Parti 2: Echinacoside Inibixxi r-Rilaxx ta' Glutamate Billi Jrażżan il-Vultaġġ dipendenti fuq Ca2 flimkien ma' Dħul U Protein Kinase C f'Terminali tan-nervituri Ċerebrokortiċi tal-Firien

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 u Su Jane Wang 3,*

Pls ikklikkja hawn lura għall-Parti 1

3.2 Implikazzjonijiet Terapewtiċi

L-eċċitotossiċità, proċess patoloġiku ikkawżat minn rilaxx eċċessiv tal-glutamate u attivazzjoni tar-riċettur tal-glutamate, hija l-kawża ewlenija ta 'mewt newronali f'disturbi akuti u kroniċi tal-moħħ bħal puplesija, korriment trawmatiku fil-moħħ, mard ta' Parkinson u Alzheimer [13,41], u strateġiji terapewtiċi. li jinvolvu l-inibizzjoni tar-rilaxx tal-glutamate jistgħu jkunu strateġiji newroprotettivi promettenti għat-trattament ta 'tali mard. Echinacoside ġie kkonfermat li jippenetra l-barriera tad-demm-moħħ (BBB) ​​u juri effetti newroprotettivi f'diversi mudelli in vivo ta 'newrotossiċità [8,10-12,42]. Għalkemm il-mekkaniżmu ta 'dawn l-effetti newroprotettivi mhux mifhum kompletament, ġew irrappurtati diversi mekkaniżmi possibbli inkluż inibizzjoni ta' rispons infjammatorju, stabbilizzazzjoni tal-funzjoni mitokondrijali, antiossidazzjoni, tneħħija tar-radikali ħielsa u imitazzjoni tal-funzjoni newrotrofika [5,9,12,42]. Fl-istudju attwali, il-ħila taechinacosidebiex tnaqqas ir-rilaxx tal-glutamate mit-terminali tan-nervituri tista 'wkoll tispjega parzjalment il-mekkaniżmu newroprotettiv tagħha. Madankollu, jekk dan l-effett jikkontribwixxix għall-potenzjal terapewtiku apparenti ta 'echinacosidef'disturbi tal-moħħ assoċjati mal-eċitotossiċità tal-glutamate teħtieġ aktar riċerka.

Effetti newroprotettivi ta'cistanchu echinacoside

4.Materjali u metodi

4.1. Kimiċi

Fura-2-acetoxymethyl ester (Fura-2-AM) u 3',3',3'-dipropylthiadicarbocyanine iodide [DiSC3(5)] inxtraw minn Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). o-conotoxin MVIIC, rottlerin, 2-[1-({3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimide ( GF109203X), 5,6,7,13-tetraidro- 13-metil-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pirrolo[3,{ {27}}c]carbazole-12-propanenitrile (Go6976) u N-[2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H89) inxtraw minn Tocris Bioscience (Bristol, UK) ).Echinacoside, dantrolene, DL-treo-beta-benżil-ossiaspartat (DL-TBOA), 7-kloro-5-(2-klorofeni)-1,5-diidro{ {10}},1-benzothiazepin-2(3H)-one (CGP37157), 2-({2-amino-3- metossifenil)-4H -1-benzopyran-4-one) (PD98059), ethylene glycol bis( -aminoethyl ether)- N,N,N/,N/-tetraacetic acid (EGTA) u r-reaġenti l-oħra kollha nxtraw mingħand Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Annimali

Intużaw firien Sprague–Dawley maskili ta’ xahrejn. L-annimali kienu miżmuma taħt kundizzjonijiet ambjentali standardizzati (22 ± 1 oC; 50 fil-mija umdità relattiva; ċiklu ta 'dawl/dlam ta' 12-il siegħa) u ppermettew aċċess illimitat għall-ikel u l-ilma. L-annimali nqatlu b'dekapitazzjoni u l-kortiċi ċerebrali tneħħa malajr f'4 oC. Il-proċeduri sperimentali ġew approvati mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali Fu Jen (A10259), skont il-Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju. Saru l-isforzi kollha biex tiġi minimizzata t-tbatija tal-annimali u biex jintuża numru minimu ta’ annimali meħtieġ biex jiġu prodotti riżultati affidabbli.

