L-istress ossidattiv huwa wieħed mill-prekursuri sinifikanti ta' diversi mard metaboliku parti 2

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

3. Diskussjoni

Ir-radikali ħielsa jistgħu jattakkaw il-proteini, il-lipidi, jew id-DNA biex jipprokuraw elettron, li jirriżulta f'diversi problemi tas-saħħa. Għal din ir-raġuni, huwa essenzjali li tiġi bbilanċjata s-sistema antiossidanti tal-ġisem u r-radikali ħielsa ffurmati mill-ossidazzjoni. F'każ ta' deterjorament ta' dan il-bilanċ, jinqala' stress ossidattiv [29]. L-istress ossidattiv huwa wieħed mill-fatturi ewlenin li jirriżulta f'diversi disturbi kroniċi bħal kanċer, dijabete, mard kardjovaskulari, marda ta 'Alzheimer, eċċ Filwaqt li hemm sistemi awto-antiossidanti fil-ġisem tal-bniedem biex jiġġieldu l-ħsara ossidattiva lit-tessuti u l-organi, dawn id-difiża is-sistemi jistgħu jitilfu l-effiċjenza tagħhom minħabba kundizzjonijiet differenti bħal konsum żejjed ta’ alkoħol, tipjip, stress, użu kroniku tad-droga, u radjazzjoni, eċċ. [30]. Diversi rapporti xjentifiċi indikaw li metaboliti sekondarji tal-pjanti għandhom rwol sinifikanti fil-prevenzjoni tal-istress ossidattiv u l-effetti ta 'ħsara tiegħu [13,14,31]Anke jekk il-bijodisponibilità hija parametru importanti li jaffettwa l-bijoattività ta' dawn il-komposti, ma ġietx ikkunsidrata f' ħafna studji. Madankollu, huwa magħruf sew li l-metaboliti sekondarji huma soġġetti għal trasformazzjonijiet strutturali minħabba kundizzjonijiet ta 'pH differenti, attività enżimatika, u temperatura tal-ġisem fis-sistema gastrointestinali. Barra minn hekk, il-karatteristiċi kimiċi tal-metaboliti sekondarji bħall-piż molekulari, il-polarità, u l-grad ta 'rbit ma' makromolekuli fil-matriċi tal-pjanti huma wkoll fatturi sinifikanti li jaffettwaw il-bijodisponibilità tagħhom [13]. Għaldaqstant, l-assorbiment tal-komposti jew il-metaboliti tagħhom fid-demm ladarba jinbelgħu huwa essenzjali sabiex jiġu eżerċitati l-effetti fiżjoloġiċi sistemiċi tagħhom. Mudelli ta' simulazzjoni ta' diġestjoni in vitro jistgħu jipprovdu evidenza għall-valutazzjoni tal-karatteristiċi possibbli ta' bijodisponibilità tas-sustanzi. Filwaqt li l-konferma fi provi umani hija meħtieġa biex tintalab kwalunkwe proprjetà funzjonali, mudelli ta’ simulazzjoni in vitro jintużaw b’mod wiesa’ bħala alternattivi għal studji in vivo jew provi umani, li ħafna drabi huma etikament dibattibbli, intensivi fir-riżorsi, għaljin u jieħdu ħafna ħin [32].

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Diversi riċerkaturi investigaw ukoll il-potenzjal antiossidant ta 'estratti ppreparati minn organi differenti ta' speċi Cistus. Skont l-istħarriġ tal-letteratura, dan huwa l-ewwel studju dwar l-ispeċi Cistus rigward il-bijodisponibilità ta 'sustanzi fenoliċi u l-impatt tagħhom fuq l-attività antiossidanti billi juża mudell ta' simulazzjoni ta 'diġestjoni in vitro. Karas et al. [33] issuġġerixxa li 10 fil-mija tal-komponenti polifenoliċi jibqgħu mhux diġeriti fil-matriċi tal-pjanti u 90 fil-mija minnhom huma soġġetti għal diġestjoni fil-fażi gastrika jew intestinali (madwar 48 fil-mija u 52 fil-mija, rispettivament). Kif issemma qabel, l-ammonti fenoliċi kollha f'estratti milwiema ġew affettwati b'mod negattiv mill-proċedura ta 'simulazzjoni ta' diġestjoni umana in vitro. Għalhekk, ġie skopert telf sinifikanti fil-kontenuti fenoliċi tal-kampjuni bijodisponibbli tal-estratti kollha. Barra minn hekk, il-konċentrazzjonijiet totali ta 'proanthocyanidin ta' kampjuni IN kienu taħt il-limitu ta 'skoperta fl-estratti milwiema kollha. Diversi studji qanqlu wkoll l-influwenza negattiva tal-proċedura tad-diġestjoni fuq il-komposti fenoliċi fl-estratti tal-pjanti u b'hekk bijoattivitajiet relatati. Per eżempju, aħna rrapportajna l-kontenut fenoliku totali ta 'Salvia virgata Jacq. kien ukoll affettwat ħażin mill-proċedura tad-diġestjoni fl-istudju preċedenti tagħna Barra minn hekk, l-ammonti ta 'metaboliti ewlenin tal-estratt, jiġifieri, rutin u aċidu rosmarinic, kellhom it-tendenza li jonqsu [13]. B'kuntrast, bosta studji rrappurtaw riżultati kontradittorji. Fl-istudju minn Celeb et al. [34], osservaw iż-żieda tal-ammonti totali ta 'aċidu fenoliku, flavonojdi u fenoliċi fil-kampjuni bijodisponibbli ta' estratt metanoliku minn Hypericum perfoliatum L. Fil-fatt, il-metaboliti ewlenin, quercitrin, aċidu kloroġeniku u galliku, kellhom proporzjonijiet ta 'bijoaċċessibbiltà 'l fuq minn 100 fil-mija. Dawn l-istudji wrew li l-effetti tal-proċedura tad-diġestjoni jistgħu jvarjaw skont il-materjali tal-pjanti. Sabiex jiġu ċċarati dawn id-differenzi, huwa essenzjali li jiġi kkunsidrat il-mekkaniżmu ta 'azzjoni tas-sistema tad-diġestjoni fuq sustanzi fenoliċi. (benefiċċji tal-bijoflavonoids) Serra et al.[35] issuġġerixxa li l-komposti fenoliċi jinsabu prinċipalment fil-glikosidi, polimeri, u forom ester fil-matriċi tal-pjanti u huma idrolizzati fis-sistema diġestiva qabel l-assorbiment. Diversi fatturi jistgħu jinfluwenzaw it-trasformazzjonijiet strutturali tal-komposti fenoliċi fil-passaġġ gastrointestinali. Pereżempju, komposti b'piż molekulari ogħla, bħal proanthocyanidins jew procyanidins, jeħtieġ li jiġu idrolizzati qabel l-assorbiment fl-imsaren. L-istruttura tal-matriċi tal-pjanti hija wkoll fattur prominenti fil-bijodisponibilità tal-fenoliċi; (jixtru cistancheIl-komposti fenoliċi jistgħu jorbtu mal-makromolekuli fil-matriċi tal-pjanti, bħal fibri, proteini u molekuli tal-lipidi. Għalhekk, il-komponenti fenoliċi liberati biss mill-matriċi jistgħu jsiru assorbibbli mill-passaġġ gastrointestinali. Barra minn hekk, valuri differenti tal-pH u azzjonijiet enżimatiċi tal-mikrobijota intestinali huma fost il-fatturi kruċjali l-oħra li jaffettwaw it-trasformazzjoni fl-istruttura kimika tal-komposti fenoliċi [36]. Fid-dawl ta 'din id-dejta, nistgħu niipotetizzaw li riżultati differenti miksuba minn tipi simili ta' studji sperimentali jistgħu jkunu dovuti għall-kumplessità tas-sistema tad-diġestjoni u l-kompożizzjoni tal-matriċi tal-pjanti. Kif ippreżentat fit-Tabella 3, il-kampjuni bijodisponibbli ta 'estratti ta' Cistus urew attività antiossidant aktar dgħajfa mill-kontropartijiet mhux diġeriti u post-gastriċi minħabba l-kontenuti fenoliċi aktar baxxi tagħhom.

