PARTI Ⅱ: Rwol tal-Fibroblast Renali Primarju tal-Bniedem f'Tagħmir medjat ta' TGF- 1- li jimita l-fibrożi

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

PARTI Ⅱ: Rwol tal-Fibroblast Renali Primarju tal-Bniedem f'Tagħmir medjat li jimita l-Fibrożi TGF- 1-

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee & et al.

Astratt

Fibrożi renalihija marda kronika tal-kliewi progressiva li fl-aħħar mill-aħħar twassal għal insuffiċjenza renali fl-aħħar stadju. Minkejja diversi approċċi għall-ġlieda kontrafibrożi renali, mudell sperimentali biex jiġu evalwati mediċini disponibbli bħalissa mhuwiex ideali. Aħna żviluppajna mudelli li jimitaw b bl-użu ta 'apparati ta' ko-kultura tridimensjonali (3D) iddisinjati bi tliet saffi separati ta 'interstizju tat-tubuli, jiġifieri, saffi epiteljali, fibroblastiċi u endoteljali. Introduċejna ċelluli epiteljali tubulari prossimali renali umani (HK-2), ċelluli endoteljali tal-vina umbilikali umana, u fibroblasti renali derivati ​​mill-pazjent, u evalwajna l-effetti ta'tfattur tat-tkabbir li jbiddel- (TGF-)uTGF-trattament inibitur fuq danrenalifibrożimudell. L-espressjoni tal-fibrożimarker alpha-muskolu lixx actin fuqTGF- 1it-trattament ġie miżjud f'ċelluli HK-2 kkultivati ​​b'monosaffi f'mudell ta' marda 3D. Fil-kompartiment vaskulari tarenalifibrożimudelli, id-densità tal-bastimenti żdiedet u naqset fil-TGF--grupp ittrattat uTGF--grupp ta 'trattament ta' inibituri, rispettivament. Multiplex ELISA bl-użu ta 'supernatanti fil-TGF--mudelli 3D li jistimulaw urew li ċitokini pro-infjammatorji u livelli ta' fattur ta' tkabbir inkluż interleukin-1 beta, fattur ta' nekrożi tat-tumur-alfa, fattur bażiku ta' tkabbir tal-fibroblasti, uTGF- 1, TGF- 2, uTGF- 3żdiedu, li jimitaw il-mikroambjenti fibrotiċi tal-kliewi umani. Dan l-istudju jista 'jippermetti l-kostruzzjoni ta' bniedemrenalifibrożi-mudell ta 'apparat li jimita lil hinn mill-esperimenti tal-kultura tradizzjonali.

Kliem ewlieni: fibroblast renali; fibrożi; TGF- 1

cistanche tubolosa benefiċċji għas-saħħa: trattament ta 'mard kroniku tal-kliewi

Agħfas HAWN GĦALL-PARTI Ⅰ

3. Diskussjoni

TGF- 1għandu rwol importanti fl-akkumulazzjoni tal-matriċi fil-fibrogenesis renali u jinibixxi l-proliferazzjoni fil-biċċa l-kbira taċ-ċelloli, inklużi ċ-ċelloli epiteljali u endoteljali glomerulari, kif ukoll ċelloli epiteljali tubulari 【1】. Madankollu, TGF-ß1 jinduċi proliferazzjoni fil-fibroblasti tal-kliewi umani permezz tal-induzzjoni tal-fattur bażiku tat-tkabbir tal-fibroblast (FGF-2) [8].

