Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Pls ikklikkja hawn għall-Parti 1

Pls ikklikkja hawn għall-Parti 3

Cistanche jista 'jtejjeb il-memorja

Minħabba dawn is-sejbiet, imbagħad eżaminajna jekk l-espressjoni miR-466f{-3p tal-hippocampal irregolatax fil-ġrieden fuq tagħlim spazjali umemorjaformazzjoni affettwat ukoll il-morfoloġija newronali in vivo. B'mod sinifikanti, sibna li d-densità medja tas-sinsla tan-newroni tal-hippocampal tal-ġrieden GLN kienet ogħla minn dik tal-ġrieden PLN, kif żvelat mill-impregnazzjoni ta' Golgi tal-piramidali.

Figura 3. Effetti tal-alterazzjoni tal-livelli ta' espressjoni miR-466f{-3p tal-hippocampal fuq il-prestazzjoni tal-MWM tal-ġurdien

(A) Skeda ta 'żmien sperimentali tal-kompitu MWM, analiżi tal-espressjoni, jew kejl tal-elettrofiżjoloġija tal-imħuħ tal-ġurdien wara injezzjoni ta' lentivirus.

(B) Pannelli tax-xellug: espressjoni ta 'dsRed fl-hippocampus tal-ġurdien. Immaġini rappreżentattivi IF ta' ingrandiment baxx u għoli ta' hippokampus minn ġrieden infettati b'lentiviruses rikombinanti li jesprimu dsRed-only bħala kontroll (kolonna tax-xellug ta' immaġini) jew miR-466f{-3p flimkien ma' dsRed (lemin kolonna ta’ stampi). Iż-żoni f'kaxxa taż-żewġ immaġini ta' fuq huma mkabbra u murija hawn taħt. Vireg tal-iskala, 100 mm. Il-linji bit-tikek jindikaw il-konfini tad-DĠ. In-nuklei kienu mtebbgħin b'DAPI. GCL, saff taċ-ċelluli tal-granuli; ML, saff molekulari. Istogramma tal-lemin, livelli ta' espressjoni relattiva ta' miR-466f{-3p fl-ippokampus tal-ġrieden infettat b'lentivirus li jesprimi kontroll jew miR-466f{{-3p, kif ttestjat minn RT-qPCR ( n=16 għal kull grupp).

(C) Prestazzjonijiet MWM ta' ġrieden infettati b'lentiviruses rikombinanti differenti, ippakkjati bl-użu ta' ħames plasmidi differenti li jesprimu dsRed-only, miR-466f-3p, mut-miR-466f{ {5}}p, u miR/SCR-sponges, rispettivament, fl-ippokampus tagħhom (n=13, 26, 16, 19, u 11 għal kull grupp, rispettivament). Panel tax-xellug: latency ta 'ħarba waqt it-taħriġ. Panel tal-lemin: latency ta 'ħarba individwali fis-6 sessjoni.

Id-dejta murija f'(B) hija ppreżentata bħala medja ± SD, u d-dejta murija f'(C) hija ppreżentata bħala medja ± SEM. Is-sinifikat statistiku ġie evalwat permezz ta' test t mhux imqabbad (B), ANOVA f'żewġ direzzjonijiet b'paragun post hoc Bonferroni (Ċ, panel tax-xellug), jew ANOVA wieħed bit-test post hoc ta' Tukey (C, panel tal-lemin). Differenzi statistiċi: #p < 0.05,="" **/##p="">< 0.01="" u="" ****p="">< 0.0001;="" *mir-466f-3p="" kontra="" oħrajn;="" #mir-sponża="" versus="">

newroni fl-ippokampus tal-ġurdien GLN u PLN (Figura S3). Dawn is-sejbiet juru li r-regolazzjoni 'l fuq tal-hippocampal miR-466f{-3p tippromwovi t-tkabbir tan-newrite u l-formazzjoni tas-sinsla dendritika, li hija simili għall-induzzjoni tad-densità tas-sinsla osservata fl-ippokampus tal-ġrieden GLN meta mqabbla mal-ġrieden PLN.

miR-466f-3p jimmodula b'mod pożittiv it-tagħlim spazjali tal-ġurdien umemorjaprestazzjoni, kif ukoll plastikità sinaptika