Cistanchejistaittejjeb l-immunità

Barra minn hekk, iż-żewġ estratti ta 'C.saluifolius wrew attività antiossidant aħjar f'assaġġi DPPH, CUPRAC, FRAP, u TOAC meta mqabbla ma' speċi oħra. Barra minn hekk, iż-żewġ estratti ta 'C.paroifforus wrew attività ogħla ta' scavenging radikali DMPD mill-estratti ta 'speċi oħra. Kif indikat fit-Tabella 1, il-fenoliċi totali, flavonoids,cistanche bienfaitsu l-kontenuti ta 'aċidu fenoliku ta' C. salviifolius kienu ogħla milli fil-kampjuni l-oħra. Għalhekk, il-potenzjal antiossidant ogħla ta 'l-estratti ta' C. salviifolius jista 'jkun relatat mal-kontenuti fenoliċi tiegħu.

Barra minn hekk, it-tnaqqis fil-potenzjali antiossidanti, attivitajiet inibitorji fuq enżimi relatati mal-karboidrati, u AGEs tal-kampjuni bijodisponibbli jistgħu jkunu relatati mat-tnaqqis fil-marker flavonoid glycosides. Madankollu, l-estratti ta 'Cistus kien fihom ukoll sustanzi fenoliċi oħra, kif indikat fil-Figura 1. Għalhekk, analiżi kromatografika dettaljata tal-estratti hija meħtieġa biex tissorvelja l-influwenza tad-diġestjoni fuq l-attività bijoloġika.

