Titjib tal-memorja ta' estinzjoni permezz ta' interventi farmakoloġiċi u ta' mġiba mmirati għar-riattivazzjoni tagħha

Għal aktar informazzjoni:ali.ma@wecistanche.com

Titjib ta' estinzjonimemorjapermezz ta' interventi farmakoloġiċi u ta' mġieba mmirati għar-riattivazzjoni tagħha

Josué Haubrich , Adriano Machado, Flávia Zacouteguy Boos, Ana P. Crestani, Rodrigo O. Sierra, Lucas de Oliveira Alvares & Jorge A. Quillfeldt

L-estinzjoni hija proċess li jinvolvi tagħlim ġdid li jinibixxi l-espressjoni ta 'memorji miksuba qabel. Għalkemm temporanjament effettiva, l-estinzjoni ma tħassarx assoċjazzjoni oriġinali ta 'biża'. Peress li t-traċċa ta 'estinzjoni għandha t-tendenza li fade maż-żmien, l-oriġinalmemorjajista’ jerġa’ jqajjem. Min-naħa l-oħra, effetti ta 'tisħiħ ġew deskritti f'diversi studji ta' rikonsolidazzjoni bl-użu ta 'manipulazzjonijiet differenti ta' mġieba u farmakoloġiċi. Sabiex tkun taf jekk memorja ta 'estinzjoni tistax tissaħħaħ permezz ta' interventi bbażati fuq riattivazzjoni fil-kompitu ta 'kondizzjonament tal-biża' kuntestwali, bdejna billi nirreplikaw il-fenomenu klassiku ta 'rkupru spontanju biex nuru li sessjonijiet qosra ta' espożizzjoni mill-ġdid jistgħu jipprevjenu t-tmermir tat-traċċa ta 'estinzjoni maż-żmien f' mod fit-tul. Din l-attenwazzjoni tal-biża intweriet li tiddependi kemm fuq il-kanali tal-kalċju tat-tip L kif ukoll is-sinteżi tal-proteini, li tissuġġerixxi proċess ta 'rikonsolidazzjoni wara l-effett ta' tisħiħ indott mir-riattivazzjoni. It-traċċa tal-estinzjoni kienet ukoll suxxettibbli għal titjib b'infużjoni ta' wara r-riattivazzjoni ta' amemorja-Enhancing drug (NaB), li kien kapaċi wkoll jipprevjeni rapidu biża riakkwist (iffrankar). Dawn is-sejbiet jindikaw approċċi ġodda bbażati fuq ir-riattivazzjoni li kapaċi jsaħħu memorja ta 'estinzjoni biex jippromwovu l-persistenza tagħha. L-interazzjonijiet kostruttivi bejn l-estinzjoni u r-rikonsolidazzjoni jistgħu jirrappreżentaw approċċ ġdid promettenti fil-qasam tat-trattamenti tad-disturbi relatati mal-biża '.

Ikklikkja għal Cistanche u Cistanches għall-memorja

Memorjal-irkupru huwa fenomenu dinamiku li jista', meta jitqiesu l-kundizzjonijiet it-tajba, iwassal għal żewġ proċessi distinti, konsolidazzjoni mill-ġdid jew estinzjoni. Wara sessjoni qasira ta' rkupru fl-istess kuntest ta' taħriġ, konsolidata qabelmemorjajista 'jidħol fi stat labile li jeħtieġ sinteżi ta' proteina de novo biex terġa 'tistabbilizza u tippersisti, proċess imsejjaħ rikonsolidazzjoni1. Madankollu, sessjonijiet ta' rkupru fit-tul u mhux imsaħħa jistgħu jwasslu għall-estinzjoni2. Għalkemm il-konsolidazzjoni mill-ġdid tal-memorji tal-biża ġiet studjata b'mod estensiv3, 4, ftit studji s'issa investigaw il-possibbiltà li traċċa ta' estinzjoni tgħaddi minn rikonsolidazzjoni wara l-irkupru5-7, u r-riżultati possibbli tagħha u l-applikazzjonijiet kliniċi bħalissa mhumiex esplorati8.

L-estinzjoni tnaqqas ir-risponsi kondizzjonati permezz ta 'proċess li jinvolvi l-konsolidazzjoni ta' inibitorju ġdidmemorja; huwa maħsub li mhux unlearning jew tħassir tat-traċċa oriġinali9, 10. Terapiji bbażati fuq l-estinzjoni huma komunement użati biex ifixklu risponsi avversivi f'pazjenti b'disturbi relatati mal-biża 'bħal disturb ta' stress posttrawmatiku11, 12. Minkejja li huma intervent effettiv, ir-rikaduta. ta’ sintomi tal-biża’ spiss jiġi rrappurtat13 li juri li, meta mqabbel ma’ memorji robusti tal-biża’, l-estinzjoni hija inqas dejjiema u suxxettibbli għat-tmermir. It-tweġibiet tal-biża’ jistgħu faċilment jirkupraw minħabba diversi proċessi ta’ rikaduta, bħall-irkupru spontanju, dħul mill-ġdid, tiġdid u akkwist mill-ġdid rapidu14, 15. Għaldaqstant, huwa ta’ importanza kbira li jinstabu approċċi aħjar biex itejbu s-saħħa u l-persistenza tal-estinzjoni.

Minkejja li kemm ir-rikonsolidazzjoni kif ukoll l-estinzjoni qed jiġu attivati ​​mill-irkupru, huma proċessi distinti. Fl-imġieba, ir-rikonsolidazzjoni hija ġeneralment involuta minn espożizzjonijiet qosra għall-istimolu kondizzjonat (CS) filwaqt li l-estinzjoni teħtieġ oħrajn itwal. Barra minn hekk, l-induzzjoni tar-rikonsolidazzjoni hija modulata minn fatturi kuntestwali u konjittivi oħra magħrufa kollettivament bħala kundizzjonijiet tal-konfini16. Billi jvarja t-tul tal-espożizzjoni għas-CS, l-aġent anamnestiku se jfixkel b'mod selettiv jew ir-rikonsolidazzjoni tat-traċċa oriġinali jew il-konsolidazzjoni.

Psikobijoloġija u Neurocomputation lab u Newrobijoloġija taMemorjalaboratorju. Programm tal-Gradwati fin-Newroxjenzi, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, PortoAlegre, il-Brażil. Il-korrispondenza u t-talbiet għall-materjali għandhom jiġu indirizzati lil JH (email: biohaubrich@gmail.com) jew JAQ (email: quillfe@ufrgs.br) tat-traċċa tal-estinzjoni17–23. Il-fatt li ż-żewġ proċessi ma jseħħux simultanjament jissuġġerixxi effett ta’ dominanza ta’ traċċa, fis-sens li t-traċċa dominanti tkun l-ewwel, jekk mhux l-unika waħda, affettwata minn kwalunkwe interferenza. Id-dominanza tat-traċċa sseħħ ukoll meta traċċi ta' biża' u estinzjoni kkonsolidati qabel jeżistu flimkien, li jaffettwaw l-irkupru tagħhom. F'kundizzjonijiet bħal dawn, espożizzjoni mill-ġdid għas-CS, li potenzjalment tista' tattiva kemm traċċi ta' biża' kif ukoll ta' estinzjoni, se tirriżulta fl-espressjoni tal-memorja dominanti u fl-inibizzjoni ta 'l-oħra2. Kif diskuss hawn fuq, inizjalment, l-estinzjoni hija dominanti u faċilment trażżan il-biża '. Madankollu, maż-żmien it-traċċa oriġinali tal-biża tegħleb l-inibizzjoni bl-estinzjoni u terġa’ ssir espressa b’mod dominanti14. Barra minn hekk, hemm dissoċjazzjoni doppja bejn iż-żewġ proċessi rigward markaturi molekulari bħal Zif26824, calcineurin19, 25 u BDNF26, li jindika li ż-żewġ proċessi ma jseħħux b'mod parallel.

Ħafna drabi huwa ssuġġerit li r-rwol funzjonali tal-proċess ta 'destabilizzazzjoni-ristabilizzazzjoni wara r-rikonsolidazzjoni huwa li jippermettimemorjabiex taġġorna biex iżżomm ir-rilevanza predittiva u adattiva tagħha3, 27–29. Per eżempju,memorjail-kontenut jista' jiġi aġġornat permezz tal-inkorporazzjoni ta' informazzjoni ġdida30–34. Barra minn hekk, bosta studji rrappurtaw li r-rikonsolidazzjoni tista' timmedjamemorjatitjib u tisħiħ30, 35–39 kif ukoll attenwazzjoni tal-memorja (mingħajr estinzjoni) ta 'esperjenzi avversivi34, 40. Interessanti, hemm studji li juru li f'xi kompiti r-rikonsolidazzjoni sseħħ biss meta l-memorja għadha ma tkunx f'livell asintotiku41-43, u jenfasizzaw aktar ir-rwol tagħha fit-tisħiħ tat-traċċa tal-memorja. Madankollu, s'issa mhux magħruf jekk traċċa ta' estinzjoni konsolidata tistax tiġi modifikata permezz ta' konsolidazzjoni mill-ġdid.

