Ċitotossiċità Selettiva tas-Sustanza Veġetali Acteoside Kontra Iċ-Ċelloli tat-Tumur U l-Intuwizzjonijiet Mekkanistiċi tagħha

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Christina Cheimonidi et al

ASTRATT

Il-prodotti naturali huma kkaratterizzati minn diversità strutturali estrema u għalhekk joffru sors uniku għall-identifikazzjoni ta' aġenti ġodda kontra t-tumur. Hawnhekk, nirrapportaw li s-sustanza veġetaliacteosideli kien iżolat b'metodi fitokimiċi avvanzati minn weraq ta' Lippia citriodora wera ċitotossiċità msaħħa kontra ċelluli tat-tumur metastatiku; aġixxa f'sinerġija ma 'diversi aġenti ċitotossiċi u ċelluli tal-kanċer kimoreżistenti sensitizzati.Acteosidema kienx tossiku f'kuntesti ċellulari fiżjoloġiċi, filwaqt li żiedet it-tagħbija ossidattiva, affettwa l-attività ta 'moduli proteostatiċi, u soppressa l-metalloproteinases tal-matriċi fil-linji taċ-ċelluli tat-tumur. Amministrazzjoni intraperitoneali jew orali (permezz ta 'ilma tax-xorb) ta' acteoside f'mudell ta 'ġurdien melanoma rregola risponsi antiossidanti fit-tumuri; madankollu, il-kunsinna intraperitoneali biss irażżan it-tkabbir tat-tumur u kkaġuna risponsi immuni reattivi kontra t-tumur. Analiżi ta 'identifikazzjoni/kwantifikazzjoni tal-ispettrometrija tal-massa wrew li l-kunsinna intraperitoneali ta'acteosideirriżulta b'mod sinifikanti ogħla, vs amministrazzjoni orali, il-konċentrazzjoni tal-kompost fil-plażma u tumuri ta 'ġrieden ittrattati, li jissuġġerixxi li l-effett tiegħu in vivo kontra t-tumur jiddependi fuq ir-rotta ta' amministrazzjoni u l-konċentrazzjoni miksuba fit-tumur. Fl-aħħarnett, studji ta 'mudellar molekulari u analiżi ta' attività enżimatika wrew liacteosidejinibixxi proteina kinase C. B'mod konklużiv, l-acteoside iżomm wegħda bħala scaffold kimiku għall-iżvilupp ta 'aġenti ġodda kontra t-tumur.

Kliem ewlieni:Acteoside, Kanċer, Kompost naturali, Stress ossidattiv, Proteostasi, Immunomodulazzjoni

cistanche acteoside

1. Introduzzjoni

Il-karċinoġenesi hija kkaratterizzata mid-deregolamentazzjoni ta 'bosta mogħdijiet ta' sinjalazzjoni taċ-ċelluli u hija assoċjata ma 'żieda fl-istress ċellulari ossidattiv, replikattiv, metaboliku, ġenotossiku u proteotossiku [1]. Biex jadattaw u jegħlbu dawn il-fenotipi tal-istress, iċ-ċelluli malinni jirregolaw (minbarra l-onkoġeni) diversi mogħdijiet mhux onkoġeniċi bil-għan li jew irażżnu jew (għallinqas) itaffu l-istress kontinwu. Fost il-mogħdijiet varji mhux onkoġeniċi misjuba li huma ta 'spiss upregulated matul tumorigenesis hemm il-moduli tan-netwerk tal-proteostasis (PN) flimkien ma' reazzjonijiet antiossidanti ċellulari [2,3].

Komponenti ewlenin tal-PN huma ż-żewġ makkinarju ta 'degradazzjoni prinċipali, jiġifieri l-passaġġ Autophagy-Lysososome (ALP) u l-Pathway Ubiquitin-Proteasome (UPP), flimkien man-netwerk ta' chaperones molekulari ċellulari. L-ALP huwa prinċipalment involut fid-degradazzjoni ta 'aggregati ta' proteini u organelli bil-ħsara [4], filwaqt li l-UPP jiddegrada proteini normali ta 'ħajja qasira u proteini mhux mitwija ħażin jew mhux mitwija mhux riparabbli [5-8]. Il-proteasome 26Sewkaryotic huwa kkostitwit mill-partiċelli regolatorji 19S (RP) u l-partiċelli 20 Score (CP); l-aħħar huwa magħmul minn erba 'ċrieki heptameric f'munzelli (tnejn tat-tip madwar tnejn tat-tip) li jiffurmaw struttura bħal barmil. L-attivitajiet tal-proteasome peptidase li jixbħu chymotrypsin (CT-L), trypsin-like (TL) u caspase-like (CL) jinsabu fis-subunitajiet proteasomali 5, 2 u 1, rispettivament [6]. L-effikaċja klinika murija tal-inibituri tal-proteasome Bortezomib (Velcade®; jismu wkoll PS-341) u Carfifilzomib kontra diversi tumuri malinni ematoloġiċi [9] ipprovdiet il-"prova tal-kunċett" li timmira l-UPP bħala strateġija promettenti għall- trattament tal-kanċer. In-netwerk kumpless ta 'mogħdijiet ta' difiża ċellulari antiossidanti li ta 'spiss jiġi rregolat 'il fuq matul il-karċinoġenesi [3,10] jinkludi enzimi antiossidanti, kif ukoll bosta fatturi ta' traskrizzjoni li jimmobilizzaw risponsi ġenomiċi ċitoprotettivi; dawn jinkludu forkhead box O (Foxo) u l-fattur nukleari erythroid 2-fattur relatat (Nrf-2). Nrf-2 huwa ċentrali fil-protezzjoni taċ-ċelloli kontra l-ħsara ossidattiva u/jew ksenobijotika peress li jistimula l-espressjoni ta' ġeni antiossidanti u ta' fażi II [11-13].