4.3. Preparazzjonijiet Sinaptosomali

Is-sinaptosomi ġew ippurifikati mill-kortiċi ċerebrali tal-firien fuq gradjenti ta' Percoll mhux kontinwi kif deskritt qabel [43,44]. Fil-qosor, it-tessut ġie omoġenizzat f'medju li kien fih 0.32 M sukrożju (pH 7.4), l-omoġenat ġie ċentrifugat għal 10 min fi 3000× g (5{{25} }00 rpm f'rotor JA 25.5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) u 4 oC, u s-supernatant reġa' ġie ċentrifugat għal 12-il minuta f'14,500× g (11, 000 rpm f'rotor JA 25.5). Il-pellet ġie sospiż mill-ġdid bil-mod f'0.32 M sukrożju (pH 7.4), u alikwot ta' din is-sospensjoni sinaptosomali (2 mL) tqiegħdet fuq gradjent discontinu Percoll ta' 3 mL li kien fih 0.32 M sukrożju, 1 mM EDTA, 0.25 mM DL-dithiothreitol, andthiothreitol. 3 fil-mija, 10 fil-mija, u 23 fil-mija Percoll (pH 7.4). Wara ċentrifugazzjoni fi 32,500 × g (16,500 rpm f'rotor JA 20.5) għal 7 min f'4 oC, is-sinaptosomi ġew irkuprati minn bejn l-10 fil-mija u t-23 fil-mija tal-meded Percoll, u ġew dilwiti f'volum finali ta '30 mL ta' Medju buffer HEPES (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2﹒ 6H2O, 1.2 mM Na2HPO4, 10 mM glukożju, u 10 mM HEPES (pH 7.4)). Wara ċentrifugazzjoni ulterjuri f'27,000× g (15,000 rpm f'JA 25.5) għal 10 min, il-pellet tas-synaptosome ġie sospiż mill-ġdid fi 3 mL ta 'medju buffer HEPES, u l-kontenut ta' proteina ġie determinat permezz ta 'assaġġ Bradford. Fl-aħħarnett, 0.5 mg tas-suspensjoni tas-synaptosomes ġiet dilwita f'10 ml ta 'mezz ta' buffer HEPES u ċentrifugata f'3000 × g (5000 rpm f'rotor JA 20.1) għal 10 min. Is-supernatant twarrab, u l-gerbub li kien fihom is-sinaptosomi ġew maħżuna fuq is-silġ u ntużaw fi żmien 4-6 sigħat.

cistanche herb

4.4. Rilaxx ta' Glutamate

Ir-rilaxx tal-glutamat ġie ttestjat permezz ta' flworimetrija onlajn kif deskritt qabel [45,46]. Pritkuni sinaptosomi ġew sospiżi mill-ġdid f'medju buffer HEPES (0.5 mg/mL) u preinkubati f'37 oC għal 10 min fil-preżenza ta 'albumina tas-serum bovina 16 uM biex jorbot kwalunkwe aċidi grassi ħielsa rilaxxati minn sinaptosomi waqt preinkubazzjoni. 2-mL alikwot tas-synaptosomes ġie trasferit għal kuvette mħawwda li kien fih 2 mM NADP plus, 50 unità ta' glutamate dehydrogenase, u 1.2 mM CaCl2, u l-fluworexxenza ta' NADPH ġiet imkejla f'Perkin-Elmer LS{{14} }} spettrofluorimetru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) f'tul ta' mewġ ta' eċitazzjoni u emissjoni ta' 340 u 460 nm, rispettivament. Peress li s-sinaptosomi mhumiex suxxettibbli għall-istimulazzjoni elettrika, l-imblokkatur tal-kanali tal-potassju 4-aminopyridine intuża biex jistimula r-rilaxx tal-glutamat. 4-aminopyridine jiddestabilizza l-potenzjal tal-membrana u huwa maħsub li jikkawża Na spontanju ripetittiv flimkien ma 'depolarizzazzjoni dipendenti fuq il-kanal li tapprossima mill-qrib id-depolarizzazzjoni in vivo tat-terminal sinaptiku li twassal għall-attivazzjoni ta' kanali Ca2 plus li jiddependu mill-vultaġġ u rilaxx tan-newrotrasmettitur [47 ]. Id-dejta nkisbet f'intervalli ta' 2 s. Standard ta 'glutamate eżoġenu (5 nmol) ġie miżjud fl-aħħar ta' kull esperiment. Il-valur tal-bidla fil-fluworexxenza prodotta miż-żieda standard intuża biex jiġi kkalkulat il-glutamate rilaxxat bħala nanomoles ta 'glutamate għal kull milligramma ta' proteina sinaptosomali (nmol/mg). Il-valuri ta' rilaxx ikkwotati fit-test huma livelli milħuqa fi stat fiss wara 5 min ta' depolarizzazzjoni (nmol/mg/5 min). Id-dejta kumulattiva ġiet analizzata bl-użu ta' spreadsheets ta' Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, USA) u MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Potenzjal tal-Membrana tal-Plażma

