Il-kożmetiċi li jbajdu għandhom skala kbira tas-suq u prospetti wesgħin ta 'żvilupp filwaqt li l-prodotti li jbajdu tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża dejjem kienu hotspot ta' riċerka. F'dan l-istudju, l-estratt attiv li jbajdu ta 'Platycodon grandiflorum (PGE) ġie iżolat u purifikat għall-ewwel darba, u l-mekkaniżmu ta' attività li jbajdu u l-kompożizzjoni kimika ta 'PGE ġew spjegati. Total ta '45 komponenti ġew identifikati permezz ta' analiżi ta 'kromatografija likwida-spettrometrija tal-massa ta' prestazzjoni għolja (HPLC-MS), inklużi arbutin, syringin, aċidu chlorogenic, glycoside E, platycodin D3, baicalin, platycodin D, luteolin. Ir-rati ta' tneħħija ta' PGE lejn radikali ħielsa DPPH u ABTS kienu 98.03 fil-mija u 84.30 fil-mija, rispettivament. Ir-rata ta 'inibizzjoni ta' PGE lejn tyrosinase kienet sa 97.71 fil-mija. Il-PGE kellu effetti anti-infjammatorji sinifikanti fuq makrofaġi RAW264.7 stimulati minn lipopolysaccharide (LPS) u kellu effetti ta 'inibizzjoni sinifikanti fuq il-ġenerazzjoni ta' tyrosinase u melanin ta 'ċelluli B16F10 stimulati minn a-MSH. Ir-riżultati wrew li l-PGE kiseb effett sinerġistiku li jbajdu billi jinibixxi l-attivazzjoni ta 'radikali ħielsa mill-ossiġnu fuq tyrosinase, antiossidazzjoni, effett anti-infjammatorju, attività ta' enżimi u ġenerazzjoni ta 'melanin. Bħala aġent li jbajdu estratt minn pjanti naturali, PGE għandu potenzjal eċċellenti fir-riċerka u l-iżvilupp tal-kożmetiċi li jbajdu l-pjanti, li jistabbilixxi pedament għal aktar żvilupp u użu tar-riżorsi Platycodon grandiflorum u jipprovdi bażi teoretika għall-iżvilupp ta 'kożmetiċi li jbajdu l-ħodor u organiċi.
Skont studji rilevanti,cistanchehija ħaxixa komuni li hija magħrufa bħala "l-ħaxix miraklu li jtawwal il-ħajja". Il-komponent ewlieni tiegħu huwaCistanoside, li għandha diversi effetti bħalantiossidant, aanti-infjammatorji, u l-promozzjoni tal-funzjoni immuni. Il-mekkaniżmu bejn cistanche ujbajdu l-ġildatinsab fl-effett anti-ossidanti tal-glycosides cistanche. Melanin fil-ġilda tal-bniedem hija prodotta mill-ossidazzjoni ta 'tyrosine katalizzat minntyrosinase, u r-reazzjoni ta 'ossidazzjoni teħtieġ il-parteċipazzjoni ta' ossiġnu, għalhekk ir-radikali ħielsa mill-ossiġnu fil-ġisem isiru fattur importanti li jaffettwa l-produzzjoni tal-melanin. Cistanche fih cistanoside, li huwa antiossidant u jista 'jnaqqas il-ġenerazzjoni ta' radikali ħielsa fil-ġisem, u b'hekkjinibixxi l-produzzjoni tal-melanin.
