Phenylethanoid Glycosides: Metodu Għas-Separazzjoni Totali Glycosides Ta Phenethyl Alcohol U L-Effett Inibitorju tiegħu fuq Monoamine Oxidase-A

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com

Iżolament U Identifikazzjoni ta' Phenylethanoid Glycosides Minn Aloysia Polystachya U l-Attività Tagħha Bħala Inibituri ta' Monoamine Oxidase-A

Awturi

Ana Maria S. Pereira1, Camila C. Guimarães1, Sarazete IV Pereira1, Eduardo J. Crevelin2, Gustavo HT Pinto1, Lucas JF Morel1, Bianca W. Bertoni1, Suzelei C. França1, Silvia H. Taleb-Contini1

Affiljazzjonijiet

1 Departamento de Biotecnologia em Plantas Medicinais, Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP), Ribeirão Preto, SP, Brażil

2 Departamento de Química, Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de

São Paulo (USP), Monte Alegre, Ribeirão Preto, SP, Brażil

Kliem ewlieni:aloysia polystachya, verbenaceae, attività antidipressanti, feniletanojdi, inibituri tal-monoamine oxidase, Acteoside

Astratt

Aloysia polystachya jintuża bħala sedattiv u antidipressant mill-popolazzjonijiet indiġeni tal-Arġentina u l-Paragwaj, iżda l-komposti assoċjati ma 'dawn l-attivitajiet ma ġewx determinati. Aħna sseparajna u identifikajna l-kostitwenti ewlenin ta 'l-estratt idroetanoliku ta' A. polystachya permezz ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni ultra-spettrometrija tal-massa u kkonfermajna l-preżenza ta 'acteoside, isoacteoside, 6'-acetylatteoside, u 4',4''',5, 5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''-trimethoxy-[C7– O–C7'']-biflavone permezz ta' spettroskopija NMR. Attivitajiet inibitorji tal-estratt idroetanoliku u purifikatphenylethanoid glycosideskontra monoamine oxidase-A ġew evalwati bl-użu ta 'assaġġ fluworometriku standard. L-estratt idroetanoliku inibixxi l-attività tal-monoamine oxidase-A b'mod dipendenti mid-doża b'IC50 ta' 9.2 µg/mL, filwaqt li l-inibitur selettiv tal-monoamine oxidase clorgyline wera IC50 ta' 0.06 µg/mL ( 0.22 µM).Acteosidekien l-aktar inibitur b'saħħtu ta 'monoamine oxidase-A (valur IC50 ta' 5 µM), filwaqt li isoacteoside u 6'-acetylatteoside wrew valuri IC50 ta 'madwar 10 µM. Ir-riżultati wrew li phenylethanoids minn estratt idroetanoliku ta 'A. polystachya instabu li għandhom attività inibitorja kontra monoamine oxidase-A. Huwa probabbli li l-mod ta 'azzjoni ta' l-acteosides huwa multi-mira, li jinvolvi t-tnaqqis ta 'molekuli infjammatorji u newtralizzazzjoni ta' reazzjonijiet ta 'ossidazzjoni kif ukoll inibizzjoni ta' monoamine oxidase-A.

Introduzzjoni

Skont rapport reċenti mill-Organizzazzjoni Dinjija tas-Saħħa [1], aktar minn 320 miljun ruħ (4.4 fil-mija tal-popolazzjoni dinjija) ibatu minn dipressjoni u disturbi ta’ ansjetà, b’madwar 800 elf suwiċidju fis-sena jiġu kommessi bħala riżultat ta’ dawn il-kwistjonijiet mentali. . Għalkemm trattament b'antidipressanti sintetiċi

huwa disponibbli, ħafna pazjenti jsofru minn effetti sekondarji bħal ħalq xott, stitikezza, sturdament, vista mċajpra, żieda fl-aptit, żieda fil-piż, nuqqas ta’ rqad, u problemi tal-kliewi [2]. Għal din ir-raġuni, approċċi li jużaw mediċina komplementari u alternattiva, inkluża l-fitoterapija, intużaw fit-trattament ta 'diversi tipi ta' disturbi mentali [3].

