PARTI 1 Attività anti- osteoporotika ta ' mediċina tradizzjonali Ċiniża li tittiekel Cistanche deserticola fuq il- metaboliżmu ta ' l- għadam ta ' firien ovariektomija permezz ta ' passaġġi ta ' sinjalazzjoni medjati minn RANKL / RANK/ TRAF6

Bo Zhang 1†, Ling-Ling Yang 1†, Shu-Qin Ding 1†, Jing-Jing Liu 1, Yan-Hong Dong 1,

Yan-Ting Li 1, Nan Li 1, Xiao-Jun Zhao 1, Chang-Ling Hu 2, Yiping Jiang 3* u Xue-Qin Ma 1*

1 Laboratorju Ewlieni tal-Modernizzazzjoni tal-Mediċina Etnika Hui, Dipartiment tal-Analiżi Farmaċewtika, Ministeru tal-Edukazzjoni, Skola tal-Farmaċija, Università Medika ta 'Ningxia, Yinchuan, Ċina, Laboratorju 2 għal Ikel Funzjonali u Saħħa tal-Bniedem, Ċentru għall-Eċċellenza fit-Teknoloġiji ta' Wara l-Ħsad, North Carolina Research Campus, North Caroline A&T State University, Greensboro, NC, l-Istati Uniti, 3 Dipartiment tal-Farmakognosija, It-Tieni Università Medika Militari, Shanghai , iċ-Ċina

cistanchejistgħu jiġu kkuratiosteoporożi

Minħabba l- limitazzjonijiet ta ' l- aġenti terapewtiċi eżistenti għall- kura ta ' l- osteoporożi ta ' wara l- menopawsa, għad hemm bżonn ta ' aktar għażliet kemm bl- effikaċja kif ukoll b' inqas effetti avversi.Cistanche deserticolaY. C. Ma hija magħrufa bħala ħwaha tonika popolari tradizzjonalment użata biex tikkura defiċjenza ta 'enerġija tal-kliewi inkluż dgħjufija fil-muskoli f'żoni minoritarji tal-kontej Asjatiċi. Ibbażat fuq it- teorija ta ' "tiddomina l- għadam tal- kliewi," intuża mudell ta ' far ovariektomija (OVX) ta ' osteoporożi ta ' wara l- menopawsa biex jiġi evalwat l- effett terapewtiku ta 'C. deserticolaestratt (CDE) fuq telf ta' għadam. Tmienja u erbgħin firien nisa ta' Sprague-Dawley, ta' madwar 12-il ġimgħa, ġew assenjati b'mod każwali f'sitt gruppi inkluż il-grupp ta' sham amministrat mill-ħalq b'0.5% carboxymethyl cellulose sodium (CMC-Na) (sham), il-grupp pożittiv ittrattat b'1 mg/kg ta' estradiol valerate (EV), gruppi baxxi, moderati, u ta' dożaġġ għoli li ġew amministrata oralment b'200, 400, u 800 mg/kg/jum ta' CDE, Rispettivament. Wara 3 xhur ta 'intervent kontinwu, CDE wera attività anti- osteoporotika sinifikanti evidenzjata mid- densità minerali totali mtejba ta' l- għadam, mikroarkitektura ta ' l- għadam imdejjaq; żieda fl-attività tal-fosfatażi alkalina; tnaqqis fid-deoxypyridinoline, cathepsin K, aċidu reżistenti għat-tartrat, u livelli ta' malondialdehyde; billi l-ġisem, l-utru, u l-piżijiet tal-vaġina fil-firien OVX ma kinux influwenzati minn intervent CDE. Barra minn hekk, ġie osservat fenomenu apparentement kontradittorju fuq il- livelli ta ' kalċju u fosfru bejn firien OVX u sham u eluċidu. Mekkanikament, CDE naqqas b'mod sinifikanti l-livelli ta 'espressjonijiet TRAF6, RANKL, RANK, NF-κB, IKKβ, NFAT2, u regolat up-regulated il-phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), AKT, osteoprotegerin, u espressjonijiet c-Fos, li implikatI CDE jistgħu jrażżnu l-attivazzjoni kkawżata minn RANKL / RANK ta' mogħdijiet downstream NF-κB u PI3K / AKT, u fl-aħħar mill-aħħar, jipprevjenu l-attività tal-proteini osteoklastoġeniċi ewlenin NFAT2 u c-Fos. Id-dejta kollha ssuġġerita CDE kellha attività anti-osteoporotika potenzjali u dan l-effett kien, għall-inqas parzjalment, involut fil-modulazzjoni tal-livelli NF-κB u PI3K/ AKT medjati minn RANKL / RANK6 kif ukoll il-livelli c-Fos u NFAT2. Għalhekk, is- CDE jista ' jirrappreżenta kandidat ta ' rimedju promettenti utli għat- trattament ta ' l- osteoporożi ta ' wara l- menopawsa.

