Effett Protettiv Ta' Panduratin A Fuq Apoptożi Indotta minn Cisplatin Ta' Ċelloli Tubulari Prossimili Renali Umani U Ħsara Akuta fil-Kliewi fil-Ġrieden
Mar 18, 2022
Sfond:Cisplatin huwa kimoterapija effettiva iżda l-effett sekondarju ewlieni tiegħu, akutkorriment fil-kliewi, jillimita l-użu tiegħu. Pandurate A, kompost bijoattiv estratt minn Boesenbergia rotunda, juri diversi attivitajiet bijoloġiċi bħal effetti anti-ossidattivi. L-istudju preżenti investiga l-effett nefroprotettiv ta 'pandurate A fuq iċ-ċisplatin indottkorriment renali.Metodi: Aħna investigajna l-effett ta 'pandurate A fuq it-tossiċità ta' cisplatin kemm fil-ġrieden kif ukoll f'kulturi ta 'ċelloli renali umani bl-użu ta' ċelloli RPTEC/TERT1. Riżultati: Ir-riżultati wrew li pandurate A jtejjeb it-tossiċità renali indotta minn cisplatin kemm fil-ġrieden kif ukoll fiċ-ċelloli RPTEC/TERT1 billi jnaqqas l-apoptożi. Ġrieden ittrattati b'injezzjoni waħda intraperitoneali (ip) ta' cisplatin (20 mg/kg piż tal-ġisem (BW)) urewrenalikorriment tat-tubuli u indebolimentfunzjoni tal-kliewikif muri minn eżami istoloġiku u żieda fil-krejatinina fis-serum. L-għoti flimkien ta' pandurate A (50 mg/kg BW) tjieb mill-ħalqfunzjoni tal-kliewiu mtejbarenalikorriment tat-tubuli ta 'cisplatin billi jinibixxi l-attivazzjoni ta' kinażi regolat b'sinjal extraċellulari (ERK) 1/2 u caspase 3. F'ċelluli tubulari prossimali renali umani, apoptosi taċ-ċelluli indotta minn cisplatin billi tattiva proteini pro-apoptotiċi (ERK1/2 u caspase 3), u t-tnaqqis tal-proteina anti-apoptotika (Bcl-2). Dawn l-effetti tjiebu b'mod sinifikanti permezz ta 'ko-trattament ma' pandurate A. Interessanti, pandurate A ma biddilx l-akkumulazzjoni intraċellulari ta 'cisplatin. Ma biddilx l-effikaċja kontra l-kanċer ta 'cisplatin jew fil-linji taċ-ċelluli tal-kanċer tal-pulmun tal-kolon uman jew mhux taċ-ċelluli żgħar tal-pulmun. Konklużjonijiet: L-istudju preżenti jenfasizza li pandurate A għandu effett protettiv potenzjali fuq in-nefrotossiċità ta' cisplatin.
Kliem ewlieni:kimoterapija; korriment akut fil-kliewi; panduratin A; tubulu prossimali renali uman; kontra l-apoptożi; renali; kliewi
CISTANCHE SE TTEJB ID-DJALIŻI TAL-KLIEWA/RENALI
INTRODUZZJONI
In-nefrotossiċità indotta mid-drogi hija problema kbira fl-ambjent kliniku minħabba li l-użu ta 'drogi nefrotossiċi ħafna drabi huwa inevitabbli. In-nefrotossiċità tista' tiġi definita minn korrimenti renali inkluż ħsara glomerulari u korriment tubulari li jwassal għal indeboliment tal-funzjoni renali.1) Mediċini komuni assoċjati ma'korriment fil-kliewihuma anti-infjammatorji, antibijotiċi, u aġenti kimoterapewtiċi, bħal cisplatin.2–4) Cisplatin huwa mediċina kimoterapewtika ta’ spettru wiesa’ u ta’ qawwa għolja.5) Madankollu, madwar wieħed minn kull tliet pazjenti li qed jirċievu trattament b’cisplatin ibati minn nefrotossiċità6,7) u żbilanċ ta 'elettroliti.8,9) In-nefrotossiċità indotta minn Cisplatin hija kkaratterizzata minn ħsara fit-tubuli prossimali, ħsara vaskulari