Cistanche deserticola għandha ħafna effetti, ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Diversi studji prekliniċi u kliniċi pprovdew evidenza b'appoġġ għall-benefiċċji ta' mediċini bbażati fuq il-pjanti fit-trattament ta' disturbi ta' ansjetà ġenerali u speċifiċi [4, 5]. Ta’ interess partikolari huma investigazzjonijiet dwar il-proprjetajiet ansjolitiċi ta’ Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae), speċi aromatika misjuba prinċipalment fl-Arġentina u l-Paragwaj. Skont studji etnofarmakoloġiċi, il-popolazzjonijiet lokali jużaw il-pjanta, li hija komunement magħrufa bħala burrito, bħala toniku diġestiv, sedattiv u antidipressant [6, 7]. Għalkemm il-partijiet prop-ansjolitiċi u antidipressanti ta 'estratti idroetanoliċi minn A. polystachya ġew ikkonfermati minn studji prekliniċi [8-10], ma saru l-ebda investigazzjonijiet fitokimiċi bil-għan li jiġu identifikati l-komposti assoċjati ma' dawn l-attivitajiet.

Preċedentement intwera li l-attivitajiet antidipressanti ta 'xi pjanti mediċinali, pereżempju, Hypericum perforatum L. (Hypericaceae) u Peganum harmala L. (Nitrariaceae), huma assoċjati mal-inibizzjoni ta' monoamine oxidase-A (MAO-A) [11] –13]. Il-familja MAO hija mqassma fis-sistemi nervużi ċentrali u periferali u l-espressjoni żejda ta 'dawn l-enzimi tippromwovi d-deaminazzjoni ossidattiva ta' monoamini bi tnaqqis fil-livelli tan-newrotrasmettituri serotonin, norepinephrine, u dopamine, li jirriżultaw fil-bidu ta 'disturbi psikjatriċi. Tali proċessi ta 'deamination jiġġeneraw ukoll sustanzi bħall-perossidu tal-idroġenu, radikali ħielsa mill-ossiġnu, u aldeidi li huma responsabbli għall-istress ossidattiv taċ-ċelloli. MAOs jeżistu f'żewġ iżoformi ewlenin li huma differenti fir-rigward tad-distribuzzjoni, l-ispeċifiċità tas-sottostrat, u s-sensittività għall-inibituri. L-isoforma MAO-A għandha rwol importanti fid-depressjoni u d-disturbi ta 'ansjetà, filwaqt li MAO-B hija involuta f'mard newrodeġenerattiv [13-17].

Fid-dawl ta 'hawn fuq, aħna ipoteżijna li l-proprjetajiet ansjolitiċi u antidipressanti ta' A. polystachya joħorġu, għall-inqas parzjalment, mill-preżenza ta 'inibituri ta' MAO-A. Sabiex tiġi ttestjata din l-ipoteżi, aħna identifikajna l-prinċipji attivi preżenti fl-estratt idro-etanoliku mill-weraq ta 'A. polystachya u evalwajna l-effetti tal-estratt mhux raffinat u l-kostitwenti ewlenin iżolati minnhom fuq l-attività MAO-A.

Riżultati u diskussjoni

L-estratt idroetanoliku mill-weraq ta 'A. polystachya ġie sottomess għal spettrometrija tal-massa ta' kromatografija likwida ultra-prestazzjoni (UPLC-MS), u l-kromatogramma hekk miksuba hija pre- scented f'▶Fig. 1a. Il-komponenti ewlenin tal-estratt ġew ippurifikati bil-kromatografija tal-kolonna u l-kromatografija likwida ta’ prestazzjoni għolja b’fażi inversa (RP-HPLC), u identifikati bħalaacteoside(syn verbascoside), isoacteoside, 6'-acetylatteoside, u 4',4''',5,5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''-trimethoxy-[C7–O– C7'']-biflavone b'paragun ta' 1H- u 13C-NMR tagħhom, HSQC, HMBC (▶Tabella 1S, 2S, Informazzjoni ta' Appoġġ), u data MS (▶Fig. 1b-e) b'valuri rrappurtati fil-letteratura [18 –20]. Il-konċentrazzjoni ta 'acteosidefl-estratt idroetanoliku, kif determinat mill-HPLC, kien 108.65 ± 1.3 µg/mg ta 'estratt imnixxef. Dan jirrappreżenta l-ewwel rekord tal-kostitwenti tal-estratti tal-weraq minn A. polystachya, għalkemm iż-żejt essenzjali tal-pjanta ġie analizzat qabel u nstab li fih il-monoterpenes carvone u limonene bħala l-komponenti ewlenin [21].

