Part2: Komposti Bijoattivi minn Ephedra Fragilis: Ottimizzazzjoni ta' Estrazzjoni, Karatterizzazzjoni Kimika, Attivitajiet ta' Antiossidanti u Antiglikazzjoni

Għal aktar informazzjoni. kuntatttina.xiang@wecistanche.com

2.7.Attività ta 'Antiglycation

2.7.1.Analiżi UV-Viżibbli

L-ispettru UV-vis huwa teknika veloċi, konsistenti u sempliċi użata komunement biex tiskopri bidliet konformazzjonali ta 'proteini u formazzjoni kumplessa. L-ispettri ta' assorbiment ta' BSA nattiv u glikat inkubat għal 15-il jum fil-preżenza jew in-nuqqas ta' CEE/frazzjonijiet kif ukollquercetin(kontroll pożittiv) huma ppreżentati fil-Figura 3A.

Intwera b'mod ċar li l-BSA indiġeni juri quċċata karatteristika f'入2s0 nm, li huwa l-aktar dovut għall-aċidi amminiċi aromatiċi, inklużi tyrosine, tryptophan, u phenylalanine [47].

Mal-modifika bil-glukożju, l-assorbenza f'λ280 nm kienet 60.57 fil-mija aktar iperkromika minn BSA nattiva. Iż-żieda fl-intensità ta 'assorbiment f'入2s0 nm tista' tiġi attribwita għall-iżvolġiment indott mill-glikazzjoni tal-helix tal-proteina, li jista 'jaffettwa l-funzjoni fiżjoloġika normali tiegħu.

Treatment with CEE/fractions reduced significantly the absorbance at入2so nm compared to glycated BSA, and this reduction varied markedly between fractions according to the solvent polarity. Overall, descending antiglycation activity was portrayed as EAF>WBF>DMF>CCE>WF>HE, li kienu 1.82,1.71,1.57,1.35,1.28,u 1.13-darbiet inqas minn glycated BSA. Madankollu, din l-attività kienet ferm inqas minn dik ta'quercetinużat bħala kontroll pożittiv (2.24-darbiet inqas minn glycated BSA). Għalhekk, jista 'jiġi konkluż b'mod ċar minn studji ta' assorbiment li EAF minn E.fragilis jippossjedi effett protettiv kontra l-iżvolġiment tal-BSA indott mill-glikazzjoni tal-proteini.

2.7.2. Inibizzjoni tal-Glycation tal-Proteina fil-Mudell BSA-Glu

L-AGEs huma grupp eteroġenju ta 'komposti b'karatteristiċi ta' fluworexxenza f'λ440 nm meta eċċitati f'入370 nm. Il-kapaċità ta 'CEE u l-frazzjonijiet varji tagħha minn E. fragilis biex jinibixxu l-formazzjoni ta' AGEs ġiet evalwata bl-użu tal-assaġġ BSA-glucose, u r-riżultati huma ppreżentati fil-Figura 3B.

Kif jidher mill-Figura 3B, ir-rata ta 'inibizzjoni tal-AGEs tal-kampjuni ttestjati kollha wriet xejra 'l fuq biż-żieda tal-konċentrazzjonijiet. F'1 mg/mL, CCE, HE, DME EAE, WBF, WF, u quercetin inibixxu l-formazzjoni ta' AGEs b'53.26,39.83,54.82,76.68,69.09,48.83, u 97.84 fil-mija, rispettivament, wara l-inkubazzjoni għal 15-il jum. L-EAF(ICs =0.375±{0.034 mg/mL)kien l-aktar inibitur effettiv tal-AGEs fost il-frazzjonijiet kollha, segwit minn WBF, DMF, CCE, u WF b'IC5 0 valuri ta' 0.595 ± {{3{0}}.{047, 0.857 ± 0.018, 0.951 ± 0.099, u 1.044± 0.032 mg/mL, rispettivament. HF wera l-iktar attività dgħajfa bil-valur ICso bħala 1.212±0.063 mg/mL.