Ir-rikonsolidazzjoni tista 'tiftaħ tieqa biex tippermetti l-modulazzjoni farmakoloġika tal-riattivatmemorja. Dan ikun parallel esperimenti klassiċi li fihom l-infużjoni ta 'wara r-riattivazzjoni ta' aġenti amnestiċi tfixkel il-memorja1, jew għall-inqas tnaqqas b'mod effettiv ir-risponsi tal-biża 'f'fobiji44. Ukoll, interventi ta 'wara r-riattivazzjoni li jippromwovu r-rikonsolidazzjoni jistgħu jwasslu għal prestazzjoni mtejba45-47. Għalhekk, komposti speċifiċi amministrati matul it-tieqa tamemorjalability matul rikonsolidazzjoni tippermetti għal modulazzjoni pożittiva jew negattiva tamemorjasaħħa.

Minħabba r-rilevanza klinika tiegħu, hemm interess konsiderevoli fl-iżvilupp ta' approċċi aktar effiċjenti bbażati fuq l-estinzjoni48. Il-memorji tal-estinzjoni huma effettivi biex jrażżnu r-reazzjonijiet tal-biża' b'mod temporanju iżda l-biża' terġa' lura faċilment2. Jirriżulta mill-fatt li l-proċess ta' rikonsolidazzjoni mmexxi mill-irkupru jista' jwassal għalmemorjatisħiħ, jew fl-imġieba30, 35–39, jew farmakoloġikament45–47, aħna ipoteżi li jekk estinzjonimemorjajiġi attivat mill-ġdid, jista’ jgħaddi minn proċess ta’ rikonsolidazzjoni u jiġi modulat b’mod pożittiv b’interventi ta’ mġiba u farmakoloġiċi, li jirriżultaw f’żieda fir-reżistenza għar-rikaduta.

Biex tivverifika dan, aħna evalwajna l-effett ta 'espożizzjonijiet mill-ġdid fil-qosor għall-kuntest kundizzjonat f'annimali li qabel kienu mħarrġa fil-kondizzjonament tal-biża' kuntestwali (CFC) u sottomessi għall-estinzjoni. Sibna li l-irkupru spontanju ġie osservat ġimgħatejn wara l-estinzjoni, iżda sessjonijiet perjodiċi ta 'riattivazzjoni setgħu jdewmu l-qawmien mill-ġdid tat-traċċa tal-biża' għal mill-inqas 4 ġimgħat. Dan l-effett intwera li jiddependi fuq kanali tal-kalċju tat-tip L (L-VGCC), u riattivazzjoni jum wara s-sessjoni ta 'estinzjoni intweriet li tikkawża li t-traċċa ta' estinzjoni ssir temporanjament labile b'mod dipendenti fuq is-sinteżi tal-proteini. Kollha flimkien, id-dejta tissuġġerixxi bil-qawwa proċess ta' rikonsolidazzjoni li jaġixxi fuq it-traċċa tal-estinzjoni. Ukoll, fi protokoll użat biex jinvestiga l-biża’ ta’ akkwist rapidu mill-ġdid - proċess ieħor ta’ rikaduta ta’ wara l-estinzjoni49 - infużjoni waħda ta’ wara r-riattivazzjoni ta’ butirrat tas-sodju (NaB), inibitur HDAC li jirregola b’mod pożittiv il-plastiċità newronali50, kienet kapaċi ttejjeb il- estinzjonimemorjasal-punt li tirreżisti l-irkupru tal-biża. L-evidenza turi li t-traċċa tal-estinzjoni tista’ tissaħħaħ b’mod effettiv permezz ta’ interventi bbażati fuq ir-riattivazzjoni.

Esperiment 1: Estinzjonimemorjajinibixxi biss b'mod temporanju l-espressjoni tal-biża'. Estinzjoni hija tagħlim ġdid li temporanjament trażżan akkwist preċedentementmemorja. Għalhekk, wara l-estinzjoni, żewġ memorji opposti jeżistu flimkien u jikkompetu għall-espressjoni. Inizjalment, il-memorja ta 'estinzjoni hija dominanti fuq it-traċċa tal-biża' u għalhekk tista 'tinibixxi l-espressjoni tagħha. Madankollu, din is-soppressjoni mhix permanenti. Hekk kif jgħaddi ż-żmien, il-memorja tal-biża tegħleb l-inibizzjoni tal-estinzjoni u r-risponsi ta 'mġieba avversivi jerġgħu lura. Dan il-proċess jissejjaħ irkupru spontanju15. L-ewwel, ivvalutajna l-profil temporali ta 'rkupru spontanju fil-protokoll CFC tagħna. Għaldaqstant, l-annimali kienu kkundizzjonati mill-biża 'u 24 siegħa wara għaddew minn taħriġ ta' estinzjoni. L-għada, saret sessjoni tat-test biex tiġi evalwata ż-żamma tal-estinzjoni. It-tieni test sar 7, 14, 21, jew 28 jum wara biex jiġi vvalutat l-irkupru spontanju (Fig. 1A).

Matul is-sessjoni tal-estinzjoni, il-livelli tal-iffriżar naqsu maż-żmien fil-gruppi kollha, li jindikaw akkwist tal-estinzjoni (ANOVA b'miżuri ripetuti, F(5,140)=13.625, P=0.001; Fig. 1B) . Fit-test 1, l-annimali wrew livelli baxxi ta 'ffriżar, li jindikaw iż-żamma ta' estinzjoni (Fig. 1C). Biex jiġi vvalutat l-irkupru spontanju, il-prestazzjoni fit-test 1 u t-test 2 tqabblu ma 'ANOVA ta' miżuri ripetuti, li żvelat interazzjoni sinifikanti ta 'grupp x sessjoni (ANOVA b'miżuri ripetuti, F(3,27)=8.085, P { {18}}.0005). Il-post-hoc ta’ Tukey wera li kien hemm irkupru sinifikanti tar-risponsi tal-biża’ biss fi gruppi fejn it-test 2 sar jew 21 (P=0.013) jew 28 jum (P=0.0002) wara t-test 1, iżda mhux qabel (7 ijiem: P=0.999; 14-il jum: P=0.969; Fig. 1C).

Ir-riżultati juru l-irkupru spontanju tal-biża' li jiddependi mill-ħin deskritt tajjeb15memorjawara l-estinzjoni. Fil-protokoll tagħna, il-memorja tal-estinzjoni trażżan ir-risponsi tal-biża 'għal mill-inqas 14-il jum. Wara 14-il jum, jista 'jseħħ irkupru spontanju tal-biża'. Għalhekk, għalkemm inizjalment dominanti, il-memorja tal-estinzjoni titmermer maż-żmien u tippermetti l-qawmien mill-ġdid tal-espressjoni tal-biża '.

Esperiment 2: Riattivazzjonijiet perjodiċi ta 'traċċa ta' estinzjoni jdewmu t-tħassir tiegħu li jiddependi mill-ħin (irkupru spontanju). Fl-esperiment 1 sibna li inizjalment, il-memorja tal-estinzjoni hija dominanti fuq l-avversivmemorjatraċċa, jipprevjeni l-espressjoni tiegħu. Dan l-effett jisparixxi f'punti ta 'żmien aktar tard meta l-estinzjoni ma tkunx aktar kapaċi irażżan l-espressjoni tal-biża'. Ġie rrappurtat li sessjonijiet ta 'riattivazzjoni jistgħu jwasslu għalmemorjatisħiħ30, 36, 39. Peress li t-traċċa tal-estinzjoni titmermer maż-żmien, aħna mbassra li r-riattivazzjoni tagħha possibbilment tirriżulta fit-tisħiħ tagħha, u b'hekk ittejjeb il-persistenza tagħha u l-abbiltà li trażżan il-biża 'f'punti ta' żmien remoti.