L-estratt idroetanoliku mhux raffinat mill-weraq ta 'A. polystachya inibixxa l-attività MAO-A b'mod dipendenti mid-doża (▶Fig. 2a) b'IC50 ta' 9.2 µg/mL, filwaqt li l-clorgyline ta' inibitur selettiv MAO wera IC5 0 ta' 0.06 µg/mL (0.22 µM). Il-purifikatacteosideswera wkoll attivitajiet inibitorji kontra MAO-A (▶Fig. 2b), b'acteoside jippreżenta l-inqas valur IC50 ta' 5 µM (3.1 µg/mL) segwit minn isoacteoside b'IC50 ta' 10.1 µM (6.3 µg/mL) u 6'- acetylatteoside b'IC50 ta' 9.5 µM (6.3 µg/mL). L-inibizzjoni ta 'MAO-A twassal għall-istabbiliment mill-ġdid tal-livelli ta' serotonin, norepinephrine, dopamine, u tyramine, li huma newrotrasmettituri ewlenin fil-kontroll tal-ansjetà u d-dipressjoni [16]. Għalhekk, il-preżenza ta 'diversi inibituri MAO-A fil-weraq ta' A. polystachya tispjega, għall-inqas parzjalment, l-attività antidipressanti u ansjolitika rrappurtata qabel tal-ispeċi [8-10].

L-użu ta 'taħlitiet ta' pjanti b'ħafna komponenti jista 'jkun ta' vantaġġ fit-trattament ta 'mard ta' etjoloġija kumplessa bħal ansjetà, depressjoni, u kundizzjonijiet newroloġiċi oħra. Bħalissa, l-użu ta 'phytomedicines fit-trattament ta' mard li jaffettwa s-sistema nervuża huwa bbażat fuq il-paradigma ta 'ligands multi-mira diretti,

jiġifieri, farmaċewtiċi li għandhom attivitajiet multi-mira li jirriżultaw mill-preżenza ta 'sustanzi bħal polifenoli bi proprjetajiet anti-infjammatorji, antiossidanti, u inibitorji MAO li huma kapaċi jagħtu newroprotezzjoni [20, 22-25].

Ta 'min jinnota, madankollu, li l-karattru polari ta' sustanzi polifenoliċi jista 'jfixkel l-interazzjonijiet mal-miri molekulari tagħhom. Madankollu, studji kliniċi wrew li l-kuntatt bejn il-polifenoli u l-metaboliti sekondarji mhux polari preżenti fl-estratti jistgħu jimmodifikaw il-permeabilità tal-membrani taċ-ċelluli u jiffaċilitaw l-assorbiment ta 'komposti polari [23]. Għalhekk, estratti kumplessi tal-pjanti li fihom aġenti multi-mira li jinteraġixxu mar-riċetturi tagħhom b'mod plejotropiku jiġġeneraw sinerġiżmu farmakoloġiku li jaffettwa bosta proċessi, inkluż il-moviment ta 'metaboliti polari madwar membrani taċ-ċelluli. F'dan il-kuntest, Li et al. [26] uża mudell ta’ zebrafish biex juri danacteosidejista 'jippenetra l-barriera tad-demm-moħħ, u ppropona li l-phenylethanoid glycoside jista' jkollu effett terapewtiku potenzjali fil-marda ta 'Parkinson.