Għal aktar informazzjoni:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Introduzzjoni
Fl-industrija globali tas-sbuħija, hemm bosta tipi ta 'kożmetiċi funzjonali li jbajdu, u s-sehem tas-suq huwa mistenni li jespandi aktar. Biex tissodisfa d-domanda dejjem tikber għal aġenti li jbajdu l-ġilda f'formulazzjonijiet kosmetiċi li jbajdu u tikseb l-effett li jbajdu l-ġilda, l-industrija tal-kosmetiċi introduċiet diversi addittivi kimiċi, inklużi hydroquinone, cysteine, glutathione, vitamina A u glukokortikojdi. Dawn il-komposti għandhom effetti tajba li jbajdu; madankollu, xi wħud minnhom għandhom effetti sekondarji tossiċi; pereżempju, "rhododendron" jikkawża tikek bojod fil-ġilda tal-utent,1 "Hydroquinone" għandu proprjetajiet ċitotossiċi u mutaġeniċi,2 "Glucocorticoid" jista 'jikkawża dermatite dipendenti mill-ormoni.3 Fil-preżent, iż-żieda ta' dawn l-ingredjenti (rhododendron, hydroquinone, glucocorticoid ) għall-kożmetiċi mhux permess. L-effett tal-prodott mhuwiex l-uniku standard li l-konsumatur jikkunsidra meta jixtri l-kożmetiċi. F'dawn l-aħħar snin, kien hemm fqigħ kontinwu ta 'problemi ta' sikurezza tal-prodotti kożmetiċi fl-insegwiment tas-saħħa. Ir-riċerkaturi sabu li sustanzi attivi li jbajdu estratti minn ħwawar naturali huma inqas tossiċi u għandhom ħafna inqas effetti sekondarji. Numru dejjem jikber ta' konsumaturi japprezzaw is-sikurezza tal-prodott. Barra minn hekk, prodotti ħodor, favur l-ambjent u organiċi saru aktar popolari, kif rifless mill-promozzjoni ta 'ħafna marki ta' bejgħ dirett. Għalhekk, ir-riċerka u l-iskoperta ta 'ingredjenti tal-kura tal-ġilda li jbajdu sikuri u b'saħħithom saru xejra fl-iżvilupp modern. L-applikazzjoni ta' estratti veġetali Ċiniżi minn pjanti naturali bħala materja prima fil-kożmetiċi gradwalment saret hotspot ta' riċerka fl-iżvilupp ta' prodotti li jbajdu u għall-kura tal-ġilda.4
Platycodon grandiflorum, materjal mediċinali tradizzjonali Ċiniż, ilu jintuża fiċ-Ċina għal aktar minn 2000 sena. L-ewwel rekord jista 'jiġi ntraċċat lura għall-"klassika tal-ħxejjex Shennong".5 L-azzjoni farmakoloġika tradizzjonali ta' Platycodon grandiose hija li tnaqqas is-sogħla u l-espettorat. Platycodon grandiflorum fih saponini, toroq, aċidi fenoliċi, steroli u polisakkaridi.6–8 Il-kumplessità u d-diversità tal-kostitwenti kimiċi jiddeterminaw id-diversità tal-attivitajiet bijoloġiċi tagħhom.9 Ir-riċerka farmakoloġika moderna wriet li Platycodon grandiflorum għandu anti-infjammatorju, batterjostatiku, anti -tumur, anti-ossidazzjoni, immuni-regolazzjoni, u effetti farmakoloġiċi oħra.10,11 Fil-Korea u fit-Tramuntana taċ-Ċina, Platycodon grandiflorum tintuża ħafna bħala materja prima fl-ikel u l-kożmetiċi. Kożmetiċi magħmula minn Platycodon grandiflorumas il-materja prima, bħal essenza li jbajdu, ħalib li jbajdu, u ġel tad-doċċa li jbajdu, huma favoriti mill-konsumaturi fil-Korea, il-Ġappun, u pajjiżi oħra tal-Asja. katalgu materjali.13 Madankollu, l-ingredjenti attivi li jbajdu u l-mekkaniżmu ta 'azzjoni ta' Platycodon grandiflorum għadhom mhux ċari, u saru ftit studji preliminari dwar l-attività li jbajdu tiegħu. Gong XJ et al. qabbel l-attivitajiet inibitorji tat-tyrosinase ta 'diversi ħwawar Ċiniżi u sab li Platycodon grandiflorum kellu l-effett inibitorju l-aktar qawwi.14 Fuq din il-bażi, Xu BJ et al. evalwat l-effett li jbajdu tal-kostitwent effettiv ta 'Platycodon grandiflorum permezz ta' esperiment ta 'inibizzjoni tat-tyrosinase u sab li l-kostitwent effettiv ta' Platycodon grandiflorum kien probabbilment il-kontenut totali ta 'saponin.15 F'dan l-istudju, biex ikompli jiċċara s-sustanzi attivi li jbajdu u l-mekkaniżmu li jbajdu ta' Platycodon grandiflorum , użajna l-estratt attiv li jbajdu ta 'Platycodon grandiflorum miksub permezz tal-metodu ta' traċċar farmakodinamiku bħala l-oġġett ta 'riċerka. Billi nistudjaw l-attività u l-komponenti, aħna niċċaraw il-kompożizzjoni tas-sustanzi attivi li jbajdu ta 'Platicodon grandiflorum u nesploraw il-mekkaniżmu li jbajdu tas-sustanzi attivi li jbajdu ta' Platycodon grandiflorum. L-istudju se jipprovdi bażi teoretika għall-użu aħjar ta ' Platycodon grandiflorum bħala materja prima għall-kożmetiċi li jbajdu.