u infjammazzjoni.4) Akkumulazzjoni ta' cisplatin fiċ-ċelloli renali tinduċi mogħdijiet multipli li jippromwovu l-mewt taċ-ċelluli. Speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS) ġiet identifikata bħala medjatur ewlieni fin-nefrotossiċità ta' cisplatin.10,11) Barra minn hekk, ROS jinduċi nefrotossiċità permezz ta 'attivazzjoni ta' protein kinases attivati minn mitoġenu (MAPKs).10,12,13) Diversi studji rrappurtaw li cisplatin innifsu jista 'jistimula direttament extraċellulari sinjal regolat kinase (ERK) 1/2 (membru ta' MAPKs) kemm in vitro kif ukoll in vivo. 14,15)
Ċerti fitokimiċi jtejbu n-nefrotossiċità indotta minn cisplatin billi jinibixxu l-akkumulazzjoni ROS u l-apoptożi. ) Il-prattika klinika attwali tipprovdi biss trattamenti ta 'appoġġ biex tirkupra l-funzjoni tal-kliewi.20) Għalhekk, għadu importanti li tfittex aġenti effettivi biex jipprevjenu jew jittrattaw in-nefrotossiċità indotta minn cisplatin. Pandurate A huwa fitokimiku interessanti. Huwa cyclohexanol chalcone iżolat minn Boesenbergia rotunda, pjanta użata fil-mediċina tradizzjonali u l-ikel.21) Panduratin A intwera li jipprevjeni jew jikkura stress ossidattiv, infjammazzjoni, u mard metaboliku.22,23) Korriment ta 'tubuli prossimali renali kkawżat minn cisplatin huwa medjat, għall-inqas parzjalment, permezz ta 'stress ossidattiv u infjammazzjoni miżjuda.11) Għalhekk, investigajna l-effett ta' pandurate A fuq it-tossiċità ta 'cisplatin kemm f'annimali kif ukoll f'kulturi taċ-ċelluli bl-użu ta' ċelloli RPTEC/TERT1. Aħna ttestjajna wkoll jekk il-ko-trattament b'pandurate A taffettwax l-attività kontra l-kanċer ta' cisplatin fil-linji taċ-ċelluli tal-kanċer tal-bniedem.
MATERJALI U METODI
Kimiċi Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), cisplatin, and compound C (AMP-activated protein kinase (AMPK) inhibitor) were purchased from Sigma-Aldrich (MO, U.S.A.). 3 H-1-Methyl-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) was purchased from PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Thailand). Annexin V- fluorescein isothiocyanate (FITC) apoptosis detection kit was purchased from BD Biosciences (CA, U.S.A.). Primary antibodies for p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No. 9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Cat. No. 2118S), p-AMPKα (Cat. No.2531S), AMPKα (Cat. No. 5832S), Bax (Cat. No. 5023) and β-actin (Cat. No. 4970T) antibodies were obtained from Cell Signaling (MA, U.S.A.) and anti-neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) antibody (Cat. No. STCSC-515876) was purchased from Santa Cruz Biotechnology (CA, U.S.A.). Pandurate A >Purità ta '98 fil-mija determinata minn HPLC ġiet iżolata minn Boesenbergia rotunda kif deskritt qabel mill-grupp tagħna.24) Ir-riżomi ta' Boesenbergia rotunda inġabru minn Kanchanaburi, it-Tajlandja. L-impjant ġie identifikat minn Tuanta Sematong. Il-kampjun tal-vawċer (Nru BKF 68909) ġie depożitat fil-Forest Herbarium, Royal Forestry Department, Bangkok.