In-newrotrażmettituri monoaminerġiċi huma l-miri ewlenin tal-antidipressanti moderni peress li n-nuqqasijiet tagħhom huma responsabbli għas-sintomi debilitanti tad-dipressjoni. Studju reċenti in vivo wera li l-estratti etanoliċi u akwei ta’ Lippia citriodora (Verbenaceae) u l-komponent ewlieni tagħhomacteosideurew effetti ansjolitiċi, ipnotiċi u rilassanti tal-muskoli u dawn il-proprjetajiet ġew attribwiti, parzjalment, għal interazzjoni mar-riċettur ta 'l-aċidu gamma-aminobutyric tat-tip A (GABAA) [27].

Studji kliniċi wrew li mediċini bil-kapaċità li jimblokkaw ċitokini infjammatorji, bħal TNF- , jew komponenti oħra tal-mogħdija tas-sinjalar infjammatorju, pereżempju, cyclooxygenase-2 (COX-2), huma effettivi fit-tnaqqis sintomi depressivi f'pazjenti b'artrite rewmatojde, psorjasi u kanċer, kif ukoll dawk li jbatu minn disturbi psikjatriċi kbar [28]. F'dan il-kuntest, ġie rrappurtat liacteosidejista' jnaqqas il-produzzjoni u r-rilaxx ta' molekuli infjammatorji, bħal nitriku ossidu (NO), TNF- , u interleukin 12 (IL-12) f'makrofaġi stimulati minn lipopolysaccharide/interferon-gamma (LPS/IFN- ) [29] , kif ukoll istamina u aċidu arakidoniku fiċ-ċelloli mast RBL-2H3 [30]. Barra minn hekk,acteosidekapaċi jnaqqas il-livelli ta' TNF-, IL-1, IL-8, IL-6, u NO, u jattiva caspase-1, fattur nukleari-kappa-B

(NF-κB), NO synthase u proteina attivatur-1 [31] indotta minn IL-32 u/jew LPS fiċ-ċelloli TH-1 u makrofaġi [32].

Xi wħud minn dawn il-medjaturi infjammatorji, bħal IFNs, IL-6, IL-8, u IL{-1, instabu f'livelli anormali kemm f'kampjuni ta' tessut periferali kif ukoll post-mortem minn individwi depressi , u kienu relatati mas-sintomi tad-dipressjoni [33]. L-attivazzjoni ta' dawn il-molekuli minn stressors psikosoċjali tista' tippromwovi bidliet funzjonali sinifikanti fil-moħħ, li jwasslu għall-iżvilupp ta' mġieba depressiva u disturbi psikjatriċi oħra. IFNs, IL-1, u TNF-, pereżempju, jistgħu jżidu l-espressjoni u l-funzjoni ta 'serotonin, noradrenaline, u pompi tar-riċetturi tad-dopamine, u b'hekk inaqqsu d-disponibbiltà ta' dawn in-newrotrasmettituri fil-qasma sinaptika [28]. Barra minn hekk, IFN- , IL-6, TNF- , u stress ossidattiv jistgħu jattivaw indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO), enzima responsabbli għad-degradazzjoni tat-triptofan u, b'hekk, inaqqsu l-konċentrazzjoni tal-prekursur primarju ta' sintesi tas-serotonin [34].

Acteoside, isoacteoside, u 6'-acetylatteoside fihom porzjonijiet ta 'hydroxy- phenylethyl u caffeoyl li huma magħrufa li huma assoċjati ma' proprjetajiet antiossidanti [35, 36], u l-acteoside innifsu juri attività antiossidant konsiderevoli [37]. Studji wrew liacteosidejinibixxi l-aggregazzjoni ta '-amyloid peptide (A) b'mod dipendenti mid-doża, jiffunzjona bħala aġent newroprotettiv, u jsaħħaħ il-memorja, u dawn il-proprjetajiet ġew attribwiti għall-attività antiossidant tal-aġent [38, 39]. Meta wieħed iqis li bosta speċi fenoliċi b'ħafna proprjetajiet antiossidanti jintużaw fit-trattament ta 'disturbi newroloġiċi [15], ġie ssuġġerit li l-effetti antidipressanti u ansjolitiċi tal-phenylethanoid glycosidesiżolati minn A. polystachya jistgħu jirriżultaw ukoll mill-attivitajiet anti-ossidanti tagħhom. Din is-suppożizzjoni kienet appoġġjata minn Xu et al. [40], li ppreżenta evidenza dwar ir-relazzjoni bejn iż-żieda fl-istress ossidattiv u d-dipressjoni/ansjetà.

