Parti 1|Glycogen Synthase Kinase 3b Iperattività fiċ-Ċelloli Exfoliated ta' l-Awrina Tbassar Progressjoni tal-Mard Dijabetiku tal-Kliewi

Xianhui Liang, et al

1 Ċentru ta 'Purifikazzjoni tad-Demm, Istitut tan-Nefroloġija, l-Ewwel Sptar Affiljat tal-Università ta' Zhengzhou, Zhengzhou, iċ-Ċina; 2Departmentof Medicine, Division of Kidney Disease and Hypertension, Rhode Island Hospital, Brown University School of Medicine, Providence, RhodeIsland, USA; u 3Dipartiment tal-Mediċina, Diviżjoni tan-Nefroloġija, Kulleġġ tal-Mediċina tal-Università ta' Toledo, Toledo, Ohio, l-Istati Uniti

Għal aktar informazzjoni jekk jogħġbok ikkuntattja:emily.li@wecistanche.com

Cistanche tubulosa jipprevjeni mard tal-kliewi, ikklikkja hawn biex tikseb il-kampjun

L-evidenza dejjem tikber tindika glycogen synthase kinase (GSK) 3b bħala attur ewlieni f'diversimard tal-kliewi. Madankollu, bħala transducer pivotali tal-mogħdija tas-sinjalar tal-insulina, ir-rwol ta 'GSK3b fid-dijabetekliewi mardjibqa inċert. Fil-ġrieden DB/DB, l-espressjoni renali ta 'GSK3b totali u attivata kienet dejjem aktar elevata. Dan qabel l-iżvilupp tad-dijabetekliewi mardu korrelatati mal-progressjoni tas-sinjali tadijabetikukliewikorriment, inkluż albuminurja u akkumulazzjoni ta 'matriċi extraċellulari fil-glomeruli u tubulointerstizjali. In vitro, l-espożizzjoni ta’ podoċiti glomerulari, ċelluli mezanġjali u ċelluli tubulari tal-kliewi għal ambjent dijabetiku kkaġuna espressjoni u iperattività ta’ GSK3, li jidhru essenzjali u suffiċjenti biex joħorġudijabetikuħsarat ċellulari fiċ-ċelluli tal-kliewi, minħabba li l-effett ċitopatiku tal-ambjent dijabetiku kien imtaffi minn knockdown GSK3b, iżda kien mimitat minn espressjoni ektopika ta 'GSK3b kostituttivament attiv anke fil-milied normali. Inkonsistenza, kampjuni ta 'bijopsija tal-kliewi miksuba minn pazjenti bi stadji varji ta' nefropatija dijabetika wrew espressjoni amplifikata ta 'GSK3b totali u attivat fil-glomeruli u t-tubuli renali, assoċjati mas-severità ta' nefropatija dijabetika. Barra minn hekk, f'koorti retrospettivi ta 'pazjenti dijabetiċi tat-tip 2 li ġew segwiti għal aktar minn ħames snin, l-attività relattiva ta' GSK3b f'ċelluli mqaxxra fl-awrina rrappreżentat fattur ta 'riskju indipendenti għall-iżvilupp jew il-progressjoni ta' indeboliment renali. Barra minn hekk, l-analiżi tal-kurva karatteristika operattiva tar-riċevitur wriet li l-attività GSK3b fiċ-ċelloli mqaxxra fl-awrina pprovdiet qawwa ħafna aħjar mill-albuminurja f'pazjenti dijabetiċi li jiddiskriminaw b'indeboliment renali progressiv minn dawk b'funzjoni tal-kliewi stabbli. Għalhekk, l-espressjoni renali u l-attività ta 'GSK3b huma amplifikati f'nefropatija dijabetika sperimentali u klinika. Għalhekk, GSK3b fiċ-ċelloli mqaxxra fl-awrina jista' jservi bħala bijomarkatur ġdid għat-tbassir tad-dijabete.kliewimardprogressjoni.

