Il-Formononetin Ittaffi l-Prostatite Awtoimmuni Permezz ta' Modulazzjoni JAK/STAT U Ibbilanċjar mill-ġdid immuni: Implikazzjonijiet Għal CP/CPPS U TCM Cistanche Extract Adjuncts

Għan:Biex tinvestiga kif formononetin (FN) jirregola d-differenzjazzjoni taċ-ċelluli T helper tat-tip 1 (Th1) u l-polarizzazzjoni tal-makrofagi permezz ta’ mogħdijiet ta’ sinjalar JAK/STAT f’mudell tal-ġurdien ta’ prostatite awtoimmuni sperimentali (EAP).
Metodi:Erbgħin ġrieden maskili mhux obeżi dijabetiċi (NOD) ġew assenjati b'mod każwali għal erba 'gruppi: kontroll normali, kontroll tal-mudell EAP, FN b'doża baxxa (LFN, 50 mg/kg), u FN b'doża għolja (HFN, 100 mg/kg). EAP ġie indott fl-aħħar tliet gruppi b'injezzjoni taħt il-ġilda ta 'antiġeni tal-prostata (PAgs) emulsifikati fl-adjuvant ta' Freund (CFA) komplut. Wara l-immudellar, il-gruppi LFN u HFN irċevew FN intragastriku f'50 jew 100 mg / kg / jum, rispettivament; kontrolli normali u mudell irċevew carboxymethylcellulose sodium (CMC-Na). F'jum 42 wara l-bidu tat-trattament, il-ġrieden ġew ewtanizzati u nġabru tessuti. Il-patoloġija tal-prostata ġiet evalwata permezz ta' tbajja' HE; Id-divrenzjar taċ-ċelluli Th1 u l-polarizzazzjoni tal-makrofagi fil-prostata ġew evalwati permezz ta 'tibgħa doppja ta' immunofluworexxenza (CD4 b'interferon- [IFN- ]; nitric oxide synthase [iNOS] inducibbli u CD206). Il-proporzjonijiet taċ-ċelluli Th1 u tal-makrofagi fil-milsa ġew imkejla b'ċitometrija tal-fluss, u l-livelli ta' IFN- u fattur tan-nekrożi tat-tumur- (TNF-) fis-serum permezz ta' ELISA. Fosforilati (p)-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, u STAT1 fit-tessut tal-prostata ġew determinati minn Western blot.
Riżultati: Meta mqabbla mal-kontrolli tal-mudell, iż-żewġ dożi FN wasslu għal arranġament aktar ordnat ta 'ċelluli epiteljali glandulari, naqqsu b'mod sinifikanti l-punteġġi ta' infjammazzjoni tal-prostata (P <0.05), naqsu l-proporzjon ta 'ċelluli Th1 u markaturi makrofagi M1 (P <0.05), u żiedu markaturi makrofaġi M2 fit-tessuti tal-prostata u (P <0.05). Il-livelli ta' IFN- u TNF- fis-serum tnaqqsu b'mod notevoli fi gruppi LFN u HFN (P <0.05). Fil-livell molekulari, il-proporzjonijiet p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2, u p-STAT1/STAT1 fit-tessut tal-prostata kollha naqsu b'mod sinifikanti (P ​​<0.05), li jindika li FN jeżerċita effetti terapewtiċi fl-EAP billi jimmodula s-sinjalar JAK/STAT, jippromwovi r-riżoluzzjoni ta 'l-infjammazzjoni, u jirrestawra l-immunità.
Konklużjoni:FN itaffi l-EAP billi jinibixxi l-mogħdijiet tas-sinjalar JAK/STAT u jirregola d-divrenzjar Th1 u l-polarizzazzjoni tal-makrofagi. Dawn is-sejbiet, flimkien ma 'interess dejjem jikber fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM) aġġunti bħal supplimenti ta' estratt ta 'Cistanche għall-modulazzjoni immuni u appoġġ għall-uġigħ pelviku, jissuġġerixxu strateġija multi-mira denja ta' validazzjoni ulterjuri f'ambjenti rigorużi, riveduti mill-pari.