L-għoliantiglikazzjoniil-potenzjal ta 'EAF jista' jkun dovut għall-ammont għoli ta 'kontenuti fenoliċi u flavonoid, li ġew deskritti bħala inibituri tajbin ħafna tal-formazzjoni ta' AGEs [48]. Antiglycation ogħla ta 'l-EAF ta' Liquidambar formosana Estratt tal-weraq Hance kien irrappurtat ukoll minn Zhang et al. [31]meta mqabbel ma' dak tal-frazzjonijiet tad-diklorometan, n-butanol, u ilma tiegħu.

Kif mogħti fit-Tabella 5, l-inibizzjoni tal-AGEs kienet korrelata b'mod qawwi b'mod pożittiv kemm ma' TF(r=0.950;p<0.01)and tp(r=""><0.01)contents, which="" were="" in="" line="" with="" previously="" reported="" studies="" [2,29].="" the="" ages="" inhibition="" was="" also="" correlated="" in="" a="" positive="" way="" to="" dpph",abts,h2o2,reducing="" power,="" tac,andβ-carotene="" assays="" withr="">

r=0.914,r=0.983, r=0.975,r=0.923, u r=0.963 (p<0.01),respectively. these="" reflected="" that="" ages="" inhibition="" is="" linked="" to="" the="" efficiency="" of="" primary="" antioxidants="" [6].="" kaewseejan="" and="" siriamornpun="" [29]="" also="" reported="" that="" phenolic="" compounds="" prevented="" the="" formation="" of="" ages="" through="" its="">tneħħija tar-radikali ħielsauantiossidantkapaċitajiet.

2.7.3. Effetti fuq l-Ossidazzjoni tal-Proteina Indotta mill-Glycation

Glycation ta 'proteini (reazzjoni Maillard) hija reazzjoni mibdija mit-twaħħil kovalenti ta' tnaqqis taz-zokkor ma 'grupp amminiku ta' proteini (prinċipalment residwi lysine u arginine), li twassal għall-produzzjoni ta 'prodott instabbli u riversibbli jiġifieri, bażi ta' Schiff li tkompli tgħaddi minn riarranġament Amadori biex jiffurmaw prodotti ta 'Amadori bl-isem ta' ketamina aktar stabbli. Sussegwentement, il-prodotti Amadori jgħaddu minn reazzjoni enediol biex jipproduċu proteini karbonilati [48]. Id-degradazzjoni ta 'din il-ketamina tista' tiġġeneraradikali ħielsabħal radikali superoxide, li huma kkonvertiti aktar f'HO·via reazzjoni Fenton, li jikkawżaw ħsara ossidattiva u ċellulari [49].

Protein oxidation is accompanied by carbonyl protein formation and loss of protein thiols, which are often employed as protein oxidation indicators[50]. As given in Figure 3C, the level of carbonyl content in native BSA was 1.16±0.04 nmol/mg protein, which was increased to more than 3.62-fold (4.21 ± 0.10 nmol/mg protein) upon glycation. The treatment with CEE and its various fractions reduced the level of carbonyl content with the increase of samples concentrations ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Furthermore, the inhibition effect of quercetin on the formation of carbonyl proteins was stronger than that of all fractions at every concentration point. When the concentration was 1 mg/mL, CEE, HF, DMF, EAF, WBF, WF, and quercetin decreased the level of carbonyl content by 42.29, 17.37,58.68,73.44,69.17,28.84,and 98.68%, respectively, compared to native BSA. Overall descending, the inhibition of carbonyl content formation was portrayed as Q>EAF>WBF >DMF > CCE> WF >HF.

L-effetti ta 'CEE/frazzjonijiet fuq l-ossidazzjoni tat-tiol tal-proteina indotta mill-glikazzjoni huma ppreżentati fil-Figura 3D. Fil-BSA nattiva, il-livell ta' proteini tiol kien 1.06± 0.{086nmol/mg proteina, li naqas b'aktar minn tliet darbiet(0 .34± 0.021 nmol/mg proteina) fi proteina glycated. Fil-preżenza ta 'CEE/frazzjonijiet, il-livell tal-grupp thiol żdied b'mod sinifikanti b'mod dipendenti fuq id-doża li jvarja minn 0.1 sa 1 mg/mL. Barra minn hekk, il-livell ta 'proteina thiol żdied fl-ordni li ġejja: HF<><><><>

