Parti 2:Trapjant ta' PBMCs tal-Fniek Indotti mill-Estratt tal-Bajd tat-Tiġieġ Bħala Trattament Għal Korriment ta' Iskemija-riperfużjoni Renali fil-Fniek

Għal aktar informazzjoni ikkuntattja:tina.xiang@wecistanche.com

Ikklikkja l-link hawn taħt biex tikseb l-1 parti

https://www.xjcistanche.com/news/part-1-transplantation-of-chicken-egg-white-ex-54616513.html

Ikklikkja biex titgħallem aktar informazzjoni. dwar it-titjib tal-kliewi

Riżultati

1. Tikkettar b'suċċess tal-PBMCs b'CFSE

Carboxyfluorescein diacetate u succinimidyl ester(CFSE) tikketta PBMCs esibiti fluworexxenza isfar-aħdar taħt mikroskopju fluworexxenti, kif muri f'Eig 1B. Wara kontrostaining b'DAPI, iċ-ċelloli kollha wrew fluworexxenza blu, kif muri f'Fig 1A, u analiżi tal-koinċidenza fit-tbajja tal-fluworexxenza wriet li ċ-ċelloli ġew ittikkettati b'suċċess, kif muri f'Eig 1C.

2. Identifikazzjoni tal-PBMCs wara l-induzzjoni

2.1.Livelli ta' espressjoni relattiva ta' ġeni taċ-ċelluli somatiċi u relatati mal-multipotenza f'PBMCs mhux indotti u indotti.L-espressjoni ta 'NANOG, OCT4, u SOX2 żdiedet b'mod sinifikanti f'PBMCs stimulati b'estratt ta' abjad tal-bajd tat-tiġieġ, u l-espressjoni tal-ġene taċ-ċelluli somatiċi LMNA naqset (Fig 1D), li indika li ċ-ċelluli ddifferenzjati f'ċelluli multipotenti. L-analiżi statistika wriet li ż-żewġ gruppi kienu differenti b'mod sinifikanti (n=3,p=0.003). Iċ-ċelloli ġew indotti tliet darbiet, u tliet repliki bijoloġiċi ġew inklużi fl-istudju. Id-differenza fil-ġene taċ-ċelluli somatiċi LMNA bejn iż-żewġ gruppi ma kinitx statistikament sinifikanti.

2.2.Il-fattur tal-pluripotenza tal-PBMCs indotti kien ogħla b'mod sinifikanti minn dak tal-PBMCs mhux indotti. Fost iċ-ċelloli mhux indotti,{{0}}.081 fil-mija kienu pożittivi għall-OCT4-PE, filwaqt li 99.3 fil-mija taċ-ċelloli indotti kienu pożittivi għall-OCT4-PE . Il-perċentwali taċ-ċelloli mhux indotti u indotti pożittivi għall-SSEA-4-PE kienu 1.08 fil-mija u 16.5 fil-mija, rispettivament. Barra minn hekk, 0.495 fil-mija taċ-ċelloli mhux indotti kienu pożittivi għal NANOG-PE, filwaqt li 95.8 fil-mija taċ-ċelloli indotti nstabu li kienu pożittivi għal NANOG-PE (Fig 1E-1M). Il-perċentwali taċ-ċelloli tal-kontroll tal-isotip pożittivi għal OCT4-PE, SSEA{-4-PE, u NANOG-PE kienu 0.546 fil-mija, 0.401 fil-mija, u 0.249 fil-mija, rispettivament.

2.3.Analiżi immunoistokimiċi taw riżultati pożittivi għall-PBMCs indotti.Analiżi immunoistokimiċi ta 'OCT4 u NANOG wrew li PBMCs indotti, iżda mhux PBMCs mhux indotti, esprimew dawn il-markaturi (Fig 2A -2 D). Fig2A u 2Cshow PBMCs mhux indotti, u Fig 2B u 2D juru PBMCs indotti. Barra minn hekk, OCT4expression tidher f'Fig 2A u 2B, u Fig 2Cand 2D juru l-espressjoni ta 'NANOG.

2.4.Analiżi Western blot taw riżultati pożittivi għal PBMCs indotti.Skont ir-riżultati tal-Western blot, OCT4 kien espress f'PBMCs indotti iżda mhux f'PBMCs mhux indotti (EFig 2E).