Il-potenzjal tal-membrana tal-plażma ġie ddeterminat b'żebgħa sensittiva għall-potenzjal tal-membrana, DiSC3 (5) [48]. Is-sinaptosomi ġew sospiżi mill-ġdid f'medju buffer HEPES, u 2 mL alikwoti ġew trasferiti għal kuvette mħawwda li fiha 5 uM DiSC3(5) f'37 oC fi spettrofluworometru Perkin–Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA , L-ISTATI UNITI). Wara li ħalliet it-taħlita tibbilanċja għal 3 min, il-fluworexxenza ġiet iddeterminata f'tul ta' mewġ ta' eċitazzjoni u emissjoni ta' 646 u 674 nm, rispettivament. Id-dejta nġabret f'intervalli ta' 2 s. Id-dejta kumulattiva ġiet analizzata bl-użu ta 'MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) u espressa f'unitajiet ta' fluworexxenza.

4.6. Ca2 ċitosoliku flimkien mal-Konċentrazzjoni ([Ca2 plus ]C)

Il-[Ca2 plus ]C tkejjel bl-indikatur Ca2 plus fura-2. Sinaptosomi (0.5 mg/mL) ġew inkubati minn qabel f'medju buffer HEPES li kien fih 5 uM fura-2 u 0.1 mM CaCl2, għal 30 min f'37 oC f'test tube mħawwad . Wara t-tagħbija tal-fura-2, is-sinaptosomi ġew ċentrifugati f'mikroċentrifuga għal 30 s fi 3000 × g (5000 rpm). Il-gerbub sinaptosomali ġew sospiżi mill-ġdid f'medju buffer HEPES, u s-sospensjoni sinaptosomali tħawwad f'cuvette termostatizzat fi spettrofluorometru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) ġie miżjud wara 3 min u saru żidiet oħra wara 10 min addizzjonali. Id-dejta tal-fluworexxenza ġiet akkumulata f'tul ta 'mewġ ta' eċċitazzjoni ta '340 u 380 nm (tul ta' mewġ ta 'emissjoni 505 nm) f'intervalli ta' 2 s. [Ca2 plus ]C (nM) ġie kkalkulat bl-użu ta' proċeduri ta' kalibrazzjoni [49] u ekwazzjonijiet deskritti qabel [50]. Id-dejta kumulattiva ġiet analizzata bl-użu ta 'MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western Blotting

Is-sinaptosomi ġew omoġenizzati f'liżi buffer (10 mM HEPES buffer, pH 7.4), 1 fil-mija Triton X-100, u taħlita ta 'inibitur tal-protease. Lysates ġew iċċarati permezz ta 'ċentrifugazzjoni, u l-konċentrazzjoni tal-proteini ġiet determinata bl-użu ta' kit ta 'assaġġ tal-proteini (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Ammonti ugwali ta 'proteini ġew separati permezz ta' elettroforesi tal-ġel tas-sodju dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) u ttrasferiti għall-membrana tan-nitrocellulose. Il-membrani ġew imblukkati b'salina buffered Tris li kien fih 5 fil-mija ħalib b'xaħam baxx u inkubati b'antikorp primarju xieraq (fosfo-protein kinase C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) matul il-lejl fi żmien 4 oC. Wara tliet ħasliet f'salina b'Tris-buffered, il-membrana mbagħad ġiet ittrattata bl-antikorp sekondarju konjugat bil-perossidasi tar-ravanell (1:3000) għal siegħa f'temperatura tal-kamra. Il-membrani mbagħad ġew maħsula mill-inqas tliet darbiet b'salina buffered Tris u viżwalizzati bl-użu tas-sistema ta 'kimiluminixxenza msaħħa (Amersham, Buckinghamshire, UK). Alikwot ta' kampjuni ġie mgħobbi u ttestjat b'antikorp anti-PKC għall-iskoperta ta' PKC bħala kontroll tat-tagħbija. Il-livell ta 'espressjoni jew fosforilazzjoni ġie vvalutat permezz ta' densità tal-faxxa, li kienet kwantifikata permezz ta 'densitometrija. Il-kwantifikazzjoni densitometrika tal-meded ġiet analizzata bl-użu tas-softwer Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Analiżi Statistika