Il-potenzjal inibitorju tal-estratti tal-pjanti fuq l-enzimi diġestivi reċentement ġibed aktar attenzjoni minħabba t-tħassib dwar is-sikurezza tal-inibituri sintetiċi. Għalhekk, l-effett inibitorju ta 'estratti tal-pjanti ġie ddeterminat f'diversi studji, u dan l-effett kien ġeneralment assoċjat ma' sustanzi fenoliċi bħal flavonoids, aċidi fenoliċi, proanthocyanidins, eċċ Sun et al. [37] issuġġerixxa li l-komposti polifenoliċi juru l-effetti inibitorji tagħhom billi jorbtu ma 'l-enzimi msemmija hawn fuq bl-għajnuna ta' forzi idrofobiċi u bonds mhux kovalenti. Għalhekk, l-inibizzjoni tal-attività tal-enzimi o-amylase u a-glucosidase mill-polifenoli hija relatata mal-istrutturi molekulari tagħhom. Filwaqt li dan il-mekkaniżmu ta 'interazzjoni ġie studjat bl-użu ta' tekniki differenti bħal kinetika ta 'inibizzjoni, docking molekulari, quenching tal-fluworexxenza, eċċ., għadha ma nkisbet l-ebda konklużjoni ċerta [38]. Madankollu, bosta studji rrappurtaw li l-inibizzjonijiet tal-enżimi diġestivi tal-estratti tal-pjanti huma direttament relatati mal-kontenuti fenoliċi tagħhom. Studji simili dwar l-attivitajiet ta' inibizzjoni ta' l-enżimi ta' l-ispeċi Cistus kienu wkoll irrappurtati qabel. Sayah et al. [39] investiga l-attivitajiet inibitorji -amylase u -glucosidase tat-8{{10}} fil-mija estratti metanoliċi u milwiema minn C. monspeliensis u C. saluifolius. Ir-riżultati tagħhom kienu skond l-istudju preżenti, u żvelaw li l-estratt milwiema ta 'C. salvifolius wera o-glucosidase ogħla (ICso ug/mL:0.95±0.14)u -amylase (IC5{ {55}} ug/mL:217.1±0.15)attività inibitorja mill-estratt milwiema C. monspeliensis （IC50 ug/mL∶ 14.58±1.26） u （IC50 4g/mL:886.10±0.10), rispettivament Ir-rati inibitorji taż-żewġ estratti milwiema fuq dawn l-enzimi kienu ogħla mill-kompost ta’ referenza acarbose (ICso ug/mL:18.01±2.00)Simili għall-istudju tagħna, sabu korrelazzjoni mar-rati inibitorji tal-enżimi u t-total ammonti fenoliċi u flavonojdi. Kemm il-kontenut fenoliku totali kif ukoll il-flavonoid totali tal-estratt milwiema C. saloijfolius (408.43±1.09mg GAE u 140.00±1.15 RE, rispettivament) kienu ogħla mill-estratt milwiema C.monspeliensis (261.76±1.9mg GAE u 1.9mg 78.00±1.15 RE rispettivament). Orhan et al. [40] investigat ukoll il-potenzjali inibitorji tal-enzimi diġestivi ta '80 fil-mija estratti akwei u etanoliċi mill-weraq ta' C.laurifolius. Skont ir-riżultati tagħhom, 80 fil-mija estratt etanoliku (71.7 fil-mija ± 0.6) wera attività inibitorja qawwija -amylase meta mqabbla ma 'estratt milwiema (39.3 fil-mija ± 2.2) f'konċentrazzjoni ta' 1mg/mL. Huma ssuġġerew li l-komposti fenoliċi, speċjalment il-flavonoids, jaffettwaw direttament is-sekrezzjoni tal-insulina billi jipprevjenu l-apoptożi taċ-ċelluli beta u jappoġġaw l-attività kontra d-dijabete. Din l-ipoteżi, korrelatata mar-riżultati tagħna, timmarka li l-kampjun ND ta 'estratti milwiema ta' C. salviifolius eżerċita l-ogħla kontenut totali ta 'flavonoid u fenoliċi u l-akbar attivitajiet inibitorji -amylase u o-glucosidase. Kif mogħti fit-Tabella 4, l-estratt milwiema ta 'C. salviifolius wera attivitajiet inibitorji aħjar fuq enżimi diġestivi mill-estratti l-oħra. Barra minn hekk,kolesterol cistancheKampjuni IN ta 'l-estratti milwiema kien fihom ammonti fenoliċi u flavonoid aktar baxxi minn kampjuni ND u għalhekk żvelaw attivitajiet inibitorji ta' enzimi aktar baxxi fix-xogħol preżenti. Filwaqt li l-kontenuti fenoliċi tal-estratti ġew affettwati b'mod negattiv mill-proċedura tad-diġestjoni, xorta wrew attività inibitorja sinifikanti tal-enzimi diġestivi. F'diversi studji, flavonoid glycosides ġew irrappurtati bħala l-metaboliti ewlenin ta 'estratti tal-pjanti b'potenzi inibitorji qawwija -amylase u -glucosidase[41-43]Filwaqt li l-mekkaniżmu inibitorju ta 'komposti fenoliċi fuq l-enżimi diġestivi għadu ma ġiex żvelat, l-istruttura- Twettqu studji dwar ir-relazzjoni tal-attività fuq xi komponenti fenoliċi bħal flavonoids, aċidi fenoliċi, proanthocyanidins, u tannini. Studji dwar ir-relazzjoni bejn l-istruttura u l-attività dwar il-flavonojdi wrew li r-rabta doppja C2=C3 taċ-ċirku C isaħħaħ il-potenzjal ta 'inibizzjoni ta' l-enzima diġestiva ta 'komposti bħal dawn. Peress li din ir-rabta tgħolli d-densità tal-elettroni, is-saħħa tal-interazzjoni bejn il-flavonoid u l-enzima tiżdied [44]. Barra minn hekk, gruppi hydroxyl fuq C-5 u C{-7 jiffaċilitaw il-potenzjal inibitorju -amylase tal-flavonoids. Ġie ssuġġerit ukoll li l-idrossilazzjoni tal-iskeletru tal-flavonoids taffettwa b'mod pożittiv il-potenzi inibitorji tal-enżimi a-amylase u -glucosidase tagħhom[45]. Kif indikat qabel, il-flavonoids markaturi kollha fl-istudju preżenti kienu flavonol glycosides li jġorru dawn ir-rekwiżiti strutturali deskritti hawn fuq. Madankollu, wara proċedura ta 'diġestjoni in vitro, l-attivitajiet relatati tagħhom naqsu b'mod sinifikanti f'kampjuni bijodisponibbli tal-estratti milwiema.

Ġeneralment, il-potenzjal inibitorju tal-estratti tal-pjanti fuq AGEs huwa relatat ma 'diversi fatturi, jiġifieri, il-kontenut fenoliku tagħhom, il-potenzjali antiossidanti, il-kapaċitajiet ta' kelazzjoni tal-metall, l-interazzjonijiet tal-proteini, u l-attivitajiet ta 'imblukkar tar-riċetturi AGE [13]. Kif ippreżentat fit-Tabella 4, kampjuni bijodisponibbli ta 'l-estratti milwiema wrew attivitajiet inibitorji AGE aktar baxxi meta mqabbla ma' kampjuni ND peress li l-proċedura ta 'diġestjoni in vitro affettwat ħażin il-kontenut ta' fenoliċi ta 'l-estratti. Skont ir-riżultati tal-istudju attwali, il-kampjun ND tal-estratt milwiema ta 'C. (cistanche u tongkat ali reddit) saluifolius kellu l-ogħla attività inibitorja AGE kif ukoll kontenut totali fenoliku u flavonoid. B'paragun, kampjun IN ta 'estratt milwiema ta' C. monspeliensis wera l-iktar potenzjal dgħajjef ta 'inibizzjoni ta' AGE, li jista 'jkun attribwit għall-inqas kontenut totali ta' flavonojdi u fenoliċi tiegħu. Peress li l-flavonoids għandhom distribuzzjoni mifruxa f'estratti tal-pjanti, frott, ħxejjex u xorb, bosta studji intensifikaw dwar il-potenzjal ta 'inibizzjoni tal-flavonoids fuq formazzjonijiet AGE. L-istess flavonoids assenjati bħala l-fenoliċi markaturi f'dan l-istudju ġew irrappurtati wkoll bħala l-komposti markaturi fi studji oħra[46-48].