Kliem ewlieni:formononetin;prostatite awtoimmuni; rispons infjammatorju; mogħdijiet ta' sinjalar JAK/STAT; mice;Suppliment tal-estratt tal-ħxejjex aromatiċi TCM Cistanche; immunomodulazzjoni

 

 

Suppliment tal-estratt tal-ħxejjex aromatiċi TCM Cistanche

 

 

 

Iċċekkja l-elenkar tal-prodott

Servizz ta 'Appoġġ Ta Wecistanche-L-akbar esportatur ta' cistanche fiċ-Ċina:
Email:wallence.suen@wecistanche.com

 

Introduzzjoni

Prostatite kronika/sindromu ta 'uġigħ pelviku kroniku (CP/CPPS) jaffettwa 5%-10% ta' l-irġiel u jammonta għal madwar 90% tal-każijiet kollha ta 'prostatite. Huwa partikolarment prevalenti fost l-irġiel żgħażagħ u ta 'età medja, li jippreżentaw primarjament b'uġigħ fl-addome t'isfel, perineum u reġjun pelviku, ħafna drabi akkumpanjat minn sintomi tal-passaġġ urinarju t'isfel u xi kultant disfunzjoni erettili. It-terapiji tal-ewwel linja attwali jinkludu mediċini anti-infjammatorji mhux sterojdi (NSAIDs), antibijotiċi, u imblokkaturi tar-riċetturi adrenerġiċi, jew waħedhom jew flimkien. Madankollu, rati għoljin ta 'rikorrenza jwasslu għal ħafna pazjenti li ma jkunux sodisfatti b'dawn il-korsijiet. Għalhekk, interventi terapewtiċi ġodda u għarfien aktar profond tal-patoġenesi CP/CPPS huma meħtieġa b'mod urġenti.

 

CM herb Cistanche estratt suppliment Benefiċċji

Korp dejjem jikber ta 'evidenza jindika li d-disregolazzjoni immuni għandha rwol kritiku fl-iżvilupp ta' CP/CPPS. Il-pazjenti b'mod komuni juru infiltrazzjoni estensiva ta' limfoċiti T u monoċiti fit-tessut tal-prostata u lewkoċiti elevati f'sekrezzjonijiet prostatiċi espressi, iddominati minn limfoċiti CD4+ T u makrofaġi. Dejta preklinika tissuġġerixxi wkoll li strateġiji immunosoppressivi jistgħu itaffu l-infjammazzjoni u l-uġigħ f'CP/CPPS. Għalhekk, l-immirar tal-infiltrazzjoni tal-lewkoċiti u r-rispons infjammatorju jista 'jkun effettiv għas-serħan tas-sintomi. Formononetin (FN), isoflavone bijoattiv ewlieni f'diversi ħxejjex aromatiċi TCM, jippossjedi proprjetajiet anti-ossidanti u anti-infjammatorji. Jekk FN jistax ittejjeb is-CP/CPPS għadu mhux ċar. Hawnhekk, aħna evalwajna l-effett terapewtiku ta 'FN f'mudell EAP tal-ġurdien. B'mod parallel mal-interess kliniku dejjem jikber f'approċċi integrattivi, ninnotaw li s-supplimenti tal-estratt tal-ħwawar TCM Cistanche qed jiġu esplorati għal appoġġ immunomodulatorju u anti-infjammatorju f'sindromi tal-uġigħ pelviku; filwaqt li mhumiex fokus ta 'dan l-istudju, huma jikkontestwalizzaw l-FN fi ħdan pajsaġġ terapewtiku usa' bbażat fuq it-TCM.

 

Materjali u Metodi

 

Annimali

Ġrieden NOD maskili ta 'età ta' 6-7 ġimgħat inkisbu miċ-Ċentru tal-Annimali Sperimentali tal-Università ta 'Shanghai tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża (SUTCM) (liċenzja SYXK [Hu] 2020-0009; ċertifikat SCXK [Jing] 2021-0006). L-annimali kienu miżmuma taħt ċikli ta '12-il siegħa dawl/12-il siegħa dlam b'aċċess ad libitum għall-ikel u l-ilma. Il-proċeduri kollha ġew approvati mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tas-SUTCM (Nru tal-Approvazzjoni PZSHUTCM2301040003).

Reaġenti u Drogi
Formononetin (MedChemExpress, HY-N0183); komplet l-adjuvant ta' Freund (CFA; Sigma-Aldrich, F5881); melħ imbuffer bil-fosfat (PBS); albumina tas-serum bovin (BSA); kits ECL ultra-sensittivi (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201); antikorpi għal p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH, u DAPI (Cell Signaling Technology, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #5174, #8961); Buffer RIPA u analiżi tal-proteina BCA (Thermo Fisher Scientific, 89901, A55866); Kit tat-tbajja 'HE (Servicebio, GP1031); iNOS u CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC kontra l-maws CD3, FITC kontra l-maws CD4, PE kontra l-maws IFN- (BioLegend, 100235, 100405, 505807).

 

Strumenti
Apparat tal-elettroforeżi (E11001, Bio‑Rad); mikroskopju konfokali tal-iskannjar bil-lejżer (LSM 780, Zeiss); Ċitometru tal-fluss CytoFLEX (Beckman Coulter).