Fl-istudju preżenti, waqqafna afibrożi-apparat li jimita li juża tliet komponenti ċellulari essenzjali, inklużi fibroblasti renali primarji umani, ċelluli epiteljali tubulari renali, u ċelluli endoteljali umani u evalwawh bħalarenalifibrożimudell ibbażat fuqTGF- 1stimulazzjoni. Biex tiġġenerarenalifibrożi-on-a-chip, waqqafna sistema ġdida ta 'kultura 3D iddisinjata bi tliet partijiet separati ta' tessut, bil-għan li tegħleb l-ostakli assoċjati mal-immudellar tal-mard renali. L-istudju tagħna wera danTGF- 1reazzjonijiet ċellulari indotti, inkluż transizzjoni tubulari epiteljali-mesenkimali (EMT) ta 'ċelluli epiteljali, alterazzjoni mikrovaskulari ta' ċelluli endoteljali, u bidliet taċ-ċitokini fil-fibroblasti tal-kliewi. Dan huwa l-ewwel studju li jintroduċi afibrożi-apparat li jimita li jinkludi fibroblasti primarji derivati ​​minn kliewi umani u fibroblasti stimulati iżolati minn pazjenti b'TGF- 1, induttur magħruf ta 'risponsi fibrotiċi ġeneralment użat bħala l-istandard biex jimitafibrożifil-kulturi taċ-ċelluli [9]. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu liTGF- 1-ċelluli epiteljali ittrattati huma kkonvertiti għal fenotip bħal ċellula mesenchymal. MetaTGF- 1huwa amministrat lill-fibroblasts, diversi ċitokini huma mibdula biex jirriflettu l-induzzjoni ta 'proċessi fibrotiċi. Jidher li fil-renalifibrożimudell, fibroblasts huma l-forza ewlenija wara l-iżvilupp tas-sistema tal-kultura stabbilita permezz ta 'stimulazzjoni TGF.

Davis et al, irrapportaw li t-3Dculture ta 'ċelloli endoteljali hija biżżejjed biex iċ-ċelloli jinvadu u jiffurmaw netwerk ta' lumen u tubi, wara organiżmu intatt in vivo [10,11]. Diversi gruppi rrappurtaw li mudelli ta 'kultura 3D juru livelli ogħla ta' nefrotossiċità minn mudelli ta 'kultura ta' ċelluli 2D [12]. Barra minn hekk, l-espressjoni ta 'ġeni relatati man-nefrotossiċità u l-infjammazzjoni kienet ogħla b'mod sinifikanti fil-mudell tal-kultura taċ-ċelluli 3D tal-kliewi milli f'kultura tipika 2D[13].

F'dan l-istudju, il-midja tal-kultura tal-bniedemrenalifibrożi-on-a-chip kellu livell ogħla b'mod sinifikanti ta 'ċitokini meta mqabbel ma' dak f'2Dculture. Il-grupp tagħna wera li fibroblasti derivati ​​mill-pazjent jistgħu jirrikreaw tessuti tal-kliewi indiġeni, inklużi saffi taċ-ċelluli endoteljali u epiteljali, permezz tas-suġġeriment tagħna.fibrożi-on-a-chip mudell. Konsegwentement, dawn is-sejbiet jindikaw li l-renalifibrożi-on-a-chip mudell jissimula b'mod preċiż l-ambjent mikrofiżiku tal-kliewi tal-bniedem. Barra minn hekk, minħabba li l-fibroblasts kkultivati ​​fiċ-ċippa huma derivati ​​minn pazjenti, mudelli oħra ta 'pazjent klinikament rilevanti jistgħu jinkisbu faċilment u b'mod ċar b'mod sikur. Għalhekk, il-bniedemrenalifibrożi-on-a-chip mudell sistema tista 'tippermetti l-iżvilupp ta' mediċina personalizzata b'kejl sensittiv tal-funzjonijiet epiteljali u endoteljali. Fl-esperimenti tagħna,fibrożiu anġjoġenesi kienu naqsu fil-TGF-gruppi ttrattati b'inibituri. L-inibituri ta' TGF- huma antagonisti naturali ta' TGF-, li ntwerew bl-użu ta' diversi mudelli ta' mard renali. Jidher li huwa possibbli li jsiru esperimenti biex tikkonferma l-effettività tat-trattament f'mudelli ta 'mard li jużaw aġenti terapewtiċi bħal dan l-inibitur ta' TGF. Għalhekk, din iċ-ċippa pprovdiet mezz biex tiżviluppa mudell imtejjeb ta 'fibrożi renali biex tkejjel il-morfoloġija u l-funzjoni taċ-ċelluli u tista' tkun utli fit-twettiq ta 'valutazzjonijiet tan-nefrotossiċità għall-farmaċewtiċi.

