell molekulari, u evalwa l-abilità ta 'induzzjoni ta' awtofagija ta 'żewġ glycosides feniletanojdi ta' cistanche deserticola fiċ-ċelloli Hepg2. Ir-riżultati wrew li wara ż-żieda ta 'trattament BAFA1 abbażi ta' l-intervent ta 'l-induttur ta' l-awtofagija rapamycin, l-LC intraċellulari 3- ⅱ taċ-ċelloli HepG2 żdied b'mod sinifikanti, u jindika li s-sistema ta 'evalwazzjoni ta' l-awtofagija tista 'tevalwa b'mod preċiż l-attività ta' induzzjoni ta 'l-awtofagija tad-drogi; Wara li l-ECH u l-ACT ġew ittrattati b'BAFA1, l-espressjoni ta 'Lc 3- ⅱ proteina fiċ-ċelloli Hepg2 fil-grupp ECH + BAFA1 u l-grupp ACT + BAFA1 kienet sinifikament ogħla minn dik fil-grupp ECH u l-grupp ACT, u d-differenzi kienu statistikament sinifikanti (p<0.05). However, since the autophagy process is very complex, it is easily changed by external environmental stimuli. Therefore, this study used BafA1 to block the autophagic flow, thereby more accurately evaluating the autophagy inducing ability of ECH and ACT. The results showed that after using BafA1 to block the autophagic flow, the intracellular autophagosomes could not be degraded in the autophagolysosomes, resulting in a significant increase in the overall autophagy level of the cells. After the intervention of rapamycin, Ech, and ACT in HepG2 cells, the LC3-Ⅱ protein expression levels of HepG2 cells in the rapamycin+BafA1 group and the ACT+BafA1 group were higher than those in the BafA1 group alone. Although the expression levels of HepG2 cells in the ECH+BafA1 group were significantly higher than those in the ECH group alone, the differences were statistically significant (P<0.05), the expression levels of LC3-Ⅱ protein in HepG2 cells were lower than those in the BafA1 group alone, indicating that ACT has a significant ability to induce autophagy in HepG2 cells. Therefore, this study took ACT as the research object and further studied its pharmacological activity in inducing autophagy and li jeżerċitaw il-protezzjoni tal-fwiedu funzjonijiet bijoloġiċi oħra. It-tieni, is-sigurtà hija konsiderazzjoni primarja fl-iżvilupp tad-droga. Sabiex tevalwa s-sigurtà tal-ACT, dan l-istudju ttestja aktar l-effett tal-ACT fuq il-vijabbiltà taċ-ċelloli Hepg2. Ir-riżultati wrew li l-vijabbiltà taċ-ċelloli Hepg2 kienet kważi mhux affettwata mill-intervent b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'ACT, li jindika li l-ACT jista' jintuża bħala mediċina kandidata biex tkompli tistudja l-effetti farmakoloġiċi tagħha u l-mekkaniżmi molekulari.

L-awtofagija hija proċess bijoloġiku kkonservat ħafna fiċ-ċelloli, u bidliet ħfief fil-konċentrazzjonijiet tal-mediċina jaffettwaw il-livell ta 'awtofagoġomi ċellulari. Biex tiddetermina aktar il-konċentrazzjoni ottimali ta 'ACT biex tinduċi l-formazzjoni ta' awtofagoġomi fiċ-ċelloli Hepg2, dan l-istudju uża konċentrazzjonijiet differenti ta 'ACT flimkien ma' BAFA1 biex jikkura ċ-ċelloli Hepg2 u skopra l-livell ta 'espressjoni ta' LC {3-} ⅱ proteina fiċ-ċelloli. Ir-riżultati wrew li 50 μmol / L ACT jistgħu jżidu b'mod sinifikanti l-livell ta 'awtofagoġomi fiċ-ċelloli Hepg2. Għalhekk, dan l-istudju uża 50 μmol / L att biex jintervjeni fil-mudell taċ-ċellula NAFLD mibni in vitro, u esplora preliminarjament ir-relazzjoni bejn l-ITSProtezzjoni tal-fwiedfunzjoni u awtofagija.