Figura 1. Estinzjonimemorjajonqos milli jrażżan il-biża' b'mod permanenti. (A) Rappreżentazzjoni skematika tal-proċeduri sperimentali. Il-firien kundizzjonati mill-biża’ ġew sottomessi għal sessjoni ta’ estinzjoni ta’ 30-min u ġew ittestjati 24 siegħa wara. It-tieni test sar 7, 14, 21, jew 28 jum wara t-test 1 (N=6 /9 għal kull grupp). (B) Livelli ta 'iffriżar waqt sessjonijiet ta' estinzjoni. (C) Livelli ta' ffriżar waqt it-testijiet. (*) Differenza sinifikanti bejn it-testijiet 1 u 2 (P<0.05, repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

Għaldaqstant, il-firien ikkundizzjonati mill-biża' għaddew minn taħriġ ta' estinzjoni, ġew ittestjati jum wara u ttestjati mill-ġdid 28 jum wara għal irkupru spontanju. Fl-intervall bejn it-test u t-test mill-ġdid, grupp ta’ annimali għaddew minn 3-sessjonijiet ta’ riattivazzjoni min fil-jiem 7, 14, u 21 jum wara t-test 1 (Grupp ta’ Riattivazzjoni) jew baqgħu fil-gaġeġ tagħhom (Grupp ta’ Kontroll; Fig. 2A) . Ġie sottomess grupp addizzjonali għal sessjonijiet ta' riattivazzjoni iżda l-ebda taħriġ dwar l-estinzjoni (Ebda grupp ta' estinzjoni flimkien ma' riattivazzjoni). L-intervall ta' 7-jum bejn ir-riattivazzjonijiet intgħażel minħabba li, f'dan il-ħin, l-estinzjoni għadha espressa b'mod robust (Esperiment 1).

Waqt it-taħriġ ta 'estinzjoni, l-annimali effettivament urew tnaqqis dipendenti fuq il-ħin ta' reazzjonijiet ta 'biża' (F(5,110)=30.516, P=0.001; Fig. 2B). Fit-test 1, kien hemm differenza sinifikanti bejn il-gruppi (F(2,28)=8.11, P=0.002; Fig. 2C). Il-post-hoc ta’ Tukey wera li l-gruppi ta’ Kontroll u Riattivazzjoni wrew livelli simili ta’ ffriżar (P=0.915) u t-tnejn urew iffriżar aktar baxx mill-grupp Nru estinzjoni flimkien ma’ riattivazzjoni (P=0.007 u P=0. {21}}.001, rispettivament). Matul is-sessjonijiet ta' riattivazzjoni, ANOVA b'miżuri ripetuti wriet differenza sinifikanti bejn Riattivazzjoni u Ebda Estinzjoni flimkien ma' gruppi ta' riattivazzjoni (F(1,19)=46.63, P=0.0001) u l-ebda effett tas-sessjoni (F (2,38)=2.28, P=0.116) lanqas grupp x interazzjoni sessjoni (F(2,38)=1.00, P=0.376 Fig. 2D). It-tqabbil bejn it-test 1 u t-test 2 wera interazzjoni sinifikanti tal-grupp x sessjoni (ANOVA b'miżuri ripetuti, F(2,28)=3.89, P=0.03). Il-post-hoc ta' Tukey wera li l-biża' fil-grupp ta' Riattivazzjoni u fil-grupp Nru estinzjoni flimkien ma' riattivazzjoni ma nbidlitx mit-test 1 għat-test 2 (P=0.844), iżda kien hemm irkupru sinifikanti ta' biża' fil-grupp ta' kontroll (P=0.02). Importanti, l-iffriżar tal-grupp ta 'Riattivazzjoni kien inqas mill-oħrajn kollha fuq it-test 2 (Riattivazzjoni x Kontroll: P=0.007; Riattivazzjoni x Ebda estinzjoni flimkien ma' riattivazzjoni: P=0.0001; Fig. 2E). Dan juri li r-riattivazzjoni saħħet l-estinzjonimemorjau b'hekk impedixxa l-irkupru tal-biża' f'punt ta' żmien remot. Notevolment, f'dan il-protokoll, is-sessjonijiet ta' riattivazzjoni per se ma kellhom l-ebda effett fuq il-livelli tal-biża' meta ma sar l-ebda tagħlim dwar l-estinzjoni.

Esperiment 3 - It-tisħiħ tal-estinzjoni kkaġunat mir-riattivazzjoni jiddependi fuq L-VGCCs. Sabiex jinduċi rikonsolidazzjoni,memorjairid jiġi attivat mill-ġdid u jidħol fi stat labile. Xogħlijiet preċedenti wrew li l-attivazzjoni tal-kanali tal-kalċju tat-tip voltage-gated (L-VGCC) waqt ir-riattivazzjoni hija meħtieġa għad-destabilizzazzjoni, u l-imblokk tagħhom minn nimodipine jipprevjeni r-rikonsolidazzjoni milli sseħħ51. Biex tevalwa r-rwol ta 'L-VGCC fit-tisħiħ ta' estinzjoni kkaġunat mir-riattivazzjoni, irripejna d-disinn sperimentali tal-aħħar esperiment u tajna nimodipine qabel ir-riattivazzjoni (Fig. 3A).

Matul it-taħriġ ta 'estinzjoni, l-annimali wrew tnaqqis dipendenti fuq il-ħin ta' reazzjonijiet ta 'biża' (F (5,125)=13.55, P=0.001; Fig. 3B). Fit-test 1, annimali mill-gruppi tal-Vettura u Nimodipine urew livelli ta' ffriżar ugwalment baxxi (It-test t tal-Istudent; t(25)=0.510, P=0.615; Fig. 3C). Matul is-sessjonijiet ta' riattivazzjoni, kien hemm interazzjoni sinifikanti ta' grupp x sessjoni (F(2,50)=7.863, P=0.001; Fig. 3D) b'annimali ttrattati b'nimodipine li juru żieda fil-biża 'tul is-sessjonijiet (P=0.004), filwaqt li ma kien hemm l-ebda bidla fl-espressjoni tal-biża' fil-firien ittrattati bil-vettura (P=0.983).

Fit-tieni test, firien ittrattati b'nimodipine wrew livelli ogħla ta' ffriżar mill-kontrolli (t(25)=5.44, P=0.0001; Fig. 3E). Meta tqabbel il-prestazzjoni taż-żewġ sessjonijiet tat-test, ANOVA b'miżuri ripetuti sabet interazzjoni sinifikanti bejn grupp u sessjoni (F(1,20)=7.75, P=0.006). Tukey'spost-u żvelat li l-prestazzjoni ta 'annimali kkurati b'nimodipine fit-test 2 kienet ogħla mill-prestazzjoni tal-gruppi u s-sessjonijiet l-oħra kollha (P <0.001). dan="" juri="" li="" t-titjib="" tal-estinzjoni="" permezz="" ta="" 'riattivazzjonijiet="" jeħtieġ="" attivazzjoni="">

Esperiment 4: Riattivazzjoni ta' traċċa ta' estinzjoni waħda tiftaħ tieqa sensittiva għas-sinteżi tal-proteini. Wara r-riattivazzjoni,memorjajista’ jgħaddi minn fażi li teħtieġ li s-sinteżi tal-proteini de novo tiġi kkonsolidata mill-ġdid u tippersisti. Għalhekk, f'dan l-istat labile, huwa suxxettibbli għal tfixkil minn inibituri tas-sintesi tal-proteini1. Fix-xogħol preċedenti, intwera li l-estinzjonimemorjahija suxxettibbli għal rikonsolidazzjoni

Figura 2. Riattivazzjonijiet perjodiċi jipprevjenu l-irkupru spontanju tal-estinzjonimemorja. (A) Rappreżentazzjoni skematika tal-proċeduri sperimentali. Il-firien ikkundizzjonati mill-biża’ ġew sottomessi għal 30-minn sessjonijiet ta’ estinzjoni jew baqgħu fil-gaġeġ tagħhom (Ebda estinzjoni flimkien ma’ Grupp ta’ Riattivazzjoni: N=7). Sar test l-għada u test mill-ġdid 28 jum wara. Fl-intervall bejn it-testijiet, l-annimali ġew attivati ​​mill-ġdid bi 3-min fil-jiem 7, 14 u 21 wara t-test 1 jew baqgħu fil-gaġeġ tagħhom (Estinzjoni flimkien ma 'l-ebda grupp ta' riattivazzjoni: N=10; Estinzjoni flimkien ma 'grupp ta' Riattivazzjoni: N=14). (B) Livelli ta 'iffriżar waqt sessjonijiet ta' estinzjoni. (C) Livelli ta' ffriżar waqt it-test. (D) Livelli tal-iffriżar waqt riattivazzjonijiet. (E) Livelli tal-iffriżar waqt it-test mill-ġdid. (*) Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi (P<0.05, two-way="" or="" repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

tfixkil minn interferenza ta 'wara r-riattivazzjoni fil-paradigma ta' evitar inibitorja5, 6. Wara li użajna sessjonijiet ta 'espożizzjoni mill-ġdid f'esperimenti preċedenti, aħna hawn evalwajna jekk dawn l-espożizzjonijiet mill-ġdid kinux fil-fatt sessjonijiet ta' riattivazzjoni li jinvolvu r-reklutaġġ ta 'sintesi tal-proteini. Għaldaqstant, l-annimali kienu kkundizzjonati mill-biża’ u l-għada grupp għadda minn taħriġ ta’ estinzjoni (grupp ta’ estinzjoni) filwaqt li oħrajn baqgħu fil-gaġeġ tagħhom (grupp ta’ ebda estinzjoni). Fit-2 jum wara t-taħriġ, l-annimali kollha għaddew minn sessjoni qasira ta 'riattivazzjoni ta' 3min u immedjatament wara ġew injettati bl-inibitur tas-sintesi tal-proteini cycloheximide (CHX) jew il-vettura tiegħu. L-għada, l-annimali ġew ittestjati (Fig. 4A).