Biex tinvestiga jekk miR-466f{-3p jirregolax b'mod pożittiv it-tagħlim spazjali tal-ġurdien umemorjaformazzjoni, użajna approċċ ta 'infezzjoni lentivirus rikombinanti biex jesprimu żżejjed il-miRNA fl-ippokampus tal-ġurdien. Il-ġrieden ġew analizzati 7 ijiem wara l-injezzjoni ta 'lentivirus fid-DG (Figura 3A). Immaġini rappreżentattivi tal-livelli ta' espressjoni tal-ġenbejn ta' miR-466f{-3p kienu tabilħaqq elevati fil-grupp ta' espressjoni eċċessiva ta' miR{-466f{-3p meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll (istogramma tal-lemin fil-Figura 3B). Sibna li ġrieden b'espressjoni eċċessiva tal-ippocampal ta' miR-466f{- 3p u soġġetti għall-kompitu MWM urew latenzi ta' ħarba ta' 88 ± 5 s fl-ewwel sessjoni u 19 ± 1 s fis-6 sessjoni (aħmar dot line, Figura 3C), li kienu aħjar milli għal ġrieden ta 'kontroll tal-vettur (linja sewda) jew ġrieden ta' kontroll mutanti (linja ta 'ċirku aħmar) u simili għal-latencies ta' ħarba ta 'ġrieden GLN deskritti f'Figura 1A. B'mod parallel, eżaminajna l-effett tat-telf tal-funzjoni miR{-466f{-3p fuq it-tagħlim spazjali umemorjabilli jinibixxi miR-466f{-3p bl-użu ta' miR-sponge. Notevolment, il-prestazzjoni tal-MWM tal-ġrieden li fihom hippocampal miR-466f{-3p kien maqbud mill-miR-sponge kienet simili għal dik tal-ġrieden PLN, jiġifieri, ma tgħallmux isibu l-pjattaforma anki billi l-aħħar sessjoni (linja kwadra ħadra solida,

Figura 3C). Barra minn hekk, ġrieden injettati b'lentivirus ma dehrux li ħarbtu l-plastiċità omeostatika, peress li xi ġrieden f'kull grupp kienu tgħallmu jew għall-inqas kienu fil-proċess tat-tagħlim matul l-aħħar sessjoni (Figura 3C, istogramma tal-lemin).

Minħabba li l-espressjoni żejda ta' miR-466f{-3p fl-ippokampus tal-ġurdien tejbet it-tagħlim tagħhom umemorjakapaċità, analizzajna l-elettrofiżjoloġija komparattiva ta 'newroni tal-hippocampal ikkultivati ​​li jesprimu livelli differenti ta' miR-466f-3p. Il-kurrent postsinaptiku eċitatorju minjatura (mEPSC) minn newroni tal-ippokamp DIV14 li jesprimu żżejjed miR-466f{-3p jew mut-miR-466f-3p, miR-sponża, jew kontroll kien reġistrati bl-użu ta' klampi tal-garża taċ-ċelluli kollha. Filwaqt li ma kien hemm l-ebda differenzi sinifikanti fl-amplitudni tal-mEPSC, żieda fit-Tau, jew it-tħassir tat-Tau fost l-erba’ settijiet ta’ kampjuni, il-frekwenza tal-mEPSC tan-newroni li jesprimu żżejjed miR-466f{-3p kienet ogħla b’mod sinifikanti meta mqabbla ma’ gruppi oħra (Figura 4A), li jindikaw li r-riċetturi glutaminerġiċi postsinaptiċi kienu attivati ​​b'mod aktar qawwi fuq espressjoni żejda ta' miR-466f{- 3p.