Simili għall-inibizzjoni tal-enżimi diġestivi, l-attivitajiet inibitorji tal-AGE tal-flavonoids ġew stimulati mill-bond doppju C2=C3 u l-idrossilazzjoni taċ-ċrieki A u C. Madankollu, it-twaħħil taz-zokkor mal-iskeletru tal-flavonojdi jwassal għal tnaqqis fl-attività inibitorja [49]. Min-naħa l-oħra, Cervantes-Lauren et al.[50] issuġġerixxa li flavon-3-ta' glikożidi kellhom potenzjal akbar ta' inibizzjoni ta' l-AGE mill-glikożidi flavonojdi l-oħra. Din l-ipoteżi tista 'tkun spjegazzjoni għat-tnaqqis fl-inibizzjoni tal-AGE f'kampjuni bijodisponibbli. Pereżempju, quercitrin u hyperoside ma ġewx skoperti f'kampjuni bijodisponibbli tal-estratt milwiema ta 'C.monspeliensis, li hija r-raġuni għall-attività aktar baxxa ta' kampjuni IN ta 'C. monspeliensis meta mqabbla mal-estratti minn speċi oħra. Anki jekk quercitrin ma ġiex skopert fl-estratt milwiema ta 'C. saloifolius, ammonti ogħla b'mod sinifikanti ta' hyperoside u salidroside jistgħu jkunu l-kawża tal-attività għolja ta 'inibizzjoni ta' AGE. B'mod ġenerali, ġiet osservata korrelazzjoni pożittiva bejn il-kontenut tal-flavonoid tal-markatur tal-kampjuni u l-potenzjal inibitorju tagħhom fuq AGEs.

4. Materjal u Metodi

4.1.Kimiċi

Ir-referenzi, l-enzimi u l-kimiċi kollha użati fl-esperimenti nxtraw minn Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Intużaw materjali ta 'grad analitiku fl-esperimenti.

4.2.Kampjuni tal-Pjanti

Partijiet mill-ajru ta’ C.creticus u C.saloifolius inġabru mill-kampus tal-Università ta’ Yeditepe (Kayisdagi, Istanbul) matul l-aħħar ġimgħa ta’ April 2018. Partijiet mill-ajru ta’ C.mon-speliensis u C. paroiflorus inġabru minn ħdejn Alacant Kutlu Aktas Balaji, Cesme, Izmir fit-tieni ġimgħa ta 'Mejju 2018. Partijiet mill-ajru ta' C. laurifolius inġabru mit-triq Kemer-Doganhisar, Konya, fl-ewwel ġimgħa ta 'Ġunju 2018. Il-Prof. Dr Erdem Yesilada awtentika materjali tal-pjanti. Kampjuni ta' vawċer għal C. creticus (YEF18013), C. Lauri folium(YEF18017), C.monspeliensis(YEF18015),C.paroiflorus(YEF18016) u C.salvifolius (YEF18014) ġew maħżuna fl-Erbarju tad-Dipartiment tal-Farmacognosija tal-Ispiżerija, Yeditepe University, Istanbul, it-Turkija. 4.3.Proċedura ta' Estrazzjoni

L-estrazzjoni milwiema ntgħażlet peress li tintuża komunement bħala teknika ta 'preparazzjoni fil-mediċina tradizzjonali. Il-partijiet tal-ajru mnixxfa bl-arja oħxon u trab tal-ispeċi Cistus (100 g) ġew estratti b'ilma distillat sħun (80 grad, 1.5 L) bl-użu ta 'apparat li jħawwad għal 15-il minuta. Imbagħad, estratti milwiema ġew iffiltrati minn karta filtru u evaporati sa nixfa taħt pressjoni mnaqqsa. Wara li tlestiet il-proċedura ta 'lijofilizzazzjoni, estratti ġew maħlula f'ilma distillat għal aktar ipproċessar (kampjun mhux diġerit: ND) (ir-rendiment ta' estratti: 13.04 fil-mija għal C.creticus, 15.7 fil-mija għal C.laurifolus, 12.8 fil-mija għal C.monspeliensis ,14.94 fil-mija għal C.parviflorus,14.74 fil-mija għal C.salvifolius). 4.4.Metodu ta' Simulazzjoni tad-Diġestjoni tal-Bniedem in Vitro