Matul is-sessjoni ta 'estinzjoni, ANOVA b'miżuri ripetuti żvelat akkwist ta' estinzjoni (F(5,75)=24.08, P=0.001; Fig. 4B). Waqt ir-riattivazzjoni, ANOVA f'żewġ direzzjonijiet indikat li l-annimali li qabel kienu għaddew minn estinzjoni wrew livelli ta' ffriżar aktar baxxi meta mqabbla mal-grupp ta' ebda estinzjoni (F(1,43)=23.32, P=0. 001; Fig. 4C). Fit-test, ANOVA f'żewġ direzzjonijiet żvelat interazzjoni sinifikanti tal-grupp x tad-droga (F(1,43)=22.64, P=0.001). Il-post-hoc ta’ Tukey wera li l-annimali kkurati b’cycloheximide fil-grupp ta’ bla estinzjoni wrew livelli ta’ ffriżar aktar baxxi minn dawk ittrattati bil-vetturi (P=0.01), li jindika li l-biża’.memorjakienet indebolita. Fil-grupp tal-estinzjoni,

Figura 3. It-tisħiħ tal-estinzjoni kkaġunat mir-riattivazzjoni jiddependi fuq kanali tal-kalċju tat-tip L li jaħdmu bil-vultaġġ. (A) Rappreżentazzjoni skematika tal-proċeduri sperimentali. Il-firien ikkundizzjonati mill-biża’ ġew sottomessi għal sessjoni ta’ estinzjoni ta’ 30-min. Sar test l-għada u test mill-ġdid 28 jum wara. Fl-intervall bejn it-testijiet, l-annimali ġew attivati ​​mill-ġdid bi 3-min fil-jiem 7, 14, u 21 wara t-test 1. Nimodipine (N=15) jew il-vettura tiegħu (N=12) kienu sc infuża 30min qabel kull riattivazzjoni (B) Livelli ta 'iffriżar matul is-sessjoni ta' estinzjoni. (C) Livelli ta' ffriżar waqt it-test. (D) Livelli tal-iffriżar waqt riattivazzjonijiet. (E) Livelli tal-iffriżar waqt it-test mill-ġdid. (*) Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi (P<0.05, two-way="" or="" repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="" test).="" chx-treated="" animals="" showed="" higher="" freezing="" levels="" than="" vehicle-treated="" ones="" (p="0.001)," indicating="" that="" extinction="">memorjakien imfixkel.

Għaldaqstant, meta ma sar l-ebda taħriġ ta 'estinzjoni, it-traċċa tal-biża' tiġi destabbilizzata permezz ta 'riattivazzjoni u hija mfixkla minn CHX. Meta l-memorji ta 'estinzjoni u biża' jeżistu flimkien, isseħħ effett ta 'dominanza ta' traċċa u l-estinzjonimemorjahija dik li ssofri d-destabilizzazzjoni, li tirrikjedi s-sinteżi tal-proteini de novo biex tippersisti. Din is-sejba turi li t-traċċa tal-estinzjoni ġiet attivata mill-ġdid b'mod effettiv, li tissuġġerixxi li r-rikonsolidazzjoni hija l-mekkaniżmu li jimmedja t-tisħiħ tal-memorja tal-estinzjoni.

Esperiment 5 - Proċess ieħor ta' rikaduta ta 'traċċa ta' estinzjoni, Akkwist mill-ġdid Rapidu, jista 'jinżamm farmakoloġikament bi trattament ta' wara r-riattivazzjoni. Ġie rrappurtat li r-rikonsolidazzjoni tista’ tissaħħaħ bl-amministrazzjoni ta’ wara r-riattivazzjoni ta’ komposti bħal inibituri HDAC, li tirriżulta f’żieda fil-prestazzjoni f’terminu twil ta’ wara r-riattivazzjoni.memorjatest45, 52–54. Hawnhekk, staqsejna jekk l-estinzjoni tistax tiġi modulata b'mod pożittiv permezz ta 'trattament ta' wara r-riattivazzjoni bl-inibitur HDAC sodium butyrate (NaB). Aħna għalhekk użajna protokoll ta 'rikondizzjonar li jippermetti l-iskoperta ta' bidliet relattivi fis-saħħa tal-biża 'u l-memorja tal-estinzjoni skont il-proporzjon tal-akkwist mill-ġdid tal-biża'. Pereżempju, ġeneralment wara proċeduri ta' estinzjoni standard, l-akkwist mill-ġdid huwa rapidu32, 34, iżda jista' jkun bil-mod f'ċerti ċirkostanzi bħal tagħlim estensiv ta' estinzjoni jew kondizzjonament inizjali dgħajjef14.

Il-firien ikkundizzjonati mill-biża’ għaddew minn taħriġ ta’ estinzjoni u sessjoni ta’ riattivazzjoni 24 siegħa wara. Immedjatament wara r-riattivazzjoni, NaB jew il-vettura tiegħu ġiet infuża (ip). Fl-erbat ijiem ta’ wara, l-annimali għaddew minn proċedura mħallta ta’ ttestjar u ta’ rikondizzjonar dgħajjef biex tiġi vvalutata l-akkwist mill-ġdid tal-biża’. Kull sessjoni kienet tikkonsisti minn test ta '4min segwit minn footshock dgħajfa u perjodu addizzjonali ta' 30 s fil-kaxxa (Fig. 5A). Matul it-taħriġ ta 'estinzjoni, annimali murija

Figura 4. Estinzjonimemorjateħtieġ sintesi tal-proteini de novo wara r-riattivazzjoni tagħha biex tippersisti. (A) Rappreżentazzjoni skematika tal-proċeduri sperimentali. Il-firien ikkundizzjonati mill-biża’ ġew sottomessi għal 30-minn sessjonijiet ta’ estinzjoni jew baqgħu fil-gaġeġ tagħhom. Saret sessjoni ta’ riattivazzjoni 7 ijiem wara segwita minn test l-għada. Immedjatament wara r-riattivazzjoni, l-annimali rċevew infużjoni ip ta’ cycloheximide (Grupp ta’ estinzjoni: N=10; Grupp ta’ bla estinzjoni: N=14) jew il-vettura tiegħu (Grupp ta’ estinzjoni: N=9; Mhux ta’ estinzjoni) grupp: N=11). (B) Livelli ta 'iffriżar matul is-sessjoni ta' estinzjoni. (C) Livelli ta 'iffriżar matul is-sessjoni ta' riattivazzjoni. (D) Livelli tal-iffriżar matul is-sessjonijiet tat-test. (*) Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi (P<0.05, repeated-measures="" or="" two-way="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

tnaqqis dipendenti fuq il-ħin tar-risponsi tal-biża' (F(5,110)=32.89, P=0.001; Fig. 5B). Fir-riattivazzjoni, ma kien hemm l-ebda differenza bejn il-gruppi aktar tard infużi b'NaB jew Veh (t(22)=0.59, P=0.56; Fig. 5C). Matul l-4 sessjonijiet tat-test (li jispiċċaw b'rikondizzjonament dgħajjef li l-effett tiegħu ġie analizzat fit-test li ġej; Fig. 5D), ANOVA b'miżuri ripetuti indika interazzjoni sinifikanti ta' droga x sessjoni (F(3,66)=4.82 , P=0.004). Il-post-hoc ta 'Tukey żvela li matul l-ewwel test, il-gruppi Veh u NaB kienu ugwali fil-livell tal-iffriżar (P=0.99). Madankollu, wara sessjoni waħda ta' rikondizzjonar, ittrattat b'Veh fil-pront wera akkwist mill-ġdid tal-biża' (P=0.0002) filwaqt li ttrattat b'NaB ma kienx (P=0.99). Il-grupp ittrattat b'NaB wera biss akkwist mill-ġdid sinifikanti wara tliet sessjonijiet ta' rikondizzjonar, fit-test 4 (P=0.002).

Dawn ir-riżultati juru li t-trattament b'NaB wara r-riattivazzjoni wassal għall-estinzjonimemorjareżistenti għall-akkwist mill-ġdid rapidu. Annimali mill-grupp tal-vetturi malajr urew iffrankar wara sessjoni waħda dgħajfa ta 'taħriġ mill-ġdid.

Figura 5. Infużjoni ta' wara r-riattivazzjoni ta', amemorja-id-droga li ssaħħaħ, issaħħaħ ukoll it-traċċa ta 'estinzjoni billi tipprevjeni akkwist mill-ġdid rapidu tal-biża'. (A) Rappreżentazzjoni skematika tal-proċeduri sperimentali.