Ibbażat fuq dan ta 'hawn fuq, nikkonkludu li l-proprjetajiet antidipressanti tal-estratt idroetanoliku mill-weraq ta' A. polystachya, u tal-feniletanojdi purifikati iżolati minnu, jistgħu jiġu spjegati b'modi ta 'azzjoni multi-mira li jinvolvu l-inibizzjoni ta' MAO-A, downregulation ta ' molekuli infjammatorji, u newtralizzazzjoni ta 'reazzjonijiet ta' ossidazzjoni. Għalhekk, ir-riżultati ppreżentati hawnhekk isostnu l-ipoteżi oriġinali tagħna li l-attivitajiet ansjolitiċi u antidipressanti tal-estratt idroetanoliku ta 'A. polystachya jirriżultaw, għall-inqas parzjalment, mill-inibizzjoni ta' MAO-A. Madankollu, ir-relazzjoni struttura-attività tal-phenylethanoid glycosidesidentifikati f'dan l-istudju jeħtieġ aktar attenzjoni sabiex molekuli ġodda jkunu jistgħu jiġu ddisinjati għat-trattament ta' disturbi newroloġiċi speċifiċi.

Materjali u metodi

Materjal tal-pjanti

Weraq ta’ A. polystachya nħasad fil-Farmacia da Na- tureza da Terra de Ismael (Jardinópolis, SP, Brażil) f’Jannar 2016. Materjal tal-pjanti ġie identifikat minn Dr Lúcia Rossi (Instituto Botânico, São Paulo, SP, Brażil), u kampjun ta’ voucher ġie depożitat fl-Erbarju tal-Pjanti Mediċinali fl-UNAERP bin-numru tal-voucher

HPM-1213.

HPM-1213. Il-permess biex jiġu evalwati l-bijoattivitajiet tal-estratti mill-pjanti Brażiljani ngħata mill-Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis ​​(nru 02001.005074/ 2011-19).

Preparazzjoni ta' l-estratt idroetanoliku ta' Aloysia polystachya

Weraq (1000 g) ġew imnixxfa għal 72 siegħa f'forn ta 'l-arja li jiċċirkola f'45 grad , pulverizzat, u mgħoddi minn għarbiel tal-malja 40-. Il-materjal trab kien mgħaddas fl-ilma: etanol (20:80; v/v) għal 7 ijiem u sussegwentement iffiltrat minn karta tal-filtru Whatman Nru 41. Il-filtrat tnaqqas għan-nixfa fuq evaporatur li jdur u lajofilizzat biex jagħti

130.2 g ta 'estratt mhux raffinat niexef, li jirriżulta fi proporzjon ta' estratt tad-droga ta '7.6:1.

Separazzjoni u identifikazzjoni ta' kostitwenti permezz ta' kromatografija likwida ta' prestazzjoni ultra-spettrometrija tal-massa

Analiżi kromatografiċi saru bl-użu ta 'sistema Waters Acquity UPLC H-Class mgħammra b'ditekter ta' diode array (DAD) u spettrometru tal-massa quadrupole tandem Waters Xevo TQ-S b'sors Z-spray li jaħdem fil-modalità ta 'jone negattiv. Soluzzjonijiet tal-ħażniet li fihom 1.0 mg/mL ta' estratt jew l-istandardsacteoside, isoacteoside, 6'-acetylatteoside, u 4',4''',5,5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''- trimethoxy-[C7–O–C7''] -flavone fil-metanol ta 'grad LC ġew ippreparati separatament, bl-ivvibrar għal 30 min kull wieħed meta meħtieġ, u ffiltrati permezz ta' 0.45 μm Millipore filters (Merck Millipore). soluzzjonijiet ġew dilwiti għal 10 µg/mL bil-metanol, u alikwoti (5 μL) ġew injettati fuq kolonna Sigma-Aldrich Ascentis Express C18 (100 × 4.6 mm id; daqs tal-partiċelli ta' 2.7 µm). Il-fażi mobbli kienet tikkonsisti f'ilma li fih 0.1 fil-mija aċidu formiku (solvent A) u metanol li fih 0.1 fil-mija aċidu formiku (solvent B) fornut b'rata ta 'fluss ta' 0.5 mL/ min skond il-profil ta 'eluzzjoni: iżokratiku bi 3 fil-mija B bejn 0 u 4 min, segwit minn gradjenti lineari minn 3 sa 60 fil-mija B bejn 4 u 19 min u minn 60 sa 90 fil-mija B bejn 19 u 23 min, u final- ly lura għal 3 fil-mija B bejn 23 u 28 min. L-effluwent ġie mmonitorjat minn DAD fil-medda ta’ 210 sa 720 nm u minn MS bis-sors ottimizzat u l-parametri operattivi kif ġej: volt kapillari-