Studji relatati fuq mudelli taċ-ċelloli NAFLD urew li wara intervent in vitro b'aċidi grassi ħielsa, il-livell Tg taċ-ċelloli Hepg2 żdied b'mod sinifikanti, u l-aggregazzjoni ta 'qtar tal-lipidi żejtnija tista' tiġi osservata b'mod ċar fiċ-ċelloli [24-25]. F'dan l-istudju, 100 μmol / L PA intużaw biex jintervjenu fiċ-ċelloli Hepg2 in vitro għal 24 siegħa. Il-livell Tg taċ-ċelloli Hepg2 fil-grupp mudell kien sinifikament ogħla minn dak fil-grupp ta 'kontroll vojt. Fl-istess ħin, l-aggregazzjoni ta 'qtar tal-lipidi tista' tiġi osservata b'mod ċar fiċ-ċelloli, li jindikaw li l-mudell taċ-ċellula NAFLD ġie mibni b'suċċess. Sabiex jiġi osservat aktar l-effett tal-ACT fuq il-mudell taċ-ċellula NAFLD, 50 μmol / L ACT intuża biex jintervjeni fil-mudell taċ-ċellula in vitro NAFLD, u l-effett tal-ACT fuq NAFLD ġie evalwat permezz ta 'sejbien tal-livell Tg u tebgħa taż-żejt aħmar. Ir-riżultati wrew li wara l-intervent tal-ACT, il-livell Tg u n-numru ta 'qtar żejtni tal-lipidi fiċ-ċelloli HepG2 kienu sinifikament inqas minn dawk fil-grupp mudell, li jindikaw li l-ACT għandu l-attività li tnaqqas it-TG fil-mudell taċ-ċellula NAFLD indotta mill-PA. Sabiex tiġi studjata aktar ir-relazzjoni bejn l-attività li tbaxxi l-lipidi tal-ACT u l-awtofagija ċellulari, dan l-istudju uża LC 3- ⅱ antikorpi tal-proteina speċifiċi u sondi fluworexxenti Bodipy biex jikko-tebgħa ta 'l-awtofagoġomi u l-qtar tal-lipidi. Ġie osservat li n-numru ta 'awtofagoġomi fiċ-ċelloli Hepg2 wara l-intervent tal-ACT żdied b'mod sinifikanti meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll, li kien konsistenti mar-riżultati tal-immunoblotting tal-proteina f'dan l-istudju, li kkonferma aktar li l-ACT għandu attività li tinduċi l-awtofagija fiċ-ċelloli HepG2. Barra minn hekk, wara l-intervent tal-mediċina, l-awtofagoġomi intraċellulari u l-qtar tal-lipidi ko-lokalizzati, li jindikaw li l-effett tal-ACT fuq it-titjib tad-deġenerazzjoni xaħma NAFLD indotta mill-PA jista 'jinvolvi l-involviment ta' awtofagija ċellulari. Madankollu, fil-mudell taċ-ċellula NAFLD, jekk l-ACT teżerċitax l-attività farmakoloġika tagħha li tnaqqas il-livelli ta 'TG intraċellulari permezz tal-passaġġ lipofaġiku għad trid tiġi spjegata aktar billi timblokka l-proċess ta' awtofagija intraċellulari.
Fil-qosor, fost iż-żewġ komposti tal-feniletanol glycoside ta 'Cistanche DesertIcola, ACT għandu abbiltà sinifikanti li jikkaġuna l-awtofagija fiċ-ċelloli HepG2. Fl-istess ħin, fil-mudell taċ-ċelloli tal-fwied indotta mill-PA, CT naqqas b'mod sinifikanti l-livell Tg fiċ-ċelloli HepG2. Wara l-intervent tal-ACT, l-awtofagoġomi u l-qtar tal-lipidi fiċ-ċelloli HepG2 kellhom ċerta relazzjoni ta 'ko-lokalizzazzjoni, li tindika li l-awtofagija tista' tkun triq ġdida involuta fil-proċess farmakoloġiku ta 'ACT f'termini ta' protezzjoni tal-fwied. Ara l-Figura 5. Fi studji sussegwenti, il-mekkaniżmu ta 'azzjoni ta' ACT fit-tnaqqis tal-lipidi se jiġi studjat aktar fid-dettall bl-użu ta 'imblokkaturi ta' l-awtofagija biex jistabbilixxu l-pedament għal żvilupp ġdid ta 'mediċini.