L-effetti li jbajdu l-ġilda jinvolvu t-tnaqqis tal-produzzjoni tal-melanin fil-ġilda. Il-melanin huwa l-pigment ewlieni biex jikkontrolla l-kuluri tal-ġilda u tax-xagħar. Huwa kompost molekulari għoli distribwit b'mod wiesa 'fl-annimali u l-pjanti. Meta jiġi prodott melanin eċċessiv, il-melanin jakkumula fil-ġilda, u jifforma tikek u freckles, li jistgħu jwasslu għal kanċer sever tal-ġilda.16 Għalhekk, biex tiġi evitata pigmentazzjoni eċċessiva tal-ġilda, huwa meħtieġ li tinibixxi l-produzzjoni tal-melanin. Melanoċiti jinsabu fis-saff bażali epidermali u huma kkontrollati minn tyrosinase. Speċijiet ta 'ossiġnu reattivi jattivaw l-attività ta' tyrosinase, u tyrosinase jikkatalizza 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) biex jipproduċi DOPA quinone u mbagħad jikkatalizza DOPA quinone biex jipproduċi melanin permezz ta 'awtoossidazzjoni u reazzjoni ta' enzimi. Għalhekk, l-inibizzjoni tal-proliferazzjoni ta 'tyrosinase u melanocyte tista' tinibixxi b'mod sinifikanti l-produzzjoni tal-melanin.17 Barra minn hekk, effetti antiossidattivi u anti-infjammatorji tajbin jistgħu jnaqqsu l-ħsara kkawżata mill-ossidazzjoni u l-infjammazzjoni tal-ġilda, idewmu t-tixjiħ tal-ġilda, u jżommu l-ġilda elastika u lixxa u għalhekk jeżerċitaw effett sinerġiku li jbajdu.18,19
Għalhekk, biex issib estratt attiv naturali minn Platycodon grandiflorum bi proprjetajiet li jbajdu, antiossidanti u anti-infjammatorji, dan l-istudju ffoka prinċipalment fuq l-effetti tal-estratt ta 'Platicodon grandiflorum (PGE) fuq l-inibizzjoni tat-tyrosinase, l-inibizzjoni intraċellulari tat-tyrosinase, u l-attività inibitorja taċ-ċellula. ġenerazzjoni tal-melanin. L-istudju kellu l-għan li janalizza l-effett inibitorju tal-PGE fuq l-attività tat-tyrosinase u l-ġenerazzjoni tal-melanin u jevalwa b'mod komprensiv l-effett li jbajdu u l-kura tal-ġilda tal-PGE u l-effetti antiossidanti u anti-infjammatorji tiegħu. Il-kompożizzjoni kimika tal-PGE ġiet identifikata u analizzata permezz ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC) u kromatografija likwida (LC) / spettrometrija tal-massa (MS), u l-materjal attiv speċifiku li jbajdu tal-PGE ġie ċċarat. Huwa vitali li jiġu żviluppati prodotti ġodda Platycodon grandiflorum u jiġi promoss l-iżvilupp tal-industrija Platycodon grandiflorum.
2. Materjali u metodi
2.1. Materjali
Aċidu formiku, metanol, 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,20-casino-bis ({3-ethylbenzothiazoline-6-aċidu sulfoniku) (ABTS ), acetylacetone, NaOH, K2S2O8, u reaġent Ehrlich inkisbu minn Beijing Chemical Plant. Platycodin D, arbutin, platycodin D3, glycoside E, syringin, aċidu chlorogenic, baicalin, u prodotti ta 'referenza luteolin inkisbu mill-Istitut taċ-Ċina ta' Identifikazzjoni ta 'Prodotti Bijoloġiċi Farmaċewtiċi. L-aċetonitrile kromatografikament pur u l-metanol inkisbu minn JT Baker Co., USA. Tyrosinase, L-tyrosine, sodium hyaluronate, u hyaluronate nkisbu minn Beijing Solebo Technology Co., Ltd Iċ-ċelluli 264.7 oriġinali u ċ-ċelloli B16F10 inxtraw miċ-Ċentru tar-Riżorsi taċ-Ċelloli tal-Istitut tax-Xjenzi Bijoloġiċi ta 'Shanghai, iċ-Ċina, u maħżuna fil- laboratorju ta 'kulleġġ mediku affiljat mal-Università ta' Changchun tal-Mediċina Ċiniża. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), serum bovin fetali, u antibijotiċi (peniċillina u streptomycin) inkisbu minn Gibco USA. Triton X-100, a-MSH, kit ELISA (NO, IL-6, TNF-a), u kit tal-għadd taċ-ċelluli-8 (CCK-8) inkisbu minn Changchun Baijin Biotechnology Co., Ltd Ilma pur inkiseb minn Wahaha Food Co. Ltd.