Riżultati simili ġew osservati fil-pjanta Teucrium polium peress li l-EAF kien aktar effettiv mill-frazzjonijiet l-oħra (etere tad-dietil u frazzjonijiet tal-ilma) kontra l-ossidazzjoni tal-proteina medjata mill-glikazzjoni[51]. Fl-istudju tagħhom, Golshahi u Bahramikia [52] irrappurtaw ukoll riżultati simili meta użaw diversi solventi b'polarità dejjem tiżdied (etere tad-dietil u ilma) fil-qsim ta 'pjanta mediċinali Trachyspermum copticum. Skont dawn l-awturi, l-EAF għandha l-aktar effett protettiv qawwi kontra l-ossidazzjoni tal-proteina medjata mill-glikazzjoni, segwita mill-bogħod minn dawk tal-etere tad-dietil u tal-ilma. Dan juri l-preżenza fl-EAF ta’ dawn il-komposti li jista’ jkollhom effett preventiv kontra ħsarat ossidattivi kkaġunati mill-ipergliċemija lill-proteini, li huwa maħsub li jseħħ taħt il-proċessi ta’ glycoxidation billi jnaqqas il-formazzjoni ta’ proteina karbonil u jipproteġi t-tioli tal-proteini mill-ossidazzjoni kif issuġġerit mid-dejta.

2.8.Komposti Fenoliċi identifikati fl-EAF

L-EAF, li wera l-ogħla attività bijoloġika minn frazzjonijiet oħra, intgħażlet għall-identifikazzjoni tal-komposti bijoattivi ewlenin tagħha permezz ta 'RP-HPLC. Numru totali ta 'sitt komposti ġew identifikati billi tqabbel il-ħin ta' żamma tagħhom ma 'dawk ta' standards ta 'referenza. Il-komposti fenoliċi identifikati huma ppreżentati fil-Figura 4. L-aċidi Gallic, vanillic, caffeic, u ferulic ġew identifikati bħala aċidi fenoliċi, filwaqt li żewġ komposti biss, jiġifieri rutin u quercetin, ġew identifikati bħala flavonoids. Skont studju minn Soumaya et al. [53], ferulic acid, luteolin-7-O-glucoside, myricetin, u kaempferol 3-O-rutinoside ġew identifikati bħala preżenti fl-EAF ta' partijiet mill-ajru ta' E.fragilis Tuneżina, filwaqt li l-preżenza ta' rutin , quercetin, aċidu galliku, u aċidu tal-kaffeina nstabu biss għall-ewwel darba fl-istudju tagħna. Id-differenza fil-kompożizzjoni kimika tal-EAF miksuba mill-istess speċi ta’ pjanti tista’ tvarja f’partijiet differenti ta’ pjanta, l-istadju tal-iżvilupp tal-pjanti, il-kundizzjonijiet tat-tkabbir (eż., ħamrija, dawl, temperatura, ilma, umdità, u fertilizzanti), il-ħin tal-ħsad, is-sistema tat-tnixxif, u l-proċedura tal-estrazzjoni [54]. Ir-riżultati miksuba mill-profil tal-marki tas-swaba 'fitokimiċi wrew rikkezza tajba ta' E.fragilis li kellhom diversi komposti fenoliċi li huma meqjusa bħala kontributuri ewlenin għall-attivitajiet ta 'tneħħija tar-radikali ħielsa u antiossidanti [55]. Barra minn hekk, dawn il-komposti huma magħrufa għall-kapaċitajiet qawwija tagħhom kontra l-glikazzjoni [48]. Diversi studji wrew il-konnessjoni diretta bejn l-attivitajiet antiossidanti ta 'komposti fenoliċi u l-kapaċitajiet tagħhom ta' antiglikazzjoni.