TGF-huwa l-fattur profibrotiku predominanti f'diversi mard tal-kliewi [14] u għandu rwol fl-anġjoġenesi [15]. L-effetti anġjoġeniċi ta 'TGF- huma kumplessi ħafna u jista' jkollhom jew attività proanġjoġenika jew antianġjoġenika skont l-issettjar u fatturi regolatorji varji [16]. Fatturi ta' tkabbir anġjoġeniku bħal VEGF u FGF-2jinduċu anġjoġenesi in vivo jidhru li għandhom rwol ċentrali fil-modulazzjoni ta' anġjoġenesi in vivo [17-20]. Xi evidenza tindika li dawn iż-żewġ fatturi jistgħu jaġixxu b'mod sinerġiku biex jippromwovu avvenimenti morfoġenetiċi taċ-ċelluli endoteljali [21,22]. Aħna pprovdejna evidenza li l-espressjoni tal-mRNA tal-VEGF u s-sekrezzjoni tal-proteina FGF-2 huma elevati b'mod sinifikanti minn TGF- 1 f'ċipep 3D meta mqabbla mal-kultura 2D.

Il-limitazzjoni ta 'tagħnafibrożimudelli jistgħu jkunu li nħolqu f'perjodu ta 'żmien relattivament qasir, 24 siegħa. TGF-beta għandu proprjetajiet pro-fibrotiċi u anti-infjammatorji fi żmien kmienifibrożiproċess, mhux fil-proċess kroniku. Konvenzjonalment,TGF-ġie utilizzat primarjament f'ċitokini indottifibrożimudelli. Madankollu, peress li ċitokina waħda biss ma tistax tkun rappreżentata in vivo,fibrożimudelli ta’ induzzjoni li jużaw diversi sustanzi kandidati addizzjonali bħalTGF-u BMP7 ġew proposti. Madankollu, żewġ jew tliet ċitokini għadhom mhumiex biżżejjed biex jirriproduċu in vivo. Aħna użajnaTGF-bħala l-punt tat-tluq; madankollu, ippruvajna nimplimentaw mikroambjent in vivo fuq iċ-ċippa billi ninduċu maltempata ta 'ċitokini aktar diversa. Fibroblast, komponent ċellulari ewlieni ta 'fibrożi, ġiet introdotta, u stimulazzjoni sekondarja ta 'ċitokini aktar diversi (IL-1 , TNF- , b-FGF,TGF- 1, TGF-2, uTGF-3) ġie indott f'fibroblasti stimulati biTGF-. Għalhekk, ambjent simili għalfibrożifil-ġisem tal-bniedem ġie riprodott.