2.2. Preparazzjoni ta 'estratt attiv li jbajdu Platycodon grandiflorum
Platycodon grandiflorum ġie fornut minn Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. Platycodon grandiflorum ġie mgħaffeġ intone trab, imsaħħan, u jerġa 'jintuża b'soluzzjoni ta' etanol 95 fil-mija tliet darbiet, siegħa għal kull darba. Imbagħad, il-prodott ġie ffiltrat, u l-filtrat ġie rkuprat u ingħaqad mal-filtrat miksub minn tliet estrazzjonijiet. Il-filtrat ġie mnixxef u mħallat b'ilma distillat għar-riżoluzzjoni, u n-butanol (volum 1: 1) saturat bl-ilma ġie estratt ħames darbiet. Is-saff ta 'n-butanol ġie kkombinat, is-soluzzjoni ta' n-butanol tneħħiet, u nkiseb il-PGE. Ir-rata ta' estrazzjoni ta' PGE minn Platycodon grandiflorum kienet ta' 8.9 fil-mija.
2.3. Kultura taċ-ċelluli
Iċ-ċelloli tal-melanoma tal-ġurdien B16F10 u ċ-ċelloli RAW264.7 ġew ikkultivati f'DMEM supplimentat b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu, 100 U mL-1 peniċillina, u 100 g mL-1 streptomycin f'arja umidifikata ta' 5 fil-mija CO2 f'37 grad C. Meta ċ-ċelloli ġew imkabbra għall-istat ta 'fużjoni, ġew diġeriti bit-tripsin u ċ-ċelloli kienu mgħoddija kull jumejn. L-esperimenti kollha saru tliet darbiet u ripetuti tliet darbiet biex tiġi żgurata r-ripetibbiltà.
2.4. Assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli
Biex tiġi evalwata s-sigurtà tal-PGE, l-effetti tal-PGE fuq iċ-ċelloli B16F10 u RAW264.7 ġew iddeterminati permezz tal-metodu CCK-8 skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur.20 L-ewwel, ċelloli B16F10 u ċelloli RAW264.7 ġew ikkultivati f'{{ 10}}pjanċi ta 'bir f'konċentrazzjonijiet ta' 5 × 103 ċelluli għal kull bir u 1 × 10⒋ ċelluli għal kull bir għal 24 siegħa u mbagħad ittrattati b'PGE jew DMEM f'konċentrazzjonijiet differenti għal 72 siegħa. Wara t-trattament, 10 mL CCK-8 reaġent ġie miżjud ma 'kull bir, u ċ-ċellula ġiet ikkultivata aktar għal sagħtejn. L-assorbiment f'450 nm tkejjel bl-użu ta' microplate reader.
2.5. Attività antiossidanti
L-attività antiossidant ta 'PGE ġiet iddeterminata permezz ta' testijiet ta 'scavenging ta' DPPH u ABTS, u l-aċidu askorbiku intuża bħala l-kontroll pożittiv.21,22 Ir-riżultati ġew espressi bħala r-rata ta 'inibizzjoni perċentwali.
Barra minn hekk, soluzzjoni PGE, aċidu askorbiku, u platycodin D b'konċentrazzjonijiet differenti ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0, u 1.2 mg mL―1) ġew miżjuda ma' tubu tat-test li jinstadd. Imbagħad, 2 mL soluzzjoni DPPH ġiet miżjuda f'kull tubu tat-test; it-tubi ġew vortexed, it-taħlita tħallat u titħalla tirreaġixxi f'kamra mudlama għal 30 min, u l-assorbenza A1 f'520 nm ġiet iddeterminata. Imbagħad, 2 mL metanol intuża bħala l-grupp ta 'kontroll minflok is-soluzzjoni DPPH biex jiġi ddeterminat il-valur tal-assorbiment A2. Il-valur tal-assorbiment A0 ġie ddeterminat billi s-soluzzjoni tal-kampjun tinbidel b'2 mL metanol bħala l-grupp ta' kontroll vojt. Aġġustat il-valur tal-assorbenza għal 0 bil-metanol. Ir-rata ta' tneħħija radikali DPPH ġiet ikkalkulata skont il-formula li ġejja:
Biex tipprepara ABTS flimkien ma' $ likur omm, 35.2 mg ABTS u 6.139 mg persulfat tal-potassju tħalltu għal volum kostanti ta' 10 mL. Il-likur ġie dilwit bil-metanol wara 12-16 siegħa ta' reazzjoni f'temperatura tal-kamra sakemm il-valur ta' assorbiment tas-soluzzjoni f'734 nm kien madwar 7.{{10}} × 0.2. Imbagħad, 30 mL soluzzjoni PGE, aċidu askorbiku, u platycodin D b'konċentrazzjonijiet differenti (0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 mg mL―1) tħalltu ma '220 mL ABTS flimkien ma' soluzzjoni c fi pjanċa tikkettata b'enżima 96-tajjeb, u l-assorbiment f'734 nm tkejjel wara reazzjoni fid-dlam għal 6 min.
fejn A0 hija l-assorbenza tal-kampjun vojt, u AS hija l-assorbenza tal-kampjun li jrid jitkejjel.