2.9. Studju ta' Docking Molekulari ta' Komposti Identifikati

Biex tara b'mod ċar il-mekkaniżmu dettaljat li bih il-komposti identifikati fl-EAF ta 'E. fragilis jorbtu ma' BSA u RAGE, għamilna studju ta 'docking molekulari. Ir-riżultati tad-docking huma ppreżentati fit-Tabella 6, filwaqt li l-interazzjonijiet bejn il-kompost l-aktar attiv u l-miri huma murija fil-Figura 5. Ir-riżultati wrew li quercetin imwaħħal sewwa fis-sit tal-irbit, li jinsab fil-kavità idrofobika tas-sottodominju IB ta 'BSA bl-inqas enerġija ta' rbit ta '{ {2}}.7 kcal/mol (Figura 5A).B'kuntrast, inkisbet enerġija li torbot inqas b'aċidu feruliku, aċidu vaniliku, aċidu kaffejku, aċidu galliku, u rutin (-6.35,{{7} }.05, -5.84,-5.25 u-4.41 kcal/mol, rispettivament). Normalment, grad għoli ta 'negattività ta' enerġija li torbot huwa aktar effettiv u l-kompost jintuża għall-kontroll tal-proċessi ta 'glycation. Mill-Figura 5B, huwa ċar li quercetin tifforma tmien bonds idroġenu ma 'SER109, ASP111, LEU112, LEU115, ARG144, ARG185, u ARG458of BSA, u erba' interazzjonijiet idrofobiċi medjati mill-aċidi amminiċi alifatiċi (PRO110, LYS141RG, PRO141RG) . Ukoll, erba 'aċidi amminiċi (ASP108, HIS145, LEU189, u LEU462) madwar quercetin interazzjoni permezz tal-forzi ta' van der Waal. Ġie rrappurtat li l-lysine u l-arginine huma r-residwi ewlenin tal-aċidu amminiku involuti fil-proċess tal-glikazzjoni [56]. Għalhekk, il-masking ta 'quercetin għal residwi ta' lysine u arginine jista 'jkun wieħed mill-mekkaniżmi possibbli ta' E. fragilis biex jinibixxi glycation tal-proteini fi stadju inizjali.

L-ingaġġ ta’ prodotti AGEs ma’ RAGE huwa magħruf li jwassal, permezz tal-formazzjoni ta’ ROS permezz ta’ NADPH oxidase u mitokondrija [57], l-attivazzjoni ta’ mogħdijiet multipli ta’ sinjalazzjoni intraċellulari (inklużi JAK/STAT, phosphoinositol-3 kinase, rho GTPases, SAPK/INK). MAP kinases, p38 u erk1/2 (p44/p42) MAP kinases), u li jilħqu l-qofol tagħhom fl-attivazzjoni tal-fatturi ta 'traskrizzjoni NF-kB [58], li jwasslu għall-patoġenesi tad-dijabete u disturbi assoċjati mat-tixjiħ [5]. Għalhekk, l-imblukkar tal-interazzjonijiet AGEs-RAGE jista 'jirażżan it-trasduzzjoni tas-sinjali li jipprovokaw l-istress, li hija meqjusa bħala strateġija terapewtika li tinibixxi l-glikazzjoni fi stadju aktar tard. Ir-riżultati ta' docking b'RAGE, kif muri fit-Tabella 6, ippruvaw li l-aċidu galliku għandu l-ogħla punteġġ ta' docking (G=-6.8 kcal/mol) meta mqabbel ma' dawk ta' aċidu vaniliku, aċidu feruliku, aċidu kaffejku, quercetin, u rutina(-6.68,-5.94,-5.89,-5.58, u -4.89 kcal/mol, rispettivament). Barra minn hekk, l-immudellar 2D ta 'aċidu galliku u RAGE wera li l-aċidu galliku ffurmat ħames bonds ta' idroġenu konvenzjonali ma 'CYS38, GLY40, ALA41, LYS43, u SER83 ta' RAGE (Figura 5C, D). Ukoll, LYS37 u LYS43 kienu responsabbli għall-interazzjonijiet idrofobiċi ta 'aċidu galliku ma' RAGE. Ħames aċidi amminiċi madwar l-aċidu galliku (GLU32, LYS39, PRO42, ASN81, u GLY82) ġew imwaħħla mill-forzi ta 'van der Waal, u b'hekk stabbilizzaw il-kumpless aċidu galliku-RAGE billi jipprovdu ambjent koeżiv qawwi. Fil-qosor, l-istudju attwali wera l-interazzjoni effiċjenti ta’ ċerti komposti bijoattivi fl-EAF ta’ E. fragilis mal-proteini fil-mira ta’ BSA u RAGE.E.fragilis jistgħu jkunu sors ta’ kompetituri potenzjali għall-glukożju u l-AGEs, li jistgħu jirreżistu tagħhom. jorbot lejn BSA u RAGE, rispettivament, u għalhekk inaqqas l-iżvilupp sussegwenti ta 'stress ossidattiv u infjammazzjoni (Figura 6).