2.5. It-tulijiet relattivi tat-telomeri kienu sinifikament itwal f'PBMCs indotti.Ibbażat fuq ir-riżultati kwantitattivi tal-PCR, it-telomeri ta' PBMCs indotti (1.83807±0.84756) kienu itwal b'mod sinifikanti minn dawk ta' PBMCs mhux indotti (1±0.08307)(Eig 2E, tfisser ± devjazzjonijiet standard , n=5,p=0.013), li indika li ċ-ċelloli ddifferenzjati f'ċelloli staminali żgħar. It-tulijiet relattivi tat-telomeri fil-fatt żdiedu wara d-didifferenzazzjoni.

3. Il-livelli tan-nitroġenu tal-urea fis-serum u tal-krejatinina naqsu fil-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli indotti

Il-grupp ta 'kontroll mudell kellu kontenut ta' nitroġenu ta 'l-urea ta' 22.1 mmol / l u kontenut ta 'krejatinina ta' 452 umol / l. Wara tliet rawnds ta 'trapjant b'ċelluli indotti, il-kontenut tan-nitroġenu tal-urea kien 7 mmol/l, u l-kontenut tal-krejatinina kien 74 μmol/l; dawn il-valuri kienu simili għal-livelli normali. Il-livelli fil-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli mhux indotti baqgħu elevati (Fig 2G). L-analiżi statistika wriet differenzi statistikament sinifikanti fost ir-riżultati tal-erba 'gruppi (p= 0.031).

4. Il-konċentrazzjonijiet tal-proteini urinarji naqsu fil-grupp indott

Il-konċentrazzjoni tal-proteina fl-awrina fil-grupp ta' kontroll mudell kienet 8.17 mg/ml. Wara t-tliet trattamenti, il-konċentrazzjoni tal-proteina urinarja fil-grupp indott kienet 4.35 mg/ml, li kienet simili għal-livell normali. Madankollu, il-kontenut ta 'proteini urinarji tal-grupp mhux indott baqa' għoli f'7.96mg/ml (Fig 2H). L-analiżi statistika wriet differenzi statistikament sinifikanti fost ir-riżultati miksuba mill-erba 'gruppi (p=0.001).

5. Ċelloli ttikkettjati ġew skoperti fil-grupp indott

Kif muri f'Fig3A-3D, ħafna ċelluli fluworexxenti tqassmu fil-kliewi tal-grupp tat-trattament taċ-ċelluli indotti, filwaqt li l-tessuti tal-kliewimit-tliet gruppi l-oħra ma wrew l-ebda ċellula fluworexxenti. Spjegazzjoni possibbli hija li ċ-ċelloli indotti jiġu ttrasportati lejn il-kliewi midruba biex isewwi l-ħsara. Id-distribuzzjoni ta 'PBMCs indotti ttikkettjati b'mod fluworexxenti f'sezzjonijiet tal-kliewi ffriżati ssuġġeriet li dawn iċ-ċelloli kienu involuti fit-tiswija tal-kliewi danneġġjata.

6. L-istruttura tal-kliewi tal-grupp indott uriet fenotip normali

Ibbażat fuq ir-riżultati tat-tbajja tal-ematossilin-eosin(HE), l-istruttura tal-kliewi tal-fniek fil-grupp ta 'kontroll tal-mudell kienet bil-ħsara. Wara t-trattament biċ-ċelloli indotti, il-renalil-istruttura tat-tessut uriet fenotip normali. B'kuntrast, il-ħsara lit-tessut tal-kliewi baqgħet tippersisti fil-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli mhux indotti (Fig 3E -3 H). Il-punteġġ tan-nekrożi tubulari akuta (ATN) huwa muri f'Fig 3I.

7. L-IOD tal-gruppi taċ-ċelloli indotti tnaqqset b'mod sinifikanti

Image-Pro Plus 6.0(Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA) intuża softwer biex twettaq analiżi immunoistokimika tad-densità ottika kumulattiva (IOD). Għal kull grupp, mill-inqas sitt oqsma ta 'ingrandiment ta' 200 × intgħażlu b'mod każwali minn kull taqsima, u nqabdu immaġini. Aħna ppruvajna naraw il-kamp viżiv kollu biex niżguraw li kull ritratt kellu l-istess sfond. Intuża softwer Image-Pro Plus 6.0 biex jintgħażel l-istess kulur kannella bħala standard uniformi biex tiġi ġġudikata t-tebgħa pożittiva fl-immaġini kollha. Kull immaġini ġiet analizzata biex tiddetermina l-IOD ta 'tbajja' pożittiva. L-IOD żdied b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'kontroll tal-mudell, filwaqt li l-IODs tal-gruppi taċ-ċelluli ta' kontroll normali u indotti kienu mnaqqsa u mnaqqsa b'mod sinifikanti, rispettivament. L-IOD tal-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli mhux indotti ma kienx imnaqqas b'mod notevoli meta mqabbel ma' dak tal-grupp ta 'kontroll mudell (Fig3). L-analiżi statistika wriet differenzi sinifikanti fost ir-riżultati tal-erba 'gruppi (p =0.001).