estratt ta' cistanche deserticola: trattament ta' mard tal-kliewi

4. Materjali u Metodi

4.1.Kulturi taċ-Ċelloli

Kidney fibroblasts(KFs)were isolated from biopsies of the normal tissue portion of renal cell carcinoma patients with an estimated glomerular filtration rate (eGFR)>60 mL/minuta/1.73 m2 wara li l-pazjenti jkunu taw il-kunsens tagħhom għat-tieni bijopsija għal skopijiet ta' riċerka. Il-KFs ġew ikkultivati ​​f'mezz tat-tkabbir tal-fibroblast (FGM-2, Lonza, l-Isvizzera), u l-passaġġi 3 sa 4 intużaw għall-esperimenti. Il-fibroblasti tal-kliewi ġew mibruxa mill-kultura għal 1-2 ġimgħat sakemm iċ-ċelloli ffurmaw monosaff. Biex jiġu eliminati ċ-ċelloli epiteljali li jikkontaminaw il-kultura, il-fibroblasti ġew magħżula bl-użu ta 'żibeġ manjetiċi kontra l-fibroblasti (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) wara l-ewwel passaġġ. Iċ-ċelloli nqalgħu bl-użu ta' 0.05 fil-mija trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Korea), inkubati bi żibeġ anti-fibroblast, u separati permezz ta' kolonna manjetika, u l-fluss- permezz inġabret. Il-fibroblasti primarji purifikati kienu kkaratterizzati minn analiżi tal-għażla taċ-ċelluli attivata bil-fluworexxenza (FACS) bl-użu ta 'antikorpi anti-fibroblast konjugati bil-PE. Id-Dissoċjatur tal-għażla taċ-ċelluli attivati ​​b'mod manjetiku ġentili (MACS) intuża għall-ikkapuljar ġentili tat-tessut tal-kliewi. Separatur manjetiku Octo MACSTM b'kolonni MACS LS (bi plungers) applikat għall-purifikazzjoni ta 'ċelluli tikkettati bil-mikrobead inxtara minn Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Tubi ġentili MACS C (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) intużaw għall-ikkapuljar tal-kliewi għas-separazzjoni taċ-ċelluli. MACS Smart Strainers (70 um) inkisbu minn Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Il-buffer tal-kolonna intuża biex jinħasel il-kolonni u jissuspendi mill-ġdid il-gerbub taċ-ċelluli. Il-buffer ġie ppreparat bħala soluzzjoni li fiha 0.5 fil-mija albumina tas-serum bovin (BSA) b'2 mM EDTA f'salina buffered bil-fosfat (PBS) (pH7.4) u mixtrija minn Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Ċelluli endoteljali tal-vini umbilikali tal-bniedem li jesprimu proteini fluworexxenti ħodor (GFP-HUVECs, Lonza, l-Isvizzera) ġew ikkultivati ​​f'Medju tat-Tkabbir Endoteljali (EGM-2, Lonza, l-Isvizzera), u ntużaw ċelloli fil-passaġġi 3 sa 4. Linja taċ-ċelluli tubulari prossimali tal-bniedem (ċelluli tal-kliewi tal-bniedem-2(HK{-2) inkisbu mill-American Type Culture Collection (ATCC). Il-linja taċ-ċelluli tkabbar f'Dulbecco's modifikat Eagle's medium (DMEM) b'livell għoli ta' glukosju supplimentat b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu (FBS), peniċillina (100 U/mL), u streptomycin (100 ug/mL).Reaġenti nxtraw minn Gibco (Rockville, MD, USA).Iċ-ċelloli kollha ġew maqlugħa bl-użu ta '0.05 fil-mija Trypsin- EDTA u miżmum f'inkubatur umidifikat f'37 grad u 5 fil-mija CO2. Il-KFs ġew sospiżi mill-ġdid f'FGM-2 f'konċentrazzjoni taċ-ċelluli ta' 4 × 10 gradi ċelluli/mL. Ċelloli epiteljali tubulari tal-kliewi tal-bniedem (HK{{49} }}) ġew sospiżi mill-ġdid f'konċentrazzjoni ta 'ċelluli 2 × 10 grad/mL f'DMEM ta' glukożju għoli.