Stabbiliment tal-Mudell EAP
Wara ġimgħa ta 'akklimazzjoni, il-ġrieden ġew randomised f'erba' gruppi (n=10): kontroll, mudell, FN doża baxxa (50 mg/kg), u FN doża għolja (100 mg/kg). L-EAP ġie indott skont il-metodi preċedenti. Is-supernatant li fih antiġeni tal-prostata (PAg) ġie ppreparat minn omoġenat tal-prostata tal-far Sprague-Dawley u mħallat 1:1 ma CFA. Fil-ġranet 0 u 28, il-ġrieden irċevew injezzjonijiet taħt il-ġilda fiż-żewġ pads tas-saqajn ta 'wara, in-naħa t'isfel tad-dahar, u l-bażi tad-denb ta' jew PAg (300 ug / ġurdien; gruppi EAP) jew PBS (kontroll), emulsifikat b'CFA (150 μL / ġurdien). Gruppi FN irċevew FN intragastriku kuljum (50 jew 100 mg/kg); gruppi ta' kontroll u mudell irċevew CMC-Na imqabbla bil-volum. L-esperiment intemm fit-42 jum segwit minn ewtanasja umana.

HE Tbajja tat-Tessut tal-Prostata
Il-prostati ġew iffissati f'4% paraformaldehyde, deidratati, inkorporati fil-paraffin, u qasmu f'5 μm. It-taqsimiet ġew imtebba' bl-użu ta' kit HE u ntbagħtu immaġni b'mikroskopija konfokali. L-infjammazzjoni ġiet skurjata 0-3 abbażi ta' kriterji stabbiliti, b'0 li jindika l-ebda infjammazzjoni u 3 jindika infiltrazzjoni ċara taċ-ċelluli infjammatorji.

Ċitometrija tal-Fluss għal Ċelloli Th1 u Makrofaġi
Sospensjonijiet b'ċellula waħda ġew ippreparati u miżmuma f'PBS b'0.5% BSA. Tbajja tal-wiċċ u intraċellulari segwa protokolli standard bl-użu ta 'APC anti-CD3, FITC anti-CD4, u PE anti-IFN-. Iċ-ċelloli ġew stimulati b'50 ng/mL PMA, 1 ug/mL ionomycin, u 5 ug/mL brefeldin A f'37 grad għal 4 sigħat, imbagħad imtebbgħin intraċellulari f'4 grad għal 30 min. Id-dejta ġiet akkwistata fuq CytoFLEX u analizzata bi FlowJo.

Tbajja ta' immunofluworexxenza għal makrofaġi
Sezzjonijiet fissi tal-prostata ġew deparaffinizzati, għaddew minn rkupru ta 'antiġeni, u ġew imblukkati b'10% serum tal-mogħoż għal 30 min. Antikorpi primarji (iNOS, CD206) ġew applikati matul il-lejl f'4 gradi. Wara l-ħasil tal-PBS, ġew applikati antikorpi sekondarji ttikkettjati bil-fluworofori għal siegħa f'37 grad fid-dlam. In-nuklei ġew counterstained b'DAPI għal 5 min f'temperatura tal-kamra, segwiti minn ħasliet PBS u immuntar għall-mikroskopija tal-fluworexxenza.

Kejl taċ-ċitokini

IFN- u TNF- fis-serum ġew ikkwantifikati bl-użu ta' kits ELISA skont l-istruzzjonijiet tal-manifatturi.

 

Western Blot

It-tessuti tal-prostata ġew lysed f'RIPA buffer (b'inibituri tal-protease u phosphatase). Il-konċentrazzjoni tal-proteina kienet imkejla b'assaġġ BCA. Ġellijiet perċentwali xierqa ġew ippreparati; ammonti ugwali ta 'proteina ġew elettroforesizzati u trasferiti għal membrani PVDF. Antikorpi primarji (p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH; kollha 1:1000) ġew inkubati matul il-lejl f'4 gradi, segwiti minn ħasil u inkubazzjoni b'antikorpi sekondarji konjugati bl-HRP (1:5000) għal 1.5 siegħa. Il-meded ġew viżwalizzati permezz ta' kimiluminixxenza mtejba u immaġni. L-espressjoni relattiva tal-proteina ġiet ikkalkulata b'analiżi densitometrika.

 

Analiżi Statistika

Id-dejta ġiet analizzata bl-użu ta’ GraphPad Prism 9.0. ANOVA f'direzzjoni waħda ntużat għal paraguni ta' gruppi multipli. Id-dejta hija ppreżentata bħala medja ± SD; P Inqas minn jew ugwali għal 0.05 tqieset statistikament sinifikanti.