8. Il-fibrożi tjiebet fil-grupp indott

Ġiet osservata depożizzjoni sostanzjali tal-fibra tal-kollaġen fil-grupp ta 'kontroll tal-mudell, u seħħet fibrożi serja. Din il-fibrożi ġiet imtejba jew eliminata fil-grupp tat-trattament taċ-ċelluli indotti, filwaqt li fibrożi severa kienet għadha osservata fil-grupp ittrattat taċ-ċelluli mhux indotti (Eig 4A-4D).

9. Tħaxxin tal-membrana tal-kantina ma kienx osservat fil-grupp indott

Il-ħxuna tal-membrana tal-kantina glomerulari, il-membrana bażilari tal-kapsula renali, u l-membrana tubulointerstizjali żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'kontroll mudell. Fil-grupp tat-trattament taċ-ċelluli indotti, il-membrana tal-kantina ma wriet l-ebda tħaxxin sinifikanti, filwaqt li membrani tal-kantina eħxen xorta kienu osservati fil-grupp tat-trattament taċ-ċelluli mhux indotti (Fig 4E -4H). Il-punteġġi tal-ħxuna tal-membrana tal-kantina huma murija f'Fig 4I.

10. Ċelloli trapjantati differenzjati f'ċelluli epiteljali tubulari

Ir-riżultati tal-immunofluworexxenza wrew li ċ-ċelloli trapjantati wrew fluworexxenza ħadra u ħamra fl-istess ħin, li indika li ċ-ċelloli trapjantati kienu differenzjati f'ċelluli epiteljali tubulari (TECs) (Fig 4J).

11. Is-sustanzi identifikati żdiedu fil-grupp mudell u naqsu wara t-trattament

Fil-modalità tal-jone negattiv, iż-żewġ sustanzi li wrew livelli miżjuda b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'kontroll tal-mudell kienu 2'-deoxy-D-ribose u N-acetylglucosamine 1-phosphate (Fig 5A). Il-livelli ta 'dawn iż-żewġ komposti tnaqqsu b'mod sinifikanti wara terapija taċ-ċelluli indotta meta mqabbla mal-livelli misjuba fil-grupp ta' kontroll tal-mudell (Fig5A).Fil-mod ta 'jone pożittiv, il-livelli ta' tliet sustanzi (D-pinitol, lysyl-glycine, u glutamyl -asparagine) żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'kontroll tal-mudell (Fig 5B), u l-livelli ta' dawn it-tliet sustanzi tnaqqsu b'mod sinifikanti wara terapija taċ-ċelluli indotta meta mqabbla ma 'dawk misjuba fil-grupp ta' kontroll tal-mudell (Fig5B)

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0244160.g005

Fil-modalità tal-jone negattiv, il-livelli taż-żewġ sustanzi identifikati żdiedu fil-grupp mudell u naqsu wara t-trattament, li indika korrelazzjoni sinifikanti bejn il-livelli taż-żewġ sustanzi.

Fil-modalità tal-jone pożittiv, il-livelli tat-tliet sustanzi identifikati żdiedu fil-grupp ta 'kontroll tal-mudell u naqsu wara t-trattament, li indika korrelazzjonijiet sinifikanti fost il-livelli ta' dawn it-tliet sustanzi.

12. Ġew osservati bidliet sinifikanti fil-metaboliżmu tal-pirimidina u fil-mogħdijiet tal-bijosintesi tal-fenilalanina, tyrosine u tryptophan