età 2.50 kV, temperatura tas-sors Z-sprej 150 grad, temperatura ta 'desolvation (N2) 350 grad, fluss tal-gass desolvation 600 L/h, u firxa ta' massa ta 'm/z 150 sa 600 fil-modalità ta' skan sħiħ.

Purifikazzjoni ta' kostitwenti identifikati

L-estratt idroetanoliku mhux raffinat (10 g) ġie maħlul fl-ilma: etanol (50:50; v/v) u maqsum konsekuttivament kontra hexane, ethyl acetate, u n-butanol. Il-frazzjoni tal-butanol kienet ikkonċentrata fuq evaporatur li jdur u kampjun ta' 3g tal-estratt frazzjonat ġie applikat għal kolonna tal-ħġieġ (10 × 3 cm od) mimlija b'ġel tas-silika C-18 RP (230-400 malji; Sigma; -Aldrich) u eluwit bl-ilma, segwit minn taħlitiet suċċessivi ta 'ilma: metanol (90:10, 50:50, u 10:90; v/v). Is-subfrazzjoni miksuba permezz ta' elużjoni bl-ilma: metanol (90:10; v/v) ġiet ippurifikata aktar permezz ta' RP-HPLC bl-użu ta' Sistema Shimadzu LC-20AP akkoppjata ma' SPD-20A detector UV/Vis u mgħammra b'kolonna Phenomenex Luna® C-18 (250 × 10 mm id; daqs tal-partiċelli ta' 5 μm). Il-fażi mobbli kienet l-ilma: metanol li beda f'90:10 (v/v) u jinbidel għal 30:70 (v/v) f'100 min biex jagħti l-erba' komposti magħrufaacteoside(750 mg), isoacteoside (430 mg), 6'-acetylatteoside (42 mg), u 4',4''',5,5''-tetradroxy-6,6'',3''' -trimetossi-[C7–O–C7'']-flavone (13 mg). Ir-rata tal-fluss tal-fażi mobbli kienet 1 mL/min, il-volum tal-injezzjoni kien 500 μL, il-kromatogramma ġiet irreġistrata f'340 nm, u l-ispettri UV nkisbu fil-medda ta '240 sa 400 nm. L-identitajiet tal-kostitwenti purifikati ġew ikkonfermati mill-ispettri 1H- (500 MHz) u 13C-NMR (125 MHz) tagħhom irreġistrati fuq spettrometru Bruker mudell DPX 500, u tqabbil tad-dejta ma’ dawk disponibbli fil-letteratura [18, 19, 41]. Il-puritajiet tal-komposti iżolati ġew ikkonfermati minn UPLC-DAD-MS (▶Fig. 1b–d) u NMR (▶Fig. S1–S12, Informazzjoni ta 'Appoġġ).