Kliem ewlieni:Cistanche deserticola, antiosteoporotiku, TRAF6, RANKL, RANK

Għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok ikkuntattja lil:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola għandha ħafna effetti, ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

INTRODUZZJONI

Peress li l- osteoporożi ma ġietx ikkunsidrata bħala parti mit- tixjiħ normali, inkisbu avvanzi estensivi fil- qasam ta ' l- osteoporożi. Illum, l-osteoporożi saret periklu kbir għas-saħħa li jolqot aktar minn 200 miljun popolazzjonijiet mad-dinja kollha bl-attendent 10 biljun dollaru ntefqu kull sena fuq dawn l-individwi (Ma et al., 2015). L- osteoporożi, li tinkludi l- osteoporożi ta ' wara l- menopawsa u tas- senile, kienet ikkaratterizzata minn deterjorament mikro- arkitettoniku u densità baxxa tal- massa ta ' l- għadam (BMD) bħala riżultat ta ' żbilanċ bejn il- formazzjoni ta ' l- għadam medjat mill- osteoblast u s- assorbiment mill- ġdid ta ' l- għadam medjat mill- osteoklast, rispettivament (Kanis et al., 2015). B'kunsiderazzjoni tal-limitazzjonijiet tal-għażliet terapewtiċi attwali u xi effetti avversi mhux mixtieqa ta 'aġenti sintetiċi (Ye et al., 2015) għat-trattament tal-marda tal-osteoporożi, huwa meħtieġ għal alternattivi kemm bl-effikaċja kif ukoll b'effetti sekondarji minimi (Tan et al., 2017). Bħala mod notevoli ta 'terapija komplementari u alternattiva għat-trattament ta' diversi mard inkluż l-osteoporożi ta 'wara l-menopawsa, il-ħwafa mediċinali naturali speċjalment il-mediċini tradizzjonali Ċiniżi (TCM) ġew rikonoxxuti gradwalment u ġġustifikati ħafna (Czerwinska u Melzig, 2018; Ma et al., 2018). Elfejn sena ilu,Cistanche deserticolaY. C. Ma nstab ta 'benefiċċju għas-saħħa tal-bniedem u rreġistrat fil-ktieb mediċinali klassiku Ċiniż jismu Shen Nong Herbal (Anonimu, 1981). Issa, huwa TCM importanti rreġistrat uffiċjalment fil-farmakopeja Ċiniża (Ċiniża u Farmakopea, 2015) u wkoll bħala ħaxix toniku famuż li ilu jintuża fil-kontej Asjatiċi inklużi ċ-Ċina u l-Ġappun għal sekli sħaħ ta 'snin (Wong et al., 2006).C. deserticolainstab li għandu profil ta 'sigurtà favorevoli (Liao et al., 2018) u funzjonijiet mediċinali wesgħin: folk, kien użat ħafna biex issajjar b'tipi ta' tipi ta 'kċina erbali għat-trattament ta' defiċjenza tal-kliewi, debilità tal-muskoli, u dgħjufija lumbari; illum il-ġurnata, ingħataw attenzjoni dejjem akbar għad-diversi funzjonijiet farmakoloġiċi tagħha inklużi anti-infjammatorji, kontra l-għeja, antitumor, attività antiossidanti, titjib fl-immunità, eċċ (Gu et al., 2016; Fu et al., 2018). Huwa magħruf ukoll bħala "ginseng tad-deżert" fiċ-Ċina minħabba l-effett kurattiv mediku kliniku eċċellenti tiegħu. Kemm l-applikazzjoni tradizzjonali kif ukoll moderna ta 'C. deserticolagħamel din il-ħwatha popolari kemm fil-mediċina kif ukoll fl-industrija tal-ikel tas-saħħa, u b'hekk ġiet żviluppata f'likwidu mediċinali u nutrittiv approvat mill-Amministrazzjoni tal-Ikel u tad-Droga tal-Istat. MogħtijaC. deserticolanormalment kien impjegat biex jittratta defiċjenza tal-kliewi fil-mediċina folkloristika Ċiniża, li implikat li din il-ħwaaq mediċinali li tittiekel tista 'titqies bħala aġent alternattiv promettenti biex tintervjeni l-osteoporożi bbażata fuq it-teorija ta' "bone dominanti tal-kliewi" (Wang et al., 2016). Id-dejta ppubblikata kienet uriet l-effett anti-osteoporotiku