Fil-modalità tal-jone negattiv, ġiet skoperta bidla sinifikanti fil-mogħdija tal-metaboliżmu tal-pirimidina bejn il-grupp ta 'kontroll mudell u l-grupp ta' kontroll normali (Eig6A). Barra minn hekk,

bidliet sinifikanti f'din il-mogħdija ġew osservati fil-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli indotti meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll tal-mudell (Fig 6B), li indika li l-mogħdija tal-metaboliżmu tal-pirimidina hija mogħdija mibdula b'mod sinifikanti. Fl-analiżi tal-modalità tal-jone pożittiv, il-mogħdijiet tal-bijosintesi tal-phenylalanine, tyrosine u tryptophan ġew mibdula b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'kontroll mudell meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll normali (Fig 6C), u dawn il-mogħdijiet ġew mibdula b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli indotti meta mqabbla mal- grupp ta 'kontroll tal-mudell (Eig 6D), li indika li l-mogħdijiet tal-bijosintesi tal-phenylalanine, tyrosine, u tryptophan huma mogħdijiet sinifikanti. F'Fig6, kulur tal-bużżieqa aktar skur u volum akbar jindikaw differenza aktar sinifikanti. Kif muri mill-vleġeġ f'Fig 6A u 6B, id-differenza fil-mogħdija tal-metaboliżmu tal-pirimidina hija sinifikanti, u kif indikat mill-vleġeġ f'Fig 6C u 6D, id-differenzi fil-mogħdijiet tal-bijosintesi tal-phenylalanine, tyrosine u tryptophan huma sinifikanti.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0244160.g006

Diskussjoni

Akutakliewikorriment ikkawżat minn iskemija-riperfużjoni hija marda klinika komuni, u r-rata ta 'mortalità ta' pazjenti b'korriment akut fil-kliewi hija ta 'madwar 30 fil-mija sa 50 fil-mija minħabba miżuri ta' trattament limitati[14]. Matul iskemija, l-attivazzjoni tal-enzimi tinduċi qerda taċ-ċitoskeletri, ħsara fil-membrana taċ-ċelluli, u degradazzjoni tad-DNA, li eventwalment twassal għal nekrożi taċ-ċelluli u apoptożi [15]. Iskemija-riperfużjoni jattiva wkoll proteini komplementari, ċitokini, u chemokines, fost molekuli oħra, u l-mekkaniżmi sottostanti l-korriment ta 'iskemija-riperfużjoni huma ta' importanza sostanzjali [16]. Barra minn hekk, ċelloli staminali trapjantati jippromwovu l-migrazzjoni u r-reklutaġġ ta 'ċelloli staminali tal-kliewi residwi lejn is-sit tal-ħsara u jinduċu d-divrenzjar tagħhom f'TECs, iżda l-mekkaniżmu eżatt mhuwiex ċar [17].

Il-mortalità ta' pazjenti b'korriment ta' iskemija-riperfużjoni hija għolja minħabba n-nuqqas ta' trattament kliniku effettiv [18]. Il-kundizzjoni teħtieġ terapija ta’ sostituzzjoni tal-kliewi fit-tul jew tul il-ħajja jewtrapjant tal-kliewi[19]. Il-mekkaniżmu patofiżjoloġiku tal-korriment tal-iskemija-riperfużjoni huwa kkumplikat ħafna u jirriżulta minn bosta interazzjonijiet fost ċelloli infjammatorji, ċelloli endoteljali vaskulari, u ċitokini[20]. F'dawn l-aħħar snin, iċ-ċelloli staminali mesenkimali saru l-fokus tar-riċerka dwar il-korriment tal-iskemija-riperfużjoni [21] u ntwera li jtejbu l-iskemija-riperfużjoni indottakorriment renali. Kif muri fi studji li jużaw mudelli ta 'iskemija-riperfużjoni, iċ-ċelluli staminali mesenkimali għandhom rwol importanti fir-regolazzjoni tal-immunità, li jipparteċipaw fir-rikostruzzjoni vaskulari[22], u jsewwu l-mikroambjent renali billi jxerrdu fatturi antiapoptotiċi parakrini, fatturi mitoġeniċi u fatturi anġjoġeniċi. Studju reċenti li juża ċelloli staminali ta 'oriġini differenti żvela li ċelloli staminali pluripotenti indotti tipi oħra ta' ċelloli staminali [22]. Aħna nemmnu li ċ-ċelloli indotti huma aktar probabbli li jkunu ċelloli staminali mesenkimali minħabba li huma aktar maturi minn ċelloli staminali pluripotenti indotti.

