Esplorazzjoni Preliminari tal-Effett U l-Mekkaniżmu ta' Promozzjoni tal-Polisakkaridi Minn Cistanche Deserticola Fuq il-Proliferazzjoni tal-Linfoċiti

Metodi

Assaġġ MTT intuża biex jikxef il-proliferazzjoni ta 'limfoċiti tal-milsa fil-ġrieden. Cyclophosphamide (Cy) intuża biex jirreplika mudelli ta 'annimali ta' annimali immunokompromessi, u tkejlu l-indiċi tal-milsa u tat-timu ta 'annimali normali u immunokompromessi. L-attività ta' interleukin-2 (IL-2) ġiet imkejla bl-assaġġ tal-proliferazzjoni tat-timoċiti. Riżultati: Cistanche deserticola polysaccharide ippromwova b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni ta' limfoċiti attivati ​​ta' mitoġen (ConA u LPS) u ċelluli normali mhux attivati, u ppromwova s-sekrezzjoni ta' IL-2 fil-limfoċiti. Amministrazzjoni intraperitoneali wriet li Cistanche deserticola polysaccharide żied b'mod sinifikanti l-indiċi tal-milsa ta 'ġrieden normali u immunokompromessi, u kellu wkoll effett antagonistiku sinifikanti fuq it-tnaqqis tal-indiċi tat-timu kkawżat minn Cy. Konklużjoni: Cistanche deserticola polysaccharide jista 'jippromwovi b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni ta' limfoċiti tal-milsa fil-ġrieden, li jista 'jkun relatat mal-promozzjoni tiegħu ta' sekrezzjoni IL-2.

Cistanche għajxien fid-deżert

[Kliem ewlenin]Cistanche deserticola polysaccharide; Indiċi tal-milsa; Indiċi tat-timu; Proliferazzjoni tal-limfoċiti; Interleukin-2

Il-polisakkaridi tal-pjanti ġibdu attenzjoni mifruxa minħabba l-effetti immunomodulatorji mifruxa tagħhom u t-tossiċità relattivament baxxa [1]. Cistanche deserticola ma, magħrufa bħala "Desert Ginseng", hija iz-zokk bil-qoxra, niexef, imlaħħam ta 'Cistanche deserticola, pjanta tal-Orobaceae, li għandha effetti farmakoloġiċi estensivi. Id-decoction tal-ilma tiegħu jista 'jżid b'mod sinifikanti l-perċentwal fagoċitiku u l-indiċi fagoċitiku tal-makrofaġi. Studji ulterjuri wrew li l-bażi materjali tagħha hija l-polysaccharide totali ta 'Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et al. [4] sabu li komponent wieħed ta 'Cistanche deserticola polysaccharide għandu effett proliferattiv sinifikanti fuq limfoċiti timiċi tal-ġrieden in vitro. L-effett ta' Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-proliferazzjoni tal-limfoċiti kien osservat in vivo u in vitro.

Formula molekulari ta' Cistanche deserticola

1Materjali u Metodi

1.1 Drogi u reaġenti

Il-polysaccharide minn Cistanche deserticola huwa pprovdut mid-Dipartiment tal-Pjanti u Kimika tal-Istitut tal-Mediċina u t-Tħawwil, Kulleġġ Mediku. Huwa estratt mit-trab tal-estratt ta 'Cistanche, u l-kontenut ta' polisakkarid huwa 87%.

Trab ta 'l-estratt ta' Cistanche

Qabel ma tuża esperimenti in vivo, dewweb u ħallat b'salina fiżjoloġika sal-konċentrazzjoni meħtieġa, u għalli għall-isterilizzazzjoni. Qabel l-użu ta 'esperimenti in vitro, il-mezz ta' kultura RPMI-1640 ġie maħlul u dilwit, u saret sterilizzazzjoni bi pressjoni għolja. Lipopolysaccharide (LPS), concanavalin (ConA), dexamethasone (DEX), u MTT huma kollha prodotti ta 'Sigma Corporation. Cyclophosphamide, impriża konġunta Sino-Amerikana ta 'Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., serum bovin tal-fetu, mezz ta' kultura RPMI1640, u trypsin huma kollha prodotti Gibco. Reaġenti oħra huma reaġenti analitiċi domestiċi.

1.2 Annimali

Ġrieden żgħar BALB c (livell SPF) huma pprovduti minn Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd [SCXK (Beijing) 2002-2003]. L-annimali tal-grad SPF jitrabbew f'kamra u jiġu mitmugħa u jixorbu liberament.