2.6. Attività anti-infjammatorja indotta minn Lipopolysaccharide tal-makrofagi RAW264.7
Il-makrofagi RAW264.7 f'medja ta '1 mL ġew miżrugħa fi pjanċa ta' 24-bir, b'1 × 104 ċelluli għal kull bir, u kkultivati matul il-lejl sabiex iċ-ċelloli aderixxu mal-ħajt. Iċ-ċelloli ġew ikkultivati għal 24 siegħa wara espożizzjoni għal estratti ta 'lipopolysaccharide (LPS) u PGE f'konċentrazzjonijiet differenti (10, 50, 100 mg mL―1). Il-konċentrazzjonijiet ta' NO, IL-6, u TNF-a fis-supernatant taċ-ċellula ġew determinati bl-użu ta' kit ELISA, kif ordnat mill-manifattur.23
2.7. Attività Tyrosinase
Bl-użu ta' metodu rrappurtat fil-letteratura, b'phosphate buffer (25 mmol, pH=6.8) bħala solvent, soluzzjoni ta' substrat L-tyrosine (0.5 mg mL―1), enzima tyrosine soluzzjoni (50 U mL―1), u soluzzjonijiet oħra fi 96-pjanċi ta’ bir ta’ sistema ta’ reazzjoni totali ta’ 240 mL, flimkien ma’ 120 mL ta’ soluzzjoni ta’ substrat, 40 mL ta’ buffer tal-fosfat, 40 mL ta’ soluzzjoni tal-kampjun, u blender. Imbagħad, 40 mL ta 'soluzzjoni ta' enzima tyrosine ġiet miżjuda mas-sistema ta 'hawn fuq. Ir-rispons ta 'temperatura kostanti ta' banju ta 'l-ilma ta' 37 grad C għal 20 min ġie nnutat, u l-assorbiment tkejjel f'475 nm.24
fejn A hija l-assorbiment tas-soluzzjoni tal-kampjun sostitwita bis-soluzzjoni buffer ekwivalenti, B hija l-assorbiment tas-soluzzjoni tal-kampjun, is-soluzzjoni ta 'tyrosinase hija sostitwita bis-soluzzjoni buffer ekwivalenti, C hija l-assorbiment tas-soluzzjoni tal-kampjun, u D hija l-assorbiment ta' is-soluzzjoni buffer ekwivalenti minflok is-soluzzjoni tyrosinase (Tabella 1).
2.8. Attività inibitorja tal-formazzjoni tal-melanin
Iċ-ċelluli tal-melanoma B16F10 f'medja ta '1 mL ġew miżrugħa fi pjanċa ta' kultura 24-bir, b'1 × 104 ċelluli għal kull bir, u kkultivati matul il-lejl biex iċ-ċelloli jaderixxu mal-ħajt. Iċ-ċelloli ġew ikkultivati b'ormon li jistimula l-a-melanocyte (100 nM a-MSH) għal 48 siegħa u kkultivati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'PGE u arbutin (100, 150, 200 mg mL―1) għal 24, 48, u 72 siegħa.
Wara l-ħin tal-amministrazzjoni, iċ-ċelloli ġew maħsula darbtejn b'PBS (pH=7.2) u mħallta ma 'PBS 200 mL li kien fih 1 fil-mija Triton X-100. Iċ-ċelloli ġew lysed bl-iffriżar u tidwib. Wara li s-sistema ġiet ċentrifugata f'12 000 rpm għal 30 min, is-supernatant tneħħa, u 1 M NaOH li kien fih 10 fil-mija dimethyl sulfoxide (300 mL) ġie miżjud fil-granuli taċ-ċelluli; imbagħad irreaġixxa fi 80 grad għal 2 sigħat biex lyse melanin fiċ-ċelloli.25 L-assorbenza f'450 nm ġiet iddeterminata.