Mard dijabetiku tal-kliewi(DKD) tkompli tkun kawża ewlenija ta’ insuffiċjenza renali fl-aħħar stadju fl-Istati Uniti u f’pajjiżi żviluppati oħra. studji ta’ segwitu epidemjoloġiku fit-tul.3 Ir-raġuni għal dan ir-riżultat eteroġenju mhix mifhuma bis-sħiħ, iżda tidher multifatturali, li tinvolvi diversi fatturi kawżattivi, inklużi l-ġenetika, l-ambjenti,kliewimard, u s-severità tad-dijabete.4,5 Kontroll gliċemiku fqir kien fattur ta 'riskju magħruf għall-albuminurja u DN. Madankollu, porzjon sinifikanti tal-pazjenti għadhom jiżviluppaw DN minkejja kontroll gliċemiku strett.6 Fil-prattika klinika, huwa meħtieġ li jiġi adottat bijomarkatur sensittiv u preċiż għall-istratifikazzjoni ta 'pazjenti dijabetiċi f'riskju li javvanzaw għal indeboliment renali. Għal snin sħaħ, l-albuminurja ġiet ikkunsidrata bħala markatur surrogat ta' kumplikazzjonijiet tal-kliewi dijabetiċi.7,8 Madankollu, korp dejjem jikber ta' evidenza tissuġġerixxi li l-albuminurja tista' ma tkunx preċiża.9,10 Ġiet innutata diskordanza sinifikanti bejn albuminurja u indeboliment renali fid-DN. 11,12 Skont id-dejta tal-Istudju Prospettiv tad-Dijabete tar-Renju Unit,13 minn dawk il-pazjenti li żviluppaw indeboliment tal-kliewi, 61 fil-mija ma kellhomx albuminurja minn qabel u 39 fil-mija qatt ma żviluppaw albuminurja matul l-istudju. Bl-istess mod, minn dawk il-pazjenti li żviluppaw albuminurja, 24 fil-mija biss żviluppaw indeboliment renali matul l-istudju. Fi kliem ieħor, għal pazjenti b'mikroalbuminurja jew makroalbuminurja, il-maġġoranza prevalenti jistgħu ma jiżviluppawx indeboliment renali. Din id-dejta għalhekk tisfida l-paradigma klassika tal-albuminurja dejjem qabel l-indeboliment renali matul il-progressjoni tad-DKD. Bħala tali, huwa imperattiv li jiġu identifikati bijomarkaturi ġodda.

għat-tbassir tad-DN jew għal dijanjosi bikrija tad-DN. Fl-aħħar għaxar snin, ġew ittestjati numru ta 'molekuli ġodda.14–16 Fost dawn, glycogen synthase kinase 3 (GSK3) ħareġ bħala kandidat attraenti. GSK3 huwa serine/threonine-protein kinase kkonservat ħafna, espress b'mod kullimkien li oriġinarjament kien ikkaratterizzat bħala transducer ewlieni tal-kaskata tas-sinjalar tal-insulina u jirregola l-glikoġenesi. L-interess f'GSK3 żdied ħafna bir-realizzazzjoni li jaġixxi wkoll bħala punt ta' konverġenza għal mogħdijiet ta' sinjalazzjoni taċ-ċelluli multipli involuti f'infjammazzjoni, immunomodulazzjoni, embrijoġenesi, ħsara fit-tessuti, tiswija u riġenerazzjoni.17-19 GSK3 teżisti bħala iżoformi 2: GSK3a u GSK3b. F'tessuti ta 'organi differenti, iż-2 iżoformi huma espressi b'mod differenzjali. Fil-kortiċi tal-kliewi, l-isoforma b hija espressa b’mod predominanti u tinsab ma’ glomeruli u ċelluli tubulari prossimali.20,21 L-attività eċċessiva ta’ GSK3b tal-kliewi ġiet assoċjata ma’ firxa diversa ta’ mard tal-kliewi, inklużi Glo-newropatiji proteinuriċi u mard kroniku progressiv tal-kliewi.22 Madankollu , bħala transducer ewlieni tal-mogħdija tas-sinjalar tal-insulina, ir-rwol ta 'GSK3b fil-patoġenesi ta' DN għadu mhux magħruf. Għad irid jiġi delineat jekk id-disregolazzjoni GSK3b fil-kliewi hijiex involuta fid-DN. Biex jindirizza din il-kwistjoni, l-istudju preżenti eżamina l-profili tal-espressjoni ta 'GSK3b totali u attivat f'kampjuni tal-kliewi miksuba minn mudelli murini dB/dB ta' DN mhux dipendenti fuq l-insulina u fit-tessuti tal-bijopsija tal-kliewi minn pazjenti bi stadji varji ta 'DN tat-tip 2. Barra minn hekk, f'koorti retrospettivi ta 'pazjenti b'dijabete tat-tip 2, il-livelli ta' espressjoni ta 'GSK3b totali u attivat ġew imkejla f'ċelloli mqaxxra fl-awrina, li ttieħdu kampjuni bħala bijopsija tal-kliewi likwida bbażata fuq l-awrina. Aħna eżaminajna r-relazzjoni bejn il-livelli ta 'espressjoni ta' GSK3b jew il-forma attivata tiegħu fiċ-ċelloli tal-linja bażi mqaxxra fl-awrina u l-iżvilupp jew il-progressjoni ta 'indeboliment renali f'pazjenti dijabetiċi.