4.2.Reaġenti

Il-matriċi kienet magħmula minn ġellijiet tal-fibrin, inkluż fibrinoġenu disponibbli kummerċjalment mill-plażma bovina, aprotinin mill-pulmun bovin, u trombina mill-plażma bovina. It-tliet materjali msemmija hawn fuq inxtraw minn Sigma (St. Louis, MO, USA). Fibrinogen ġie maħlul f'l × PBS f'banju ta 'l-ilma (37 grad) għal 3 0 min f'konċentrazzjoni ta' 10 mg/mL. Trombina u aprotinin ġew maħlula f'ilma dejonizzat f'konċentrazzjoni ta '50 unità/mL u 4 TIU/mL. It-tliet soluzzjonijiet ġew sterilizzati permezz ta 'filtrazzjoni minn filtru ta' 0.22 μm. Bniedem rikombinantiTGF- 1inkiseb minn PeproTech EC Ltd. (Londra, UK). Inibitur speċifiku ta' TGF-beta receptor kinase, SB431542, inxtara mingħand Tocris Cookson, Inc. (Ellisville, MO, USA).

4.3. Disinn taċ-Ċelloli fl-Apparat

Qabel iż-żrigħ taċ-ċelluli biex jiffaċilita t-twaħħil strett, l-apparat ġie ttrattat għal 1 min f'magna tal-plażma (Femto Science Inc., Suwon, Korea) b'qawwa ta '70 W, 50 Hz. Idrofiliċità tal-wiċċ indotta mit-trattament tal-plażma u għenet biex tiffaċilita l-mudell tal-ġel u t-tagħbija tal-midja. Biex jiġu evitati bidliet fl-idrofiliċità, saru esperimenti fi żmien 30 minuta wara t-trattament tal-plażma. Disinn ċellulari differenti fi ħdan l-apparati jistgħu jsiru b'mod personalizzabbli ħafna. Kien importanti li jiġu ddeterminati l-kompożizzjoni u l-konċentrazzjoni tat-tipi ta 'ċelluli differenti li għandhom jiġu disinjati minn qabel. Għal sospensjonijiet ta' idroġel ċellulari, 37.5 μL ta' sospensjoni taċ-ċelluli u alikwot separat ta' 12.5 μL ta' 10 mg/mL ta' soluzzjoni ta' fibrinoġenu (250 μL ta' 10 mg/mL ta' soluzzjoni ta' fibrinoġenu b'40 μL ta' 4 TIU/mL aprotinin) ġew ippreparati immedjatament biex jitħalltu qabel it-tagħbija. Immedjatament qabel it-tagħbija, is-37.5 μL ta 'sospensjoni taċ-ċelluli tħalltu ma' 12.5 μL ta '10 mg/mL fibrinoġenu sakemm omoġenizzat. Il-50uL ta 'idroġel tħallat ma' qtar ta '1 uL ta' trombina (0.5 unità/mL). Immedjatament wara t-taħlit, trombina b'sospensjoni ta 'fibrina ta' GFP-HUVECs (konċentrazzjoni taċ-ċelluli ta 'ċelluli 2 × 10'/mL) ġiet injettata fit-tarf ta' barra tal-kanal ta 'barra (Figura 3, Gel A). Aħna stennejna 3 min biex il-crosslinking tal-fibrinoġen ikun komplut. Immedjatament wara t-taħlit, trombina b'sospensjoni ta 'fibrina ta' KFs (konċentrazzjoni ta 'ċelluli ta' 4 × 10 gradi ċelluli / mL) tqiegħdet fuq kull naħa tal-art tal-ġibjun għal kull bir (Figura 3, Gel C). Din is-sospensjoni tal-fibrina ta 'KFs tħalla crosslink f'temperatura tal-kamra għal 3 min. Sospensjoni taċ-ċelluli ta' 10 μL ċelluli epiteljali tubulari prossimali renali umani (HK-2) ġiet injettata fil-port tal-injezzjoni tal-kanal ta' ġewwa (Figura 3, Ġel B). Biex twaħħal HK-2 mal-ħajt tal- ġel tal-fibrina fil-kanal GFP-HUVECs, l-apparat inbidel 90 grad u mqiegħed fil-5 fil-mija CO, inkubatur għal 30 min f'37 grad. L-HK-2 issetilja u fforma folja taċ-ċelluli fuq in-naħa tal-ġel tal-fibrina.