2.9. Attività taċ-ċelluli tyrosinase
Ċelloli tal-melanoma B16F10 f'medja ta' 1 mL ġew miżrugħa fi 24-pjanċa tal-kultura bir-bir, b'1 × 104 ċelluli għal kull bir, u kkultivati matul il-lejl biex iċ-ċelloli jaderixxu mal-ħajt. Iċ-ċelloli ġew ikkultivati b'ormon li jistimula l-a-melanocyte (100 nM a-MSH) għal 48 siegħa u kkultivati b'konċentrazzjonijiet differenti (100, 150, 200 mg mL-1) ta 'PGE u arbutin għal 24, 48, u 72h. Wara l-ħin tal-amministrazzjoni, iċ-ċelloli ġew maħsula darbtejn b'PBS (pH =7.2) u mħallta ma 'PBS 200 mL li kien fih 1 fil-mija Triton X-100. Iċ-ċelloli ġew lysed bl-iffriżar u tidwib. Wara ċ-ċentrifugazzjoni f'{23}} rpm għal 30 min, is-supernatant ġie depożitat fi pjanċa ta' 96-bir, 100 mL kull bir, u mħallat ma' 100 mL 0.1 fil-mija soluzzjoni L-DOPA. Wara inkubazzjoni f'37 grad għal sagħtejn, l-assorbenza f'475 nm ġiet iddeterminata immedjatament.26
2.10. Analiżi tal-kompożizzjoni kimika
2.10.1. Analiżi HPLC.Is-soluzzjoni tal-kampjun PGE ġiet analizzata bl-użu ta’ sistema Shimadzu LC{{0}}AHT HPLC b’rilevatur tat-tifrix tad-dawl evaporattiv ELSD6{000 (Alltech CHROM).27 Is-separazzjoni kromatografika saret fuq Sepax Bio -Kolonna C18 (4.6 × 250 mm, 5 mm, minn Sepax Technologies, Delaware, USA). Is-sistema tal-fażi mobbli kienet magħmula minn fażi mobbli A (acetonitrile) u fażi mobbli B (0.1 fil-mija ilma ta 'aċidu formiku). Il-gradjent tas-solvent huwa ppreżentat fit-Tabella 2. Il-kundizzjonijiet kromatografiċi kienu kif ġej: ir-rata tal-fluss kienet 0.8 mL min―1, it-temperatura inizjali ta 'detezzjoni tat-tifrix tad-dawl evaporattiv (ELSD) kienet 105 × C, ir-rata tal-fluss tal-gass kienet 2.8 L min― 1, u l-kwantità ta 'injezzjoni kienet 20 L. Ġew ippreparati għoxrin lott ta' PGE.
2.10.2. Analiżi tal-kompożizzjoni kimika tal-PGE permezz tal-HPLC flimkien mal-ispettrometrija tal-massa.It-teknoloġija LC/MS b'riżoluzzjoni għolja Q-Orbitrap intużat flimkien mal-ispettrometru tal-massa b'riżoluzzjoni għolja Q Exactive fuq is-sistema tal-kromatografija Ultimate 300{0 RS biex tanalizza u tidentifika il-kompożizzjoni kimika tas-soluzzjoni tal-kampjun PGE permezz tal-MS.28 Il-kundizzjonijiet tal-MS huma kif ġej: sors tal-joni: sors tal-jonizzazzjoni tal-elettrospray; Mod ta 'skannjar: swiċċ ta' skanjar ta 'jonji pożittivi u negattivi; metodu ta 'skoperta: massa sħiħa/dd-MS2; riżoluzzjoni: 70 000 (massa sħiħa), 17 500 (dd-MS2); medda ta' skanjar: 150.0–2000.0 m/z; vultaġġ elettrospray: 3.8 kV (pożittiv); temperatura kapillari: 300 grad C; gass tal-ħabta: argon ta 'purità għolja (purità $ 99.999 fil-mija); gass għant: nitroġenu (purità $ 99.999 fil-mija , 40 arb); gass awżiljarju: nitroġenu (purità $ 99.999 fil-mija , 350 grad ); ħin ta 'akkwist tad-data: 30.0 min. Kundizzjonijiet kromatografiċi: kolonna grafika kromatika: RP-C18 (150 × 2.1 mm, 1.8 mm, Welch); Rata tal-fluss: 0.30 mL min― 1; fażi milwiema: 0.1 fil-mija soluzzjoni milwiema ta 'aċidu formiku; fażi organika: 0.1 fil-mija aċetonitrile ta 'aċidu formiku; likwidu tal-ħasil tal-labra: metanol; temperatura tal-kolonna: 35 grad C; volum ta 'injezzjoni: 5.00 mL. Il-gradjent tas-solvent jidher fit-Tabella 3.
2.11. Statistika tad-dejta
L-esperimenti kollha saru mill-inqas tliet darbiet. Id-dejta ġiet irrappurtata bħala valur medju ± devjazzjoni standard. Analiżi statistiċi saru bl-użu ta' SPSS 21.0 u Oriġini 9.0. Għal paraguni multipli, id-dejta kienet soġġetta għal ANOVA one-way (post hoc tat-Turkija) u t-test paired biex tiddetermina s-sinifikat statistiku. p < 0.05 tqieset differenzi statistikament sinifikanti bejn il-gruppi.