Id-dejta nkisbet minn preparazzjoni sinaptosomali waħda u ma kinitx indipendenti minn xulxin. Biex tiġi ttestjata s-sinifikat tal-effett ta' mediċina kontra l-kontroll, intuża t-test ta' Student b'żewġ denbu. Meta kien meħtieġ paragun addizzjonali (bħal jekk it-tieni trattament influwenzax l-azzjoni ta 'echinacoside), intużat ANOVA one-way segwit mit-test ta' Tukey. L-analiżi tlestiet permezz tas-softwer SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Id-dejta hija espressa bħala medja ± SEM; is-sinifikat ġie evalwat f'p < 0.05="" għall-miżuri="" statistiċi="">

cistanche

5. Konklużjonijiet

Dan huwa l-ewwel studju li juri li echinacoside jinibixxi r-rilaxx tal-glutamate minn sinaptosomi ċerebrokortikali tal-firien billi jnaqqas l-influss ta’ Ca2 plus permezz tal-kanali Cav2.2 u Cav2.1, u din l-inibizzjoni tar-rilaxx x’aktarx dipendenti fuq is-soppressjoni tal-mogħdija tal-proteina kinase C, għall-inqas f’ parti. Is-sejba preżenti hija ta 'valur għaliex tipprovdi ħarsa ġdida dwar il-mekkaniżmi ta' azzjoni ta 'echinacoside fil-moħħ.

Rikonoxximenti: Dan ix-xogħol kien appoġġjat minn għotja mill-Ministeru tax-Xjenza u t-Teknoloġija (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur: Tzu Yu Lin u Su Jane Wang ikkonċepiw u ddisinjaw l-esperimenti; Cheng Wei Lu wettaq l-esperimenti; Cheng Wei Lu u Shu Kuei Huang analizzaw id-dejta; Su Jane Wang kiteb il-karta.

Kunflitti ta' Interess: L-awturi jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.