Wara li twaħħlet l-HK-2, l-apparat kien mimli bl-EGM-2. L-apparat ġie inkubat għal 3 ijiem f'37 grad f'inkubatur ta '5 fil-mija CO. Il-medju nbidel bi jew mingħajr 5ng/mLTGF- 1u with5ng/mLTGF- 1u 10 umTGF- 1inibitur wara tlett ijiem ta 'inkubazzjoni (Figura 3).

x'inhu cistanche

4.4. Imunoċitofluworexxenza

Tessuti ko-kultivati ​​fl-apparat ġew iffissati b'soluzzjoni ta 'paraformaldehyde ta' 4 fil-mija (w/v) (Biosesang, Seongnam, Korea) f'PBS (Welgene, Gyeongsan, Korea) għal 20 min, segwit minn permeabilizzazzjoni b'20 immersjoni min f'0.15 fil-mija Triton X-100(Sigma, St.Louis, MO, USA). Il-kampjuni mbagħad ġew ittrattati bi 3 fil-mija BSA (Sigma, USA) għal siegħa. Iċ-ċelloli ġew inkubati b'antikorpi mixtrija minn Abcam. L-antikorpi primarji kienu anti-cytokeratin 8 u anti-o-SMA, jitħallew għal jumejn f'temperatura tal-kamra (RT). Alexa Fluor 647 konjugat donkey anti-fenek IgG(H plus L) intuża bħala l-antikorp sekondarju. It-tikkettar tad-DNA sar b'dilwizzjoni ta' 1:250 ta' Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) għal 3 sigħat f'RT. Immaġini nġabru permezz ta 'mikroskopju laser konfokali Zeiss LSM 710. L-intensità medja tal-fluworexxenza (MFI) ġiet imkejla bl-użu ta' ImageJ u analizzatur tal-intensità tal-fluworexxenza.

4.5. Analiżi Multiplex ta 'Citokines

L-MSD V-Plex Cytokine and Angiogenesis Panel 1 Human kit (Rockville, MD, USA) intuża biex ikejjel il-konċentrazzjonijiet ta' interleukin-1 beta （IL-1ß） u fattur bażiku ta' tkabbir tal-fibroblast (b-FGF) f'kampjuni singoli, skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-kampjuni kollha ġew ivvalutati għal-livelli totali ta' proteina ta' IL-1 u b-FGF. L-ammont (f'pg/mL) ġie kkwantifikat mill-kurva standard ta 'kull kejl.

4.6. Multiplex Bead Immunoassay

Il-konċentrazzjonijiet taċ-ċitokini ġew analizzati bl-użu ta' sistema ta' immunoassaġġ ta' żibeġ multiplex (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, USA), ibbażata fuq teknoloġija multi-plexing (xMAP; Luminex, Austin, TX, USA), skond il- istruzzjonijiet tal-manifattur. Id-dejta nkisbet bl-użu ta' workstation kompatibbli ma' Luminex u s-softwer tal-maniġer tagħha (workstation Bio-Plex u verżjoni 6. 0 softwer; Bio-Rad, Tokyo, Ġappun), skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. TGF- 1 uman, TGF- 2, u TGF- 3 relatati mal-fibrożiproċess ġew analizzati simultanjament fil-kampjuni dilwiti. L-isoformi ta'TGF-ġew skoperti bl-użu ta’ Sistemi Bio-Plex 200 u Bio-Plex ProTM Human disponibbli kummerċjalmentTGF-analiżi (Bio-Rad Laboratories, Inc); ibbażat fuq l-informazzjoni pprovduta mill-manifattur. Il-kit tal-assaġġ multiplex jista' jkejjel kwantitattivament ċitokini multipli mis-supernatant b'limitu aktar baxx ta' skoperta ta' 1 pg/mL għal kull ċitokin. Kull kampjun tmexxa bħala kejl wieħed għal kwantità limitata tas-supernatant miġbur.