3. Riżultati
3.1. L-effetti tal-PGE fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli B16F10 u 264.7 ċelluli
L-effetti ta' PGE fuq ċelluli tal-melanoma B16F10 u makrofaġi RAW264.7 ġew skoperti permezz tal-metodu CCK-8. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' PGE għal 24 siegħa u mbagħad ġew skoperti bl-użu tal-metodu CCK-8. Ir-riżultati huma espressi bħala persentaġġ tas-sopravivenza relattiva għall-grupp ta 'kontroll. Taħt konċentrazzjonijiet ta' PGE ta' 10–10{0 mg mL―1 (vijabbiltà taċ-ċelluli: 99.42 ±1.951–1{07.17 ±2.601 fil-mija), il-PGE ma wera l-ebda ċitotossiċità fuq iċ-ċelluli 264.7 (Fig. 1). Madankollu, seħħ tnaqqis sinifikanti fl-attività taċ-ċelluli fil-konċentrazzjoni PGE ta '200 mg mL―1 (vijabbiltà taċ-ċelluli: 74.91 ± 1.574 fil-mija). Għalhekk, firxa ta' dożaġġ ta' 10-100 mg mL―1 (Ir-rata ta' estrazzjoni ta' PGE fi Platycodon Grandiflorum kienet 8.9 fil-mija. Konċentrazzjoni ta' 10-100 mg mL―1 ta' PGE hija ekwivalenti għal 0.11-1.12 mg mL―1 ta' Platycodon Grandiflorum Iż-żieda ta '1 mL ta' medju li fih il-mediċina għal kull bir hija ekwivalenti għaż-żieda ta '0.11-0.12 mg ta' Platycodon Grandiflorum.) għandha tintgħażel. Hawnhekk, 10 mg mL―1, 50 mg mL―1, u 100 mg mL―1 (konċentrazzjoni ta' materjali mediċinali tal-pjanti: 0.11 mg mL―1, 0.56 mg mL―1, 1.12 mg mL―1, rispettivament) intgħażlu bħala konċentrazzjonijiet baxxi, medji u għoljin.
L-attività taċ-ċelluli B16F10 kienet kemmxejn differenti minn dik ta '264.7 ċelluli. Meta l-konċentrazzjoni PGE kienet 10-200 mg mL―1 (vijabbiltà taċ-ċelluli: 99.03 ± 1.965 fil-mija -91.48 ± 1.382 fil-mija), l-attività taċ-ċelloli B16F10 ma kinitx differenti b'mod sinifikanti minn dik tal-grupp ta 'kontroll. Madankollu, meta l-konċentrazzjoni kienet 250 mg mL―1 (vijabbiltà taċ-ċelluli: 85.69 ± 2.284 fil-mija), l-attività taċ-ċelluli B16F10 bdiet tonqos, u l-attività taċ-ċelluli taħt konċentrazzjoni PGE ta '1000 mg mL―1 (vijabbiltà taċ-ċelluli: 70.75 Għalhekk, firxa ta 'dożaġġ ta' 10-200 m3.337 fil-mija) kienet l-inqas. g mL―1 (Ir-rata ta' estrazzjoni ta' PGE fi Platycodon Grandiflorum kienet ta' 8.9 fil-mija. Konċentrazzjoni ta' 100-200 mg mL―1 ta' PGE hija ekwivalenti għal 1.12-2.24 mg mL―1 ta' Platycodon Grandiflorum. Żieda ta' 1 mL ta' mediċina li jkun fiha medju għal kull bir huwa ekwivalenti għaż-żieda ta '1.12– 2.24 mg ta' Platycodon Grandiflorum.) għandhom jintgħażlu. Hawnhekk, 100 mg mL―1, 150 mg mL―1, u 200 mg mL―1 (konċentrazzjoni ta' materjali mediċinali tal-pjanti: 1.12 mg mL―1, 1.68 mg mL―1 2.24 mg mL―1, rispettivament ) ġew magħżula bħala konċentrazzjonijiet baxxi, medji u għoljin, rispettivament (Fig. 2).