1.3 Apparat

Marker ta 'l-enzima Multikan Ascent, prodott ta' Thermo Electron Company, l-Istati Uniti. Leici PHS-3B Preċiżjoni pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 inkubatur tad-dijossidu tal-karbonju, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Inverted Microscope, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metodu

1.4.1 Effett fuq il-proliferazzjoni tal-limfoċiti [5]:

Preparazzjoni ta’ rutina ta’ limfoċiti tal-milsa minn ġrieden BALB/c, bl-użu ta’ RPMI-1640 biex taġġusta l-konċentrazzjoni taċ-ċelluli għal 1 × 107 mL, imlaqqma fuq pjanċa ta’ kultura ta’ 96 bir, b’100 suspensjoni ta’ ċelluli miżjuda ma’ kull bir μL-50. Kien ko-koltivat b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'Cistanche deserticola polysaccharide (il-konċentrazzjoni finali ta' Cistanche deserticola polysaccharide għall-proliferazzjoni ta 'limfoċiti mhux attivati kienet 6.25, 12.5, 25, 50, u 100 mg/L fl-ordni; il-konċentrazzjoni finali ta' Cistanche deserticola polysaccharide A għal proliferazzjoni ta 'lymphocyta lymphocyles proliferated kienet 3.9, 7.8, 15.6, 31.2, u 62.5 mg/L fl-ordni u l-konċentrazzjoni finali ta 'Cistanche deserticola polysaccharide għall-proliferazzjoni ta' limfoċiti B attivati bl-LPS kienet 1.56, 3.13, 6.25, 12.5, u 25 mg/L (L) u 25 ta 'l-ordni użata. Il-volum totali ta 'kull toqba huwa 200 μL. Meta żżid il-mitoġenu ConA u LPS (il-kontroll huwa RPMI-1640 li fih konċentrazzjonijiet korrispondenti ta' ConA jew LPS), il-konċentrazzjonijiet finali tat-tnejn huma 2.5 mg/L u 10 mg/L, rispettivament. Saru tliet toqob paralleli għal diversi trattamenti. Poġġi l-pjanċa tal-kultura f'inkubatur ta' umdità saturata ta' 37 grad, 5% CO2 għal 68 siegħa, żid MTT, u kompli koltiva għal 4 sigħat. Kejjel il-valur A540 nm b'markatur ta' l-enżima billi tuża l-metodu MTT biex tiskopri l-proliferazzjoni. Meta tqabbel kull grupp, ikkonverti l-valur A540nm f'rata ta' proliferazzjoni tal-limfoċiti skont il-formula li ġejja:Rata ta' proliferazzjoni tal-limfoċiti=kampjun AA kontroll A × 100 %.

Effetti ta 'Cistanche-Ttejjeb l-immunità

1.4.2 Effett fuq il-piż tal-organi immuni fil-ġrieden normali [6,7]:

Ġrieden żgħar BALB c (irġiel, 4 ġimgħat, b'piż tal-ġisem ta '10-15 g) ġew maqsuma b'mod każwali fi grupp ta' kontroll vojt (salina) u gruppi ta 'dożaġġ differenti (125 mg (kg · bw) u 250 mg (kg · bw)), bi 11-il firien f'kull grupp. Il-mediċina ngħatat intraperitonealment darba kuljum għal 7 ijiem konsekuttivi. Il-ġrieden inqatlu wara dislokazzjoni ċervikali. Ittieħdu l-milsa u t-timu, tneħħew ix-xaħam u t-tessut tal-fascia, u l-likwidu tal-wiċċ ġie mnixxef b'karta tal-filtru. Wara l-użin, l-indiċi tal-milsa=100 × Piż tal-milsa (mg) Piż tal-ġisem (mg); Il-hthymusindex=100 × Thymus Piż (mg) Piż tal-ġisem (mg). Ikkalkula l-indiċi tal-milsa u l-indiċi tat-timu għal kull 100 mg ta’ piż tal-ġisem, rispettivament.

1.4.3 Effett fuq il-piż tal-organi immuni fi ġrieden immunokompromessi [7,8]:

Firien żgħar BALB c (irġiel, 6 ġimgħat, piż tal-ġisem 15-20 g) kienu maqsuma b'mod każwali fi 12-il grupp skont il-piż tal-ġisem. Ħlief għall-grupp ta 'kontroll normali (injezzjoni intraperitoneali ta' volum ekwivalenti ta 'salina fiżjoloġika), il-gruppi l-oħra ġew injettati b'Cy 50 mg (kg · bw) kuljum intraperitonealment, u s-soluzzjoni tad-droga tat-test ġiet amministrata intraperitonealment [125 u 250Mg (kg · bw)], il-grupp ta' kontroll normali u l-grupp mudell ta 'l-istess ġranet konsekuttivi ngħataw 13 ġranet konsekuttivi. jum. Il-bidliet fil-piż tal-annimali ġew osservati matul l-esperiment. 24 sigħat wara l-aħħar amministrazzjoni, l-indiċi tal-milsa u tat-timu ġew imkejla u kkalkulati bl-użu tal-istess metodu bħal f'1.4.2.