tal-estratti ta' C. deserticola kemm in vivo kif ukoll in vitro (Liang et al., 2011; Li et al., 2012; Liang et al., 2013; Xu et al., 2017; Song et al., 2018) u diversi komposti iżolati inklużi echinacoside (Li et al., 2013), acteoside (Lee et al., 2013) , u cistanoside A (Xu et al., 2017) li kienu ġew irrappurtati wkoll fl-ipproċessar ta' attivitajiet anti-osteoporotiċi; u komposti oħra bħal 2'-acetylacteoside ġew ikkonfermati kellhom potenzjal antiossidanti, anti-infjammatorju, newroprotettiv, epatoprotettiv, immuni (Li et al., 2016), u potenzjali kontra t-tixjiħ (Peng et al., 2016). Sal-lum, għexieren ta' glikosidi bijoattivi tal-fenitanojdi ġew identifikati mill-Ħwam Cistanche(Wang et al., 2012), echinacoside, u acteoside huma l-komposti ewlenin li jeżistu fil-biċċa l-kbira tal-ispeċijiet Cistanche bil-kontenut kienu 1.83–41.49 u 0.27–8.28 mg/ kg, rispettivament; billi l-glikosidi l-oħra tal-fenilentanojdi inklużi ż-2'-acetylacteoside, 6'-acetylacteoside, cistanoside A, cistanoside C, u isoacteoside kien 1.56–3.16 mg/g, 0.49–1.66 mg/kg, 1.41–10.11 mg/kg, 0.33–2.24 mg/kg, u 0.08–5.00 mg/ kg, rispettivament (Dong et al., 2018). Fuq il-bażi tad-dejta ppubblikata hawn fuq, aħna sibna li l-mekkaniżmi molekulari anti-osteoporotiċi sottostanti ta 'C. deserticolaspeċjalment is-sinjalar upstream baqa' mhux ċar; u l-kompost innifsu ma jistax jirrappreżenta l-effett tal-ħwam li kien fih il-proprjetà tas-sinerġija kkontribwita minn tipi differenti ta' komponenti; barra minn hekk, il-miri speċifiċi tal-mogħdijiet tas-sinjalar kienu totalment differenti bejn komponenti differenti. Ix-xogħol attwali kellu l-għan li jinvestiga l-effett protettiv potenzjali ta'C. deserticolakontra firien ovariektomija (OVX) in vivo b' enfasi fuq ir- regolazzjoni tal- fattur 6 assoċjat mar- riċettur tal- fattur nekrożi tat- tumur (TRAF6), attivatur tar- riċettur ta ' fattur nukleari kappa B ligand (RANKL), espressjonijiet RANK u sinjali tal- fattur nukleari li jkun hemm rankl/ RANK/ TRAF6 (NF- κB), u phosphoinositide 3- kinase (PI3K) / protein kinase (AKT). Ir-remodeling tal-għadam, inkluż ir-rikostruzzjoni u t-tiswija, huwa proċess ikkomplikat irregolat mill-bilanċ bejn il-formazzjoni osteoblastika tal-għadam u s-assorbiment mill-ġdid tal-għadam osteoklastiku, u żieda fl-assorbiment mill-ġdid tal-għadam ikkawżata prinċipalment minn osteoklastoġenesi mtejba ġeneralment wasslet għal osteoporożi anke ksur tal-għadam. Il-biċċa l-kbira tas-sinjali taċ-ċelloli, l-ormoni, u l-fatturi ta 'tkabbir li kienu essenzjali għad-divrenzjar u l-funzjoni tal-osteoklast kienu kkontrollati minn RANK u ż-żewġ ligandi, RANKL u osteoprotegerin (OPG) (Lacey et al., 1998). U sejbiet reċenti skoprew aktar TRAF6 kien fattur regolatorju ewlieni fi RANKL / RANK wassal għal kaskati ta 'sinjalazzjoni (Tan et al., 2017). Bir- reklutaġġ ta ' TRAF6, RANKL marbut mar- riċettur rank tiegħu, u mbagħad il- kaskati ta ' sinjalazzjoni downstream inklużi NF- κB u PI3K/ AKT ġew attivati, imbagħad il- proteini osteokultosoġeniċi ewlenin ta ' c- Fos u l- fattur nukleari ta ' ċelluli T attivati c2 (NFAT2) (Takayanagi, 2007) kienu regolati mill- ġdid, u fl- aħħar nett, inbdew id- differenzazzjoni ta ' osteoclast. F' dan l- istudju, il- mekkaniżmu anti- osteoporotiku sottostanti ta ' CDE fuq ir- riassorbiment ta ' l- għadam medjat minn RANKL/ RANK/ TRAF6 huwa investigat u diskuss.