Il-firien ikkundizzjonati mill-biża’ ġew sottomessi għal sessjoni ta’ estinzjoni ta’ 30-min. Twettqet riattivazzjoni 24 siegħa wara segwita mill-għoti immedjat ta' butirrat tas-sodju (NaB; N=12) jew il-vettura tiegħu (N=12). Fit-3 ijiem li ġejjin, l-annimali għaddew minn sessjonijiet ta' ttestjar li spiċċaw bit-twassil ta' footshock dgħajfa flimkien ma' 30 s addizzjonali ta' esplorazzjoni kuntestwali (protokoll ta' riakkwist rapidu). Ġurnata wara, sar test standard. (B) Livelli ta 'iffriżar matul is-sessjoni ta' estinzjoni. (C) Livelli tal-iffriżar waqt ir-riattivazzjoni. (D) Livelli ta' ffriżar waqt it-testijiet. (*) Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi (P<0.05, independent-samples="" t-test="" or="" repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

Annimali ttrattati b'NaB, min-naħa tagħhom, urew biss iffrankar wara 3 sessjonijiet ta' rikondizzjonar. Dan juri li t-traċċa tal-estinzjoni tista’ tissaħħaħ b’interventi farmakoloġiċi ta’ wara r-riattivazzjoni.

Diskussjoni

Fl-istudju preżenti, aħna nuru li estinzjoni biża kuntestwalimemorjajistgħu jittejbu b'sessjonijiet qosra ta' riattivazzjoni. L-ewwel, urejna li wara t-tagħlim tal-estinzjoni, l-irkupru spontanju tal-biża 'huwa osservabbli 21 jum wara, iżda mhux 14-il jum jew qabel (Esperiment 1). Sussegwentement, sibna li meta estinzjonimemorjaġie riattivat perjodikament, it-tħassir dipendenti fuq il-ħin tiegħu ġie evitat u l-ebda rkupru spontanju tal-biża ma ġie vverifikat għal mill-inqas 28 jum (Esperiment 2), effett muri wkoll li huwa medjat minn L-VGCCs (Esperiment 3). Sabiex tivverifika jekk is-sinteżi tal-proteini kinitx qed tiġi rreklutata mis-sessjonijiet ta 'espożizzjoni mill-ġdid, aħna infużajna cycloheximide wara r-riattivazzjoni u osservajna l-okkorrenza ta' tieqa ġdida ta 'plastiċità, li tappoġġja l-idea li r-rikonsolidazzjoni hija l-proċess li qed iseħħ (Esperiment 4). Fl-aħħarnett, bl-użu ta’ protokoll differenti mmirat lejn mekkaniżmu ieħor ta’ rikaduta tal-memorja tal-estinzjoni – akkwist mill-ġdid rapidu (iffrankar) – aħna vverifikajna li l-inibizzjoni farmakoloġika tal-HDAC wara r-riattivazzjoni kienet kapaċi wkoll ittejjeb it-traċċa tal-estinzjoni, kif ippruvat mir-reżistenza osservata għall-akkwist mill-ġdid rapidu tal- rispons tal-biża.

Huwa magħruf li t-telf ta’ reazzjonijiet kundizzjonati wara l-estinzjoni mhuwiex permanenti55 peress li l-estinzjoni fil-fatt ma tiddependix fuqmemorjatħassir. Minflok, jippromwovi tagħlim ġdid li jipprevjeni l-espressjoni tal-assoċjazzjoni maħżuna qabel14. Għalhekk, memorji ta’ estinzjoni u biża’ jeżistu flimkien u jikkompetu għall-espressjoni. Dan iwassal għal effett ta 'traċċa ta' dominanza bl-estinzjoni li tinibixxi l-espressjoni tal-biża '. Madankollu, l-estinzjoni titmermer faċilment u l-memorja tal-biża’ tegħleb l-inibizzjoni tagħha permezz ta’ diversi mekkaniżmi ta’ rikaduta15, 20. L-aktar evidenti minn dawn huwa r-ritorn tal-biża’ bis-sempliċi mogħdija taż-żmien, imsejjaħ irkupru spontanju15. Barra minn hekk, il-memorja tal-biża’ tista’ tinħall mill-inibizzjoni tal-estinzjoni permezz ta’ fenomeni ta’ mġiba bħal akkwist mill-ġdid rapidu, dħul mill-ġdid u tiġdid14. It-tħassir tal-estinzjonimemorjamaż-żmien hija murija fl-Esperiment 1. Inizjalment, l-estinzjoni trażżan risponsi ta 'biża' kondizzjonati. Madankollu, f'punti ta 'żmien remoti dan l-effett jisparixxi, li jirriżulta f'rkupru spontanju. Akkwist mill-ġdid rapidu huwa osservat fl-esperiment 5. Il-firien ta 'kontroll juru malajr biża' għoli wara sessjoni waħda dgħajfa ta 'rikondizzjonar. Metodi ġodda mfassla biex jevitaw il-persistenza fqira tal-estinzjoni billi jtejbu s-saħħa tagħha potenzjalment itejbu t-trattamenti psikjatriċi ta' disturbi relatati mal-biża'48.

Mill-estinzjonimemorjajiddgħajjef maż-żmien u jitlef il-kapaċità tiegħu li jrażżan il-biża15, il-prevenzjoni ta’ dan it-tħassir tkun ta’ benefiċċju. Fl-Esperiment 2, sibna li l-persistenza ta 'memorja ta' estinzjoni tista 'tiġi modulata b'mod pożittiv permezz tar-riattivazzjoni sempliċi tagħha. Għaldaqstant, ma kien hemm l-ebda sinjali ta 'rkupru spontanju meta l-annimali għaddew minn riattivazzjonijiet qosra, anke 4 ġimgħat wara t-taħriġ ta' estinzjoni. Interessanti, ir-riattivazzjoni ma żiedetx ir-risponsi tal-biża' f'annimali mhux sottomessi għal taħriġ ta' estinzjoni kif irrappurtat qabel30, probabbilment minħabba effett ta' limitu. Għalhekk, sessjonijiet qosra ta' riattivazzjonijiet setgħu jipprevjenu t-tħassir li jiddependi mill-ħin tal-estinzjoni b'mod fit-tul.

Ħafna drabi huwa ssuġġerit li ssir rikonsolidazzjoni biex tippermettimemorjakontenut li għandu jiġi aġġornat, u jżomm ir-rilevanza adattiva tiegħu biex jiggwida aħjar l-imgieba fil-futur. Rapporti ta’ aġġornament tal-memorja mmexxi mir-rikonsolidazzjoni juru li dan jista’ jseħħ permezz tal-inkorporazzjoni ta’ informazzjoni ġdida32, 34 jew bit-tisħiħ tal-assoċjazzjonijiet eżistenti30, 35–39. Huwa importanti li jiġi rrilevat li anke meta t-tisħiħ jirriżulta minn tagħlim addizzjonali minn tieni prova identika ta' tagħlim, il-proċess ta' destabilizzazzjoni-risbilizzazzjoni għadu meħtieġ36. Għalhekk, aħna ipoteżijna li l-effett tat-tisħiħ immexxi mir-riattivazzjoni osservat fl-esperiment 2 jista 'jkun medjat minn proċess ta' rikonsolidazzjoni, li jinkludi fażi ta 'destabilizzazzjoni dipendenti mir-riattivazzjoni segwita minn fażi ta' ristabilizzazzjoni li teħtieġ sintesi tal-proteini de novo. Xogħlijiet preċedenti wrew li l-imblokkatur L-VGCC nimodipine jipprevjeni d-destabilizzazzjoni tal-memorja, u b'hekk jipprevjeni r-rikonsolidazzjoni51. Fl-esperiment 3, sibna li l-effett tat-tisħiħ tar-riattivazzjoni ġie evitat mill-imblokkatur L-VGCC nimodipine, li jappoġġja l-involviment tar-rikonsolidazzjoni fit-titjib tat-traċċa ta 'estinzjoni. Nimodipine ġie implikat ukoll fl-indeboliment tal-akkwist tal-estinzjoni kif ukoll il-konsolidazzjoni56, 57. Madankollu, fil-protokoll sperimentali tagħna, nimodipine ġie injettat diversi jiem wara li seħħet is-sessjoni tal-estinzjoni, u għamel l-effetti tiegħu distinti minn dawk miksuba madwar it-tagħlim tal-estinzjoni inizjali. Għalhekk, irrispettivament minn liema proċess fil-fatt qed jiġi mblukkat - rikonsolidazzjoni jew estinzjoni - l-esperiment 3 juri li t-tisħiħ tal-estinzjoni kkaġunat mir-riattivazzjoni jeħtieġ li sseħħ l-attivazzjoni tal-VGCC.