Wara trapjant taċ-ċelloli staminali pluripotenti indotti, molekuli espressi fuq il-wiċċ taċ-ċelloli staminali pluripotenti indotti jinteraġixxu maċ-ċelloli T biex jirregolaw l-attività bijoloġika tagħhom. Iċ-ċelloli T jistgħu jevadu s-sistema immuni wara ħsara u jnaqqsu l-intensità tar-rispons immuni fit-tessut tal-madwar, u dawn iċ-ċelloli għalhekk għandhom rwol fil-protezzjoni tal-funzjoni tat-tessut bil-ħsara sa ċertu punt [23]. Stabbilijna b'suċċess mudell ta 'fenek ta' fibrożi interstizjali renali u wrejna li t-trapjant ta 'ċelloli staminali awtologi indotti jista' jsewwi ħsara fil-kliewi fi żmien 8 ġimgħat [24]. Iċ-ċelloli staminali jipprovdu mikroambjent vantaġġuż għat-tiswija ta 'ħsara epiteljali tubulari renali [24]. F'dan l-esperiment, wara l-amministrazzjoni ta 'tliet trattamenti konsekuttivi ta' kull ġimgħa, il-livelli tal-krejatinina fis-serum u tan-nitroġenu tal-urea fil-grupp tat-trattament taċ-ċelluli indotti ġew restawrati għall-istess livell osservat fil-grupp ta 'kontroll normali, filwaqt li l-livelli fit-trattament taċ-ċelluli mhux indotti u l-kontroll tal-mudell gruppi kienu elevati b'mod sinifikanti.

Kif muri minn Haynesworth et al. [25], iċ-ċelloli staminali mesenkimali inixxu varjetà ta' fatturi ta' tkabbir, fatturi li jistimulaw il-kolonji, molekuli ta' adeżjoni, u interleukins (IL-6, IL-7, IL-8, I{{5 }}, IL-14, u IL-15), li jippromwovu l-mitosi ta 'TECs renali u t-tiswija tat-tessuti u b'hekk jinibixxu l-elevazzjoni tal-konċentrazzjonijiet ta' kreatinina u nitroġenu urea.

Fl-istudju preżenti, il-livelli ta 'espressjoni tal-fatturi ta' pluripotenza SSEA-4, NANOG, u OCT4 f'PBMCs indotti ġew skoperti permezz ta 'ċitometrija tal-fluss, u r-riżultati wrew li PBMCs iddifferenzjati f'ċelluli multipotenti. L-analiżi tal-PCR kwantitattiva wriet li t-telomeri f'PBMCs indotti kienu sinifikament itwal minn dawk f'PBMCs mhux indotti. Ibbażat fuq l-evidenza tagħna, il-PBMCs miksuba minn demm periferali tal-fenek jiddifferenzjaw f'ċelloli staminali multipotenti wara trattament b'estratti ta 'abjad tal-bajd tat-tiġieġ u juru l-karatteristiċi ta' zokk mesenkimali. ċelluli [9], li jippermetti l-parteċipazzjoni eventwali tagħhom fit-tiswija ta 'ħsara renali. Studji wrew li ċ-ċelloli tal-bajd tal-mammiferi u l-estratti taċ-ċelluli tal-bajd ta 'Xenopus jistgħu jipprogrammaw mill-ġdid iċ-ċelloli somatiċi [6,7]. Ir-riċerka preċedenti tagħna wriet li l-estratt tal-bajd tat-tiġieġ jista 'wkoll jipprogramma mill-ġdid iċ-ċelloli somatiċi [5,9]. Il-bajda tat-tiġieġ hija l-akbar ċellula tal-bajd, u l-kapaċità tagħha li tipprogramma mill-ġdid iċ-ċelluli somatiċi għalhekk tavvanza r-riċerka bijoloġika taċ-ċelluli. Iċ-ċellula tal-bajd tal-mammiferi u l-passi ta 'riprogrammar indotti mill-estratt taċ-ċelluli tal-bajd ta' Xenopus huma ingombranti, u l-estratti huma diffiċli biex jinkisbu; madankollu, bajd tat-tiġieġ huma l-akbar ċelluli tal-bajd, u ammont kbir ta 'estratt abjad tal-bajd tat-tiġieġ jista' għalhekk jinkiseb. Jekk il-proċedura titwettaq b'mod sterili, l-estratt miksub m'għandux għalfejn jiġi ffiltrat u sterilizzat. L-attività tal-estratt tista 'tinżamm tajjeb. Aħna rrepejna l-esperiment ta 'induzzjoni bl-użu ta' konċentrazzjonijiet finali ta 'estratt ta' abjad tal-bajd tat-tiġieġ ta '10 fil-mija, 20 fil-mija, 30 fil-mija, 40 fil-mija, u 50 fil-mija biex jinduċu l-PBMCs (ara Sl sa S3 Figs). Hekk kif żdiedet il-konċentrazzjoni tal-estratt tal-abjad tal-bajd tat-tiġieġ, ir-rata pożittiva tal-fattur tal-pluripotenza żdiedet gradwalment, u l-ogħla rata pożittiva nkisbet b'konċentrazzjoni finali ta '50 fil-mija. Madankollu, konċentrazzjoni ta 'estratt ta' abjad tal-bajd tat-tiġieġ ogħla minn 50 fil-mija se taffettwa t-tkabbir taċ-ċelluli. Aħna użajna protease, DNase, u RNase biex lyse l-proteina, DNA, u RNA fl-estratt abjad tal-bajd, rispettivament, u mbagħad wettaq l-esperiment ta 'induzzjoni tagħna. Sibna li l-estratt tal-abjad tal-bajd miksub wara l-lisi tal-proteina m'għadux għandu l-abbiltà li jerġa 'jipprogramma ċ-ċelloli, u l-estratt tal-proteini tat-tiġieġ miksub wara l-lisi tad-DNA u l-RNA għad għandu l-abbiltà li jipprogramma mill-ġdid iċ-ċelloli. Għalhekk, dawn is-sejbiet ikkonfermaw li r-rwol ewlieni tal-estratt għandu l-komponent tal-proteina (riżultati mhux murija).