3. Materjali u Metodi

3.1. Kimiċi u Reaġenti

22-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS), butylated hydroxy-toluene (BHT), sodium azide, guanidine hydrochloride, tween-40,1,{ {7}}diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), reaġent Folin Ciocalteau, -karotene, aċidu linolejku, glukożju, 2,4-dinitrophenylhydrazine(DNPH),5,5'-Dithiobis-({{16} }}Nitrobenzoic Acid) (DTNB), ammonju molibdat, u standards polifenoli nxtraw minn Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA). Il-perossidu tal-idroġenu (H2O2) inxtara minn Fluka (Basel, l-Isvizzera). Klorur tal-aluminju (AICl3), karbonat tas-sodju (NazCO3), klorur ferriku (FeCl3), persulfat tal-potassju (K2S2Os), ferricyanide tal-potassju (K3Fe(CN)6), aċidu sulfuriku, u s-solventi kollha nkisbu minn Merck Life Science (Darmstadt, il-Ġermanja). ). L-aċidu askorbiku u l-aċidu trikloraċetiku (TCA) inkisbu minn Scharlau (Barċellona, ​​Spanja).

3.2.Materjali tal-Pjanti

E. fragilis (partijiet tal-ajru) inġabret minn Dour Lagfifat, Oulad Teima, Taroudant, il-Marokk (latitudni, 30 grad 24'0"N; lonġitudni,9 grad 12'36"W) matul Mejju 2019. Hija ġiet identifikata mill-Professur Najat ELKHIATI, botanika mill-istitut tagħna, fejn ġiet iddepożitata ġabra ta’ kampjuni ta’ vouchers. L-impjant kien laħlaħ b'ilma distillat, imnixxef bl-arja, trab fi blender, u maħżun f'49C sakemm jintuża.

3.3.Disinn Sperimentali

3.3.1. Għażla ta' Varjabbli

Ħafna parametri huma magħrufa li għandhom effetti sinifikanti fuq l-estrazzjoni tal-komposti fenoliċi, bħat-tip tas-solvent, il-konċentrazzjoni tas-solvent, il-ħin tal-estrazzjoni u t-temperatura tal-estrazzjoni [59]. Solventi differenti bħal aċetun, metanol u etanol huma adattati għall-estrazzjoni ta 'komposti fenoliċi differenti [16], iżda l-etanol intgħażel bħala s-solvent f'dan l-istudju, minħabba s-sigurtà li tittiekel u l-manifattura ħadra [60]. Għalhekk, il-fatturi kollha, inkluża l-konċentrazzjoni tal-etanol (X), it-temperatura tal-estrazzjoni (X2) u l-ħin tal-estrazzjoni (X3) intgħażlu bħala varjabbli.

3.3.2. BBD għall-Ottimizzazzjoni tal-Estrazzjoni

Ġiet żviluppata proċedura ta 'ottimizzazzjoni bl-użu ta' RSM biex tiddetermina l-effetti tal-fatturi ta 'estrazzjoni u tagħżel l-aħjar kundizzjonijiet sperimentali ta' estrazzjoni tal-kompost fenoliku ta 'E. fragilis. Twettqet BBD ta’ tliet livelli u tliet fatturi biex tinvestiga l-impatt ta’ tliet fatturi indipendenti inklużi X1 (konċentrazzjoni ta’ etanol, fil-mija), X, (temperatura ta’ estrazzjoni, grad), u X3 (ħin ta’ estrazzjoni, h) fuq il-kontenut ta’ TP u TF ta' E, estratti ta' fragilis [17]. Għal skopijiet ta 'ottimizzazzjoni, għadd totali ta' 15-il prova inklużi tliet punti ċentrali twettqu b'mod każwali (Tabella 1). Ibbażat fuq l-esperiment preliminari tagħna ta' fattur uniku (dejta mhux murija), il-varjabbli kollha ġew stabbiliti fi tliet livelli (-1,0 u flimkien ma' 1), b'X,(40,60 u 80 fil-mija), X ,(25,42.5 u 60 grad ), u X3(6, 15 u 24 h)(Tabella 1). L-ekwazzjoni polinomjali tat-tieni ordni li ġejja (Ekwazzjoni (1)) intużat biex taqbel mal-varjabbli tar-rispons:

fejn Y hija r-rispons previst; o, ; i, u ; huma l-koeffiċjenti ta' rigressjoni għal termini ta' interċettazzjoni, lineari, kwadratiċi u ta' interazzjoni, rispettivament; u X;, u X; huma l-varjabbli indipendenti (i ≠ j).

3.3.3. Proċedura ta' Estrazzjoni

Il-kampjun tat-trab (10 g) ġie estratt b'metodu ta' maċerazzjoni f'konċentrazzjoni ta' etanol iddisinjata (40-80 fil-mija ;1:10, w/v), f'temperaturi li jvarjaw (25-60 grad ) għal perjodi varji (25-60 grad ) {5}} h) fuq inkubatur orbital shaker (160 rpm). Garża u karta tal-filtru Whatman Nru.1 intużaw biex titneħħa l-massa li ma tinħallx. Il-filtrat imbagħad ġie mnixxef f'40 grad taħt pressjoni baxxa bl-użu ta 'R-3 Rotavapor(Büchi) biex jagħti l-estratt etanoliku mhux raffinat (CEE).

3.4. Frazzjonament tas-CEE Miksuba taħt Kondizzjoni Ottimi

Is-CEE miksub taħt l-aħjar kondizzjoni ġie solubilizzat f'ilma distillat (100 mL), u l-estrazzjoni likwidu-likwidu saret b'diversi solventi ta 'polarità dejjem tiżdied biex tagħti frazzjoni ta' hexane (HF,3 × 100 mL), frazzjoni ta 'dichloromethane (DMF, 3 × 100). mL), frazzjoni tal-aċetat tal-etil (EAF.3 × 100 mL), frazzjoni n-butanol saturata bl-ilma (WBF, 3 × 100 mL),

u l-frazzjoni tal-ilma li jifdal (WF). Dawn il-frazzjonijiet imbagħad ġew iffiltrati u mnixxfa kif deskritt hawn fuq, u r-rendiment tal-estrazzjoni ġie rreġistrat skont l-Ekwazzjoni (2):

Kienu Wo u W huma l-piż ta 'CEE/frazzjonijiet imnixxef u piż inizjali ta' trab E.fragilis; rispettivament.

3.5. Analiżi Fitokimika

It-tekniki spettrofotometriċi użati biex jevalwaw il-kontenuti fitokimiċi ta 'estratti ta' E. fragilis huma dettaljati fil-Materjali Supplimentari [61,62].

3.6. Attivitajiet Bijoloġiċi

Dettalji tat-testijiet in vitro tat-testijiet antiossidanti [43,63-67] u ta' l-antiglikazzjoni [68-70] ingħataw fil-Materjali Supplimentari.

3.7.RP-HPLC Analiżi tal-EAF

Analiżi ta' komposti fenoliċi fl-EAF saret b'Agilent 1100(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)mgħammar b'kolonna analitika ta' fażi inversa ZORBAX Eclipse SB-C18 ta' 100×4 mm u 3.5 um. daqs tal-partiċelli [71]. It-temperatura tal-kolonna nżammet kostanti fi 48 grad. Elużjoni iżokratika b'acetonitrile, 0.1 fil-mija aċidu aċetiku fl-ilma (12:88, v/v) bħala fażi mobbli, u rata ta 'fluss ta' 1 mL/min żgurat separazzjoni tajba ta 'polifenoli fl-EAF ta' E.fragilis. Il-volum injettat kien 10 μL u l-kromatogrammi ġew imkejla f'330 nm. Il-ħinijiet ta 'żamma ta' komposti fenoliċi fl-EAF tqabblu ma 'dawk ta' standards purament disponibbli biex jiġu identifikati.