CISTANCHE SE TTEJB IL-FUNZJONI TAL-KLIEI/RENALI
AnnimaliĠrieden maskili C57BL/6 (8-ġimgħat) inxtraw mingħand Nomura Siam International Co., Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Il-Protokoll tal-Kura u l-Użu tal-Annimali Nru MUSC61-063-464 ġie approvat mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali, MUSC–IACUC. Il-ġrieden tħallew jaċċessaw liberament l-ikel u l-ilma. Wara ġimgħa ta 'akklimatizzazzjoni, il-ġrieden ġew maqsuma b'mod każwali u ngħataw trattamenti kif ġej: salina normali b'injezzjoni waħda intraperitoneali (ip) f'jum 4 (grupp ta' kontroll); pandurate A (50 mg/kg piż tal-ġisem (BW)) bil-gavage orali għal 7 d (grupp pandurate A); cisplatin (20 mg/kg BW) b'injezzjoni waħda ip f'jum 4 (grupp cisplatin); pandurate A (50 mg/kg BW/d) permezz ta' gavage orali għal 7 d u cisplatin (20 mg/kg BW) b'injezzjoni waħda ip f'jum 4 (grupp ta' ko-trattament). Fis-7 jum, il-ġrieden ġew anestetizzati profondament bis-sodju thiopental. Id-demm ġie miġbud u ċentrifugat għal 10 min fit-3000 pm. Is-supernatanti miġbura nżammu f'-80 grad sal-funzjoni renalikien imkejjel.Kliewiinġabru għall-kejl tal-espressjonijiet tal-proteini u studji istopatoloġiċi.
Determinazzjoni tal-Funzjoni Renali u Eżami IstoloġikuIl-funzjoni renali ġiet iddeterminata billi tkejjel il-krejatinina fis-serum bl-użu ta 'Stanbio Creatinine Liquicolor (NY, USA) u analizzatur tal-kimika tad-demm, Licenza (Ruma, l-Italja). Biex teżamina ħsara tubulari renali indotta minn cisplatin, ġurdienkliewiġew iffissati f'4 fil-mija paraformaldehyde. Il-kliewiflieli kienu mtebbgħin b'ematossilina u eosina (H&E) fotografati b'mikroskopju tad-dawl. Il-perċentwal ta' korriment tubulari ntuża biex jevalwa l-ħsara tubulari tal-kliewi: 0=ebda korriment tubulari 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;" 5="">75 fil-mija. Slajds ġew skurjati bl-addoċċ minn patologu. Il-punteġġ medju għal kull grupp ta 'annimali ġie kkalkulat billi jingħaddu 10 oqsma differenti ta' slide.
Linji taċ-ĊelloliĊelloli RPTEC/TERT1, ċelluli tal-kanċer tal-kolon (HCT116) u ċelluli mhux żgħar tal-kanċer tal-pulmun (A549) inxtraw minn American Type Culture Collection (VA, USA). Fil-qosor, iċ-ċelluli RPTEC/TERT1 ġew ikkultivati fil-medium / F-12 medju ta' Eagle modifikat komplut ta' Dulbecco (DMEM/F12) kif deskritt qabel.25) Iċ-ċelloli HCT116 u A549 ġew ikkultivati f'medja DMEM/F12 u RPMI1640, rispettivament, supplimentati b'antibijotiċi tal-peniċillina-streptomycin u 10 fil-mija serum bovin tal-fetu (FBS). Iċ-ċelloli ġew ikkultivati f'37 grad f'atmosfera umidifikata ta '5 fil-mija CO2 u 95 fil-mija O2.
Assaġġ tal-Vijabilità taċ-Ċelloli u Analiżi tal-Apoptosi taċ-ĊelloliIl-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet determinata billi ċ-ċelloli RPTEC/TERT1 jiġu esposti għal 0.5mg/mL MTT reaġent għal 1h f'37 grad C. Ir-reaġenti tneħħew, il-melħ formazan iffurmat ġie maħlul f'dimethyl sulfoxide (DMSO) u skopert minn EnVision microplate reader f'assorbiment ta' 570nm. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli kienet irrappurtata bħala perċentwal ta' kontroll. Annexin V u propidium iodide (Analiżi ta' tbajja 'PI intużaw biex jiddeterminaw l-apoptożi taċ-ċelluli. Fil-qosor, iċ-ċelloli RPTEC/TERT1 inqalgħu b'0.25 fil-mija trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). Is-sospensjonijiet taċ-ċelluli ġew inkubati b'Annexin V-FITC u PI fid-dlam f' 4 grad għal 15min segwit minn ħasil darbtejn b'buffer li torbot Iċ-ċelloli apoptotiċi ġew magħduda b'ċitometru tal-fluss u espressi bħala perċentwali taċ-ċelloli totali.