Imbagħad imkejla l-potenzament fit-tul (LTP) biex niddeterminaw direttament ir-rwol ta 'miR-466f{-3p fil-plastiċità sinaptika in vivo. Injettajna l-ippokampu tal-ġrieden b'lentivirus rikombinanti kif deskritt fil-Figura 3 u mbagħad indottajna qatgħat LTPinhippocampals bi stimulazzjoni tetanika (tliet ferroviji ta 'stimulazzjoni ta' frekwenza għolja [3xHFS]) tal-mogħdija kollaterali Schaffer. Sibna li l-protokoll tagħna indotta LTP fil-gruppi kollha, kif muri miż-żieda persistenti fil-potenzjali postsinaptiċi eċċitatorji tal-qasam (fEPSPs) fir-reġjun cornu ammonis 1 (CA1) (Figura 4B, panel tax-xellug). L-LTP kien aktar b'saħħtu fil-flieli li jesprimu żejjed miR-466f{-3p (188 fil-mija ± 2 fil-mija tal-linja bażi f'40-50 min wara l-istimulazzjoni, medja ± SEM) meta mqabbel ma' mutant (169 fil-mija ± 1 fil-mija) tal-linja bażi), SCR- sponża (173 fil-mija ± 3 fil-mija tal-linja bażi), u flieli infettati bil-virus tal-kontroll (159 fil-mija ± 2 fil-mija tal-linja bażi), bħala inibizzjoni miR-466f-3p minn miR-sponge naqqas l-LTP (128 fil-mija ± 1 fil-mija tal-linja bażi) relattiv għall-kontrolli (Figura 4B, panel tal-lemin). Aħna kejlna wkoll l-LTP tal-gruppi GLN u PLN wara t-taħriġ. Id-dejta rispettiva wriet ukoll differenzi sinifikanti fl-inklinazzjoni tal-fEPSP fir-reġjun CA1 bejn il-gruppi GLN u PLN (Figura 4C). Għalhekk, livell elevat ta' miR-466f{-3p isaħħaħ l-LTP u l-plastiċità sinaptika li, min-naħa tagħha, tista' tippromwovi t-tagħlim umemorjakapaċità tal-ġrieden. Flimkien, id-dejta ppreżentata fil-Figuri 2, 3, u 4 turi li miR-466f{-3p għandu rwol pożittiv kritiku fit-tagħlim spazjali umemorjaformazzjoni, probabbli billi ttejjeb il-formazzjoni tas-sinsla, LTP, u s-saħħa tal-plastiċità sinaptika.

L-mRNA ta' Mef2a huwa mira regolatorja ta' miR-466f-3p

Aħna wettaqna analiżi bijoinformatika biex nidentifikaw l-mRNAs fil-mira potenzjali regolati bl-irbit ta' miR-466f{-3p mat-30 UTR tagħhom. Fost il-kandidati li identifikajna kien hemm l-mRNA Mef2a li jikkodifika MEF2A. Interessanti, l-espressjoni MEF2A preċedentement instabet li kienet irregolata wara t-taħriġ MWM, u l-espressjoni żejda ta 'dan il-fattur eżerċitat effett negattiv fuq il-prestazzjonijiet tal-ġrieden (Cole et al., 2012). Għalhekk, użajna assaġġ ta' reporter luciferase biex neżaminaw jekk miR-466f{-3p jirregolax it-traduzzjoni ta' Mef2a mRNA billi jorbot mat-30 UTR tiegħu. Aħna daħħalna sekwenzi ta' Mef2a 30 UTR ta' tip selvaġġ jew mutanti 'l isfel minn SV40-cDNA luciferase mmexxi minn promotur (Luc), li rriżulta fil-plasmid reporter psiCHECK2-MEF2A 30 UTR jew psiCHECK2- mut-MEF2A 30 UTR (Figura 5A). Kif muri fl-istogramma tax-xellug tal-Figura 5B, il-ko-espressjoni ta 'miR-466f{-3p attenwat l-espressjoni ta' luciferase diretta minn Mef2a 30 UTR. Dan l-effett deher li kien jiddependi fuq l-interazzjoni bejn miR-466f{-3p u Mef2a 30 UTR peress li l-mutazzjoni jew tas-sit ta' rbit previst ta' miR{-466f{-3p fuq il-Mef2a 30 UTR (50-UGU- GUAU-30) jew ir-reġjun taż-żerriegħa ta' miR{-466f-3p (50-AUACACA-30) ir-rikonoxximent ta 'Mef2a 30 UTR ħassar l-effett inibitorju ta' miR-466f{-3p fuq l-attività tal-luċiferażi (Figura 5B, istogramma tan-nofs). Barra minn hekk, il-ko-espressjoni tal-miR-sponge, iżda mhux l-isponża CR, eliminat ukoll l-effett ripressiv ta 'miR-466f{{-3p fuq l-attività tal-luċiferażi (Figura 5B, istogramma tal-lemin). Notevolment, la l-espressjoni żejda ta 'miR-466f{{{-3p u lanqas miR-sponge ma kellhom xi effett fuq il-livelli ta' Mef2a mRNA fin-newroni tal-hippocampal primarji (Figura 5C), iżda naqqsu jew żiedu, rispettivament, il- livell ta 'proteina MEF2A (Figura 5D). Sibna wkoll li l-espressjoni żejda ta 'miR-466f{{-3p jew miR-sponge, rispettivament, irregolat jew irregolat 'l fuq il-livell ta' mRNA ta 'proteina assoċjata ċitoskeletali regolata bl-attività (Arc) fin-newroni tal-hippocampal primarji (Figura 5C) , li kienet mira downstream magħrufa regolata b'mod pożittiv minn MEF2A (Flavell et al., 2006)