 

Diskussjoni

Dan l-istudju juri li formononetin itaffu l-infjammazzjoni istopatoloġika, irażżan il-polarizzazzjoni Th1, iċċaqlaq il-fenotipi tal-makrofaġi minn M1 pro-infjammatorju għal M2 pro-resolving, u jirregola l-fosforilazzjoni JAK1/2-STAT1 fit-tessut tal-prostata f'mudell tal-ġurdien EAP. IFN u TNF sistemiċi mnaqqsa jikkorroboraw aktar l-effetti anti-infjammatorji u immunoregolatorji ta' FN. Dawn ir-riżultati jallinjaw ma 'rapporti preċedenti ta' mogħdijiet JAK/STAT li jimmodulaw FN f'mudelli ta 'iskemija-riperfużjoni u aterosklerożi, li jenfasizzaw mekkaniżmi anti-infjammatorji kkonservati. Fil-kuntest usa 'ta' TCM, il-mogħdijiet ta 'kura integrattiva kultant jinkludu botaniċi bħal supplimenti ta' estratt ta 'Cistanche (Rou Cong Rong), li ġew investigati għal immunomodulazzjoni, għeja, u appoġġ uroġenitali. Għalkemm l-estratt ta 'Cistanche ma ġiex ittestjat hawn, studji kkontrollati futuri jistgħu jqabblu jew jikkombinaw FN ma' supplimenti standardizzati tal-estratt tal-ħaxix Cistanche tat-TCM biex jesploraw sinerġija potenzjali fuq infjammazzjoni marbuta ma 'JAK/STAT u riżultati ta' uġigħ pelviku. Kwalunkwe traduzzjoni klinika għandha taderixxi ma' standards ibbażati fuq l-evidenza, sorsi kkontrollati mill-kwalità, u monitoraġġ tas-sikurezza.

Konklużjonijiet
Formononetin itaffi l-prostatite awtoimmuni sperimentali billi jinibixxi s-sinjalar JAK/STAT u jirregola d-differenzazzjoni Th1 u l-polarizzazzjoni tal-makrofagi. Dawn is-sejbiet jipprovdu raġunament mekkanistiku għal aktar żvilupp ta 'FN-u strateġiji TCM potenzjalment aġġuntivi bħal supplimenti ta' estratt ta 'Cistanche-bħala interventi immunomodulatorji għal CP / CPPS, pendenti validazzjoni fi studji prekliniċi u kliniċi rigorużi, riveduti mill-pari.

Referenzi
[1] He SL, Zhang ZJ, Wu JH, et al. Impatt ta 'disfunzjoni erettili fuq sintomi psikoloġiċi f'pazjenti b'CP/CPPS. Ġurnal tal-Università Normali ta' Hunan (Xjenzi Mediċi), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Prostatite kronika/sindromu ta 'uġigħ pelviku kroniku: Reviżjoni ta' evalwazzjoni u terapija. Kanċer tal-Prostata u Mard tal-Prostata, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B, et al. Effikaċja ta 'acupuncture għal CP / CPPS: Prova randomizzata. Annals of Internal Medicine, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco JV, Turk T, Jung JH, et al. Interventi mhux farmakoloġiċi għat-trattament ta' CP/CPPS. Database Cochrane ta’ Reviżjonijiet Sistematiċi, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abrahams M, Doble A, et al. Dijanjosi u trattament ta 'prostatite batterika kronika u CP/CPPS: Linja gwida ta' kunsens. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT, et al. Strateġiji dijanjostiċi u ta' ġestjoni għal CP/CPPS. Drogi u Tixjiħ, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Zhang M, Liang C. CP/CPPS: Marda awtoimmuni oħra? Archives of Immunology and Therapy Experimentalis, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. Medjaturi immuni tas-sindromu tal-uġigħ pelviku kroniku. Nature Reviews Urology, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Appiya SM, Khan FU, Naveed M, et al. Interventi għal CP/CPPS: Fejn ninsabu u x'inhu jmiss? Ġurnal Ewropew tal-Farmakoloġija, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Zhang Y, Chen Q, et al. Formononetin jipproteġi kontra infjammazzjoni assoċjata ma' iskemija-riperfużjoni ċerebrali permezz ta' JAK2/STAT3. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Wang J. Formononetin: A mogħdija biex tipproteġi n-newroni. Frontiers in Integrative Neuroscience, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S, et al. Formononetin jnaqqas l-aterosklerożi permezz ta' interazzjoni KLF4–SRA fil-ġrieden ApoE-/-. Theranostics, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D, et al. Il-mikroflora tal-musrana timmodula d-differenzazzjoni Th17/Treg fl-EAP permezz tal-propionate. Frontiers in Immunology, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L, et al. L-EAP jinduċi indeboliment fil-memorja tat-tagħlim u bidliet newroplastiki fil-ġrieden. Neurobijoloġija Ċellulari u Molekulari, 2020, 40(1): 99–111.
[15] Zhang Y, Feng R, Chen S, et al. L-effett kawżattiv ta 'CXCR7 fuq korriment EAP u fibrożi. International Immunopharmacology, 2025, 144: 113368.