3.8. Docking Molekulari

AutoDock Tools(ADT) verżjoni 1.5.6 intużat biex twettaq studju ta 'docking molekulari. Il-format SDF tal-komposti kollha nkiseb mid-database PubChem u mbagħad ikkonverti f'fajl 3Dpdb bl-użu ta' Open Babel GUI (verżjoni 2.4.1). L-istrutturi tal-kristall tal-BSA(PDB ID:4ORO) u RAGE(PDB ID:4LP5) inġabru mill-RCSB Protein Data Bank (PDB). Fil-qosor, il-proteini l-ewwel ġew ippreparati għall-docking billi (i) jitneħħew l-eteroatomi u l-molekuli tal-ilma kollha, (i) iżidu l-atomi tal-idroġenu polari, u (ii) jiġu assenjati ħlasijiet Kollman. Id-dimensjoni tal-kaxxa tal-grilja ġiet issettjata għal x{{10}},y=126,z=126 u x=80,y=80.Z{{ 15}} b'ċentru tal-grilja ta'×=8.415,y=21.626,z=106.57 andx{=37.98,y=-43.581 ,z=9.371 bi spazjar tal-grilja ta' 0.375A maħluqa madwar is-sit tal-irbit ta' BSA u RAGE, rispettivament. Is-softwer tad-docking tmexxa 100 darba bl-użu tal-Algoritmu Ġenetiku Lamarckian (LGA) biex issib l-aħjar poża li torbot. Il-ligand bl-inqas punteġġ ta 'enerġija li torbot intgħażel għal aktar investigazzjoni. Il-verżjoni tas-software Discovery Studio 2020 (BIOVIA, San Diego, CA, USA) intużat għall-viżwalizzazzjoni tar-riżultati tad-docking.

3.9. Analiżi Statistika

Verżjoni tas-softwer Design-Expert 119(Stat-Ease Inc., u Minneapolis, MN, USA) intużat biex twettaq RSM. L-analiżi tad-dejta saret b'analiżi one-way of variance (ANOVA) segwita mit-test post-hoc ta' Duncan bl-użu ta' SPSS 26.0(IBM Co., USA);p<0.05 was="" considered="" statistically="" significant.="" pearson="" correlation="" analysis="" was="" conducted="" to="" investigate="" correlations="" between="" variables="" and="" their="" significance.="" all="" graphics="" were="" constructed="" using="" graphpad="" prism="" 7.0="" software="" (san="" diego,="" ca,="" usa).="" all="" experiments="" were="" conducted="" in="" triplicate="" and="" presented="" as="" mean="" values="" ±standard="" deviation="">

4. Konklużjonijiet

RSM b'BBD ġie impjegat biex jiġu stabbiliti l-parametri ottimizzati għall-estrazzjoni tal-komposti bijoattivi mill-ħaxix mediċinali Marokkin E. fragilis. L-aħjar konċentrazzjoni ta 'etanol, temperatura ta' estrazzjoni, u ħin ta 'estrazzjoni kienu mbassra għall-massimu