1.4.4 Impatt fuq l-attività ta' IL-2:

① Induzzjoni ta' IL-2 [9]: Żid 50 għal kull bir fi pjanċa taċ-ċelluli 96-bir μ L Konċentrazzjonijiet differenti ta 'Cistanche deserticola polysaccharide (konċentrazzjonijiet finali fl-ordni: 3.91, 7.82, 15.63, 31.25, 62.5, 125 mg/L ta' kontroll) u 125 mg/L ta 'kultura ta' kontroll) 50 μ L ConA (konċentrazzjoni finali 5 mg/L), żid 1 aktar għal kull bir × 106 ċelluli tal-milsa. Inkuba f'inkubatur ta' umdità saturata ta' 37 grad, 5% CO2 għal 24 siegħa, ċentrifuga għal 20 minuta f'2500 r min, u ħu s-supernatant taċ-ċellula u aħżen fi - 20 grad għal standby. ② IL-2 skoperta ta' attività [9,10]: Il-metodu bażiku huwa bbażat fuq il-letteratura [9], u jsiru aġġustamenti xierqa skont il-letteratura [10]. Preparazzjoni konvenzjonali ta 'BALB c sospensjoni ta' timoċiti tal-ġurdien, pjanċa tal-kultura taċ-ċelluli 96 bir, 1 inokulazzjoni għal kull bir × 106 timoċiti, filwaqt li żżid 50 ċellula għal kull bir μ L ConA (konċentrazzjoni finali 2.5 mg/L), u mbagħad żid is-supernatant ippreparat IL-2 50 μ L (żid 50 μ L flimkien mas-soluzzjoni ta 'kontroll vojta), inkuba 4 μ L flimkien mas-soluzzjoni ta' kontroll vojta żid MTT, kompli inkuba għal 4 sigħat, ċentrifuga għal 10 sa 15-il minuta f'1000 r min, armi s-supernatant, u żid DMSO 100 għal kull bir μ L, ħawwad b'mikro oxxillatur għal 8 min, u kejjel il-valur A540 nm b'markatur ta 'enżima.

1.5 Analiżi Statistika

Id-dejta kienet espressa bħala devjazzjoni medja u standard (x ± s). Intuża softwer Microsoft Excel biex tiġbor id-dejta, u t-test sar. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Riżultati

2.1 Effett fuq il-proliferazzjoni tal-limfoċiti

Kif jidher mit-Tabella 1, iż-żieda ta 'Cistanche deserticola polysaccharide mal-mezz ta' kultura ta 'limfoċiti tal-milsa tal-ġrieden ikkultivati ​​in vitro f'konċentrazzjoni 'l fuq minn 25 mg / L tista' tistimula b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni tal-limfoċiti, li tindika li Cistanche deserticola polysaccharide innifsu għandu effett mitotiku. Fl-istess ħin,jista' jidher mit-Tabella 2 u t-Tabella 3 li CDPS għandu effett ta' promozzjoni sinifikanti fuq il-proliferazzjoni ta' limfoċiti T indotti minn ConA jew limfoċiti B indotti minn LPS.

Tab.1 L-influwenza ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-proliferazzjoni ta' limfoċiti mhux attivati ​​(x ±s, n =3)

Mhux: meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, ＊P<0.05.

Tab.2 L-influwenza ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-proliferazzjoni ta' limfoċiti T indotti minn ConA (x ±s, n =3)

 

Nota: meta mqabbel mal-grupp ConA, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 L-influwenza ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-proliferazzjoni ta' limfoċiti B indotti minn LPS (x ±s, n =3)

Nota: meta mqabbel mal-grupp LPS, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Effett fuq il-piż ta 'organi immuni fil-ġrieden normali

Kif jidher mit-Tabella 4,Cistanche deserticola polysaccharide jista 'jżid b'mod sinifikanti l-indiċi tal-milsa ta' firien żgħar normaliBALB/cc iżda ma jaffettwax il-glandola tat-timu.

2.3 Effett fuq il-piż tal-organi immuni fi ġrieden immunokompromessi

Mit-Tabella 5,wieħed jista 'jara li l-indiċi tal-organi tal-milsa u tat-timu tal-ġrieden fil-grupp immunosoppressiv Cy huma aktar baxxi minn dawk fil-grupp ta' kontroll, u Cistanche deserticola polysaccharide (125, 250 mg/kg) jista 'jtejjeb b'mod sinifikanti l-indiċi tal-milsa u tat-timu.

2.4 Effett fuq l-attività ta' IL-2

Kif jidher mit-Tabella 6,meta d-doża ta 'Cistanche deserticola polysaccharide tilħaq 7.82 mg/L, tista' żżid b'mod sinifikanti r-rilaxx ta 'IL-2 miċ-ċelloli tal-milsa tal-ġrieden.