Il-mudell ta' simulazzjoni tad-diġestjoni umana ġie applikat għal kampjuni ta' Cistus in vitro, wara l-metodu dettaljat qabel minn Celeb et al.[34]. L-ewwelnett, 1g NaCl u 1.6g pepsin ġew maħlula f'500 mL ta 'ilma distillat biex tinkiseb soluzzjoni ta' fluwidu gastriku simulat (SGF) Aktar tard, il-pH tas-soluzzjoni SGF ġie rranġat għal 2 b'HCl (5 M); 17.5 mL ta 'din is-soluzzjoni tħallat ma '2.5 mL ta' kampjuni tal-pjanti, u din it-taħlita kienet tinsab fil-banju ta 'l-ilma li tħawwad f'37 grad għal 2 h biex timita l-movimenti peristaltiċi tas-sistema tad-diġestjoni. Wara sagħtejn, il-kampjuni tpoġġew f'banju tas-silġ biex jinattivaw ir-reazzjonijiet enżimatiċi; 2 mL tal-kampjuni twarrbu bħala kampjun "post-gastriku" (PG) għal aktar esperimenti. Membrana tad-dijalisi ċellulożika mgħobbija b'ammont xieraq ta 'NaHCO3 (1 M, pH7) kienet tinsab fis-soluzzjonijiet tal-kampjun kiesaħ; għalhekk, l-assorbiment gastro-intestinali kien imitat. Imbagħad, 4.5 mL ta 'aċidi tal-bili/soluzzjoni tal-pankreatin ġew ikkombinati mas-soluzzjonijiet, u t-taħlita ġiet inkubata għal 2 sigħat oħra f'temperatura ta' 37 grad. Fl-aħħarnett, il-fluwidu ġewwa l-membrana tad-dijalisi ġie akkwistat bħala l-kampjun "bijodisponibbli" (IN). Wara li l-proċedura spiċċat, il-kampjuni kollha ġew ippreservati fi grad -20 għal aktar esperimenti. 4.5.Stima In Vitro tal-Profil Fenoliku 4.5.1. Assaġġ tal-Kontenut Fenoliku Totali Id-determinazzjoni spettrofotometrika tal-kontenut fenoliku totali tal-kampjuni saret f'mudell ta' pjanċa ta' 96-bir skond il-metodu dettaljat qabel minn Barak et al.【32】; 75 uL ta' NagCO3（20 fil-mija f'H2O ） ġie miżjud ma '20 μL ta' kampjun ippreparat frisk u soluzzjonijiet ta 'referenza. Imbagħad, 100 μL ta 'reaġent Folin-Ciocalteu ġie kkombinat mat-taħlita. Wara perjodu ta 'inkubazzjoni ta' 30 minuta f'temperatura tal-kamra fid-dlam, l-assorbanza tkejjel f'690 nm. L-aċidu galliku ntuża bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tiġi stabbilita kurva ta' kalibrazzjoni u l-kontenuti fenoliċi totali ġew espressi bħala ekwivalenti ta 'aċidu galliku (GAE). 4.5.2. Assaġġ tal-Kontenut Totali ta' Flavonojdi Id-determinazzjoni spettrofotometrika tal-kontenut totali ta' flavonojdi tal-kampjuni kienet ġestita f'96-mudell ta' pjanċa tal-bir skond il-metodu spjegat qabel minn Bardakci et al. 【51】;150 μL ta '75 fil-mija etanol, 10 μL ta' klorur tal-aluminju u 10 uL ta '1M sodium acetate trihydrate ġew magħquda ma' 50 uL ta 'kampjuni u soluzzjonijiet ta' referenza, separatament. Imbagħad, dawn it-taħlitiet ġew inkubati f'temperatura tal-kamra mudlama għal 30min. Wara l-perjodu ta 'inkubazzjoni, l-assorbiment ġie kkalkulat f'405 nm. Quercetin kien impjegat bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tiġi stabbilita kurva ta' kalibrazzjoni u l-kontenut totali ta 'flavonoid kienu rappreżentati bħala ekwivalenti ta' quercetin (QE).

4.5.3.Assaġġ ta 'Kontenut ta' Aċidu Fenoliku Total

Il-kontenut totali ta 'aċidu fenoliku tal-kampjuni kien imkejjel spettrofotometrikament wara l-proċedura rrappurtata qabel minn Barak et al. [52]. L-ewwelnett, ammonti xierqa ta 'nitrit tas-sodju u molibdat tas-sodju ġew maħlula f'ilma distillat biex jinkiseb ir-reaġent Arnow. Imbagħad, 1 ml tal-kampjuni ġie kkombinat ma '1 mL ta' reaġent Arnow, 1 mL ta '0.1 M HCl, u 1 mL ta' 1 M NaOH, separatament. Wara dan, il-volum tat-taħlita ġie aġġustat għal 10 ml b'ilma distillat, u l-assorbiment inqrat immedjatament f'490 nm. L-aċidu caffeic kien impjegat bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tinkiseb kurva ta' kalibrazzjoni, u l-kontenuti totali ta 'aċidu fenoliku ngħataw bħala ekwivalenti ta' aċidu kaffejku (CAE).

4.5.4.Assaġġ tal-Kontenut Totali ta' Proanthocyanidin

Id-determinazzjoni spettrofotometrika tal-kontenut totali ta' proanthocyanidin tal-kampjuni twettqet f'mudell ta' pjanċa ta' 96-bir billi segwiet il-metodu ta' Barak et al. [11]. Fil-qosor, 25 uL tas-soluzzjonijiet tal-kampjun tħalltu ma '150 uL ta' 4 fil-mija vanillina u 75 uL ta 'soluzzjonijiet HCl (32 fil-mija), rispettivament. Wara ħin ta 'inkubazzjoni ta' 15-il minuta f'temperatura tal-kamra mudlama, l-assorbenza ġiet aġġustata għal 492 nm. Catechin hydrate ġie utilizzat bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tinkiseb kurva ta' kalibrazzjoni. Metanol kien impjegat bħala soluzzjoni ta 'kontroll. Il-kontenut totali ta 'proanthocyanidin tal-kampjuni kien iddikjarat bħala ekwivalenti ta' catechin (CE).

4.6.Assaġġi ta' Attività ta' Tkessiħ Radikali Ħieles 4.6.1.Assaġġi ta' Attività ta' Tkessiħ Radikali DPPH

L-attività ta' scavenging radikali DPPH tal-kampjuni ġiet iddeterminata f'{0}}mudell tal-pjanċa tal-bir wara l-metodu modifikat minn Celeb et al.[53]. Għall-ewwel, 150 uM ta 'soluzzjoni DPPH kienet ippreparata friska. Imbagħad, 200 μL ta 'soluzzjoni DPPH tħalltu ma' 25 uL ta 'soluzzjonijiet tal-kampjun. Imbagħad, din it-taħlita ġiet inkubata f'temperatura tal-kamra mudlama għal 50 min. L-assorbenza ġiet ikkalkulata f'540 nm. Butylated hydroxytoluene (BHT) kien impjegat bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti. Il-metanol intuża bħala soluzzjoni ta' kontroll. L-attività tal-kampjuni ġiet ippreżentata bħala EC50, li tikkorrispondi għall-konċentrazzjoni li turi attività ta '50 fil-mija.