RIŻULTATI

GSK3b huwa espress żżejjed u iperattiv fiċ-ċelluli parenkimali tal-kliewi fil-ġrieden db/db, assoċjati mal-progressjoni tal-albuminurja u l-ħsara dijabetika fil-kliewi

Ġrieden db/db b'defiċjenza tar-riċettur tal-leptin huma mudelli stabbiliti sew għad-dijabete mellitus tat-tip 2 u DN. Li jibdew mill-età ta’ 10 ġimgħat, ġrieden db/db jiżviluppaw spontanjament sinjali bikrija ta’korrimenti fil-kliewi, ikkaratterizzat minn albuminurja progressiva u akkumulazzjoni tal-matriċi fil-glomeruli.23 B’kuntrast, ġrieden ta’ kontroll imqabbla mal-età (db/m) għandhom gliċemija normali u l-ebda evidenza notevoli ta’mard tal-kliewi. F'esperiment li jibda minn 10 ġimgħat, l-espressjoni tal-kliewi tat-total (Figura 1) u attivata (Figura 2) GSK3b (fosforilata f'Y216 [p-GSK3B]) fi ġrieden db/db versus ġrieden db/m ta' kontroll ġiet elevata progressivament ( Figura 1b u 2b). Dan kien prinċipalment lokalizzat għal podoċiti u ċelluli mesanġjali fil-glomeruli (Figura 1a) u għal ċelluli epiteljali tubulari f'tubulointerstizjali (Figura 2a), kif muri minn tbajja 'immunoistokimika. Is-sejbiet morfoloġiċi ġew ikkorroborati b'analiżi immunoblot ta' omoġenati sħaħ tal-kliewi (Figura 1c u 2c). L-analiżi tar-rigressjoni wriet li l-intensità tat-tbajja 'tal-GSK3b totali (Figura 1d) u attivata (Figura 2d) fil-glomeruli kkorrelata b'mod pożittiv mal-eliminazzjoni urinarja tal-albuminurja fil-ġrieden db/db f'etajiet differenti. Anke fl-istadju bikri tad-dijabete fil-ġrieden db/db, bħal fl-età ta '10 jew 14-il ġimgħa, l-attività ta' GSK3b kienet elevata b'mod prominenti fil-kliewi, kif rifless minn induzzjoni sinifikanti ta 'p-GSK3b (Figura 2). Jidher li l-iperattività ta 'GSK3b fil-kliewi tal-ġrieden db/db fl-istadju bikri kienet fil-biċċa l-kbira attribwibbli għal modifiki ta' wara t-traduzzjoni, bħal fosforilazzjoni f'Y216, iżda fi stadju aktar tard, kienet prinċipalment minħabba żieda fl-espressjoni ta 'GSK3b totali.

Il-progressjoni ta 'DN karatteristiċi akkumulazzjoni dejjem tiżdied tal-matriċi extraċellulari kemm glomeruli u interstizjali. Tabilħaqq, kif muri minn tbajja fl-immunoistokimika fluworexxenti FL, il-kliewi tal-ġurdien db/db wrew żieda progressiva fl-espressjoni ta 'fibronectin kemm fil-glomeruli kif ukoll fl-interstizjali (Figura 3a). Dan kien ikkorroborat aktar minn analiżi immunoblot ta 'omoġenati tal-kliewi għal fibronectin u collagen IV (Figura 3b u c). Barra minn hekk, l-espressjoni ta 'GSK3b totali u attivat ikkorrelata b'mod pożittiv ma' dik ta 'fibronectin intessuti tal-kliewi(Figura 3d).