Kwantifikazzjoni ta 'acteoside minn firxa ta' dajowd HPLCditekter

din is-soluzzjoni ġiet analizzata fuq sistema Shimadzu LC{{{{10}}}}APvp akkoppjata ma' SPD-M10Avp DAD u mgħammra b'kolonna Phenomenex Luna C18 (250 × 4.6 mm id, 5 µm) protetti minn prekolonna Phenomenex C18 (4.0 × 3.0 mm id, 5 µm). Is-separazzjonijiet twettqu f'temperatura tal-kamra (22 ± 1 grad ) bl-użu ta 'fażi mobbli li tinkludi aċidu aċetiku 0.1 fil-mija fl-ilma (solvent A) u metanol (solvent B;

JT Baker HPLC grade) fornut b'rata ta' fluss kostanti ta' 1.0 mL/min skond il-programm: gradjent lineari minn 10 sa 70 fil-mija B bejn 0 u 32 min, minn 70 sa 10 fil-mija B bejn 32 u 35 min, u eluzzjoni isokratika finali b'10 fil-mija B bejn 35 u 40 min. Il-wavelength ta 'detezzjoni ġie stabbilit għal 330 nm.

Il-kontenut ta 'acteoside fl-estratt ġie stmat bl-użuacteoside(Sigma-Aldrich; CAS Nru. 61276-17-3) bħala l-istandard estern. Soluzzjonijiet li fihom 500, 250, 125, 62.5, 31.2, u 15.6 ug/ mL tal-istandard ta’ referenza ġew ippreparati, u l-kurvi tal-kalibrazzjoni ġew mibnija billi kull soluzzjoni tiġi soġġetta għal analiżi HPLC fi tliet kopji [42 ]. Il-proporzjon tal-ogħla żona ta 'acteoside standard għall-konċentrazzjoni korrispondenti ta' analit ġie stabbilit permezz ta 'rigressjoni lineari tal-kurvi standard (▶Fig. S13, Informazzjoni ta' Appoġġ). Id-dejta analitika ġiet ivvalidata fir-rigward tal-linearità, il-preċiżjoni u l-eżattezza skont il-linji gwida maħruġa mill-Agência Nacional de Vigilância Sanitária [42]. Il-limiti ta' skoperta (LoD) u kwantifikazzjoni (LoQ) ta' acteoside kienu 0.30 u 0.92 µg/mL, rispettivament.

Assays ta' inibizzjoni ta' monoamine oxidase-A

MAO-A umana rikombinanti, tyramine, clorgyline, vanillic acid, 4-amino antipyrine, u horseradish peroxidase inxtraw mingħand Sigma-Aldrich. L-analiżi ta' inibizzjoni MAO-A twettqu bl-użu ta' pjanċi ta' 96-bjar wara verżjoni modifikata tal-metodu deskritt minn López et al. [43]. Kull bir kien mgħobbi b'50 μL ta' soluzzjoni kromoġenika (0.8 mM aċidu vaniliku, 2.5 mM 4-amino antipyrine, u 4 U/mL horseradish peroxidase f'phosphate buffer f'pH 7.6), 100 μL ta' 3 mM tiramina, u alikwot ta' 50-μL tal-estratt idroetanoliku mhux raffinat jew wieħed mill-feniletanojdi purifikati maħlul fil-metanol. Fl-aħħarnett, 50 μL alikwoti ta '8 U/mL MAO-A ġew miżjuda ma' kull wieħed mill-bjar u l-pjanċa ġiet inkubata f'37 grad għal 30 min, li matulu l-assorbanzi ġew irreġistrati kull 5 min permezz ta 'qarrej tal-mikroplate. Clorgyline (Ikbar minn jew ugwali għal 97 fil-mija GC; Sigma-Aldrich) u metanol ġew inklużi bħala kontrolli pożittivi u negattivi, rispettivament, fuq kull pjanċa tal-assaġġ.

Analiżi statistika

Twettqu tliet valutazzjonijiet indipendenti ta 'attivitajiet inibitorji MAO-A u d-dejta miksuba ġiet analizzata bl-użu ta' softwer Graph-Pad Prism. Il-valuri IC50 ta 'l-estratt idroetanoliku, phenylethanoids purifikati, u l-kontroll pożittiv ġew ikkalkulati permezz ta' rigressjoni mhux lineari, simulazzjoni ta 'plots ta' log (konċentrazzjoni ta 'inibitur) versus inibizzjoni perċentwali normalizzata.