4.6.2.DMPD Assaġġ ta 'Attività ta' Tkessiħ Radikali

DMPD * (N, N-dimethyl-p-phenylenediamine) l-attività ta ' scavenging radikali tal-kampjuni twettqet f'96-mudell tal-pjanċa tal-bir skond il-metodu deskritt qabel minn Inan et al. [13]. L-ewwelnett,10{{10}} mM DMPD flimkien ma' soluzzjoni,0.05 M FeCl; Soluzzjoni 6H2O u buffer aċetat 0.01 M ġew ippreparati friski. Imbagħad, 1 mL ta 'soluzzjoni DMPD, 100 mL ta' buffer aċetat, u 0.2mL ta 'soluzzjoni FeCl3-6H2O tħalltu, u aktar tard 15 uLof soluzzjoni tal-kampjun ġew ikkombinati ma' 210 μL ta 'din it-taħlita. Wara l-perjodu ta 'inkubazzjoni f'temperatura tal-kamra mudlama għal 50 min, l-assorbanza tkejjel f'492 nm. Trolox intuża bħala soluzzjoni ta' referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tinkiseb kurva ta' kalibrazzjoni. Il-konċentrazzjonijiet tas-soluzzjonijiet tal-kampjun kienu 1 mg/mL. L-attivitajiet ta ' scavenging radikali DMPD tal-kampjuni ġew iddikjarati bħala ekwivalenti Trolox (TE). 4.7.Assaġġi tal-Attività li Jnaqqsu l-Metall

4.7.1.Assaġġ tal-Enerġija Antiossidanti li Tnaqqas Ferriku (FRAP)

Id-determinazzjoni tal-attività FRAP tal-kampjuni twettqet f'mudell ta' 96 well-plate wara l-proċedura rrappurtata qabel minn Bardakci et al.[54]. Fil-bidu tal-esperiment, ir-reaġent FRAP ġie ffurmat billi tħallat acetate buffer, ferric-tripyridyltriazine, u FeCl; 6H2O soluzzjonijiet. Wara dan, ir-reaġent FRAP tpoġġa ġewwa l-forn ta' 37 grad għal 30 min. Imbagħad, 10 uL tas-soluzzjonijiet tal-kampjun ġew ikkombinati ma '30 μL ta' ilma distillat u 260 uL ta 'reaġent FRAP, rispettivament. Wara l-ħin ta 'inkubazzjoni f'37 grad għal 30min, l-assorbanza ġiet aġġustata għal 593 nm. Inbniet kurva standard billi ntużaw molaritajiet differenti ta' soluzzjoni ta' sulfat tal-ħadid (0.25-2 mM) biex jiġu evalwati r-riżultati. BHT intuża bħala soluzzjoni ta' referenza f'konċentrazzjonijiet differenti. L-attivitajiet FRAP tal-kampjuni ġew ippreżentati bħala mM FeSO4 f'1 g estratt niexef.

4.7.2.Assaġġ tal-Kapaċità tal-Antiossidant tat-Tnaqqis tal-Kupriku (CUPRAC)

L-attività CUPRAC tal-kampjuni ġiet iddeterminata f'mudell ta' pjanċa ta' 96-bir wara l-metodu modifikat minn Celeb et al. 【31】; 85 μL ta 'CuSO4 （10 mM）, neocupraine, u soluzzjonijiet ta' aċetat ta 'ammonju u 51 uL ta' ilma distillat ġew miżjuda ma '43 uL ta' soluzzjonijiet tal-kampjuni, separatament. Wara perjodu ta 'inkubazzjoni (20 min) f'50 grad f'banju ta' l-ilma, l-assorbiment tkejjel f'450 nm. L-aċidu askorbiku intuża bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tinkiseb kurva ta' kalibrazzjoni. L-attivitajiet CUPRAC tal-kampjuni ġew ippreżentati bħala ekwivalenti ta' aċidu askorbiku (AAE). 4.8.Assaġġ ta' Attività Antiossidanti Totali (TOAC)

Id-determinazzjoni totali tal-attività antiossidanti tal-kampjuni twettqet f'mudell ta' pjanċa ta' 96-bir wara l-proċedura minn Celeb et al. [55]. Għall-ewwel, ċertu ammont ta 'fosfat tas-sodju monobażiku, ammonju molybdate tetrahydrate, u aċidu sulfuriku tħallat biex takkwista s-soluzzjoni TOAC. Imbagħad, 300 μL ta 'soluzzjoni TOAC ġew miżjuda ma' 30 uL ta 'soluzzjonijiet tal-kampjun. Wara l-perjodu ta 'inkubazzjoni f'95 grad f'banju ta' l-ilma għal 90 min, l-assorbanza ġiet iddeterminata f'690 nm. L-aċidu askorbiku intuża bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti biex tinkiseb kurva ta' kalibrazzjoni. L-attivitajiet TOAC tal-kampjuni kienu rappreżentati bħala ekwivalenti ta' aċidu askorbiku (AAE). 4.9.Stima tal-Indiċi tal-Bijodisponibilità

L-indiċi tal-bijodisponibilità (BAvI) ġie kkalkulat skont l-ekwazzjoni teoretika deskritta minn Inan et al.[13]:

BAVI=CIN/CND L-"indiċi tal-bijodisponibilità" (BAvI) kien deskritt bħala l-proporzjon tan-numru ta' fenoliċi fil-kampjun bijodisponibbli (IN) għal dak fil-kampjun mhux diġerit (ND). 4.10. Kwantifikazzjoni ta 'Marker Flavonoids minn HPTLC