Valutazzjoni ta 'Akkumulazzjoni ta' ROS IntraċellulariIl-livelli ta' ROS ġew determinati permezz ta' analiżi DCFH-DA. Iċ-ċelloli RPTEC/TERT1 ġew inkubati b'10uM DCFH-DA u inkubati għal 30min f'37 grad. Sussegwentement, iż-żebgħa DCFH-DA tneħħiet u ċ-ċelloli ġew maħsula b'saline buffered phosphate(PBS). Il-livell ta 'ROS intraċellulari kien imkejjel f'wavelengths ta' 485 u 530nm għall-eċitazzjoni u l-emissjoni, rispettivament. L-akkumulazzjoni ta 'ROS intraċellulari hija rrappurtata bħala perċentwal ta' intensità fluworexxenti relattiva maċ-ċelloli ta 'kontroll.
CISTANCHE SE TTEJJEB IL-MARD TAL-KLIEWA/KLIEWA
Analiżi tal-Akkumulazzjoni tal-PlatinumIl-platinu akkumulat ġie mkejjel kemm fiċ-ċelloli RPTEC/TERT1 diġeriti kif ukoll fil-ġurdienkliewimill-ispettrometru UNICAM 989 QZ AA (Geleen, l-Olanda). Għaxar mikrolitri ta '1 fil-mija Triton X-100 u 400uL ta' 1 fil-mija aċidu nitriku ġew miżjuda ma 'kull kampjun ta' 100μL. Il-kampjuni ġew imbagħad inkubati għal mill-inqas siegħa. Qabel l-iskoperta tal-platinu, kull kampjun ġie dilwit 10:1 b'1 fil-mija aċidu nitriku. Il-konċentrazzjoni tal-platinu ġiet ikkalkulata bl-użu ta 'rigressjoni lineari ta' kurva standard tal-platinu ppreparata bl-użu ta '2.5mg/mL ta' cisplatin dilwit f'1 fil-mija aċidu nitriku. Il-platinu ġie kkalkulat bħala ng/numru taċ-ċellula jew ng/kliewipiż.
3H-MMP* Assaġġ ta' teħidIt-teħid ta '3H-MPP plus fiċ-ċelloli RPTEC/TERT1 ġie determinat bl-użu tal-metodu preċedenti tagħna.25) Fil-qosor, iċ-ċelloli ġew maħsula b'buffer tat-trasport sħun u inkubati aktar għal 20min. Il-monosaffi taċ-ċelluli ġew inkubati b'H-MPP plus (10nM) segwit minn ħasil b'buffer tat-trasport kiesaħ bis-silġ. Il-kampjuni nġabru u l-attività radjuattiva ta 'H-MPP plus ġiet imkejla bl-użu ta' counter tax-xpetpett likwidu.
Western Blotting AnaliżiL-espressjonijiet tal-proteini ġew ipproċessati skont l-istudju preċedenti tagħna.26) Proteini estratti mill-ġurdienkliewiu ċ-ċelloli RPTEC/TERT1 ġew ċentrifugati f'12000rpm għal 20min f'4 gradi. Ammonti ugwali ta 'proteini iżolati miċ-ċelloli u t-tessut ġew żnaturati u separati b'elettroforesi tal-ġell tal-polyacrylamide dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) ta' 10-12 fil-mija. Il-kampjuni ġew trasferiti fuq membrani tan-nitroċelluloża segwiti minn imblukkar ta 'proteini mhux speċifiċi ta' siegħa bl-użu ta 'ħalib xott bla xaħam (5 fil-mija). Il-membrani ġew inkubati b'antikorp primarju għal 24 siegħa u mbagħad ġew inkubati b'antikorp sekondarju għal siegħa. L-intensità tal-espressjoni tal-proteini ġiet skoperta bl-użu ta 'sottostrat HRP kimiluminixxenti u kkwantifikata minn softwer ImageJ.
Analiżi StatistikaId-dejta hija espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (SD). Id-dejta ġiet analizzata b'ANOVA one-way bl-użu tat-testijiet posthoc ta' Tukey (GraphPad Prism 8.0). Sinifikat huwa kkunsidrat meta l-valur p huwa inqas minn 0.05.