MATERJALI U METODI

Annimali, Ċelloli, Antikorpi, u Reaġenti

Firien nisa adulti Sprague-Dawley (Università Medika ta 'Ningxia, Yinchuan, iċ-Ċina); ċelloli RAW264.7 (Zhong Qiao Xin Zhou Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, iċ-Ċina); il-fattur ta' stima tal-kolonja tal-makrofaġi (M-CSF) u RANKL (PerroTech, Inc. USA); estradiol valerate [estradiol valerate (EV), Delpharm Lille SAS, Pariġi, Franza]; kit ELISA tal-cathepsin K (CK) (BioVision, Amerikan); kits ELISA ta' kontra l-proteini tad-deoxypyridinoline (DPD) u tal-proteina tal-għadam (BGP) (Xinyu Biological Engineering Co., Ltd, Shanghai, iċ-Ċina); malondialdehyde (MDA), glutathione (GSH), u kits ta' reaġenti ta' superoxide dismutase (SOD) (Inġinerija Bijoloġika ta' Jianchen, Nanjing, iċ-Ċina); peniċillina u streptomycin (Gibco, l-Istati Uniti ta' l-Amerika); membrana tal-fluworur tal-polivinilidene (PVDF) (Millipore Life Sciences, l-Istati Uniti tal-Amerka); antikorpi primarji li jinkludu GAPDH (18AF0401), β-actin (17AV0411), IκB kinase β (IKKβ) (AD01134589), TRAF6 (2), RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), NFκBIA (AH041382226), PI3K (AC09021266), OPG (AG06292776), c-Fos (AG12059411), AKT (AF05173234), NFAT2 (AO11015648), u antikorpi sekondarji (immunoglobulina tal-mogħoż kontra l-fenek tal-peroxidase ikkonjugata bil-għerq tal-mustarda G, 134658) ġew offruti minn ZSGB-BIO (Beijing, iċ-Ċina); Il-midjum modifikat tal-ajkla (DMEM) ta' Dulbecco, il-pannifikazzjoni tal-proteina tal-aċidu bijokoniniku, is-serum tal-bovini tal-fetu (FBS), u s-salina buffered tal-fosfat ta' Dulbecco (PBS) inxtraw mingħand Hylcone (Logan, UT, USA); echinacoside [kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC) ≥98%, 11167-200503, Istituti Nazzjonali għall-Ikel u l-Kontroll tad-Droga, iċ-Ċina]; l-erside (HPLC≥98%, AB0497, ALFA, iċ-Ċina); isoatteoside (HPLC≥98%, AB17021202, ALFA, iċ-Ċina); 2'-acetyl acteoside (HPLC≥98%, PRF7081243, Chengdu Pu Rui Fa Technology, Co., Ltd. iċ-Ċina); cistanoside A, cistanoside C, and 6'-acetyl acteoside (HPLC≥95%, iżolati u ppurifikati fil-laboratorju tagħna) (Xu et al., 2017).