Rikonsolidazzjoni huwa proċess li fih stabbilit qabelmemorjajiġi attivat mill-ġdid u jsir labili, u jeħtieġ li s-sinteżi tal-proteini de novo tippersisti. Biex tindirizza aktar il-kwistjoni dwar jekk sessjoni ta 'riattivazzjoni tinduċix ir-rikonsolidazzjoni tat-traċċa ta' estinzjoni, investigajna l-effett tal-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini ta 'wara r-riattivazzjoni f'annimali li għaddew jew ma kinux qabel taħriġ ta' estinzjoni (Esperiment 4). F'annimali li ma sofrewx estinzjoni, l-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini ta' wara r-riattivazzjoni ħarbat ir-rikonsolidazzjoni tal-biża' kuntestwalimemorja, li jirriżulta f'livelli baxxi ta' ffriżar. L-eżitu ta 'mġieba oppost seħħ fil-grupp li għadda minn estinzjoni: fit-test, annimali ttrattati b'CHX urew livelli għoljin ta' ffriżar, li jindika li l-memorja ta 'estinzjoni kienet imfixkla. F'dan l-esperiment, peress li l-estinzjoni kienet imfixkla minn inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini wara espożizzjoni waħda mill-ġdid (kif ikkonfermat f'test l-għada), ma ġew investigati l-ebda sessjonijiet ta 'espożizzjoni mill-ġdid żejda. Ir-riżultati ta 'dan l-esperiment jissuġġerixxu li t-traċċa tal-estinzjoni ġiet imfixkla sa punt li ma kinitx aktar kapaċi irażżan il-biża'. Xogħol ta 'qabel5, 7, jindika li r-riattivazzjoni ma kinitx sempliċement tippromwovi "tagħlim addizzjonali dwar l-estinzjoni", iżda wasslet li t-traċċa tal-estinzjoni tidħol fi stat labile li kien jeħtieġ rikonsolidazzjoni biex tippersisti. Wieħed irid jinnota li jew il-memorja tal-estinzjoni jew il-memorja tal-biża kienet qed tiġi espressa fil-ħin tar-riattivazzjoni. Għaldaqstant, it-traċċa li hija attivata b'mod dominanti mir-riattivazzjoni kienet dik iddestabilizzata u għalhekk imfixkla mill-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini.

Fl-aħħarnett, ivvalutajna jekk it-traċċa tal-estinzjoni setgħetx tiġi modulata b’mod pożittiv permezz ta’ trattament ta’ wara r-riattivazzjoni b’memorja-t-titjib tad-droga. Intwera li bosta aġenti farmakoloġiċi jtejbumemorjakonsolidazzjoni u rikonsolidazzjoni, inklużi inibituri HDAC bħal butirat tas-sodju45, 52, 53. Fl-esperiment 5, sibna li t-trattament NaB ta 'wara r-riattivazzjoni saħħaħ it-traċċa ta' estinzjoni, u ppermettilha tirreżisti rikaduta permezz ta 'protokoll ta' riakkwist rapidu. Annimali ttrattati b'NaB wrew reżistenza notevoli għall-iffrankar wara proċedura rapida ta 'akkwist mill-ġdid. Annimali ttrattati bil-vettura wrew iffrankar wara sessjoni waħda dgħajfa ta’ rikondizzjonar, filwaqt li l-firien ittrattati b’NaB kienu jeħtieġu 3 sessjonijiet ta’ rikondizzjonar biex juru l-istess effett ta’ rkupru. Dan juri li anke sessjoni qasira ta' riattivazzjoni tagħmel traċċa ta' estinzjoni suxxettibbli għal titjib b'interferenza pożittiva. It-titjib tal-estinzjoni permezz tal-inibizzjoni tal-HDAC ta 'wara r-riattivazzjoni, kif irrappurtat hawn, jissuġġerixxi li l-istess effett ta' benefiċċju jista 'jinkiseb b'mediċini oħra li jtejbu l-memorja biex jinibixxu l-espressjoni tal-biża' maż-żmien.

Għandha tiġi kkunsidrata l-possibbiltà li t-tisħiħ tal-estinzjoni li jiddependi mir-riattivazzjoni seta' ġie medjat b'estinzjoni addizzjonali minflok rikonsolidazzjoni. Ġie rrappurtat li anki espożizzjonijiet mill-ġdid qosra għal kuntest jistgħu jwasslu għall-estinzjoni meta jsiru f’punti ta’ żmien remoti35. Għalkemm il-protokoll sperimentali ta 'dik id-dokument huwa differenti minn tagħna f'numru sinifikanti ta' aspetti, aħna inkludew grupp sperimentali addizzjonali biex jikkontrollaw dan it-tħassib speċifiku: fl-esperiment 2, il-grupp "No-estinzjoni flimkien ma 'riattivazzjoni" għadda mill-istess tliet sessjonijiet ta' riattivazzjoni iżda ma ġiex sottomess għal sessjoni ta’ estinzjoni. Dan il-grupp ma wera l-ebda attenwazzjoni tal-biża ', la waqt riattivazzjonijiet u lanqas it-test, differenti minn dak li jkun mistenni fl-estinzjoni. Evidenza addizzjonali ġejja mill-esperiment 4. Jekk espożizzjoni qasira indotta estinzjoni addizzjonali, allura t-trattament ta 'cycloheximide kien ifixkel biss it-tagħlim inkrementali ta' dik is-sessjoni, u jħalli meħlus dak li kien maħżun qabel. Madankollu, cycloheximide ta 'wara r-riattivazzjoni ħarbat it-traċċa tal-estinzjoni, abolixxa l-inibizzjoni tal-biża' f'test li sar 24 siegħa wara. L-interruzzjoni ta' traċċa maħżuna qabel mill-inibizzjoni tas-sintesi tal-proteini ta' wara r-riattivazzjoni hija konsistenti mal-interpretazzjoni tar-rikonsolidazzjoni. Għalhekk, meta wieħed iqis il-konverġenza tal-evidenza kollha tal-imġieba u farmakoloġika miksuba bid-disinn sperimentali preżenti, ir-riżultati tagħna jindikaw li dak li seħħ matul is-sessjonijiet ta’ riattivazzjonijiet kien proċess ta’ rikonsolidazzjoni li medja t-tisħiħ tal-estinzjoni.memorja.

L-irkupru tal-biża 'wara approċċi bbażati fuq l-estinzjoni huwa kritiku biex wieħed jifhem biex ittejjeb it-trattamenti tal-imġieba u farmakoloġiċi ta' disturbi ta 'ansjetà. Fil-fatt, it-titjib tal-estinzjoni jista 'jitqies bħala karatteristika tar-riċerka psikjatrika. Hawnhekk, sibna li sessjonijiet qosra ta’ riattivazzjoni kienu effettivi biex jipprevjenu l-irkupru spontanju ta’ biża’ estintimemorja. Dan l-effett kien medjat minn L-VGCCs u jinvolvi sinteżi tal-proteini, li jissuġġerixxi bil-qawwa li r-rikonsolidazzjoni hija l-mekkaniżmu wara dan it-tisħiħ. Sibna wkoll li l-modulazzjoni farmakoloġika pożittiva ta 'wara r-riattivazzjoni kienet kapaċi tipprevjeni l-biża' ta 'akkwist rapidu mill-ġdid. Flimkien, dawn is-sejbiet juru li l-estinzjoni tista’ tibbenefika minn interventi bbażati fuq ir-riattivazzjoni mmirati biex itejbu s-saħħa u l-persistenza tagħha. Iżid ukoll mal-kunċett li r-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni mhumiex proċessi kompletament separati kif spiss jissuġġerixxu l-paradigmi attwali58. Minħabba l-prominenza tat-terapiji konjittivi-komportamentali bbażati fuq l-estinzjoni, dawn is-sejbiet iġibu għarfien rilevanti kemm għar-riċerka bażika kif ukoll dik klinika.

Metodi

Suġġetti. Intużaw firien Wistar maskili mill-kolonja tat-tgħammir tagħna li jiżnu 300-350 g, ta 'età 60-70 jum. L-annimali kienu miżmuma f’gaġeġ tal-plastik, erba’ sa ħamsa għal kull gaġġa, bl-ilma u l-ikel disponibbli ad libitum. L-esperimenti kollha saru mil-leġiżlazzjoni u l-linji gwida nazzjonali dwar il-kura tal-annimali (Liġi Brażiljana 11794/2008) u approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Università.

Kuntestwali Biża Kundizzjonata. Il-kamra tas-CFC kienet tikkonsisti f'kaxxa tal-Plexiglas illuminata (25.0 ×25.0-ċm gradilja ta' 0.1-ċm kalibru ta' vireg tal-istainless steel spazjati 1.{{ 7}} ċm bogħod minn xulxin). Fis-sessjoni ta' kondizzjonament, il-firien tpoġġew fil-kamra għal 3-min, u mbagħad irċevew żewġ 2-sek 0,7 mA footshocks separati b'intervall ta' 30-sec. L-annimali nżammu fl-ambjent ta’ kondizzjonament għal 30 sek addizzjonali qabel ma rritornaw lejn il-gaġeġ tagħhom.