Aħna wettaqna wkoll ibridizzazzjoni in situ tal-fluworexxenza (FISH) biex niskopru miR-466f{-3p u kkombinajna mat-tikkettar IF ta 'MEF2A f'newroni tal-hippocampal primarji DIV14 mingħajr jew bi trattament ta' forskolin. Forskolin huwa magħruf li jinduċi LTP kimiku u jattiva adenylyl cyclase, u b'hekk jgħolli l-livelli ta 'cAMP intraċellulari. Aħna osservajna kolokalizazzjoni nukleari ta 'MEF2A ma' miR-466f{- 3p, kif muri mill-immaġini rappreżentattivi fil-Figura 5E. Wara l-istimulazzjoni tal-forskolin, madankollu, is-sinjal miR-466f{{-3p żdied kemm fis-soma kif ukoll fid-dendriti, filwaqt li s-sinjal MEF2A fis-

nukleu naqas, kif muri mill-bidliet reċiproċi tal-intensitajiet tas-sinjali MEF2A u Fast Red, rispettivament, taċ-ċelloli newronali individwali (Figura 5E). Fil-qosor, id-dejta fil-Figuri 5A–5E tindika li miR-466f{{-3p tirregola b'mod negattiv l-espressjoni tal-proteina MEF2A billi torbot mat-30 UTR ta 'Mef2a mRNA u konsegwentement tirreprimi t-traduzzjoni tagħha.

B'mod konsistenti mar-riżultati deskritti hawn fuq, sibna li l-livelli tal-hippocampal tal-proteina MEF2A kienu regolati 'l isfel fil-ġrieden GLN wara t-taħriġ MWM, iżda mhux fil-ġrieden PLN (Figura 5F). Barra minn hekk, il-livelli relattivi ta 'MEF2A fi ġrieden GLN individwali (tikek) u ġrieden PLN (kwadri) kienu inversament korrelatati mal-livelli ta' miR-466f-3p (R=0.60, Figura 5G). Għalhekk, mudelli eteroġenji ta 'tagħlim spazjali umemorjail-kapaċità huma modulati minn żidiet stokastiċi ta' miR- 466f{-3p tal-hippocampal fil-ġrieden individwali u tnaqqis konsegwenti ta' MEF2A mal-istimulazzjoni tal-attività newronali.

Attivazzjoni stokastika tal-Hippocampal CREB u r-regolazzjoni ta' traskrizzjoni konsegwenti tar-raggruppament miR- 466-669 waqt it-taħriġ tal-MWM

Aħna investigajna l-mekkaniżmi li bihom R-466f{-3p fl-ippokampus tal-ġurdien jistgħu jiġu rregolati b'mod stokastiku mill-kompitu MWM. Hemm tliet prekursuri tal-miRNA li jikkodifikaw miR-466f{-3p, li kollha jappartjenu għall-grupp miR-466-669 speċifiku għall-gerriema li jinsab fl-intron 10 tal-ġene ospitanti tiegħu, mSfmbt2 (Inoue et al. ., 2017) (Figura 6A). Interessanti, b'kuntrast ma' miR-466f{-3p, ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti fil-livelli ta' espressjoni ta' mSfmbt2 bejn il-GLNandPLNgroups (Figura 6B), li jissuġġerixxi li l-miR-466-669 cluster jista' jikkodifika traskrizzjoni separata. minflok ma tkun parti mit-traskrizzjoni primarja ta' mSfmbt2. Għaldaqstant, iddisinjajna diversi settijiet ta' primers biex nidentifikaw it-traskrizzjoni primarja putattiva ta' miR-466-669 cluster permezz ta' RT-qPCR. Kif muri fil-figura 6A, framment PCR twil ( plus 282 sa 2,381), flimkien ma 'serje ta' meded qPCR li jikkoinċidu, jiġifieri A ( plus 282 sa 115), B ( 131 sa 406), C ( 388 sa 686), D ( 662 sa 1,028), E ( 1,004 sa 1,299), F ( 1,242 sa 1,629), G ( 1,605 sa 2,029), u H ( 2,005 sa 2,381), setgħu jiġu skoperti fl-ippokampus tal-ġrieden, iżda mhux parti I ( 2,3766 sa 2,381). ) (data mhux murija). Din id-dejta tappoġġja li r-raggruppament miR-466-669 ikkodifika traskrizzjoni twila qrib madwar 2,388 bp 'il fuq mill-ewwel prekursur tal-miRNA (jiġifieri, pre-mir{-466 m, indikat flimkien ma' 1 f'Figura 6A). B'mod notevoli, simili għal dak li sibna għal miR-466f{-3p, il-livell medju ta 'din it-traskrizzjoni fl-ippokampus tal-ġrieden GLN kien ogħla milli għall-ġrieden PLN (Figura 6C). Għalhekk, it-tagħlim imsaħħaħ umemorjail-kapaċità tal-ġrieden GLN hija dovuta għall-attivazzjoni tat-traskrizzjoni tar-raggruppament miR-466-669.