rendiment ta 'estrazzjoni ta' komposti fenoliċi u wera li jkun 61.93 fil-mija, 44.43 grad C, u 15.84 h, rispettivament. Is-CEE miksuba taħt l-aħjar kundizzjonijiet ta’ estrazzjoni u l-frazzjonijiet varji tagħha ġew analizzati għall-kontenut ta’ TP u TF tagħhom, kif ukoll għall-kontenut tagħhom.antiossidantu attivitajiet ta 'antiglycation. Il-frazzjoni EAF turi l-ogħla kontenuti ta 'TP u TF u l-aktar attivitajiet antiossidanti b'saħħithom meta mqabbla ma' frazzjonijiet oħra. Ukoll, l-evalwazzjoni ta 'diversi bijomarkaturi bħal spettru ta' assorbiment UV-vis, fluworexxenza ta 'AGEs speċifiċi, kontenut ta' karbonil, u grupp ta 'tioli ħielsa, uriet l-akbar effett protettiv ta' EAF kontra glycation medjat minn glukożju. Barra minn hekk, ġiet osservata relazzjoni pożittiva sinifikanti bejn il-kapaċitajiet antiossidanti tal-komposti fenoliċi u l-attivitajiet ta 'antiglikazzjoni tagħhom. Dan jindika li l-komposti fenoliċi jistgħu jkunu l-komponenti predominanti ewlenin responsabbli kemm għall-attivitajiet antiossidanti kif ukoll għall-antiglikazzjoni. Il-komposti bijoattivi fl-EAF kienu kkaratterizzati minn analiżi RP-HPLC u ġew identifikati numru totali ta 'sitt komposti. L-analiżi ta 'docking molekulari in silico wriet ukoll interazzjoni effettiva bejn quercetin u aċidu galliku b'BSA u RAGE bħala proteini fil-mira, rispettivament. B'mod kollettiv, dan l-istudju jissuġġerixxi li E.fragilis jista 'jkun sors potenzjali ta' komposti bijoattivi naturali b'attivitajiet antiossidanti u antiglikazjoni qawwija u għandu jiġi applikat fit-trattament u l-prevenzjoni ta 'tixjiħ u kumplikazzjonijiet assoċjati mal-glikazzjoni. Jeħtieġ li jsiru aktar studji dwar l-iżolament tal-komposti bijoattivi u l-iskrinjar farmakoloġiku (jiġifieri, studju taċ-ċitotossiċità) biex jiġu esplorati l-fitokimika u l-mekkaniżmi ta 'azzjoni tal-proprjetajiet farmakoloġiċi ta' E. fragilis.

Referenzi

1. Martins, N.; Barros, L.; Santos-Buelga, C.; Silva, S.; Henriques, M.; Ferreira, Decoction ICFR, Infużjoni u Estratt Idroalkoħoliku ta 'Sagħtar Kkultivat: Attivitajiet Antiossidanti u Antibatteriċi, u Karatterizzazzjoni Fenolika. Chem tal-Ikel. 2015, 167, 131–137. [CrossRef]

2. Deetae, P.; Parichanon, P.; Trakunleewatthana, P.; Chanseetis, C.; Lertsiri, S. Proprjetajiet Antiossidanti u Anti-Glycation ta 'Tejiet Veġetali Tajlandiż meta mqabbla ma' Tejiet Konvenzjonali. Chem tal-Ikel. 2012, 133, 953–959. [CrossRef]

3. Yao, Q.; Liang, Y.; Shao, Y.; Bian, W.; Fu, H.; Xu, J.; Sui, L.; Yao, B.; Li, M. Konċentrazzjonijiet Avvanzati tal-Prodott Tmiem tal-Glycation fil-Fluwidu Follikulari tan-Nisa li jkunu għaddejjin minn IVF/ICSI bi Protokoll Agonist GnRH. Riprod. Biomed. Online 2018, 36, 20–25. [CrossRef] [PubMed]

4. Grimm, S.; Ott, C.; Hörlacher, M.; Weber, D.; Höhn, A.; Grune, T. Advanced-Glycation-End-Product-Induced Formation of Immunoproteasomes: Involviment ta 'RAGE u Jak2/STAT1. Biochem. J. 2012, 448, 127–139. [CrossRef]

5. Meenatchi, P.; Purushothaman, A.; Maneemegalai, S. Antiossidant, Antiglycation u Proprjetajiet Insulinotrofiċi ta 'Coccinia Grandis (L.) in Vitro: Rwol Possibbli fil-Prevenzjoni ta' Kumplikazzjonijiet Dijabetiċi. J. Tradit. Jikkumplimenta. Med. 2017, 7, 54–64. [CrossRef] [PubMed]

6. Nakagawa, T.; Yokozawa, T.; Terasawa, K.; Shu, S.; Juneja, LR Attività Protettiva ta' Green Tea kontra Ħsara Proteina Medjata minn Radikali Ħieles u Glukożju. J. Agri. Chem tal-Ikel. 2002, 50, 2418–2422. [CrossRef] [PubMed]