estratt tal-ħxejjex aromatiċi cistanche

Referenzi

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analiżi ta 'phenylethanoid glycosides ta' Herba cistanchis minn RP-HPLC. Acta Pharm. Sin. 1997, 32, 294–300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Effetti antiossidanti sinerġistiċi ta 'alkamidi, derivattivi ta' l-aċidu caffeic, u frazzjonijiet ta 'polisakkaridi minn Echinacea purpurea fuq ossidazzjoni in vitro ta' lipoproteini ta 'densità baxxa tal-bniedem. J. Agri. Chem tal-Ikel. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Immunomodulazzjoni medjata minn ġulepp tal-ħxejjex li fih estratt standardizzat ta 'għeruq ta' Echinacea: Studju pilota f'suġġetti umani b'saħħithom dwar l-espressjoni tal-ġeni taċ-ċitokini. Phytomedicine 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Hu, WJ; Fang, TH; Tu, PF Progress tar-riċerka dwar l-attivitajiet farmakoloġiċi ta 'echinacoside. Iċ-Ċina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside isalva ċ-ċelloli newronali SHSY5Y mill-apoptosi indotta minn TNFalpha. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Attivitajiet newroprotettivi in ​​vitro ta 'phenylethanoid glycosides minn Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside Jipproteġi kontra 6- Disfunzjoni Mitokondrijali Indotta minn Hydroxydopamine u Rispons Infjammatorji fiċ-Ċelloli PC12 permezz tat-Tnaqqis tal-Produzzjoni ROS. Evid. Komplement Ibbażat. Alternattiv. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Espożizzjoni temporanja għal echinacoside hija biżżejjed biex tattiva s-sinjalar Trk u tipproteġi ċ-ċelloli newronali minn rotenone. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Effetti newroprotettivi ta 'echinacoside fil-mudell MPTP tal-ġurdien tal-marda ta' Parkinson. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Effetti ta 'echinacoside fuq livelli histio-ċentrali ta' massa attiva fil-firien ta 'okklużjoni ta' l-arterja ċerebrali tan-nofs. Biomed. Environ. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Treġġigħ lura minn estratti milwiema ta 'Cistanche tubulosa minn defiċiti fl-imġieba f'mudell ta' far bħall-marda ta 'Alzheimer: Rilevanza għad-depożizzjoni ta' l-amilojde u l-funzjoni tan-newrotrasmettitur ċentrali. BMC Kumpliment. Alternattiv. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Effetti newrotrofiċi u newrorescue ta 'Echinacoside fil-mudell tal-ġurdien MPTP subakut tal-marda ta' Parkinson. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamate bħala newrotrasmettitur fil-moħħ: reviżjoni tal-fiżjoloġija u l-patoloġija. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Noh, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Coenzyme Q10 jinibixxi l-eċitotossiċità tal-glutamate u l-alterazzjoni mitokondrijali medjata mill-istress ossidattiv f'mudell tal-ġrieden ta 'glawkoma. Investig. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalċju u ħsara newronali excitotoxic. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Riċetturi tal-glutamate, newrotossiċità u newrodeġenerazzjoni. Pflugers. Arch. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Mekkaniżmi molekulari ta 'mewt taċ-ċelluli newronali excitotoxic medjata mir-riċettur tal-glutamate. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotection minn antagonisti tar-riċetturi tal-glutamate kontra l-mewt taċ-ċelluli excitotoxic ikkaġunata minn aċċessjoni fil-moħħ li qed jixjieħ. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Effetti newroprotettivi ta 'NMDA u antagonisti tar-riċetturi tal-glutamate metabotropiku tal-grupp I kontra n-newrodeġenerazzjoni indotta minn omoċisteine ​​f'hippocampus tal-firien: Studju in vivo. J. Mol. Newrosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Ir-rwol ta 'eċċitotossiċità fil-mard newrodeġenerattiv: implikazzjonijiet għat-terapija. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Approċċi terapewtiċi bbażati fuq Glutamate: Provi kliniċi b'antagonisti NMDA.Curr. Opinja. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Ġordan, J.; Hernández-Guijo, JM Neuroprotectant minocycline jnaqqas in-newrotrażmissjoni glutamaterġika u s-sinjalar Ca2 flimkien fin-newroni tal-hippocampal. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantine jnaqqas ir-rilaxx tal-glutamate permezz ta 'inibizzjoni ta' Ca2 dipendenti fuq il-vultaġġ flimkien ma 'dħul u protein kinase C fit-terminali tan-nervituri tal-kortiċi ċerebrali tal-firien: Mekkaniżmu indipendenti mir-riċettur NMDA. Neurochem. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Antagonist tar-riċettur tal-glutamate 5 metabotropiku mhux kompetittiv (E)-2-methyl-6- styryl-pyridine (SIB1893) inaqqas ir-rilaxx tal-glutamate permezz ta' inibizzjoni ta' Ca2 dipendenti fuq il-vultaġġ flimkien ma' dħul fit-terminali tan-nervituri ċerebrokortikali tal-firien (sinaptosomi). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Metodu rapidu għall-iżolament ta' sinaptosomi fuq gradjenti Percoll. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE rilaxx tal-glutamate dipendenti mill-proteini mill-astroċiti.J. Newrosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Approċċi terapewtiċi bbażati fuq glutamate: Timmira s-sistema tat-trasport tal-glutamate.