Biex jiġi ddeterminat aktar jekk l-attivazzjoni mtejba ta 'GSK3b tippreċedix l-iżvilupp ta' DKD, ġrieden db/db u db/m ġew segwiti f'esperiment separat li jibda minn 4 ġimgħat matul l-istadju tal-predijabete. Fis-7 ġimgħa, ġrieden db/db wrew ipergliċemija evidenti (Figura Supplimentari S1A), li tissuġġerixxi dijabete, iżda l-ebda sinjali ta 'DKD, kif muri minn albuminurja normali (Figura Supplimentari S1B). Ta’ min jinnota, anki fi stadju bikri tad-dijabete, l-espressjoni renali ta’ GSK3b u p-GSK3b kif ukoll l-attività relattiva ta’ GSK3b espressa bħala proporzjon p-GSK3b/GSK3b, żdiedu b’mod varjabbli, kif imkejjel b’analiżi immunoblot tat-tessuti tal-bijopsija renali segwit minn densitometrija (Figura Supplimentari S1C u D). Barra minn hekk, analiżi ta 'rigressjoni lineari wriet li l-attività renali GSK3b f'ġimgħa 7 ikkorrelata b'mod pożittiv mal-iżvilupp ta' albuminurja u DKD f'ġimgħa 13 (Figura Supplimentari S1E). Barra minn hekk, l-analiżi tal-kurva tal-karatteristika operattiva tar-riċevitur (ROC) wriet li l-attività renali GSK3b fil-ġrieden db/db ta’ 7 ġimgħat, meta ma kien hemm l-ebda sinjali ta’ DKD, ipprovdiet preċiżjoni u qawwa eċċellenti fit-tbassir tal-iżvilupp ta’ albuminurja u DKD (Figura Supplimentari S1F).

L-espożizzjoni taċ-ċelluli tal-kliewi għal milieu dijabetiku tikkawża espressjoni żejda u iperattività ta' GSK3b, li tirriżulta f'bidliet ċitopatiċi dijabetiċi

Biex tiddetermina jekk il-kundizzjoni dijabetika ttejjebx direttament l-attivazzjoni GSK3b fiċelluli tal-kliewi, kulturi in vitro ta 'linji ta' ċelluli tal-kliewi diversi, inklużi podoċiti murini, ċelluli mesanġjali, u ċelluli epiteljali tubulari, intużaw u esposti għal milieu dijabetiku li jikkonsisti f'glukożju ambjentali għoli u fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni (TGF) b1. L-espożizzjoni tal-podoċiti għall-ambjent dijabetiku rriżultat f'korriment qawwi tal-podoċiti, immarkat minn telf tal-proteina markatur tal-podoċiti sinaptopodin. Dan kien miftiehem bil-kera b'induzzjoni prominenti ta 'GSK3b totali u attivat, kif muri minn tbajja' immunoċitokimika fluworexxenti FL (Figura 4a u b) u kkonfermat b'analiżi ta' immunoblot

(Figura 4c u d). F'ċelluli mesanġjali kkultivati, l-espressjoni ta 'total (Figura 5a) u attivata (Figura 5b) GSK3b ġiet miżjuda bl-istess mod wara l-espożizzjoni għall-ambjent dijabetiku, b'mod parallel ma' żieda fl-espressjoni ta 'molekuli ta' matriċi extraċellulari bħal fibronectin (Figura 5). Bl-istess mod, ċelluli epiteljali tubulari tal-kliewi kkultivati ​​esprimew żżejjed GSK3b totali u attivat wara trattament ta' milieu dijabetiku, u dan kien akkumpanjat minn disfunzjoni taċ-ċelluli tubulari u dedifferenzjazzjoni, immarkata minn espressjoni mnaqqsa u mfixkla ta' molekuli ta' junction stretta epiteljali bħal zonula occludens -1 ( -1) (Figura 6a–d). B'kuntrast, bħala kontroll tal-osmolalità, it-trattament tal-mannitol taċ-ċelluli kollha tal-kliewi rriżulta f'effett mhux differenti minn dak li kien imwassal mill-ambjent normali li fih glukożju ambjentali normali. Id-dijabete tal-bniedem tinvolvi mhux biss l-ipergliċemija iżda wkoll ir-reżistenza għall-insulina. Għalkemm huwa impossibbli li tissepara kompletament l-ipergliċemija mir-reżistenza għall-insulina f'mudelli tal-annimali jew f'pazjenti, mudelli in vitro ġew sfruttati biex jeżaminaw l-effett iżolat ta 'glukożju għoli kontra reżistenza għall-insulina. Biex timita l-kundizzjoni tar-reżistenza għall-insulina, l-isoforma b tar-riċettur tal-insulina twaqqgħet f'podoċiti kkultivati, ċelluli mezanġjali u ċelluli tubulari tal-kliewi (Figura Supplimentari S2A-C), u dan amplifika l-espressjoni u l-attività ta 'GSK3b anke fin-normali. milieu, kif muri mill-analiżi immunoblot u densitometrija. Din l-azzjoni ġiet imsaħħa wara espożizzjoni għall-ambjent dijabetiku, li tindika effett sinerġistiku ta 'reżistenza għall-insulina u glukożju għoli fuq l-attivazzjoni ta' GSK3b.