Aħna u oħrajn reċentement ipproponejna li nimmiraw dawn id-dipendenzi tat-tumur (jiġifieri, moduli proteostatiċi u/jew mogħdijiet ta’ rispons antiossidanti) jew iż-żieda fil-livelli ċellulari ta’ ROS fil-kuntest ta’ ġenotip trasformat joffru tieqa terapewtika potenzjali għall-qtil selettiv taċ-ċelluli tat-tumur [3] ,14]; bħala appoġġ, il-qtil selettiv taċ-ċelluli tal-kanċer minn molekula żgħira li rregolat il-livelli ta' ROS ċellulari ġie rrappurtat [2]. Huwa mistenni li approċċi kombinatorji li jinkludu wkoll l-attivazzjoni ta 'risponsi immuni reattivi kontra t-tumur [15] x'aktarx jimmassimizzaw it-tieqa terapewtika offruta billi jinibixxu risponsi PN u antiossidanti u/jew billi jgħollu l-livelli ta' ROS ċellulari.

Prodotti naturali (estratti jew komposti puri) (NPs) minn diversi sorsi (pjanti, organiżmi tal-baħar, mikro-organiżmi, eċċ) huma skrinjati għall-kapaċità tagħhom li jaġixxu bħala aġenti kontra t-tumur minħabba d-diversità strutturali estrema u l-kumplessità kimika tagħhom, kif ukoll minħabba li jaġixxu plejotropikament jimmodulaw diversi mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni ċellulari [16]. Allegatament, NPs jattivaw risponsi anti-infjammatorji, anti-tumur u/jew anti-metastatiku [16,17] u jevadu wkoll ir-reżistenza għal ħafna mediċini [18,19]. Fost dawn, il-komposti fenoliċi (inklużi phenylethanoid glycosides) ġibdu interess sinifikanti minħabba r-rwol irrappurtat tagħhom fil-prevenzjoni u/jew it-trattament ta 'diversi mard tal-bniedem.

Acteoside, imsejjaħ ukoll użu jew verbascoside [20], huwa phenylethanoid glycoside iżolat minn ħafna dicotyledons. Allegatament, l-acteoside jeżerċita xi attivitajiet bijoloġiċi interessanti, inklużi proprjetajiet antiossidanti, anti-infjammatorji u li jirregolaw l-apoptosi taċ-ċelluli [21,22]. Madankollu, l-attività potenzjali tagħha kontra t-tumur ma ġietx indirizzata. Nirrapportaw hawn, li l-acteoside wera ċitotossiċità akbar kontra ċelluli tal-kanċer tal-mammiferi mingħajr effetti tossiċi apparenti f'kuntesti ċellulari fiżjoloġiċi. Barra minn hekk, l-acteoside irażżan it-tkabbir tat-tumur tal-melanoma fil-mudell tal-ġurdien Vivo, billi (fost oħrajn) attiva risponsi immuni anti-tumur reattivi.

effetti ta'cistanche acteoside

2. Materjali u metodi

2.1. Materjal tal-pjanti u estrazzjoni

weraq imnixxef ta 'Lippia citriodora (Lamiaceae) (4.5 kg) inxtraw mis-suq lokali f'Ateni, il-Greċja. Il-weraq ġew polverizzati u estratti permezz ta 'taħwid mekkaniku għal 12-il siegħa bil-metanol (2 × 20 L). L-estratt metanoliku ġie evaporat sa nixfa u maħsul b'taħlita ta 'CH2Cl2/MeOH 98/2 (15 L). Ir-residwu li ma jinħallx ġie separat u mnixxef, u pproduċiet trab aħdar-isfar (450 g).

2.2. Purifikazzjoni ta 'acteoside u analiżi UPLC-HRMS

Porzjon (10 g) tar-residwu msemmi qabel kien soġġett għal kromatografija kontrakurrent bl-użu ta 'apparat ta' kromatografija ta 'partizzjoni ċentrifugali veloċi (FCPC) (Kromaton, Franza); taħlita ta 'EtOAc/EtOH/H2O fi proporzjon 5/0.5/4.5 intużat bħala sistema ta' solvent bifażiku. Il-frazzjonijiet miġbura ġew soġġetti għal Thin Layer Chromatography; imbagħad il-kromatogrammi ġew osservati taħt fanal UV (254 u 365 nm) u viżwalizzati permezz ta 'bexx b'methanol vanillin sulfate segwit minn tisħin għal żewġ minuti. Total ta '2.1 g ta' acteoside (purità akbar minn jew ugwali għal 90 fil-mija) ġie iżolat bil-proċess imsemmi hawn fuq. L-identifikazzjoni ta 'acteoside saret permezz ta' reżonanza manjetika nukleari (NMR) u spettrometrija tal-massa (MS), filwaqt li l-purità tagħha ġiet stabbilita permezz ta 'analiżi UPLC-MS u NMR; għad-dettalji ara Suppl. Materjali u metodi.