Memorjaestinzjoni, riattivazzjoni, u sessjonijiet tat-test. Intużaw espożizzjonijiet mill-ġdid tal-kuntest fil-qosor jew fit-tul biex jinduċu r-riattivazzjoni tal-memorja jew it-tagħlim tal-estinzjoni, rispettivament. It-taħriġ ta' estinzjoni kien jikkonsisti f'espożizzjoni mill-ġdid ta' 30-min għall-kuntest ikkundizzjonat u dejjem seħħ 24 siegħa wara CFC. Is-sessjonijiet ta' riattivazzjoni tal-memorja kienu jikkonsistu f'espożizzjoni mill-ġdid ta' 3-min għall-kuntest kundizzjonat. Fl-Esperimenti 2 u 3, riattivazzjonijiet saru fil-ġranet 7, 14, u 21 wara t-test 1. Fl-esperimenti 4 u 5 twettqu 24 siegħa wara t-taħriġ ta 'estinzjoni.

Is-sessjonijiet tat-test kienu jikkonsistu f'espożizzjoni mill-ġdid ta' 4-min għall-kuntest. Fuq l-esperimenti 1, 2, u 3, l-ewwel test sar 24 siegħa wara t-taħriġ ta 'estinzjoni, u t-tieni test sar 7, 14, 21, jew 28 jum wara, biex tiġi vvalutata l-biża' ta 'rkupru spontanju. Fl-esperimenti 4 u 5, is-sessjoni tat-test saret 24 siegħa wara r-riattivazzjoni biex jiġi vvalutat l-effett ta 'manipulazzjonijiet farmakoloġiċi ta' wara r-riattivazzjoni.

Biex tindirizza l-akkwist mill-ġdid rapidu (jew "iffrankar"; Esperiment 5), l-annimali għaddew minn test ta' 4-min segwit minn xokk dgħajfa tas-saqajn (2-seks 0.4 mA). Wara 30 sekonda oħra, reġgħu lura lejn il-gaġeġ tagħhom. Din il-proċedura ġiet ripetuta kuljum tliet darbiet, segwita minn test addizzjonali jum wara. F'din il-proċedura, l-iffriżar dejjem ġie skurjat qabel il-footshock (li kienet tikkonsisti f'sessjoni ta 'test standard). Dan ippermettilna kemm inkejlu l-prestazzjoni kif ukoll nissottomettu l-annimali għal sessjoni ta 'rikondizzjonar dgħajfa.

Drogi. L-inibitur tas-sinteżi tal-proteini cycloheximide (CHX; Sigma) ġie maħlul f'melħ isotoniku sterili b'1 fil-mija dimethylsulfoxide għal konċentrazzjoni ta '2.2mg/mL. Cycloheximide jew il-vettura tiegħu ġie injettat intraperitonealment (ip) immedjatament wara r-riattivazzjoni. Il-volum totali injettat kien 1mL/kg.

L-antagonist tal-kanali tal-kalċju tal-vultaġġ tat-tip L (LVGCCs) nimodipine (Sigma) ġie maħlul f'melħ isotoniku sterili bi 8 fil-mija dimethylsulfoxide għal konċentrazzjoni ta '16mg/mL. Nimodipine jew il-mezz tiegħu ġie injettat taħt il-ġilda 30min qabel is-sessjonijiet ta' riattivazzjoni. Il-volum totali injettat kien 1mL/kg.

Sodium butyrate (NaB; Sigma), inibitur ta' histone deacetylase (HDAC), ġie maħlul f'melħ isotoniku sterili għal konċentrazzjoni ta' 0.6g/mL. Il-volum totali injettat kien 1mL/kg ip, immedjatament wara r-riattivazzjoni.

Analiżi tad-Data.Memorjatkejjel billi kkwantifika l-imġieba tal-iffriżar u espressa bħala persentaġġ tal-ħin totali tas-sessjoni. L-iffriżar ġie skurjat minn osservatur blind għall-kundizzjonijiet sperimentali. L-omoċedastiċità u n-normalità tad-distribuzzjoni tad-dejta ġew ikkonfermati bit-test ta 'Levene u t-test Kolmogorov-Smirnov, rispettivament. Is-sessjonijiet ta' estinzjoni ġew analizzati bl-użu ta' ANOVA ta' Miżuri Ripetuti. Sessjonijiet ta 'riattivazzjoni ġew analizzati bl-użu tat-test t ta' Student, ANOVA f'żewġ direzzjonijiet, jew ANOVA ta 'Miżuri Ripetuti, segwit minn test post-hoc ta' Tukey. Is-sessjonijiet tat-test ġew analizzati bl-użu tat-test t ta' Student, ANOVA f'żewġ direzzjonijiet, jew ANOVA ta' Miżuri Ripetuti, segwit minn test Tukey post-hoc.

Referenza

1. Nader, K., Schafe, GE & Le Doux, JE Il-memorji tal-biża 'jeħtieġu sinteżi tal-proteini fl-amigdala għar-rikonsolidazzjoni wara l-irkupru. Natura 406, 722–6 (2000).(2010).

3. Finnie, PSB & Nader, K. Ir-rwol tal-mekkaniżmi tal-metaplastiċità fir-regolamentazzjonimemorjadestabilizzazzjoni u rikonsolidazzjoni. Newrosci. Biobehav. Rev 36, 1667–707 (2012).

5. Rossato, JI, Bevilaqua, LR, Izquierdo, I., Medina, JH & Cammarota, M. L-irkupru jinduċi rikonsolidazzjoni tal-estinzjoni tal-biża 'memorja. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107, 21801–21805 (2010).

7. Eisenberg, M. & Dudai, Y. Rikonsolidazzjoni tal-memorja tal-biża' friska, remota u mitfija f'Medaka: il-biżgħat qodma ma jmutux. Eur J Neurosci 20, 3397–3403 (2004).

8. Rosas-Vidal, L., Rodriguez-Romaguera, J., Do-Monte, F. & Anderson, R. Timmira r-rikonsolidazzjoni ta 'memorji ta' estinzjoni: strateġija potenzjali ġdida biex tikkura disturbi ta 'ansjetà. Mol. Psikjatrija 20, 1264–1265 (2015).

9. Bouton, ME, Westbrook, RF, Corcoran, KA & Maren, S. Modulazzjoni kuntestwali u temporali ta 'estinzjoni: mekkaniżmi ta' mġiba u bijoloġiċi. Biol. Psikjatrija 60, 352–60 (2006).

11. Furini, C., Myskiw, J. & Izquierdo, I. It-tagħlim tal-estinzjoni tal-biża’. Newrosci. Biobehav. Rev 47, 670–683 (2014).

13. Vervliet, B., Craske, MG & Hermans, D. Fear extinction and relapse: state of the art. Annu. Dun Clin. Psikolu. 9, 215–48 (2013). (2002).

15. Rescorla, Ra Irkupru spontanju. Tgħallem. Mem. 11, 501–9 (2004).

17. Pedreira, ME & Maldonado, H. Is-sinteżi tal-proteini tissodisfa r-rikonsolidazzjoni jew l-estinzjoni skont it-tul tat-tfakkira. Neuron 38, 863–869 (2003).

18. Bustos, SG, Maldonado, H. & Molina, VA Effett ta 'tfixkil ta' midazolam fuq ir-rikonsolidazzjoni tal-memorja tal-biża ': influwenza deċiżiva tal-medda ta' żmien ta 'riattivazzjoni u l-età tal-memorja. Neuropsychopharmacology 34, 446–57 (2009).

19. Merlo, E., Milton, AL, Goozée, ZY, Theobald, DE & Everitt, BJ Ir-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni huma proċessi dissoċjabbli u reċiprokament esklużivi: evidenza tal-imġieba u molekulari. J. Neurosci. 34, 2422–31 (2014).

20. Eisenberg, M., Kobilo, T., Berman, DE & Dudai, Y. Stabbiltà tal-memorja rkuprata: korrelazzjoni inversa ma 'dominanza ta' traċċa. Science 301, 1102–1104 (2003).

21. Suzuki, A. et al. Il-konsolidazzjoni mill-ġdid u l-estinzjoni tal-memorja għandhom firem temporali u bijokimiċi distinti.J. Newrosci. 24, 4787–95

(2004).

22. Lee, JLC, Milton, AL & Everitt, BJ Rikonsolidazzjoni u estinzjoni ta 'biża' kondizzjonata: inibizzjoni u tisħiħ. J. Neurosci. 26, 10051–6 (2006).

23. Flavell, CR & Lee, JL Rikonsolidazzjoni u estinzjoni tal-memorja pavlovjana appetittiva. Neurobiol Learn Mem 104, 25–31

(2013).