Curr. Opinja. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Ir-retikulu sarcoplasmic Ca2 flimkien ma 'kanal/riċettur tar-ryanodine: Modulazzjoni minn effetturi endoġeni, drogi u stati ta' mard. Pharmacol. Rev 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fann, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protein kinase C delta medjata ċitotossiċità ta' 6-Hydroxydopamine permezz ta' attivazzjoni sostnuta ta' kinase 1/2 regolata minn sinjal extraċellulari fiċ-ċelloli PC12. Neurol. Riż. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, inibitur ġdid tal-proteina kinażi. Biochem. Biophys. Riż. Komun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DĠ; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Rilaxx dipendenti u indipendenti mill-kalċju ta 'glutamate minn sinaptosomi mmonitorjati minn flwometrija kontinwa. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA L-igganċjar ta 'riċetturi tan-newrotrasmettituri ma' kanali joniċi fil-moħħ. Xjenza 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Inibizzjoni presinaptica ta 'rilaxx ta' newrotrasmettitur ikkawżat. Xejriet Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Karatterizzazzjoni farmakoloġika ta 'kanali tal-kalċju presinattiċi bl-użu ta' kejl bijokimiku subsecond ta 'newrosekrezzjoni sinaptosomali. Neurofarmakoloġija 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Akkoppjar differenzjali ta 'kanali tal-kalċju tat-tip N- u P/Q għal eżoċitożi tal-glutamate fil-kortiċi ċerebrali tal-firien. Newrosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Il-modulazzjoni presinaptica tar-rilaxx tal-glutamate timmira kanali differenti tal-kalċju fit-terminali tan-nervituri ċerebrokortikali tal-firien. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Long, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN Nerve Terminal GABAA Riċetturi Jattivaw Ca2 plus /Calmodulin-dipendenti Sinjali biex Inibixxu Voltage-gated Ca2 flimkien ma 'Influx u Glutamate Release. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angolu, JM; Iswed, ED; Joyal, JL; Xkejjer, DB; Madara, Regolament JL PKC-dipendenti tar-reżistenza transepiteljali: Rwoli ta 'MLC u MLC kinase. Em. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Ir-regolamentazzjoni tas-sekrezzjoni tan-newrotrasmettitur minn protein kinase C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DĠ; Pocock, JM Fosforilazzjoni ta 'sinapsin I u MARCKS fit-terminali tan-nervituri hija medjata minn Ca2 flimkien ma' dħul permezz ta 'kanal Ca2 plus sensittiv għal Aga-GI li huwa akkoppjat ma' eżoċitożi tal-glutamate. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]

41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Trasmissjoni glutamaterġika mibdula f'disturbi newroloġiċi: Minn glutamate extraċellulari għoli għal effikaċja sinaptika eċċessiva. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside jinibixxi l-fibrillizzazzjoni tal-amilojde ta' HEWL u jipproteġi kontra n-newrotossiċità indotta minn A. Int. J. Biol. Makromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin jinibixxi r-rilaxx ta 'glutamate fit-terminali tan-nervituri ċerebrokortikali tal-firien. Tossikol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin jinibixxi r-rilaxx tal-glutamate u jeżerċita newroprotezzjoni kontra l-eċċitotossiċità indotta mill-aċidu kainic fl-ippokampus tal-firien. Newrotossikoloġija 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DĠ; Sihra, TS Synaptosomes jippossjedu ġabra eżoċitotika ta 'glutamate. Natura 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, mediċina kontra l-istamina, jinibixxi r-rilaxx tal-glutamate fit-terminali tan-nervituri ċerebrokortikali tal-firien. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DĠ Potenziali ta' azzjoni ripetittiva f'terminali tan-nervituri iżolati fil-preżenza ta' 4-aminopyridine: Effetti fuq rilaxx ta' Ca2 plus ħieles ċitosoliku u glutamate. J. Neurochem. 1989, 53,1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Id-dipendenza jonika tal-potenzjal tal-membrana u r-risponsi marbuta mar-riċettur tal-glutamate f'synaptoneurosomes kif imkejla b'żebgħa taċ-cyanine, DiSC2 (5).J. Neurochem. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Localized Ca2 flimkien ma 'dħul preferenzjali jaffettwa d-defosforilazzjoni tal-proteini, il-fosforilazzjoni, u r-rilaxx tal-glutamate. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Ġenerazzjoni ġdida ta' indikaturi Ca2 plus bi proprjetajiet ta' fluworexxenza mtejba ħafna. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]