L-attivazzjoni ta' CREB nukleari permezz ta' fosforilazzjoni waqt kompiti MWM jew f'forom oħra ta' tagħlim hija pass kritiku għall-konverżjoni ta' terminu qasir għal terminu twil.memorja(Lisman et al., 2018; Roger- son et al., 2014). Għalhekk, investigajna jekk il-livelli varji ta 'miR-466f{-3p fost ġrieden individwali li għaddew mill-kompitu MWM jistgħux ikunu korrelatati mal-istatus ta' attivazzjoni ta 'CREB. Biex tesplora din l-idea, l-ewwel eżaminajna l-livelli ta 'fosforilazzjoni ta' hippocampal CREB fi ġrieden individwali. Kif muri fil-Figura 6D, l-attivazzjoni tal-CREB (bil-fosforilazzjoni f'residwu S-133) ġiet imsaħħa fil-ġrieden GLN relattiva għall-ġrieden PLN u HC. Aħna kkonfermajna wkoll li miR-466f{{-3p kien tabilħaqq ko-espress ma pCREB fin-newroni billi wettaq miRNA ISH flimkien ma' tbajja IF ta' pCREB u MAP2 fin-newroni tal-hippocampal primarji (Figura S2A). Barra minn hekk, il-livelli ta' traskrizzjoni primarja ta' cluster miR- 466-669 kienu korrelatati b'mod pożittiv ma' pCREB fil-ġrieden GLN (R=0.52), filwaqt li kien korrelatat b'mod negattiv ma' pCREB fil-ġrieden PLN (R=0 .71) (Figura 6E). Aħna ċċekkjajna għal korrelazzjoni bejn il-livelli ta 'fattur attiv ieħor, kinażi phospho-extracellular sinjal regolat (pERK), u l-livelli ta' traskrizzjoni primarja tar-raggruppament miR-466-669. Sibna li ż-żewġ tipi ta’ ġrieden imħarrġa bl-MWM ippreżentaw korrelazzjonijiet pożittivi bejn is-sinjal tal-cluster miR-466-669 u pERK (R=0.59 u 0.48, rispettivament; Figura S4A), u ma kien hemm l-ebda differenza fil-pERK/ espressjoni tERK bejn dawk iż-żewġ gruppi (Figura S4B). Biex jiġi ċċarat aktar l-impatt tal-attivazzjoni CREB fuq ir-regolazzjoni transkrizzjonali tal-miR-466-669cluster u, konsegwentement,

induzzjoniofmiR-466f{-3p,weusedaspecificCREBinhibitor,666- 15 (Xie et al., 2015), flimkien ma 'trattament ta' forskolin ta 'newroni tal-hippocampal primarji DIV14. Forskolin huwa magħruf li jattiva l-fosforilazzjoni CREB (Malhotra et al., 2015). Sibna li t-trattament minn qabel tan-newroni tal-hippocampal primarji b'attivazzjoni CREB indotta mill-forskolin imblukkata (Figura 6F) u naqqas il-livelli ta' miR-466f-3p u miR-466-669 cluster traskrizzjoni (Figuri 6G u 6H). Fl-istess ħin, il-livelli ta 'mRNA tal-ġeni magħrufa fil-mira pCREB nurr1 u homer1a (Bridi et al., 2017; Jensen et al., 2017) tnaqqsu wkoll mat-trattament 666-15 (Figura 6H). Meħuda flimkien, il-Figura 6 turi li l-attivazzjoni stokastika ta' CREB fl-ippokampus ta' sottopopolazzjoni ta' ġrieden inbred li għaddejjin minn kompitu MWM tinduċi traskrizzjoni tar-raggruppament miR-466-669 u, konsegwentement, induzzjoni ta' miR-466f{{23 }}p, biex b'hekk itejbu t-tagħlim spazjali tagħhom umemorjakapaċità li twettaq aħjar fil-kompitu.