4.7.PCR f'ħin reali

L-estrazzjoni ta 'RNA saret bl-użu ta' TRIzol Reagent (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Master Mix u Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit intużaw għat-traskrizzjoni inversa tal-RNA totali. qPCR saru bl-użu tal-Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix(Thermo Fisher Scientific, Inc.). Il-primers speċifiċi ġew ippreparati minn Bioneer (Daejeon, Korea) u użati f'dan l-esperiment kif ġej. Is-sekwenzi tal-primer huma miġbura fil-qosor fit-Tabella 1.

Għaxar mikrolitri ta 'PowerUp SYBR Green Master Mix, 4 μL ta' cDNA, u 2 pmol ta 'kull primer intużaw għal PCR f'ħin reali f'volum finali ta' 20 μL. Ir-reazzjoni twettqet f'95 grad għal 1s u 60 grad għal 20 s għal 45 ċiklu wara denaturazzjoni f'95 grad għal 20 s. Il-PCR saret f'duplikat jew triplikat għal kull kampjun. Il-livelli ta' cDNA ġew determinati bl-użu ta' kurva standard ta' limiti taċ-ċiklu. Id-dejta kollha għal kull cDNA kienet fil-kurva standard korrispondenti. Id-dejta miksuba kienet normalizzata għal -actin cDNA.

4.8. Analiżi Statistika

Id-dejta kwantitattiva hija ppreżentata bħala medja ± SD jew SE ta' mill-inqas tliet esperimenti indipendenti. Analiżi statistiċi saru bl-użu tat-test t ta' Student b'żewġ denbu. Aħna ikkunsidrajna differenza sinifikanti biss f'livell ta' kunfidenza ta' 95 fil-mija jew ogħla (p<>

5. Konklużjonijiet

Fil-qosor, il-protokolli f'dan l-istudju ppermettew il-kostruzzjoni tal-bniedemrenalifibrożi-apparati li jimitaw bħala mudell u wrew diversi effetti li mhumiex possibbli f'esperimenti ta 'kultura 2D. Aħna nemmnu li l-istrateġija ta' evalwazzjoni proposta f'dan l-istudju se twassal għal fehim aħjar tad-dettaljifibrożimekkaniżmi involuti fil-bidliet patoloġiċi matulmard tal-kliewi. Il-fibrożi tal-kliewi 3D żviluppata fuq ċippa tista 'tintuża bħala mudell potenzjali in vitro, li se jġibna eqreb lejn il-ħolqien ta' mudell imtejjeb ta 'kidney-on-a-chip.

cistanche phelypaes: kura għal mard tal-kliewi

Referenzi

1. Fruntiera, W.; Nobbli, N. Fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni fit-tessutfibrożi.N. Ingl. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.;Huang, XR;Li,AG;Liu, F;Li,J.; Truong, LD; Wang, XJ; Lan, HY Mekkaniżmu ta 'sinjalazzjoni ta' TGF-betal fil-prevenzjoni ta 'infjammazzjoni renali: Rwol ta' Smad. Jien. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [CrossRef]

3. Liu,Y.Renalifibrożi: Tagħrif ġdid fil-patoġenesi u t-terapewtika.Kidney Int.2006,69,213-217. [CrossRef][PubMed]

4. Andes, D.; Craig, WA Farmakokinetika u farmakodinamika tal-mudell tal-annimali: Reviżjoni kritika. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [CrossRef]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip u l-kliewi. Kidney Res. Clin. Pract.2015, 34, 165-169.[CrossRef][PubMed]