Materjali u Preparazzjoni tal-Pjanti

Zkuk imnixxfa ta'C. deserticolaY. C. Ma nxtraw mill-Kontea ta 'Yongning, provinċja ta' Ningxia f'Settembru 2015, il-koordinati speċifiċi tal-ġbir tal-pjanti kienu (106.026597, 38.262816). Il-ħwafa ġiet identifikata minn Prof. Ling Dong (dipartiment tal-farmakognosija, l-Università Medika ta' Ningxia), b'kampjun ta' vawċer (#20150901) kien disponibbli fl-ħwam tal-analiżi farmaċewtika. Total ta' 10.0 kg imnixxef u trabC. deserticolaġie estratt bl-użu tal-metodu ta 'rifluss tas-sħana, il-proċedura dettaljata kienet kif ġej: is-solvent kien 75% etanol, il-proporzjon ta'C. deserticolamaterjal għas-solvent kien 1: 8, il-ħin ta 'rifluss dam 2 siegħa, u l-materjali kienu rifluss għal tliet darbiet; imbagħad il-filtrati kollha tħalltu flimkien u kkonċentrati taħt kondizzjoni ta' pressjoni mnaqqsa biex joffru 6.5 kgC. deserticolaestratti tal-etanol (CDE). Għall-esperiment tal-annimali, 0.5% sodju taċ-ċelluloża carboxymethyl (CMC-Na) intuża biex jissospendi s-CDE, u d-dożaġġ amministrat mill-ħalq ġie stabbilit bħala 200, 400, u 800 mg/kg/kuljum, b'volum ta' 1 ml/100 g piż tal-ġisem ta' kull annimal; għall-analiżi tal-blot tal-punent, is-sulfoxide dimetil intuża biex jinħall is-CDE u mbagħad dilwit bid-DMEM biex tinkiseb il-konċentrazzjoni finali ta' 0.01, 0.1 1 mg/ml; għall-analiżi HPLC, il-metanol ġie applikat biex jinħall is-CDE, segwit minn iffiltrat u dilwit bil-fażi mobbli inizjali biex tikseb il-konċentrazzjoni xierqa.

Analiżi tal-Kromatografija Likwida ta 'Prestazzjoni Għolja ta'Estratt ta 'Cistanche deserticola

Il-kostitwenti kimiċi ewlenin tas-CDE ġew identifikati bl-użu tal-HPLC bis-sustanzi ta' referenza korrispondenti. Il-kundizzjonijiet tal-kromatografija ġew stabbiliti kif ġej: L-istrument Agilent 1220 RP-HPLC bil-kolonna C18 (4.6 i.d. × 250 mm; 5 μm), fażi mobbli ta' elużjoni tal-gradjent prinċipalment kien fiha ilma u aċetonitril kien jintuża biex jinkisbu qċaċet separati sew: solvent A (ilma li fih 0.5% aċidu aċetiku) u B (aċetonitrile): 0-4 min, 85–83% A; 4–10 min, 83–80% A; 10–30 min, 80–75% A; 30–40 min, 75–70% A. Il-volum tal-injezzjoni tal-kampjun kien ta' 5 μl, it-temperatura kienet ikkontrollata fi 30°C, u l-individwazzjoni tal-UV saret fi 333 nm (Dong et al., 2018). Is-sustanzi ta' referenza inklużi l-ekhinacoside, l-akkuter, l-isoakkuside, il-cistanoside A, il-cistanoside C, l-akebri 2'-acetyl acteoside, u l-akeoside ta' 6'-acetyl intużaw biex jidentifikaw il-quċċata korrispondenti.