Aħna analizzajna wkoll kampjuni tad-demm tal-annimali wara ġimgħa ta’ kura. Madankollu, id-differenza fost l-erba 'gruppi ma kinitx sinifikanti; għalhekk, nuru biss ir-riżultati miksuba għall-erba 'gruppi wara tliet trattamenti. Id-distribuzzjoni ta 'PBMCs indotti ttikkettjati b'mod fluworexxenti f'sezzjonijiet tal-kliewi ffriżati ssuġġeriet li dawn iċ-ċelloli kienu involuti fit-tiswija tal-kliewi danneġġjata. It-tbajja 'HE wriet ħsara lill-istruttura tal-kliewi fil-grupp ta' kontroll tal-mudell. Wara t-trattament b'ċelluli indotti, il-kliewi wera struttura normali, filwaqt li ħsara lill-istruttura tal-kliewi kienet osservata fil-grupp ta 'trattament taċ-ċelluli mhux indotti. Wara tliet trattamenti, it-tbajja tat-trikromju ta 'Masson ta' sezzjonijiet tal-kliewi mill-erba 'gruppi żvelat depożizzjoni sostanzjali ta' fibra tal-kollaġen u fibrożi serja fil-grupp ta 'kontroll mudell. Din il-fibrożi ġiet imtejba jew eliminata permezz ta' trattament biċ-ċelluli indotti, filwaqt li fibrożi severa kienet għadha osservata fil-grupp ta' trattament taċ-ċelluli mhux indotti. deoxy-D-ribose u N-acetylglucosamine 1-phosphate fil-grupp ta 'kontroll mudell meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll normali, u l-livelli ta 'dawn is-sustanzi tnaqqsu b'mod sinifikanti fil-grupp ta' trattament taċ-ċelluli indotti meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll mudell. Fil-mod ta 'jone pożittiv, il-livelli ta' ħames sustanzi żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'kontroll mudell meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll normali, u l-livelli ta 'tlieta minn dawn il-ħames sustanzi tnaqqsu b'mod sinifikanti fil-grupp ta' trattament taċ-ċelluli indotti meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll mudell. .

Il-mekkaniżmi ewlenin postulati li huma sottostanti t-tiswija osservata tal-kliewi u t-tnaqqis ta' akkumpanjament fir-rispons infjammatorju huma elenkati hawn taħt. ① Il-PBMCs indotti jiddifferenzjaw f'TECs jew jingħaqdu ma 'ċelloli superstiti biex jippromwovu direttament it-tiswija tat-tessut renali. ②L-effetti sinerġistiċi ta 'ċitokini varji jipprovdu mikroambjent tajjeb għat-tiswija tat-tessuti tal-kliewi [26]. Wara tliet trapjanti ta 'PBMCs indotti, il-funzjoni renali u l-indiċi patoloġiċi reġgħu lura għal-livelli normali, u dawn il-livelli normali baqgħu jippersistu sat-tmiem tal-esperiment, li ssuġġerixxa li ċ-ċelloli staminali multipotenti trapjantati promossi b'mod effettiv it-tiswija tal-istruttura u l-funzjoni tat-tessut renali.