RIŻULTATI Panduratin A Ittejjeb il-Kliewi Akuti Indotti minn CisplatinKorriment Aħna investigajna l-effett tal-pandurate A fuqkorriment fil-kliewiikkawżat minn cisplatin fil-ġrieden. L-ewwel osservajna t-tossiċità ġenerali billi kejlu l-bidla fil-piż tal-ġisem fil-ġrieden wara trattament b'salina normali, pandurate A (50 mg/kg BW), cisplatin (20 mg/kg BW), u kemm cisplatin (20 mg/kg BW) kif ukoll pandurate. A (50 mg/kg BW). Instabet tnaqqis sinifikanti fil-piż tal-ġisem fil-ġrieden ittrattati b'cisplatin. It-telf tal-piż tal-ġisem ġie mtaffi minn ko-trattament b'pandurate A (Fig. 1A). Meta mqabbel mal-kontroll,funzjoni tal-kliewili kien imkejjel bil-livell tal-krejatinina fis-serum wera li l-pandurate A trattat bil-ġrieden waħdu ma biddilx il-livell tal-krejatinina fis-serum; billi l-ġrieden ittrattati b'cisplatin kellhom żieda sinifikanti fil-livelli tal-kreatinina fis-serum, u dan jindika funzjoni tal-kliewi indebolita. Il-livell tal-krejatinina fis-serum fl-għoti flimkien ta 'pandurate A naqas b'mod sinifikanti meta mqabbel ma' ġrieden ittrattati b'cisplatin (Fig. 1B). Barra minn hekk, l-akkumulazzjoni tal-platinu fikliewitessut ma kienx signifid- cantly differenti fil-ġrieden ittrattati bil-cisplatin waħdu meta mqabbla ma 'ġrieden ko-trattati ma' cisplatin u pandurate A (Fig. 1C). Din id-dejta tindika li pandurate A ma affettwax il-kontenut ta' cisplatin fit-tessut renali. Il-kliewimiksuba minn ġrieden ittrattati bil-vettura jew pandurate A waħdu ma wrew l-ebda tibdil patoloġiku notevoli. Madankollu, il-ġrieden ittrattati b'cisplatin urew aktar ħsara tubulari meta mqabbla ma 'ġrieden ittrattati bil-vettura kif muri miż-żieda fid-deġenerazzjoni u d-deskwamazzjoni, il-formazzjoni ta' casts luminali, infiltrazzjoni ta 'ċelluli mononukleari, kariomegalija, emorraġija inter-tubulari, u dilatazzjoni. Dawn il-bidliet patoloġiċi kienu attenwati b'mod sinifikanti mill-ko-amministrazzjoni ta 'pandurate A (Fig. 2A, Tabella 1). Ġew determinati l-livelli ta 'espressjoni ta' NGAL (bijomarkatur ta 'nefrotossiċità), u ERK1/2 u caspase 3 cleaved (proteini pro-apoptotic). L-istudju tagħna wera li l-ġrieden ittrattati b'cisplatin żiedu b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'NGAL, p-ERK1/2, u qasmu caspase 3 meta mqabbla ma' ġrieden ittrattati bil-vettura. Ko-trattament ma pandurate A naqqas b'mod sinifikanti dawn il-proteini indotti minn trattament ta 'cisplatin (Fig. 2B).
Pandurate A Jipprevjeni Ċitotossiċità Indotta minn Cisplatin fiċ-Ċelloli Tubulari Prossimili Renali tal-Bniedem billi jinibixxi Mogħdijiet ta' Sinjali ApoptotiċiCisplatin (50 µM) tnaqqis sinifikanti fil-vijabbiltà taċ-ċelloli RPTEC/TERT1 wara inkubazzjoni ta' 72 siegħa. Interessanti, il-kotrattament b'pandurate A (1 u 5 µM) żied b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelluli (Fig.