3.2. Kapaċità antiossidanti ta 'PGE
Intużaw testijiet ta' tneħħija tar-radikali ħielsa DPPH u ABTS biex titkejjel l-attività antiossidant tal-PGE. L-attivitajiet ta' tneħħija ta' PGE lejn radikali DPPH u ABTS ġew determinati taħt konċentrazzjonijiet differenti ta' PGE (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg mL― 1). Platycodin D u aċidu askorbiku ntużaw bħala l-kontroll pożittiv. Kif muri fil-Fig. 3, l-attività tat-tkessiħ ta 'PGE lejn radikali ħielsa DPPH u ABTS żdiedet b'mod dipendenti fuq id-doża, simili għar-riżultati tal-grupp ta' kontroll pożittiv. Meta l-konċentrazzjoni ta 'PGE kienet 6.25 mg mL― 1, l-attività ta' scavenging lejn ir-radikali DPPH kienet ta '98.03 ±0.60 fil-mija, kważi l-istess bħall-attività ta' scavenging ta 'aċidu askorbiku. Barra minn hekk, il-PGE wera wkoll attività qawwija ta' scavenging lejn ABTS radikali (84.30 ± 0.53 fil-mija), li kienet ogħla minn dik tal-grupp ta 'kontroll platycodin D.
3.3. Effett ta 'tnaqqis PGE fuq rispons infjammatorju stimulat mill-LPS ta' makrofaġi RAW264.7
Skont ir-riżultati tal-effett tal-PGE fuq l-attività tal-makrofaġi RAW264.7 fit-Taqsima 3.1, konċentrazzjonijiet PGE ta '10, 50, u 100 mg mL―1 ġew magħżula bħala dożi baxxi, medji u għoljin, rispettivament, biex jittestjaw l-effett ta 'PGE fuq infjammazzjoni makrofaġi RAW264.7 stimulata minn LPS. Kif muri f'Fig. 4, il-PGE naqqas b'mod dipendenti fuq id-doża l-produzzjoni ta 'NO fil-makrofaġi RAW264.7 stimulati bl-LPS u naqqas b'mod dipendenti fuq id-doża l-livelli ta' fatturi infjammatorji IL-6 u TNF-a.
3.4. Effetti tal-PGE fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ, il-kontenut tal-melanin f'melanoċiti B16F10, u l-attività tat-tyrosinase intraċellulari
Kif muri fil-Fig. 5, l-attività inibitorja tat-tyrosinase ta 'PGE żdiedet b'mod sinifikanti biż-żieda fil-konċentrazzjoni tal-estratt. Aktar ma tkun għolja l-konċentrazzjoni ta 'PGE, aktar tkun b'saħħitha l-attività inibitorja ta' tyrosinase. L-attivitajiet inibitorji tat-tyrosinase ta' PGE f'0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, u 3.0 mg mL―1 kienu 6{ {29}}.29 fil-mija, 79.32 fil-mija, 85.14 fil-mija, 95.23 fil-mija, 96.43 fil-mija, u 97.71 fil-mija, rispettivament. Madankollu, meta l-konċentrazzjoni PGE kienet 2.5–3.0 mg mL― 1, l-attività inibitorja tat-tyrosinase ma żdiedetx b'mod sinifikanti; għalhekk, ma kienx meħtieġ li jsiru esperimenti b'konċentrazzjonijiet ogħla. Taħt l-istess kundizzjonijiet, ir-rata ta 'inibizzjoni ta' 3.0 mg mL‵1 PGE (konċentrazzjoni ta 'materjali mediċinali tal-pjanti: 33.71 mg mL―1) kienet simili għal dik ta' arbutin (3 mg mL―1, 96.97 ±1.849 fil-mija) u ogħla minn dik ta' platycodin D (3 mg mL―1, 81.67 ± 2.331 fil-mija).
Skont l-effett tal-PGE fuq l-attività tal-melanoċiti B16F10 fit-Taqsima 3.1, konċentrazzjonijiet PGE ta’ 100, 150, u 200 mg mL―1 PGE ġew magħżula bħala dożi baxxi, medji u għoljin biex jittestjaw l-effett tal-PGE fuq il-kontenut tal-melanin u attività tyrosinase ta 'melanocytes B16F10 stimulati minn a-MSH. Kif muri fil-Fig. 6, l-attività tyrosinase taċ-ċelloli B16F10 stimulati minn 100 nM a-MSH (grupp ta 'kontroll) kienet ogħla b'mod sinifikanti minn dik ta' ċelloli mhux stimulati. Biż-żieda fil-konċentrazzjoni PGE, l-attivitajiet inibitorji tal-produzzjoni ta 'tyrosinase u melanin fuq ċelluli B16F10 żdiedu b'mod sinifikanti b'mod dipendenti fuq id-doża. Biż-żieda fil-ħin ta 'amministrazzjoni, l-attività inibitorja ta' PGE fuq iċ-ċelluli B16F10 tyrosinase u l-produzzjoni tal-melanin żdiedet gradwalment.
Għal aktar informazzjoni: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