Id-determinazzjoni kwantitattiva tal-konċentrazzjonijiet ta 'salidroside, hyperoside, u quercitrin fil-kampjuni kollha ta' simulazzjoni (ND, PG, IN) ta 'l-estratti milwiema mill-ispeċi Cistus saret permezz ta' kromatografija ta 'saff irqiq ta' prestazzjoni għolja (HPILC) (CAMAG, Muttenz, l-Isvizzera) wara l-metodu validat minn Guzelmeric et al. [16]. Hyperoside, salidroside, u quercitrin ġew ippreparati f'konċentrazzjonijiet ta' 25,50 u 10{{3{0}} ug/mL, u l-konċentrazzjonijiet ta' soluzzjonijiet tal-kampjuni ppreparati friski ġew aġġustati għal 10 mg/mL. Dawn is-soluzzjonijiet ġew applikati għal pjanċi tal-ġel tas-silika b'lura tal-ħġieġ tal-fażi normali (20 cm × 10 cm, Merck, Darmstadt, il-Ġermanja) b'ċerti volumi (1-5 μL soluzzjonijiet standard u 5 μL soluzzjonijiet ta' kampjuni) bl-użu ta' siringi ta' 100 μL （ Hamilton, Bonaduz, l-Isvizzera）.Il-proċedura ta 'applikazzjoni twettqet bl-applikatur tal-kampjun Linomat 5. Il-proċess ta' żvilupp sar f'Kamra ta' Żvilupp Awtomatizzata (ADC 2) u ethyl acetate: dichloromethane. aċidu aċetiku. aċidu formiku: ilma (10:25:10) :10:10:10me) ntgħażlet bħala fażi mobbli. Imbagħad, il-pjanċi ġew derivatizzati b'Reaġent tal-Prodott Naturali (NPR) (1g diphenylboric acid 2-aminoethyl ester f'200mLof ethyl acetate) fl-apparat ta' immersjoni (CAMAG) Filwaqt li hyperoside u quercitrin ġew analizzati spettrofotometrikament f'260 nm, l-ammont ta 'salidroside tkejjel f'330 nm bi skaner UV.Il-valuri Rf tal-istandards ġew determinati bħala hyperoside （≈0.35）, quercitrin （c0.45）, （c0.45）, 0.65）.Il-koeffiċjenti ta' korrelazzjoni (r²) instabu li tkun ×0.98 għall-kwantifikazzjoni tal-flavonoids li jimmarkaw.

4.11.Attività Inibitorja fuq Enżimi Relatati mad-Dijabete 4.11.1. -Attività Inibitorja tal-Glucosidase

-attivitajiet inibitorji tal-glucosidase tal-kampjuni mhux diġeriti u bijodisponibbli miksuba mill-estratti milwiema tal-ispeċi Cistus ġew eżaminati wara l-metodu spjegat qabel minn Balan et al. [56]. L-ewwelnett, ammonti xierqa ta 'monosodium phosphate u disodium phosphate tħalltu mal-akkwist ta' 100 mM phosphate buffer (pH7). L-enzima ac glucosidase ġiet maħlula f'buffer tal-fosfat biex tinkiseb is-soluzzjoni -glucosidase （0.2U/mL）. Imbagħad 170 uL ta 'buffer tal-fosfat, 20 μL tas-soluzzjoni -glucosidase, u 20 μL ta' soluzzjonijiet tal-kampjun ġew magħquda u inkubati f'forn ta '37 grad għal 15-il minuta. Wara dan, 20 uL ta 'soluzzjoni ta' 2.5 mM p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside f'100 mM buffer tal-fosfat tal-potassju (pH7.0) ġie miżjud mat-taħlita, u perjodu ieħor ta 'inkubazzjoni ġie eżegwit f'37 grad għal 15-il minuta. Imbagħad, 80 μL ta 'soluzzjoni ta' karbonat tas-sodju 0.2 M ġew mehmuża mat-taħlita biex ttemm ir-reazzjoni. L-assorbiment kien imkejjel f'405 nm. Soluzzjoni quercetin f'konċentrazzjonijiet differenti kienet użata bħala referenza. Ir-riżultati ġew stmati bħala l-perċentwal ta 'attività inibitorja f'konċentrazzjonijiet ta' 1 mg/mL u 0.5 mg/mL ta 'kampjuni ND u IN tal-estratti milwiema tal-ispeċi Cistus.

4.11.2. -Attività Inibitorja tal-Amylase

-attività inibitorja tal-amylase ta' kampjuni mhux diġeriti u bijodisponibbli miksuba mill-estratti milwiema tal-ispeċi Cistus ġiet iddeterminata billi ssegwi l-proċedura dettaljata qabel minn Balan et al.[56]. Id-determinazzjoni spettrofotometrika tal-attivitajiet inibitorji tal-a-amylase tal-kampjuni twettqet bl-użu ta' reaġent DNS (3,5-dinitrosalicylic acid). Kif iddikjarat fil-metodu, il-maltosju huwa ffurmat mill-konverżjoni tal-lamtu, u l-kulur isfar ta 'DNS alkalin jinbidel fil-kulur oranġjo-aħmar minħabba maltożju prodott mil-lamtu. Għalhekk, 96 mM soluzzjoni DNS ġiet ippreparata mit-taħlita ta 'soluzzjoni ta' tartrat tas-sodju tal-potassju (maħlul f'2 M NaOH) u ċertu ammont ta 'DNS (maħlul f'ilma distillat). Imbagħad, 20mM sodium phosphate buffer b'6.7 mM NaCl (ko-fattur tal-enzima a-amylase) ġie ppreparat f'20 grad (pH:6.9). l-enzima a-amylase （1U/mL）u l-lamtu (10 mg/mL) ġew maħlula f'dan il-buffer. Wara dan, 50 μL ta 'buffer tal-fosfat tas-sodju u 10 μL ta' soluzzjoni ta 'enżima a-amylase tħalltu ma' 20 μL tas-soluzzjonijiet tal-kampjun. Din it-taħlita ġiet inkubata f'37 grad għal 45min. Wara l-perjodu ta 'inkubazzjoni, 20 μL tas-soluzzjoni tal-lamtu ġew miżjuda mat-taħlita. Perjodu ieħor ta 'inkubazzjoni beda f'37 grad għal 45 min. L-istess proċedura ġiet applikata għall-kampjuni mingħajr iż-żieda ta 'soluzzjoni ta' enzima o-amylase imsejħa "sfond tal-kampjun". Il-grupp ta 'kontroll ġie studjat bl-istess proċedura fin-nuqqas ta' soluzzjonijiet tal-kampjun. L-assorbiment kien imkejjel f'540 nm. Acarbose intuża bħala soluzzjoni ta 'referenza f'konċentrazzjonijiet differenti Ir-riżultati ġew ippreżentati bħala perċentwali ta' attività inibitorja f'konċentrazzjonijiet ta '1mg/mL u 0.5 mg/mL ta' kampjuni ND u IN minn estratti milwiema ta 'speċi Cistus. 4.11.3.AGE Attività Inibitorja