3A). L-effett protettiv ta 'Panduratin A kontra ċ-ċitotossiċità ta' cisplatin kien ikkonfermat bil-kejl ta 'apoptosi taċ-ċelluli. Kif mistenni, l-espożizzjoni taċ-ċelloli għal 50 µM cisplatin għal 48 siegħa żiedet b'mod sinifikanti l-apoptosi taċ-ċelloli RPTEC/TERT1. Dan l-effett kien attenwat minn pandurate A (Fig. 3B). Aħna eżaminajna jekk l-effett ta 'pandurate A fuq it-tossiċità ta' cisplatin kienx jeħtieġ attivazzjoni ta 'AMPK. Kif muri f'Fig. 3C, l-espressjoni tal-proteina ta 'p-AMPK, forma attiva ta' AMPK, żdiedet minn pandurate A filwaqt li naqset minn cisplatin. Barra minn hekk, ġie determinat l-effett protettiv ta 'pandurate A taħt inibizzjoni ta' AMPK. Interessanti, inkubazzjoni taċ-ċelloli b'10 µM kompost C, inibitur ta 'AMPK, ma attenwatx l-effett protettiv ta' pandurate A fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli (Fig. 3D). Dawn ir-riżultati jindikaw li l-effett protettiv ta 'pandurate A jista' jkun medjat minn mekkaniżmi indipendenti mill-AMPK. Wara eżaminajna l-effett ta 'pandurate A fuq ċerti proteini involuti fl-apoptożi taċ-ċelluli indotta minn cisplatin. Kif muri f'Fig. 4, cisplatin żied b'mod sinifikanti l-proteini pro-apoptotiċi p-ERK1/2 u qasam caspase 3. Cisplatin naqqas l-espressjoni tal-proteina anti-apoptotika Bcl-2. Il-ko-trattament b'pandurate A biddel l-espressjoni ta' dawn il-proteini. Peress li ROS huwa fattur ewlieni involut fl-apoptosi taċ-ċelluli renali indotta minn cisplatin, 11,27) aħna ddeterminajna l-effett ta 'panduratin A fuq l-akkumulazzjoni ta' ROS minħabba cisplatin. Cisplatin żied b'mod sinifikanti l-livelli intraċellulari ta 'ROS. Interessanti, panduratin A naqqas b'mod sinifikanti l-akkumulazzjoni ta 'ROS indotta minn cisplatin.
Panduratin A Ma Taffettwax l-Akkumulazzjoni Ċellulari ta 'Cisplatin OCT2jimmedja t-trasport ta 'cisplatin fiċ-ċelluli tubulari prossimali tal-kliewi tal-bniedem.289 Biex teżamina l-possibbiltà ta' panduratin A li tnaqqas l-akkumulazzjoni ta 'cisplatin, kejlna l-funzjoni tat-trasport ta' OCT2. Ir-riżultati wrew li l-inkubazzjoni ta 'ċelloli b'5uM panduratin A għal 10min u 24h ma kellha l-ebda effett fuq l-akkumulazzjoni ċellulari ta' H-1-methyl-4-phenylpyridinium (H-MPP plus ), sottostrat ta 'OCT2. Sussegwentement, l-effett ta 'panduratin A fuq l-akkumulazzjoni ċellulari ta' cisplatin ġie kkonfermat. Panduratin A ma kellu l-ebda effett sinifikanti fuq l-akkumulazzjoni tal-platinu fiċ-ċelloli tal-kliewi umani (Fig. 5).
L-Effett Protettiv ta 'Panduratin A Ma Jaffetwax l-Attività Kontra l-kanċer ta' CisplatinĠie determinat l-effett ta 'Panduratin A fuq it-tossiċità ta' cisplatin fil-linji taċ-ċelluli tal-kanċer. Il-viabilità taċ-ċelluli HCT116 u A549 li huma linji taċ-ċelluli tal-kanċer tal-kolon u tal-pulmun, rispettivament, tnaqqset b'mod sinifikanti 72 siegħa wara t-trattament b'cisplatin (50μuM). Il-ko-trattament b'panduratin A (5μM) ma attenwax iċ-ċitotossiċità ta 'cisplatin. Interessanti, panduratin A waħdu wkoll naqqas il-
DISKUSSJONI