Informazzjoni ta' appoġġ

Spettri H- u 13C-NMR ta'acteoside, isoacteoside, 6'-acetylatteoside, u 4',4''',5,5''-tetrahydroxy-6,6'',3'''-trimethoxy-[C7–O– C7''] -Analiżi ta 'korrelazzjoni ta' flavone u HSQC/HMBC għat-tliet phenylethanoids huma disponibbli bħala Informazzjoni ta 'Appoġġ.

riċevut 04.06.2018

rivedut fid-19.10.2018

aċċettat fl-24.10.2018

Biblijografija

DOI https://doi.org/10.1055/a-0787-1665

Planta Med Int Open 2019; 6: e1–e6

© Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York ISSN 2509-9264

Korrispondenza

Ana Maria S. Pereira

Departamento de Biotecnologia em Plantas Medicinais

Universidade de Ribeirão Preto Av. Costábile Romano 2201 14096-900 Ribeirânia

Ribeirão Preto, SP

Brażil

Referenzi

[1] Organizzazzjoni Dinjija tas-Saħħa. Depressjoni u Disturbi Mentali Komuni oħra: Estimi tas-Saħħa Globali. Ġinevra: WHO; 2017

[2] Ferguson JM. Mediċini antidipressanti SSRI: Effetti avversi u tollerabilità. Prim Care Companion J Clin Psychiatry 2001; 3: 22–27

[3] van der Watt G, Laugharne J, Janca A. Mediċina komplementari u alternattiva fit-trattament tal-ansjetà u d-dipressjoni. Curr Opin Psikjatrija 2008; 21: 37–42

[4] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Mediċini bbażati fuq il-pjanti għal disturbi ta 'ansjetà, parti 1: Reviżjoni ta' studji prekliniċi. CNS Drogi 2013; 27: 207–219

[5] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. Mediċini bbażati fuq il-pjanti għal disturbi ta 'ansjetà, parti 2: Reviżjoni ta' studji kliniċi b'evidenza preklinika ta 'appoġġ. CNS Drogi 2013; 27: 301–319

[6] Del Vitto LA, Petenatti EM, Petenatti ME. Recursos herbolarios de San Luis (República Argentina). Primera parti: Plantas Nativas. Multequina 1997; 6: 49–66

[7] González Y, Arrúa RD, Rojas GD, García MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito", Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verben-aceae), cultivado en Paraguay. Rojasiana 2014; 13: 31–41

[8] Mora S, Díaz-Véliz G, Millán R, Lungenstrass H, Quirós S, Coto-Morales T, Hellión-Ibarrola MC. Effetti ansjolitiċi u li jixbħu l-antidipressanti tal-estratt idroalkoħoliku minn Aloysia polystachya fil-firien. Pharmacol Biochem Behav 2005; 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S. The anxiolytic-like effects of Aloysia polystachya (Griseb.) Moldenke (Verbenaceae) fil-ġrieden. J Ethnopharma- col 2006; 105: 400–408

[10] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J, De Lima TCM, Mora S. The antidepressant-like effects of Aloysia polystachya (Griseb. ) Moldenke (Verbenaceae) fil-ġrieden. Phytomedicine 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H. -Alkalojdi tal-Carboline f'Peganum harmala u inibizzjoni tal-monoamine oxidase tal-bniedem (MAO). Food Chem Toxicol 2010; 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Identifikazzjoni, okkorrenza u attività ta' alkalojdi quinazoline f'Peganum harmala. Food Chem Toxicol 2017; 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Inibizzjoni tal-monoamine oxidase-A u attività antiossidant assoċjata f'estratti tal-pjanti b'azzjonijiet antidipressanti potenzjali. Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. Inibituri selettivi MAO-B: Lezzjoni minn prodotti naturali. Mol Divers 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, Silva DM, Oliveira DR, Costa EA. Trattament ta 'ansjetà u dipressjoni: Pjanti mediċinali b'mod retrospettiv. Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Fišar Z. Id-drogi huma relatati mal-attività tal-monoamine oxidase. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. Tip A monoamine oxidase u serotonin huma involuti b'mod koordinat f'disturbi depressivi: Minn żbilanċ tan-newrotrasmettitur għal newroġenesi indebolita. J Neural Transm 2017; 125: 53–66