cistancheJistgħuanti-apoptożi

Esperimenti fuq l-Annimali

Għall-esperimenti fuq l-annimali, il-proċeduri kollha twettqu skont b'mod strett il-protokoll approvat mill-gwida istituzzjonali tal-kumitat għall-kura u l-użu tal-annimali tal-Università Medika Ningxia (NXMU-20130311). Tmienja u erbgħin firien nisa adulti Sprague-Dawley li jiżnu madwar 237 ± 25 g inkisbu (Università Medika ta 'Ningxia, Yinchuan, iċ-Ċina) u miżmuma għal ġimgħa b'dieta standard tal-gerbub u ilma tal-vit taħt kundizzjoni kkontrollata mill-ambjent. Imbagħad, kull far għadda jew anestesija (chloral hydrate, 100 mg/kg, i.p.) biss, sham ovariectomized (sham), jew żewġ ovarji t-tnejn tneħħew u mbagħad maqsuma b'mod każwali f'ħames gruppi: grupp mudell (OVX) kien amministrat mill-ħalq b'0.5% CMC-Na; grupp pożittiv (EV) b'1 mg/kg/jum ta' estradiol valerate; gruppi baxxi ta' dożaġġ (CDEL), moderati (CDEM), u għoljin (CDEH) b'200, 400, u 800 mg/kg/kuljum ta' CDE, rispettivament. L-esperimenti damu għal 12-il ġimgħa; il- piż tal- ġisem ta ' kull far tkejlet kull kull ġimgħa bid- doża ta ' l- għoti aġġustata kif xieraq. Wara l- aħħar jum ta ' l- intervent, inġabru u nħażnu 24 siegħa ta ' awrina, serum, femora, tibja, u utru f' −80°C għal aktar analiżi differenti.

Parametri Bijokimiċi

Il-livelli ta' SOD tas-serum, GSH, MDA, cathepsin K, BGP, u DPD urinarju ġew determinati mill-kits tar-reaġenti korrispondenti, filwaqt li l-attività tal-aċidu fosfatażi reżistenti għat-tartrate (TRAP) ġiet evalwata skont referenza (Jiao et al., 2009). L-attività tal-fosfatażi alkalina (ALP) u l-livelli ta' Ca u P ġew stmati bl-użu ta' magna tal-analizzatur awtomatiku (Ciba-Corning 550, l-Istati Uniti).

Densità Minerali tal-Għadam u Analiżi tat-Tomografija Mikro-Komputata

Magna ta ' l- absorptiometry tar- raġġi X b' enerġija doppja (Lunar, USA) intużat biex tistma d- densità minerali ta ' l- għadam (BMD, g/ cm2) tal- wirk tal- lemin ta ' kull far bil- mod ta ' l- iskannjar ġie ssettjat bħala annimal żgħir. Imbagħad, l-istess wirk intuża biex tiġi evalwata l-immaġni 3D tal-mikroarkitija tal-għadam trabekulari billi ġie applikat apparat tal-iskaner mikro-CT (GE, Amerikan), ir-reġjun ta' interess (ROI) intgħażel billi ġie stabbilit l-istess koordinati fil-pjanċa tat-tkabbir tal-wirk ta' kull kampjun, il-parametri tal-mikroarkitektura inkluż il-kontenut minerali tal-għadam (BMC), il-kontenut minerali tat-tessut (TMC), id-densità minerali tat-tessut (TMD), is-separazzjoni trabekulari (Tb. Sp), in-numru trabekulari (Tb. N), u l-ħxuna trabekulari (Tb. Th) inkisbu bl-analiżi tar-ROI.

Determinazzjoni tal-Blot tal-Punent

Osteoklasts ġew indotti bl-użu ta 'ċelluli RAW 264.7 miżjuda ma' MCSF (25 ng/ ml) u RANKL (20 ng / ml) (Yang et al., 2019). Wara 6 ijiem ta' l-aħħar stimulati, iċ-ċelloli ta' l-osteoklast immaturati li ġew identifikati għall-attività TRAP ġew ittrattati b'CDE jew mingħajrha (0.01, 0.1, u 1 mg/ml, rispettivament) għal 48 siegħa, imbagħad iċ-ċelloli kienu lysed b'buffer tal-lisi, u s-supernatanti ġew ċentrifugati u separati b'10% elettroforeżi tal-ġell tas-sodju dodecyl sulfate-polyacrylamide u trasferiti fuq membrani PVDF. Il-membrana ġiet imblukkata b'5% ħalib mingħajr xaħam f'temperatura ambjentali għal 1 siegħa u mbagħad inkubata b'antikorpi tal-primati kontra TRAF6 (1:400), RANKL (1:400), RANK (1:400), IKKβ (1:400), NFκBIA (1:400), OPG (1:400), PI3K (1:400), AKT (1:400), c-Fos (1:400), NFAT2 (1:400), β-actin, u GAPDH (1:1,000). L-istess membrani tneħħew u ġew sondati mill-ġdid b'antikorpi korrispondenti, misjuba mis-Software tal-Laboratorju tal-Immaġni fl-aħħar. Kull wieħed mill-esperimenti ġie ripetut tliet darbiet, b'β-actin jew GAPDH bħala kontroll intern.