DISKUSSJONI

Esplorajna r-rwol possibbli tal-miRNAs fil-modulazzjoni tal-kapaċità li tvarja tat-tagħlim spazjali umemorjafost ġrieden C57BL/6J inbred. Nissuġġerixxu li l-attivazzjoni stokastika ta’ CREB u r-regolazzjoni ’l fuq konsegwenti ta’ miR-466f-3p tal-hippocampal tgħodd għall-akbar tagħlim spazjali umemorjakapaċità ta’ sottogrupp tal-ġrieden tat-test tagħna, probabbli minħabba miR-466f{-3p li jimmedja l-inibizzjoni tat-traduzzjoni tal-mRNA Mef2a li tikkodifika l-memorjaregolatur negattiv MEF2A. Is-sejbiet tagħna jipprovdu xenarju li juri r-rwol funzjonali u evoluzzjonarju ta 'miRNA speċifiku fir-regolazzjoni tal-konjizzjoni permezz ta' induzzjoni stokastika ta 'assi CREB-pCREB-miR-466f-3p-MEF2A minn stimoli ambjentali.

Il-kompitu MWM intuża ħafna biex jeżamina l-kapaċità li tvarja tat-tagħlim spazjali umemorjagħall-annimali gerriema. Taħt kundizzjonijiet normali, annimali gerriema jużaw indikazzjonijiet distali biex jorjentaw lilhom infushom, li jippermettulhom jitgħallmu u jimmemorizzaw il-post tal-pjattaforma moħbija fil-kompitu. Ħafna mill-ġrieden C57BL/6J inbred tat-test tagħna (62 fil-mija) urew mudell normali ta 'latency ta' ħarba, u sabu l-pjattaforma fi żmien 30 s bis-sessjonijiet 3rd-6th (Figura 1A, GLN). B'kuntrast, grupp ta 'ġrieden (38 fil-mija) ma tgħallmux il-kompitu anki sas-6 sessjoni (PLN). Notevolment, aħna ssuġġettajna wkoll lill-ġrieden għal żewġ testijiet oħra ta 'rikonoxximent. L-ewwel kien it-test tar-rikonoxximent tal-oġġett ġdid (NOR), li huwa prova waħda bbażata fuq esplorazzjoni innata mingħajr tisħiħ jew stress biex timmotiva l-imġiba (Leger et al., 2013). Il-korrelazzjoni bejn il-kompiti NOR u MWM f'termini ta' prestazzjonijiet tal-ġurdien hija fqira (R {{1{{20}}}}.13), li hija simili għall-korrelazzjoni bejn il-prestazzjonijiet NOR u l-livelli tal-espressjoni tal-hippocampal ta' miR-466f-3p (R=0.01; data mhux murija). It-test NOR ma żvela wkoll l-ebda differenza fl-indiċi tad-diskriminazzjoni bejn il-gruppi MWM GLN u PLN (0.36 ± 0.25 kontra 0.29 ± 0.18; Figura S1B). It-tagħlim spazjali l-ieħor umemorja-kompitu dipendenti li applikajna huwa l-labirint ta 'Barnes (BM), li huwa simili għall-MWM. Huwa bbażat fuq is-suppożizzjoni li annimali gerriema mqiegħda f'ambjent avversiv għandhom jitgħallmu u jiftakru l-post ta 'kaxxa tal-ħarba li tinsab taħt il-wiċċ tal-pjattaforma. Kif muri fil-Figura S1C, sibna li l-prestazzjonijiet tal-ġurdien fil-provi tas-sonda BM huma wkoll korrelatati b'mod pożittiv mal-livelli ta 'espressjoni tal-hippocampal ta' miR-466f-3p. Għalhekk, l-induzzjoni tal-assi CREB-pCREB-miR-466f-3p-MEF2A fl-ippokampus waqt it-tagħlim umemorjaformazzjoni hija spazjalment dipendenti mill-kuntest.