L-iperattività ta' GSK3b hija essenzjali u suffiċjenti għal ħsara u disfunzjoni taċ-ċelluli tal-kliewi kkawżata mill-ambjent dijabetiku

Biex tesplora jekk l-iperattività GSK3b hijiex involuta f'bidliet ċitopatiċi fiċ-ċelloli tal-kliewi, l-attività GSK3b f'kliewi kkultivatiċelluli ġew manipulati artifiċjalment minn interferenza RNA

(RNAi) jew espressjoni żejda tal-ġeni. Kif muri fil-Figura 7a, RNAi bl-użu ta 'scramble żgħir, RNA li jinterferixxi bilkemm jaffettwa l-effett ċitopatiku tal-milied dijabetiku fiċ-ċelloli kollha tal-kliewi. B'kuntrast, is-sajlenser ta' GSK3b abroga b'mod sostanzjali s-soppressjoni ta' sinaptopodin instigata mill-ambjent dijabetiku f'podoċiti, induzzjoni ta' fibronectin fiċ-ċelluli mesanġjali, u tfixkil ta' ZO-1 fiċ-ċelloli tubulari tal-kliewi, li jissuġġerixxi li GSK3b x'aktarx huwa essenzjali biex jinħolqu bidliet ċitopatiċi relatati mad-dijabete f' ċelluli tal-kliewi. Biex tagħraf jekk l-espressjoni żejda u l-iperattività ta 'GSK3b humiex biżżejjed għall-effetti ċitopatiċi indotti mill-ambjent dijabetiku, iċ-ċelloli ġew trasfettati b'mod temporanju jew b'vettur vojt jew b'vettur li jikkodifika l-mutant attiv b'mod kostituttiv ta' GSK3b (S9A). Għalkemm it-trasfezzjoni ta' vettur vojta bilkemm eżerċitat xi effetti, l-espressjoni żejda ektopika ta' S9A rriżultat fit-telf ta' espressjoni ta' sinaptopodin f'podoċiti, produzzjoni elevata ta' fibronectin f'ċelluli mesanġjali, u espressjoni mnaqqsa ta' ZO-1 fiċ-ċelluli tubulari tal-kliewi anke fil-ambjent normali (Figura 7b), li jfakkar l-effett ċitopatiku tal-ambjent dijabetiku.

Il-progressjoni tad-DN uman tikkoinċidi ma' espressjoni żejda u iperattività ta' GSK3b fil-glomeruli u t-tubuli tal-kliewi

Biex tivvalida aktar jekk is-sejbiet ta 'hawn fuq f'mudelli ta' kultura ta 'annimali u ċelluli humiex applikabbli wkoll għal DN kliniku, tessuti arkivjati ta' bijopsija tal-kliewi minn suġġetti normali u pazjenti bi stadji varji ta 'DN ġew ipproċessati għal tbajja ta' immunoistokimika perossidasi għal GSK3b u p-GSK3b. Il-karatteristiċi tas-suġġetti tal-kontroll u l-pazjenti huma miġbura fil-qosor fit-Tabella Supplimentari S1. Kif muri fil-Figura 8a, renali

l-espressjoni ta 'GSK3b totali u attivat ġiet miżjuda dejjem aktar flimkien mal-progressjoni DN kif iggradat skond il-klassifikazzjoni patoloġika bbażata fuq tbajja' perjodika ta' l-aċidu-Schiff. Dan huwa konsistenti mad-dejta Nephroseq, li turi wkoll espressjoni GSK3b miżjuda b'mod sinifikanti fit-tessuti tal-bijopsija tal-kliewi minn pazjenti b'DN (Figura Supplimentari S3). L-espressjoni miżjuda ta 'GSK3b totali u attivat kienet lokalizzata b'mod predominanti għal podoċiti u ċelluli mesanġjali fil-glomeruli u għal ċelluli epiteljali tubulari renali f'tubulointerstizjali (Figura 8a), bi qbil mas-sejbiet fil-ġrieden db/db. Ir-riżultati morfoloġiċi ġew ikkorroborati aktar minn analiżi morfometrika kompjuterizzata, li wriet assoċjazzjoni pożittiva bejn il-livelli ta 'espressjoni ta' totali (Figura 8b) jew attivat (Figura 8c) GSK3b u s-severità ta 'DN.