Analiżi Statistika

Id-dejta tal-esperimenti tagħna, deskritta bħala l-medja ± SD, ġiet analizzata bl-użu ta 'analiżi f'direzzjoni waħda ta' varjanza segwita mit-test ta 'Dennett (softwer SPSS 22.0, SPSS, USA), p< 0.05="" was="" considered="" as="" statistically="">

cistancheikun magħruf ukoll bħaladeżertGinseng

RIŻULTATI Kostitwenti Kimiċi Ewlenin ta 'Cistanches deserticola

Estratt Bl-użu ta' sustanzi ta' referenza korrispondenti, seba' komposti prinċipalment tal-glikosidi tal-fenitanojdi inklużi l-ekknikod,cistanosideA,l-aġġeoside, isoacteoside,cistanosideC, 2'--acetylaġġeoside,u 6'-aċetill-aġġeosideġew identifikati f'dan l-estratt, il-qċaċet u l-istrutturi tal-kromatografija korrispondenti tagħhom intwerew fil-Figura 1.

Effetti ta'Cistanches deserticolaEstratt fuq il-Piż tal-Ġisem, l-Utru u l-Vaġina

Ma kien hemm l- ebda differenza sinifikanti fil- medja inizjali tal- piż tal- ġisem qabel l- operazzjoni. Madankollu, 3 xhur wara l- operazzjoni ovariektomika, il- piżijiet tal- ġisem tal- firien fil- grupp mudell OVX żdiedu b' mod sinifikanti b' 35.< 0.001).="" cde,="" with="" the="" dosage="" of="" 200–800="" mg/kg/day,="" showed="" no="" influence="" on="" these="" noticeably="" increased="" body="" weights="" and="" decreased="" uterine="" and="" vagina="" wet="" weights,="" as="" figure="" 2="" showed.="" however,="" totally="" different="" to="" cde,="" 1="" mg/kg/day="" of="" ev="" exhibited="" a="" significant="" estrogenic="" effect,="" of="" which="" the="" gained="" body="" weight="" and="" decreased="" uterine="" and="" vagina="" weights="" in="" ovx="" rats="" were="" significantly="" reversed="" by="" ev="">

Effetti ta'Cistanches deserticolaEstratt dwar id-Densità Minerali tal-Għadam u l-Mikroarkija tal-Għadam

Tendenza li qed tonqos b' mod intuwittiv kienet osservata fil ±- grupp OVX bil- BMD kienet ta ± ' 0.< 0.001),="" which="" implied="" the="" bmd="" of="" the="" rats="" in="" ovx="" model="" group="" decreased="" about="" 12.2%="" after="" 12="" weeks="" of="" the="" ovariectomized="" surgery="" as="" compared="" to="" the="" sham="" rats.="" as="" figure="" 3="" showed,="" all="" cde="" treated="" rats="" showed="" an="" increased="" bmd="" by="" 15.1%="" (p="">< 0.001),="" 8.1%="" (p="">< 0.05),="" and="" 9.2%="" (p="">< 0.05),="" respectively,="" as="" compared="" to="" ovx="" model="" group.="" the="" 3d="" image="" and="" the="" corresponding="" quantitative="" results="" of="" the="" trabecular="" bone="" microarchitecture="" of="" rats="" were="" shown="" in="" figure="" 4.="" consistent="" with="" the="" results="" of="" bmd,="" an="" obvious="" reduction="" of="" the="" trabecular="" area="" was="" obtained="" in="" the="" ovx="" model="" group="" as="" compared="" with="" the="" sham="" rats.="" however,="" the="" deterioration="" of="" trabecular="" bone="" was="" partly="" improved="" by="" cde="" intervention,="" except="" tmd="" and="" tb.="" th,="" the="" other="" trabecular="" bone="" parameters="" include="" bmc,="" tmc,="" and="" tb.="" n="" were="" significantly="" increased="" and="" tb.="" sp="" was="" notably="" decreased="" after="" cde="">

Effetti ta'Cistanches deserticolaEstratt fuq il-Parametri Bijokimiċi tal-Awrina u tas-Serum