L-istudju preżenti juri li panduratin A jnaqqas in-nefrotossiċità cis-platin mingħajr ma tfixkel l-attività kontra l-kanċer ta 'cisplatin fil-linji taċ-ċelluli tal-kanċer tal-pulmun tal-kolon u mhux taċ-ċelluli żgħar. Aħna wrejna li l-ko-trattament b'panduratin A attenwat akutkorriment fil-kliewifil-ġrieden ikkawżat minn cisplatin. Għalkemm l-istudju preżenti juri l-effett protettiv fuq indott minn cisplatinkorriment fil-kliewi,il-mira primarja ta' panduratin A mhix identifikata. Panduratin A jista' jattiva l-AMPK fiċ-ċelloli tubulari prossimali tal-kliewi (Fig. 3) u tipi oħra ta' ċelluli.30-2) Jidher improbabbli li l-effett protettiv ta' panduratin A jeħtieġ l-attivazzjoni tal-AMPK peress li l-evidenza wriet li l-inibizzjoni tal-AMPK bl-użu ta' inibituri kimiċi ma biddilx l-effett protettiv ta' Pandu-rating A. Panduratin A tejbet il-funzjoni renali kif muri minn tnaqqis fil-krejatinina fis-serum. Funzjoni renali indebolita minn cisplatin hija korrelatata ma 'korrimenti tat-tubuli renali bħal deġenerazzjoni, formazzjoni ta' fondut luminali, emorraġija, u dilatazzjoni. Ir-riżultati tal-ħsara fit-tubuli tal-kliewi kkorrelataw tajjeb mad-dejta tagħna li turi l-induzzjoni tal-espressjoni NGAL fikliewitessut tal-ġrieden ittrattati b'cisplatin. Barra minn hekk, din l-evidenza hija sostnuta mill-istudju preċedenti li juri li NGAL huwa espress b’mod notevoli fit-tubuli renali wara akuta.korriment fil-kliewiindott minn cisplatin.3) Interessanti, ko-trattament tal-ġrieden b'panduratin A attenwat ħsara fit-tubuli tal-kliewi kkawżata minn cisplatin. L-analiżi istoloġika wriet li cisplatin żied l-infiltrazzjoni taċ-ċelluli mononukleari u dan l-effett tneħħa minn panduratin A. Dawn ir-riżultati jimplikaw li panduratin A, li qabel kien muri bħala anti-infjammazzjoni, 24.3435) jista 'jtaffa l-effett infjammatorju ta' cisplatin fit-tessut renali. L-attivazzjoni tal-MAPK tista 'tikkawża mewt taċ-ċelluli.2415) Ir-riżultati tagħna wrew li cisplatin stimula l-attivazzjoni ta' ERK1/2 u caspase 3. Espressjonijiet ta 'dawn il-proteini ġew attenwati minn panduratin A.
Mogħdijiet multipli li jikkontribwixxu għal nefrotossiċità indotta minn cisplatin (inkluż apoptożi, stress ossidattiv, u infjammazzjoni) ġew irrappurtati.4 Aħna użajna l-linja taċ-ċelluli RPTEC/TERT1 biex nidentifikaw mekkaniżmi ta 'tossiċità ta' titjib ta 'panduratin A kkawżata minn cisplatin fiċ-ċelluli tubulari prossimali renali umani. Iċ-ċelloli RPTEC/TERT1 ġew ssuġġeriti bħala mudell taċ-ċelluli renali għal tossiċitajiet indotti minn ksenobijotiċi.36Panduratin A juri effett protettiv fir-rigward taċ-ċitotossiċità ta 'cisplatin kif muri minn tnaqqis fl-apoptosi taċ-ċelluli RPTEC/TERT1. Il-mekkaniżmi tat-tossiċità ta' cisplatin fiċ-ċelloli tubulari prossimali tal-kliewi huma kumplessi. L-attivazzjoni ta' ERK1/2 u caspase 3 u t-tnaqqis ta' Bcl-2 ġew implikati fl-apoptosi taċ-ċelluli tal-kliewi minħabba cisplatin.373) B'mod konsistenti ma' studji preċedenti, l-istudju preżenti wera li cisplatin iżid l-espressjoni ta' p-ERK1/2 u qasma caspase. 