Tab.4 L-effett ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-piż ta' organi immuni fil-ġrieden normali (x ±s, n =11)

Nota: meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, ＊＊P<0.01.

Tab.5 L-effett ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-piż ta' organi immuni fil-ġrieden immunodepressi (x ±s, n =12)

Nota: meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll, ## P <0.01; meta mqabbla mal-grupp mudell, ＊＊P<0.01.

Tab.6 L-influwenza ta' Cistanche deserticola polysaccharide fuq il-produzzjoni ta' IL-2 mil-limfoċiti spleniċi fil-ġrieden (x ±s, n =3)

Nota: meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, ＊＊P<0.01.

3. Diskussjoni

Il-proliferazzjoni tal-limfoċiti spleniċi indotta minn ConA u LPS fil-ġrieden hija esperiment in vitro biex tiskopri l-funzjoni tal-limfoċiti T u B u hija indikatur importanti ta 'kapaċità immuni speċifika. Studji wrew li meta l-konċentrazzjoni finali ta 'Cistanche deserticola polysaccharide tkun 'il fuq minn 25 mg/L, tista' tippromwovi b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni tal-limfoċiti, u tindika li għandha ċertu effett mitotiku. Fil-preżenza ta 'mitogen (ConA jew LPS), doża iżgħar ta' Cistanche deserticola polysaccharide tista 'titjieb jekk il-ġisem, juri attività proliferattiva sinifikanti. Aħna nafu li ConA u LPS prinċipalment jinduċu l-proliferazzjoni ta 'limfoċiti T jew limfoċiti B, rispettivament. Studji wrewBenefiċċji għas-saħħa tat-trab tal-cistanche: Cistanche deserticola polysaccharide jista 'jippromwovi kemm il-proliferazzjoni tal-limfoċiti T kif ukoll il-proliferazzjoni tal-limfoċiti B, iżda l-effett proliferattiv tiegħu fuq il-limfoċiti B huwa sinifikament aktar b'saħħtu minn dak fuq il-limfoċiti T.

Cistanche trab benefiċċji tas-saħħa-Improve immunità

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti Cistanche Improve Immunity

【Staqsi għal aktar】 Email: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

It-timu u l-milsa huma l-organi immuni ewlenin fl-annimali. Iċ-ċelloli immuni fil-milsa huma prinċipalment limfoċiti B maturi, filwaqt li t-timu huwa prinċipalment limfoċiti T immaturi. L-indiċi tat-tim u l-milsa jistgħu jirriflettu l-iżvilupp ta 'organi immuni u l-istatus funzjonali taċ-ċelloli immuni. Injezzjoni intraperitoneali ta 'Cistanche deserticola polysaccharide tista' żżid b'mod sinifikanti l-indiċi tal-milsa ta 'ġrieden normali u immunosoppressi u għandha effett antagonistiku sinifikanti fuq atrofija timika indotta minn Cy fil-ġrieden.

Cistanche deserticola polysaccharide m'għandu l-ebda effett sinifikanti fuq l-indiċi timiku f'annimali normali, li huwa konsistenti mar-riżultati ta 'esperimenti in vitro li fihom Cistanche deserticola polysaccharide jippromwovi l-proliferazzjoni ta' limfoċiti B aktar milli limfoċiti T.

Cistanche suppliment qrib me-Improveimmunità

IL-2 hija ċitokina prodotta minn limfoċiti T mill-fażi G1 taċ-ċiklu taċ-ċelluli sal-fażi S. Huwa fattur ewlieni tat-tkabbir taċ-ċelluli T li jaġixxi bħala fattur tat-tkabbir awtokrinu. Barra minn hekk, IL-2 jista 'jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli B u s-sintesi tal-antikorpi [11,12]. Cistanche deserticola polysaccharide jippromwovi r-rilaxx ta 'IL-2 mil-limfoċiti, li ovvjament huwa relatat ma' Cistanche deserticola polysaccharide li jippromwovi l-proliferazzjoni ta 'limfoċiti milsa.

Ir-riċerka medika turi li Cistanche fih polysaccharides, Echinacosides, u Acteoside, li jistgħu jattivaw limfoċiti u jtejbu jekk il-ġisem; il-komponenti funzjonali ta ' cistanche Phenylethanoid Glycosides għandhom effett sinifikanti fuq l-irkupru taċ-ċelluli wara 60 Co gamma ray ħsara, u wkoll jistgħu jtejbu l-funzjoni immuni kontra l-ħsara mir-radjazzjoni. It-teħid ta 'supplimenti ta' Cistanche deserticola kuljum jista 'jikseb l-effett li jtejjeb l-immunità.