24. Tedesco, V., Roquet, RF, DeMis, J., Chiamulera, C. & Monfils, M.-H. Estinzjoni, applikata wara l-irkupru tal-memorja tal-biża 'smigħ, iżżid b'mod selettiv il-proteina tas-saba taż-żingu 268 u l-espressjoni tal-proteina ribosomali fosforilata S6 fil-kortiċi prefrontali u l-amigdala laterali. Neurobiol. Tgħallem. Mem. 115, 78–85 (2014).

25. de la Fuente, V., Freudenthal, R. & Romano, A. Rikonsolidazzjoni jew estinzjoni: swiċċ tal-fattur tat-traskrizzjoni fid-determinazzjoni tal-kors tal-memorja wara l-irkupru. J. Neurosci. 31, 5562–73 (2011).

27. Lee, JLC Rikonsolidazzjoni: iż-żamma tar-rilevanza tal-memorja. Xejriet Neurosci. 32, 413–20 (2009).

29. Nadel, L. & Hardt, O. Aġġornament dwar is-sistemi u l-proċessi tal-memorja. Neuropsychopharmacology 36, 251–73 (2011).

31. Forcato, C., Rodríguez, MLC, Pedreira, ME & Maldonado, H. Ir-rikonsolidazzjoni fil-bnedmin tiftaħ memorja dikjarattiva għad-dħul ta’ informazzjoni ġdida. Neurobiol. Tgħallem. Mem. 93, 77–84 (2010).

32. Monfils, M.-H., Cowansage, KK, Klann, E. & LeDoux, JE Konfini ta 'Estinzjoni-rikonsolidazzjoni: iċ-ċavetta għall-attenwazzjoni persistenti tal-memorji tal-biża'. Xjenza (80-.). 324, 951–955 (2009).

33. Hupbach, A., Gomez, R., Hardt, O. & Nadel, L. Rikonsolidazzjoni ta 'memorji episodiċi: tfakkira sottili jqanqal integrazzjoni ta' informazzjoni ġdida. Tgħallem. Mem. 14, 47–53 (2007).

34. Haubrich, J. et al. Ir-rikonsolidazzjoni tippermetti li l-memorja tal-biża 'tiġi aġġornata għal livell inqas avversiv permezz tal-inkorporazzjoni ta' informazzjoni appetittiva. Neuropsychopharmacology 40, 315-326 (2015).

35. Inda, MC, Muravieva, EV & Alberini, CM L-irkupru tal-memorja u l-mogħdija taż-żmien: mir-rikonsolidazzjoni u t-tisħiħ sal-estinzjoni. J. Neurosci. 31, 1635–43 (2011).

(2008).

37. Fukushima, H. et al. Titjib tal-memorja tal-biża' permezz ta' rkupru permezz ta' konsolidazzjoni mill-ġdid. Elife 2014, 1–19 (2014).

39. Forcato, C., Rodríguez, MLC & Pedreira, ME Proċessi ripetuti ta' labilizzazzjoni-rikonsolidazzjoni jsaħħu l-memorja dikjarattiva fil-bnedmin. PLoS One 6, e23305 (2011).

(2015).

41. Garcia-DeLaTorre, P., Rodriguez-Ortiz, CJ, Arreguin-Martinez, JL, Cruz-Castaneda, P. & Bermudez-Mattoni, F. Infużjonijiet ta’ anisomycin simultanji iżda mhux indipendenti fil-kortiċi insulari u l-amigdala jfixklu l-istabbilizzazzjoni tal-memorja tat-togħma meta aġġornat. Tgħallem. Mem. 16, 514–519 (2009).

42. Lee, JLC Rikonsolidazzjoni tal-Memorja timmedja l-aġġornament tal-kontenut tal-memorja tal-hippocampal. Quddiem. Imġiba. Newrosci. 4, 168 (2010).

44. Souter, M. & Kindt, M. Trasformazzjoni f'daqqa ta 'Imġieba Fobika Wara Aġent Amnesiku ta' Wara l-Irkupru. Biol Psychiatry, doi:10.1016/j.biopsych.2015.04.006 (2015).

45. Bredy, TW & Barad, M. L-aċidu valproic ta 'l-inibitur ta' histone deacetylase isaħħaħ l-akkwist, l-estinzjoni u r-rikonsolidazzjoni ta 'biża' kondizzjonata. Tgħallem. Mem. 15, 39–45 (2008).

47. Tronson, NC, Wiseman, SL, Olausson, P. & Taylor, JR Il-plastiċità komportamentali bidirezzjonali tar-rikonsolidazzjoni tal-memorja tiddependi fuq il-proteina kinase amygdalar A. Nat. Newrosci. 9, 167–9 (2006).

48. Fitzgerald, PJ, Seemann, JR & Maren, S. Tista' tissaħħaħ il-biża' ta' estinzjoni? Reviżjoni ta 'sejbiet farmakoloġiċi u ta' mġieba. Brain Res. Bull. 105, 46–60 (2014).

49. Bouton, ME, Winterbauer, NE & Todd, TP Proċessi ta 'rikaduta wara l-estinzjoni tat-tagħlim strumentali: Tiġdid, qawmien mill-ġdid u akkwist mill-ġdid. Imġiba. Proċessi 90, 130–41 (2012).

50. Gräff, J., Kim, D., Dobbin, MM & Tsai, L. Regolament epiġenetiku tal-espressjoni tal-ġeni fi proċessi tal-moħħ fiżjoloġiċi u patoloġiċi. 603–649, doi:10.1152/physrev.00012.2010 (2011).

51. Suzuki, A., Mukawa, T., Tsukagoshi, A., Frankland, PW & Kida, S. Attivazzjoni ta 'LVGCCs u riċetturi CB1 meħtieġa għad-destabilizzazzjoni ta' memorji tal-biża' kuntestwali riattivati. Tgħallem. Mem. 15, 426–33 (2008).

52. Federman, N., Fustinana, MS & Romano, A. Ir-rikonsolidazzjoni tinvolvi l-aċetilazzjoni tal-histone skont is-saħħa tal-memorja. Newroxjenza 219, 145–156 (2012).

53. Villain, H., Florian, C. & Roullet, P. L-inibizzjoni tal-HDAC tippromwovi kemm il-konsolidazzjoni inizjali kif ukoll ir-rikonsolidazzjoni tal-memorja spazjali fil-ġrieden. Sci. Rep 6, 27015 (2016).

54. Stefanko, DP, Barrett, RM, Ly, AR, Reolon, GK & Wood, MA Modulazzjoni tal-memorja fit-tul għar-rikonoxximent tal-oġġett permezz tal-inibizzjoni tal-HDAC. Proc. Natl. Acad. Sci. L-Istati Uniti. 106, 9447–52 (2009).

56. Flavell, CR, Barber, DJ & Lee, JLC Konsolidazzjoni mill-ġdid tal-memorja tal-imġieba tal-memorji tal-ikel u l-biża '. Nat. Komun. 2, 504

(2011).

57. Cain, CK, Blouin, AM & Barad, M. Il-Kanali tal-Kalċju Voltage-Gated tat-Tip huma Meħtieġa għall-Estinzjoni, Iżda Mhux għall-Akkwist jew l-Espressjoni, Biża 'kondizzjonali fil-ġrieden. J. Neurosci. 22, 9113–9121 (2002).

58. Almeida-Correa, S. & Amaral, OB Labilizzazzjoni tal-memorja fir-rikonsolidazzjoni u l-estinzjoni-evidenza għal sistema ta 'plastiċità komuni? J Physiol Paris 108, 292–306 (2014).

Rikonoxximenti

Nirringrazzjaw lis-Sinjura Zelma Regina V. de Almeida għall-assistenza teknika tajba u professjonali tagħha, u M.Sc. Jane Zhang għar-reviżjoni tal-lingwa ġeneruża u kompetenti tagħha. Dan ix-xogħol kien appoġġjat minn fellowships u għotjiet minn CAPES (MEC), CNPq (MCT), u PROPESQ (UFRGS). L-awturi kollha jiddikjaraw li m'għandhom l-ebda sors ieħor ta' kumpens minbarra l-istituzzjoni primarja u l-finanzjament federali.

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur

JH iddisinja l-istudju, wettaq l-esperimenti, analizza d-dejta, u kiteb il-manuskritt. AM, FZB, APC, u ROS għenu fl-esperimenti u kkontribwew b'ideat. LOA u JAQ għenu biex jiddisinjaw l-istudju u jiktbu l-manuskritt. L-awturi kollha rrevedew il-manuskritt.

Informazzjoni addizzjonali

Interessi Kompetituri: L-awturi jiddikjaraw li m'għandhom l-ebda interessi li jikkompetu.

Nota tal-pubblikatur: Springer Nature tibqa' newtrali rigward pretensjonijiet ġurisdizzjonali f'mapep ippubblikati u affiljazzjonijiet istituzzjonali.

Aċċess Miftuħ Dan l-artikolu huwa liċenzjat taħt Creative Commons Attribution 4.0 Internazzjonali