2.3. Linji taċ-ċelluli

Fibroblasti embrijoniċi tal-pulmun tal-bniedem (ċelluli IMR90) flimkien mal-linji taċ-ċelluli tal-ġurdien B16.F1, B16.F10, YAC-1, u WEHI-164 inkisbu mill-American Tissue Culture Collection (ATCC). Il-linji taċ-ċelluli tal-osteosarkoma tal-bniedem U2 OS u Sa OS ġew ġentilment mogħtija mill-Prof V. Gorgoulis (Skola tal-Mediċina, Università Nazzjonali u Kapodistriana ta’ Ateni, il-Greċja), filwaqt li ċ-ċelloli tal-osteosarkoma KH OS u l-linji taċ-ċelluli tal-osteosarkoma kimoreżistenti [23] kienu donazzjoni ta’ Dr E. Gonos (Fondazzjoni Nazzjonali tar-Riċerka Ellenika, il-Greċja). Il-linji taċ-ċelluli tal-kanċer tal-ġrieden C5N u A5 jappartjenu għal mudell ta 'karċinoġenesi tal-ġilda tal-ġrieden f'diversi stadji [24,25] u ġew mogħtija mill-Prof. A. Balmain (Comprehensive Cancer Center, Università ta' California, USA). Il-kundizzjonijiet tal-kultivazzjoni tal-linji taċ-ċelluli użati huma rrappurtati fis-Suppl. Materjali u metodi.

benefiċċju tacistanche acteoside

2.4. Melanoma ġurdien mudell maskili

Ġrieden C57BL/6 (25–30 g ta’ piż, 6–8 ġimgħat) inkisbu mill-Istitut Elleniku Pasteur u miżmuma taħt temperatura kkontrollata (22 grad) u fotoperjodu (12 h dawl: 12 h skur). ) b'aċċess liberu għall-ilma u l-ikel. Ġrieden ġew imlaqqma taħt il-ġilda b'105 ċelluli tal-melanoma B16.F1 (f'100 μL PBS) u ġew assenjati b'mod każwali għal 3 gruppi (n=5/grupp). Meta t-tumuri saru palpabbli (jum 11) ġrieden irċevew acteoside permezz ta 'żewġ rotot; jew intraperitonealment (IP) (1 mg/ġurdien dilwit f'200 μL PBS; b'kollox 6 dożi mogħtija kull jum tnejn) jew oralment bl-ilma tax-xorb (OR) (2.5 mg/ġurdien; b'kollox 13-il doża għal 13-il jum konsekuttiv). Ġrieden ta 'kontroll ġew amministrati PBS. It-tkabbir tat-tumur ġie rreġistrat kull jumejn billi tkejjel l-assi maġġuri u minuri tat-tumuri ffurmati b'kalibru diġitali. Il-kejl ġie trasformat f'volum tat-tumur bl-użu tal-formula: volum tat-tumur (cm3)=assi maġġuri × assi minuri2 × 0.5. Fit-28 jum, l-annimali ġew ewtanizzati permezz ta 'dislokazzjoni ċervikali, u l-milsa tneħħiet b'mod asettiku. L-esperiment ġie ripetut tliet darbiet b'sejbiet simili.

L-isplenoċiti ġew iżolati minn milsa omoġenizzata individwalment u immedjatament ittestjati għaċ-ċitotossiċità tagħhom kontra l-miri taċ-ċelluli B16.F1, YAC-1, u WEHI-164. Iċ-ċitotossiċità ġiet evalwata abbażi tal-kxif tal-espożizzjoni CD107 fuq il-wiċċ taċ-ċellula, bħala riżultat tad-degranulazzjoni taċ-ċelluli effetturi. Splenocytes (105 ċelluli/bir) ġew ko-kultivati ​​b'miri f'96-mikroplates tal-qiegħ sew U bi proporzjon effettur għal mira (E: T) ta '100:1, f'37 grad f'5 fil-mija CO2. Antikorpi monoklonali anti-CD107a u anti-CD107b konjugati b'FITC (25 μL/mL) u monensin (6 μL/mL; kollha minn BD Biosciences) ġew miżjuda f'kull bir. Iċ-ċelloli nħasdu 6 sigħat wara u ġew analizzati bl-użu ta 'ċitometru tal-fluss FACSCanto II. B'mod parallel, it-tumuri tneħħew u ġew ipproċessati għal analiżi downstream kif deskritt fis-Suppl. Materjali u metodi.

cistanche acteoside