GSK3b huwa iperattiv fiċ-ċelluli mqaxxra fl-awrina miġbura minn pazjenti dijabetiċi u jbassar il-progressjoni ta 'indeboliment renali Taħt kundizzjonijiet kemm fiżjoloġiċi kif ukoll ta' mard, il-fatturat u t-twaqqigħ taċ-ċelluli epiteljali renali, bħal podoċiti glomerulari u ċelluli epiteljali tubulari, iseħħu b'mod kostanti, li jwassal għal eskrezzjoni kontinwa. taċ-ċelluli parenkimali renali fl-awrina. Ċelloli mqaxxra ta' l-awrina ġew sfruttati b'suċċess bħala bijopsija tal-kliewi likwida mhux invażiva bbażata fuq l-awrina għal skopijiet ta' riċerka u dijanjostiċi. ġrieden anke fl-istadju bikri qabel ma l-albuminurja tkun manifestata, staqsejtx jekk il-kejl ta' GSK3b f'ċelluli mqaxxra fl-awrina jistax jiġi sfruttat għat-tbassir

l-iżvilupp jew il-progressjoni tad-DKD tal-bniedem. Għal dan il-għan, użajna l-bijobank tad-dijabete u wettaqna studju ta 'koorti retrospettiv. B'kollox, 127 pazjent bid-dijabete mellitus tat-tip 2, li kienu ġew segwiti fl-Ewwel Sptar Affiljat tal-Università ta 'Zhengzhou mill-2010 b'kampjuni bankarji ta' awrina frazzjonata, ġew skrinjati għall-inklużjoni f'dan l-istudju. Minn dawn il-pazjenti, 67 ġew esklużi, b'10 mitlufa għall-follow-up, 52 kellhom disfunzjoni tal-kliewi jew proteinurja ċara fil-bidu tal-marda, u 5 aktar tard iddijanjostikati bħala mard ieħor tal-kliewi b'bijopsija tal-kliewi jew immaġini. Fl-aħħar mill-aħħar, 60 pazjent ġew irreġistrati f'dan l-istudju retrospettiv tal-koorti (Figura 9). Il-karatteristiċi demografiċi u kliniċi ta' dawn il-pazjenti fil-linja bażi huma miġbura fil-qosor f'Tabella 1. L-ebda pazjent ma kellu disfunzjoni tal-kliewi jew proteinurja ċara fil-linja bażi, u ħadd ma beda terapija tad-dijalisi matul il-perjodu ta' segwitu. Skont il-kobor tal-albuminurja, il-pazjenti ġew kategorizzati f'2 sottogruppi: gruppi normoalbuminurja u mikroalbuminurja. Ħlief għal-livelli ta’ eskrezzjoni ta’ albumina fl-awrina (UAE), iż-żewġ sottogruppi ta’ pazjenti ma kinux statistikament differenti fil-linja bażi fil-parametri kliniċi, bijokimiċi u fiżjoloġiċi l-oħra kollha, inkluż it-tul tad-dijabete, il-livell tal-emoglobina glycated, il-funzjoni tal-kliewi, il-pressjoni tad-demm, u t-trattamenti preskritti. . Wara 5 snin ta' segwitu, 29 mis-60 pazjent wrew il-progressjoni ta' indeboliment renali, li kienet definita bħala jew tnaqqis ta' $25 fil-mija fir-rata ta' filtrazzjoni glomerulari stmata (eGFR) jew progressjoni tal-istatus ta' albuminurja kif indikat mill-eskalazzjoni tas-severità. ta 'albuminurja tul diversi stadji kliniċi ta' DN, jiġifieri, normoalbuminurja, mikroalbuminurja, mikroalbuminurja, jew proteinurja ċara. B'kuntrast, il-31 pazjent li fadal ma wrew l-ebda sinjali ta 'progressjoni tal-mard tal-kliewi (Figura 9). Id-dejta tal-linja bażi tal-pazjenti kienet stratifikata skont l-istat ta' progressjoni tal-indeboliment renali wara 5 snin ta' segwitu (Tabella 2). Pazjenti bi progressjoni ta' indeboliment renali, meta mqabbla ma' dawk mingħajr progressjoni, urew tnaqqis sinifikanti fl-eGFR u żieda notevoli fl-UAE. Biex tiddetermina jekk GSK3b kienx espress żżejjed jew attivat żżejjed fiċ-ċelloli renali u