6. Jang, KJ; Mehr, AP; Hamilton, GA; McPartlin, LA; Chung, S.; Suh, KY; Ingber, tubuli prossimali tal-kliewi DEHuman fuq ċippa għat-trasport tad-droga u l-valutazzjoni tan-nefrotossiċità. Integer. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Reardon, S. 'Organi-on-chips' imorru mainstream. Natura 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, CV; MuLler, GATGF- 1jinduċi proliferazzjoni fil-fibroblasti tal-kliewi tal-bniedem permezz tal-induzzjoni tal-fattur bażiku tat-tkabbir tal-fibroblast (FGF-2).Kidney Int. 2001, 59, 579-592.[CrossRef][PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M.Effett anti-fibrotiku ta 'pirfenidone f'fibroblasti derivati ​​mill-muskoli minn pazjenti bid-distrofija muskolari ta' Duchenne. Ħajja Sci. 2016, 145,127-136. [CrossRef]

10. Davis, GE.:Camarillo. C, W. Mekkaniżmu pinoċitiku dipendenti mill-integrin alfa 2 beta 1 li jinvolvi formazzjoni ta 'vakuole intraċellulari u koalescence jirregola l-formazzjoni ta' lumen kapillari u tubu f'matriċi ta 'kollaġen tridimensjonali. Exp. Ċellula Res. 1996, 224, 39-51.[CrossRef]

11. Bayless, KJ; Davis, G. Is-Cdc42 u Race GTPases huma meħtieġa għall-formazzjoni tal-lumen kapillari f'matriċi extraċellulari tridimensjonali. J. Cell Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, TM; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, DL Bioengineered tessut tal-kliewi tal-bniedem 3D, pjattaforma għad-determinazzjoni tan-nefrotossiċità. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [CrossRef]

13. Astashkina, AI; Mann, BK; Prestwich, GD; Grainger, DW Tqabbil ta' bijomarkaturi ta' nefrotossiċità ta' droga tbassir f'kultura organoid primarja tal-kliewi 3-D u linji taċ-ċelluli immortalizzati. Bijomaterjali 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Meng, XM; Nikolic-Paterson, DJ; Lan, HY TGF-beta: Ir-regolatur ewlieni ta'fibrożi. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [CrossRef]

15. Pardali,E.;Goumans, MJ;ten Dijke,P. Sinjali minn membri tal-familja TGF-beta fil-morfoġenesi vaskulari u l-mard. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, SL; Pietras, K. ALK1 bħala mira emerġenti għal terapija antianġjoġenika tal-kanċer. Demm 2011,117,6999-7006.[CrossRef]

17.Klagsbrun, M.;D'Amore, PA Regolaturi tal-anġjoġenesi. Annu. Dun Physiol.1991,53, 217-239. [CrossRef]

18. Folkman, J.;Shing, Y.Angiogenesis. J.Biol. Chem.1992, 267,10931-10934. [CrossRef]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. Fattur ta 'tkabbir endoteljali vaskulari indott minn ipoksja jista' jimmedja l-anġjoġenesi mibdija mill-ipoksja. Natura 1992, 359, 843-848. [CrossRef]

20. Kim, KJ; Li, B.; Winer, J.; Armani, M; Gillett, N.; Phillips, HS; Ferrera, N. L-inibizzjoni ta 'anġjoġenesi indotta mill-fattur tat-tkabbir endoteljali vaskulari irażżan it-tkabbir tat-tumur in vivo. Natura 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Bżar, MS; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Sinerġiżmu qawwi bejn il-fattur tat-tkabbir endoteljali vaskulari u l-fattur bażiku tat-tkabbir tal-fibroblasti fl-induzzjoni ta 'anġjoġenesi in vitro.Biochem. Biophys. Riż. Commun.1992,189,824-831.[CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, J.Effetti sinerġistiċi tal-fattur tat-tkabbir endoteljali vaskulari u l-fattur bażiku tat-tkabbir tal-fibroblasti fuq il-proliferazzjoni u l-formazzjoni tal-kurdun taċ-ċelloli endoteljali kapillari bovini fi ħdan ġellijiet tal-kollaġen. Lab. Investig.1993,69, 508-551.[PubMed]

Agħfas HAWN GĦALL-PARTI Ⅰ