L-attività inibitorja AGE ta 'kampjuni mhux diġeriti u bijodisponibbli minn estratti milwiema ta' speċi Cistus ġiet iddeterminata wara l-metodu deskritt minn Starow-icz et al. [57]. Qabel kwalunkwe proċess, konċentrazzjonijiet ta '1 mg/mL u 0.5 mg/mL ta' kampjuni ND u IN ġew ippreparati friski. Imbagħad, 1 mL ta' konċentrazzjoni ta' 10 mg/mL ta' soluzzjoni ta' albumina tas-serum bovin (BSA) ġiet miżjuda ma' 1 mL ta' soluzzjonijiet ta' kampjuni ND u IN. Kampjuni ta 'kontroll ġew ippreparati mingħajr ma żżid soluzzjonijiet ta' kampjuni ND u IN, u l-kampjuni vojta ġew ippreparati mingħajr ma żżid 0.5 M glukożju. Imbagħad, il-kampjuni kollha ppreparati ġew inkubati għal 40 siegħa f'banju ta 'l-ilma li tħawwad f'55 grad. Wara li ntemm il-perjodu ta 'inkubazzjoni, intuża l-qarrej tal-mikroplate Thermo ScientificTM VarioskanTMLUXmultimode fil-medda ta' eċċitazzjoni ta '370 nm/emissjoni ta' 440 nm biex tikkalkula l-intensità tal-fluworexxenza. Quercetin intuża bħala soluzzjoni ta' referenza f'konċentrazzjonijiet differenti.

5. Konklużjonijiet

Fl-istudju preżenti, l-estratti milwiema ta 'l-ispeċi kollha ta' Cistus irreġistrati fil-flora Torka ġew investigati għall-profili fenoliċi tagħhom u l-potenzjali antiossidanti u antidijabetiċi in vitro. Peress li d-decoction jew l-infużjoni hija l-forma komuni fil-mediċini tradizzjonali, l-użu ta 'estratti milwiema għall-valutazzjoni tal-attività fi studji sperimentali huwa partikolarment importanti. Min-naħa l-oħra, kostitwenti idrofiliċi fl-estratt milwiema huma soġġetti għal serje ta 'trasformazzjonijiet metaboliċi fis-sistema gastrointestinali ladarba jinbelgħu. Għalhekk għal evalwazzjoni korretta tal-attività tal-formulazzjonijiet tradizzjonali, l-attivitajiet tal-metaboliti bijodisponibbli għandhom jiġu investigati wkoll.

Dan huwa l-ewwel studju li jeżamina l-konsegwenzi tal-metodu ta 'simulazzjoni tad-diġestjoni umana in vitro fuq l-ispeċi Tork Cistus. Barra minn hekk, il-potenzjal ta 'inibizzjoni tal-ispeċi Tork Cistus fuq AGEs ġie studjat f'dan l-istudju għall-ewwel darba. Barra minn hekk, salidroside, hyperoside, u quercitrin ġew assenjati flavonoids markaturi, u alterazzjonijiet fil-konċentrazzjonijiet tagħhom ġew immonitorjati fil-proċedura ta 'diġestjoni in vitro. Filwaqt li l-kontenuti fenoliċi u l-attivitajiet antidijabetiċi u antiossidanti tal-estratti kienu affettwati b'mod negattiv minn proċeduri ta 'diġestjoni gastrointestinali, xorta wrew bijoattività sinifikanti. Skont ir-riżultati, l-estratt ta 'C. salviifolius ġie skopert bħala l-iktar pjanta qawwija f'termini ta' kontenut fenoliku u attivitajiet antiossidanti u anti-dijabetiċi. Bħala konklużjoni, partijiet mill-ajru minn speċi Cistus Tork għandhom kontenut fenoliku sinjuri u attivitajiet antiossidanti u anti-dijabetiċi potenzjali. Filwaqt li l-metodu ta' simulazzjoni tad-diġestjoni in vitro kien impjegat biex jevalwa l-bijodisponibilità, jista' ma jimitax bis-sħiħ il-mogħdijiet metaboliċi li jseħħu fl-organiżmu. Għalhekk, aktar studji in vivo u kliniċi huma meħtieġa biex tiġi vvalutata l-bijodisponibilità tal-komposti fenoliċi u l-kontribut tagħhom għall-effetti farmakoloġiċi rrappurtati fid-dettall.

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur:Kunċettwalizzazzjoni, YI, EC, EY; metodoloġija, YI, SA, IK, analiżi formali tal-KE, YI, IK.-C., SA; investigazzjoni, YI, IK.-C, SA; riżorsi, YI, IK.SA, EC u EY; kurazzjoni tad-dejta, YI, IK-C., SA; kitba-—YI, kitba—reviżjoni u editjar, YI, EC, EY; viżwalizzazzjoni, YI; superviżjoni, ECu EYL-awturi kollha qraw u qablu mal-verżjoni ppubblikata tal-manuskritt.

Finanzjament:Din ir-riċerka ma rċeviet l-ebda finanzjament estern. Dikjarazzjoni tal-Bord ta' Reviżjoni Istituzzjonali: Mhux applikabbli. Dikjarazzjoni ta' Kunsens Informat: Mhux applikabbli.

Dikjarazzjoni tad-Disponibbiltà tad-Data:Id-dejta ppreżentata f'dan l-istudju hija disponibbli fuq talba mill-awtur korrispondenti.

Kunflitti ta' Interess:L-awturi ma jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.

Disponibbiltà tal-Kampjun:Kampjuni tal-komposti mhumiex disponibbli mill-awturi.

Dan l-artikolu huwa estratt minn Molecules 2021, 26, 5322. https://doi.org/10.3390/molecules26175322 https://www.mdpi.com/journal/molecules