3 u tnaqqas l-espressjoni Bcl-2. Ir-riżultati tagħna jindikaw li panduratin A irażżan il-proteini tas-sinjalar apoptotiku indotti minn cisplatin, p-ERK1/2 u caspase cleaved 3, u jżomm proteina anti-apoptotika. Bcl-2. Minbarra l-attivazzjoni ta 'ERK1/2 u caspase 3, żieda fl-akkumulazzjoni ta' ROS intraċellulari hija fattur ewlieni fl-apoptosi taċ-ċelluli tal-kliewi minħabba cisplatin.139 Studju preċedenti rrapporta li panduratin A jipproteġi kontra ħsara ossidattiva fl-epatoċiti billi jnaqqas il-formazzjoni ta 'ROS intraċellulari kkawżata minn reattiv. intermedji.4 It-tnaqqis fl-akkumulazzjoni ta 'ROS wara t-trattament b'panduratin A jista' jkun medjat jew minn inibizzjoni tal-produzzjoni ta 'ROS jew żieda fir-reazzjoni ta' scavenging ta 'ROS. Aħna rrappurtajna li panduratin A żied il-livell ta 'glutathione, molekula li tneħħi ROS, li tista' tnaqqas l-akkumulazzjoni ta 'ROS fit-tessut renali (ara materjali supplimentari). Madankollu, ma neskludux li mekkaniżmi oħra huma involuti fit-tnaqqis tal-ROS. Ir-riżultati tagħna wrew li panduratin A inaqqas l-akkumulazzjoni intraċellulari ta 'ROS, li tikkontribwixxi għall-effett protettiv ta' panduratin A. Il-livell intraċellulari ta' cisplatin huwa l-fattur primarju li jaffettwa s-severità tat-tossiċità indotta minn cisplatin. Ġew irrappurtati trasportaturi renali bħal OCT2, trasportaturi tar-ram u trasportatur ta' estrużjoni ta' multidrug u toxin-1 (MATE1) li jikkontribwixxu għat-trasport ta 'cisplatin.4) Madankollu, it-trasport ta' cisplatin fiċ-ċelluli tubulari prossimali renali huwa primarjament medjat minn OCT2. L-inibizzjoni tal-OCTs intweriet li jnaqqas it-tossiċità renali indotta minn cisplatin kemm f'ċelloli tal-kliewi kkultivati kif ukoll fl-annimali. It-tossiċità ta' cisplatin mhijiex medjata bit-tnaqqis tat-trasport jew l-akkumulazzjoni ta' cisplatin.
CISTANCHE SE TTEJB L-UĠIGĦ TAL-KLIEI/KLIEWA
Panduratin A juri effetti renoprotettivi permezz tal-inibizzjoni tal-apoptożi taċ-ċelluli renali. Jekk panduratin A jinibixxi wkoll l-apoptożi taċ-ċelluli tal-kanċer, inaqqas l-effikaċja tal-kimoterapija. Aħna, għalhekk, ittestjajna jekk panduratin A inaqqasx l-attività kontra l-kanċer ta 'cisplatin. B'mod sinifikanti, il-ko-trattament b'Pandu-rating A ma jbiddilx l-attività kontra l-kanċer ta' cisplatin la fiċ-ċelloli tal-kanċer tal-kolon jew mhux taċ-ċelloli tal-pulmun żgħar. Barra minn hekk, panduratin A innifsu huwa tossiku għaż-żewġ linji taċ-ċelluli tal-kanċer. Ir-riżultati jindikaw li l-effett ta 'panduratin A huwa selettiv, li jaffettwa ċelluli renali normali u ċelluli tal-kanċer b'mod differenti. Għalkemm il-panduratin A jista' jkun aġent tajjeb għall-prevenzjoni ta' nefrotossiċità indotta minn cisplatin, l-informazzjoni dwar l-effetti farmakoloġiċi ta' panduratin A taħt mudell klinikament rilevanti f'xenograft għandha tiġi investigata fil-futur.
KONKLUŻJONI
L-istudju preżenti tagħna wera li panduratin A jipprovdi effett protettiv immarkat fuq in-nefrotossiċità ta 'cisplatin billi jnaqqas l-istress ossidattiv u jinibixxi l-attivazzjonijiet ta' ERK1/2 u caspase 3. L-effett protettiv ta 'panduratin A ma biddilx l-attività kontra l-kanċer ta' cisplatin fiċ-ċelloli tal-kanċer. Anki jekk l-imblukkar ta' xi avvenimenti ta' ħsara jista' jkollu biss effetti renoprotettivi parzjali, panduratin A jista' jkun aġent kandidat tajjeb biex itaffi n-nefrotossiċità ta' cisplatin minħabba li jnaqqas it-tossiċità ta' cisplatin permezz ta' mekkaniżmi multipli.