imkejla biex tiġi evalwata s-sensittività u l-ispeċifiċità tal-attività GSK3b fiċ-ċelluli mqaxxra fl-awrina relattiva għall-albuminurja tal-linja bażi għat-tbassir tal-progressjoni tal-indeboliment renali. Kif muri fil-Figura 11, l-attività relattiva ta 'GSK3b fiċ-ċelloli mqaxxra fl-awrina, espressa bħala proporzjon p-GSK3b/GSK3b, wriet preċiżjoni u qawwa eċċellenti fid-diskriminazzjoni ta' pazjenti b'indeboliment renali progressiv minn dawk b'funzjoni tal-kliewi stabbli, biż-żona taħt ir-ROC kurva hija 0.844 (intervall ta' kunfidenza ta' 95 fil-mija, 0.747–0.941; P ¼ 0.001 ), li kienet ħafna aħjar miż-żona taħt il-kurva ROC għal-linja bażi Ln(UAE) ({{20}}.750; intervall ta’ kunfidenza ta’ 95 fil-mija, 0.626–0.874). Il-cutoff li mmassimizzat l-indiċi ta 'Youden kien 1.24 għall-proporzjon p-GSK3b/GSK3b u 76 mg/24 siegħa għall-UAE. F'dawn il-qtugħ, is-sensittività u l-ispeċifiċità kienu 69 fil-mija u 87.1 fil-mija għall-proporzjon p-GSK3b/GSK3b u 69 fil-mija u 77.4 fil-mija għal Ln(UAE). Barra minn hekk, il-kombinazzjoni tal-proporzjon p-GSK3b/ GSK3b mal-livell totali ta 'GSK3b fiċ-ċelluli mqaxxra fl-awrina tejbet b'mod sinifikanti l-qawwa diskriminatorja, bl-erja taħt il-kurva ROC tkun 0.971 (intervall ta' kunfidenza 95 fil-mija, 0.931-1.{{48} }). Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-kejl tal-attività GSK3b fiċ-ċelloli mqaxxra fl-awrina jista 'jipprovdi preċiżjoni ħafna aħjar mill-UAE fit-tbassir tal-progressjoni ta' indeboliment renali f'pazjenti dijabetiċi.

To further explore whether enhanced GSK3b activation also predicts the development of DKD, a separate cohort of patients with type 2 diabetes but no signs of kidney disease, who started follow-up between 2010 and 2013, were retrospectively screened and examined (Supplementary Table S2). The baseline characteristics of patients were stratified according to the presence or absence of renal impairment or DKD after 5 years' follow-up (Supplementary Table S3), which was defined as either a $25% reduction in eGFR or the persistent presence of albuminuria (>30 mg/24 h). Ċelloli mqaxxra ta 'l-awrina miġbura fil-linja bażi ġew irkuprati u eżaminati b'analiżi immunoblot għal GSK3b u p-GSK3b (Figura Supplimentari S4A u B). L-attività ta 'GSK3b ġiet stmata mill-proporzjonijiet densitometriċi ta' p-GSK3b għal GSK3b totali għal kull kampjun relattiv għall-valur tal-kampjuni ta 'kontroll (Figura Supplimentari S4C).

Fost diversi varjabbli kliniċi/bijokimiċi, l-attività GSK3b (proporzjon p-GSK3b/GSK3b) fiċ-ċelloli tal-linja bażi mqaxxra fl-awrina kienet innutata li kienet ogħla b'mod sinifikanti f'pazjenti li żviluppaw DKD milli f'dawk li ma kinux (Tabella Supplimentari S3). Barra minn hekk, l-analiżi tal-kurva ROC tissuġġerixxi li l-attività relattiva ta 'GSK3b (proporzjon p-GSK3b/GSK3b) fiċ-ċelloli mqaxxra fl-awrina pprovdiet preċiżjoni u qawwa eċċellenti fit-tbassir tal-iżvilupp ta' DKD f'pazjenti dijabetiċi fi stadju bikri (Figura Supplimentari S4D).