Għalkemm il-mekkaniżmu speċifiku li permezz tiegħu l-PBMCs indotti jippromwovu t-tiswija strutturali u funzjonali tal-kliewi għadu ma ġiex mifhum bis-sħiħ, ir-riżultati ta 'dan l-istudju jissuġġerixxu li t-trapjant ġol-vini ta' PBMCs indotti jippromwovi t-tiswija wara korriment akut tal-kliewi. Dawn ir-riżultati jipprovdu referenza siewja għar-riċerkaturi li jinvestigaw il-funzjoni taċ-ċelloli staminali multipotenti fir-riġenerazzjoni tal-kliewi bil-ħsara u għat-trattament kliniku ta 'mard tal-kliewi akut u kroniku.

Fil-qosor, it-trapjant ta 'ċelluli staminali multipotenti indott għandu sinifikat sostanzjali għat-tiswija taċ-ċelluli parenkimali f'mudelli ta' annimali ta 'insuffiċjenza renali u mard ieħor tal-kliewi.

Konklużjonijiet

It-trattament ta 'PBMCs b'estratt ta' abjad tal-bajd tat-tiġieġ żied b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'ġeni u proteini relatati mal-pluripotenza, li indika li ċ-ċelloli kienu dedifferenzjati f'ċelloli staminali multipotenti. Għalhekk, il-PBMCs indotti jiddifferenzjaw f'ċelloli staminali multipotenti u jistgħu potenzjalment jintużaw biex jittrattawkorriment fil-kliewi. Ir-riċerka futura hija meħtieġa biex tidentifika l-molekuli ewlenin fl-estratt tal-abjad tal-bajd tat-tiġieġ u b'hekk ittejjeb aktar l-effiċjenza tal-induzzjoni.

Referenzi

1. Yuan X, Li D, Chen X, Han C, Xu L, Huang T, et al. Vesicles extraċellulari minn ċelluli stromali mesenkimali mesenkimali derivati ​​minn ċelluli staminali pluripotenti indotti mill-bniedem (hiPSC-MSCs) jipproteġu kontra iskemija renali/korriment ta 'riperfużjoni permezz tal-kunsinna ta' proteina ta 'speċifiċità (SP1) u attivazzjoni traskrizzjoni ta' sphingosine kinase 1 u inibizzjoni tan-nekroptożi. Ċellula Mewt Dis. 2017; 8(12):3200. Epub 2017/12/14. https://doi.org/10. 1038/s41419-017-0041-4 [pii]. PMID: 29233979; PubMed PMCID Ċentrali: PMC5870585.

2. Fahmy SR, Soliman AM, El Ansary M, Elhamid SA, Mohsen H. Effikaċja terapewtika tat-trapjant ta 'ċelluli staminali mesenkimali tal-korda taż-żokra tal-bniedem kontra iskemija renali/korriment ta' riperfużjoni fil-firien. Ċellula tat-Tessut. 2017; 49(3):369–75. Epub 2017/05/10. S0040-8166(16)30171-9 [pii] https://doi.org/10.1016/j.tice. 2017.04.006 PMID: 28476205.

3. Hu H, Zou C. Ċelloli Stem Mesenchymal fil-Kurima Iskemija-Riperfużjoni Renali: Perspettivi Bijoloġiċi u Terapewtiċi. Curr Stem Cell Res Ther. 2017; 12(3):183–7. Epub 2016/10/27. https://doi.org/10. 2174/1574888X11666161024143640 [pii]. PMID: 27781940.

4. Zhou L, Kanzunetta Q, Shen J, Xu L, Xu Z, Wu R, et al. Tqabbil ta 'frazzjoni vaskulari stromali stromali tax-xaħam tal-bniedem u ċelloli staminali mesenkimali derivati ​​mix-xaħam għall-attenwazzjoni ta' iskemija renali akuta/korriment ta 'riperfużjoni. Sci Rep 2017; 7:44058. Epub 2017/03/10. https://doi.org/10.1038/srep44058 [pii]. PMID: 28276451; PubMed PMCID Ċentrali: PMC5343423.

5. Ruan GP, ​​Wang JX, Pang RQ, Yao X, Cai XM, Wang Q, et al. Trattament b'estratti ta 'tiġieġ-abjad tal-bajd jew bajd sħiħ iżomm u jsaħħaħ is-sopravivenza u d-divrenzjar taċ-ċelloli tal-milsa. Ċitoteknoloġija. 2012; 64(5):541–51. Epub 2012/02/22. https://doi.org/10.1007/s10616-012-9431-8 PMID: 22350684; PubMed PMCID Ċentrali: PMC3432533.