Tnax- il ġimgħa wara l- operazzjoni ovariektomika, tendenza li tonqos iżda mhux statistikament ta ' livell ta ' eskrezzjoni fl- awrina ta ' Ca kienet osservata fil- grupp ta ' mudelli OVX, kif uriet Figura 5, filwaqt li l- livell ta ' awrina P fil- firien tal- grupp ta ' mudelli OVX kien naqas madwar tliet darbiet inqas mill- firien sham (p< 0.001).="" after="" treatment="" with="" cde="" (200–400="" mg/kg/day)="" for="" 12="" weeks,="" the="" reduction="" of="" serum="" ca="" and="" p="" were="" significantly="" prevented="" (p="">< 0.05),="" and="" the="" decreased="" urinary="" excretion="" level="" of="" p="" was="" also="" inhibited="" in="" all="" the="" cde="" treated="" groups="" (p=""><>

Effetti ta'Cistanches deserticolaEstratt dwar il-Formazzjoni tal-Għadam u l-Markaturi tar-Riassorbiment

Fir-rigward tal-markaturi tal-formazzjoni tal-għadam ta' ALP u BGP (Figura 6), l-attività ta' ALP, mhux BGP, tjiebet b'mod sinifikanti fit-tliet dożi kollha ta' gruppi kkurati b'CDE (200–800 mg/kg/kuljum) meta mqabbla mal-firien sham. Fir-rigward tal-markaturi tar-riassorbiment tal-għadam tan-NAS, id-DPD, u l-katepsin K (Figura 7), l-attivitajiet tat-tliet assorbimenti mill-ġdid tal-għadam

il- markaturi żdiedu b' mod sinifikanti madwar 20. u mistenni, CDE wera potenzjal kbir fit-trażżin ta 'dawn l-indiċijiet kollha, li l-attività tal-katepsin K tagħha tnaqqset b'49.9 ~ 66.7% (p< 0.001),="" the="" level="" of="" dpd="" was="" declined="" by="" 22.9~39.3%="" (p="">< 0.01),="" and="" the="" property="" of="" trap="" was="" prevented="" by="" 20.1~27.6%="" (p="">< 0.01),="" respectively,="" as="" compared="" with="" the="" rats="" of="" ovx="" model="">

Effetti tal-Cistanches deserticola Estratt fuq Attivitajiet ta 'Glutathione u Superoxide Dismutase kif ukoll Kontenut ta' Malondialdehyde

Ma kien hemm l- ebda differenzi sinifikanti fl- attivitajiet ta ' SOD u GSH bejn il- gruppi OVX u sham wara 3 xhur ta ' operazzjoni ovariektomika, kif uriet il- Figura 8, filwaqt li l- kontenut ta ' L- MDA kien ovvjament imtejjeb fil- firien ta ' OVX

grupp ta ' mudelli bi 68.

Effetti ta'Cistanches deserticolaEstratt dwar il-Livelli ta' Espressjoni ta' Proteina ta' TRAF6, RANKL, RANK, NFκBIA, IKKβ, PI3K, AKT, OPG, c-Fos, u NFAT2

Kif uriet il-Figura 9, l-espressjonijiet ta' TRAF6, RANKL, RANK, IKKβ, NFκBIA, u NFAT2 ġew irregolati b'mod sinifikanti filwaqt li l-livelli ta' PI3K, AKT, OPG, u c-Fos kienu ovvjament irregolati wara t-trattament b'CDE meta mqabbla mal-kontroll. Mekkaniżmu ipotetizzat (Figura 10) li bih CDE jista' jnaqqas il-livelli ta' RANKL, RANK, u TRAF6 u jirregola 'l fuq l-espressjoni tal-OPG, u b'hekk il-kwantitajiet vinkolanti ta' RANKL ma' RANK tnaqqsu; konsegwentement, il- passaġġi downstream inkluż is- sinjal NF- κB ġew imrażżna u PI3K/ AKT ġie stimulat, u dawn il- kaskata ta ' sinjalar flimkien wasslu għall- attivazzjoni ta ' c- Fos ġiet promossa u NFAT2 ġie inibit, u fl- aħħar l- assorbiment mill- ġdid osteoklastiku ta ' l- għadam ġie evitat. DISKUSSJONI