6. Miyamoto K, Tsukiyama T, Yang Y, Li N, Minami N, Yamada M, et al. Estratti mingħajr ċelluli minn ooċiti tal-mammiferi jinduċu parzjalment programmazzjoni mill-ġdid nukleari f'ċelloli somatiċi. Biol Reprod. 2009; 80(5):935–43. Epub 2009/01/24. https://doi.org/10.1095/biolreprod.108.073676 [pii]. PMID: 19164171.

7. Alberio R, Johnson AD, Stick R, Campbell KH. Rimodelazzjoni nukleari differenzjali ta 'ċelluli somatiċi mammiferi minn Xenopus laevis oocyte u ċitoplasma tal-bajd. Exp Cell Res. 2005; 307(1):131–41. Epub 2005/06/ 01. S0014-4827(05)00088-1 [pii] https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2005.02.028 PMID: 15922733.

8. Hansis C, Barreto G, Malory N, Niehrs C. Il-programmazzjoni mill-ġdid nukleari ta 'ċelluli somatiċi umani mill-estratt tal-bajd ta' Xenopus teħtieġ BRG1. Curr Biol. 2004; 14(16):1475–80. Epub 2004/08/25. https://doi.org/10. 1016/j.cub.2004.08.031 [pii]. PMID: 15324664.

9. Ruan GP, ​​Yao X, Shu J, Liu JF, Pang RQ, Pan XH. L-estratti tal-abjad tal-bajd tat-tiġieġ jippromwovu l-espressjoni OCT4 u NANOG u t-tkabbir tat-telomeri fiċ-ċelloli 293T. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2017; 63(7):59– 65. Epub 2017/08/26. https://doi.org/10.14715/cmb/2017.63.7.10 PMID: 28838341.

10. Alzahrani FA. Melatonin itejjeb il-potenzjal terapewtiku ta 'eżosomi derivati ​​miċ-ċelloli staminali mesenkimali kontra korriment ta' iskemija-riperfużjoni renali fil-firien. Am J Transl Res. 2019; 11(5):2887–907. Epub 2019/06/21. PMID: 31217862; PubMed PMCID Ċentrali: PMC6556638.

11. Lee KW, Kim TM, Kim KS, Lee S, Cho J, Park JB, et al. Korriment ta 'Iskemija-Riperfużjoni Renali f'Mudell ta' Xadina Dijabetika u Ittestjar Terapewtiku ta 'Ċelloli Stem Mesenchymal Derivati ​​mill-Mudullun tal-Bniedem. J Dijabete Res. 2018; 2018:5182606. Epub 2018/08/30. https://doi.org/10.1155/2018/5182606 PMID: 30155487; PubMed PMCID Ċentrali: PMC6092988.

12. Xie LB, Chen X, Chen B, Wang XD, Jiang R, Lu YP. Effett protettiv taċ-ċelluli staminali mesenkimali tal-mudullun modifikati b'klotho fuq korriment ta' iskemija-riperfużjoni tal-kliewi. Ren Fail. 2019; 41(1):175–82. Epub 2019/04/04. https://doi.org/10.1080/0886022X.2019.1588131 PMID: 30942135; PubMed PMCID Ċentrali: PMC6450585.

13. Zhu G, Pei L, Lin F, Yin H, Li X, He W, et al. Eżosomi minn ċelluli staminali mesenkimali derivati ​​mill-mudullun tal-bniedem jipproteġu kontra iskemija renali/korriment tar-riperfużjoni permezz tat-trasferiment ta' miR-199a-3p. J Cell Physiol. 2019; 234(12):23736–49. Epub 2019/06/11. https://doi.org/10.1002/jcp.28941 PMID: 31180587.

14. Shen B, Liu J, Zhang F, Wang Y, Qin Y, Zhou Z, et al. CCR2 Exosome Pożittiv Meħlus minn Ċelloli Stem Mesenchymal Jrażżan il-Funzjonijiet tal-Makrofaġi u Jtaffi l-Iskemija / Korriment Renali Indott mir-Riperfużjoni. Ċelloli Stem Int. 2016; 2016:1240301. Epub 2016/11/16. https://doi.org/10.1155/2016/ 1240301 PMID: 27843457; PubMed PMCID Ċentrali: PMC5098097.

15. Ying MK, Chen ZM, Wang YC, Feng S, Lin C, Chen FF, et al. [Effett ta' ċelloli staminali mesenkimali metanefriċi wara korriment ta' iskemija-riperfużjoni renali fil-ġrieden]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2016; 96(20):1573– 7. Epub 2016/06/09. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2016.20.006 PMID: 27266685