Konsum orali ta 'peptidi tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ kontra t-tixjiħ tal-ġilda fil-ġrieden billi tirregola d-degradazzjoni u s-sintesi tal-kollaġen, jinibixxi l-infjammazzjoni u jattiva l-liżosomi Parti 1

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

Astratt:L-effett tad-dieta fuq it-tixjiħ tal-ġilda sar suġġett ta 'riċerka interessanti. Studji preċedenti ffukaw l-aktar fuq l-effetti ta 'benefiċċju ta' peptidi tal-kollaġen derivati ​​minn organiżmi tal-baħar fuq il-ġilda li qed tixjieħ meta mogħtija mill-ħalq, filwaqt li l-effetti ta 'benefiċċju ta' peptidi tal-kollaġen derivati ​​mit-tjur fuq il-ġilda li qed tixjieħ ġew rarament irrappurtati. F'dan l-istudju, il-peptidi tal-kollaġen ġew ippreparati mill-għadam tat-tiġieġ permezz ta 'idroliżi enżimatika, u ġew investigati l-effett u l-mekkaniżmu ta' azzjoni ta 'peptidi tal-kollaġen amministrati oralment fuq it-taffija tat-tixjiħ tal-ġilda indott minn UV flimkien ma' D-galactose. Ir-riżultati wrew li l-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ kellu karatteristiċi tipiċi ta 'collagen, u l-peptidi tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ (CPs) kienu prinċipalment peptidi molekulari żgħar b'piż molekulari ta'<3000 da.="">estensjoni tal-ħajja ta' cistancheEsperimenti in vivo wrew li CPs kellhom effett sinifikanti ta 'serħan fuq il-ġilda li qed tixjieħ, indikat mill-bidliet fil-kompożizzjoni u l-istruttura tal-ġilda li qed tixjieħ, titjib tal-livell antiossidant tal-ġilda, u inibizzjoni ta' infjammazzjoni; l-effett li jtaffi kien korrelatat b'mod pożittiv mad-doża ta 'CPs. Investigazzjoni ulterjuri wriet li CPs l-ewwel inaqqsu l-livell ta 'ossidazzjoni tal-ġilda, jinibixxu l-espressjoni tal-fattur ewlieni ta' traskrizzjoni AP-1 (c-Jun u c-Fos), imbagħad jattivaw il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni TGF-/Smad biex jippromwovu s-sintesi tal-kollaġen , jinibixxi l-espressjoni ta 'MMP-1/3 biex jinibixxi d-degradazzjoni tal-kollaġen, u jinibixxi l-infjammazzjoni tal-ġilda biex ittaffi t-tixjiħ tal-ġilda fil-ġrieden. Barra minn hekk, it-traskriptoma tal-ġilda sab li l-liżosomi attivati ​​wara l-amministrazzjoni orali ta 'CPs jistgħu jkunu mogħdija importanti għal CPs fit-tixjiħ kontra l-ġilda, u huwa denju ta' aktar riċerka. Dawn ir-riżultati ssuġġerew li CPs jistgħu jintużaw bħala komponent nutrittiv funzjonali kontra t-tixjiħ.

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Kliem ewlieni:peptidi tal-kollaġen; kontra t-tixjiħ; transcriptome tal-ġilda; sinteżi tal-kollaġen; liżosomi

1. Introduzzjoni

L-era tas-saħħa, issegwi b'mod preċiż dieta sana, tiddetermina r-rwol tan-nutrizzjoni fit-tixjiħ tal-ġilda, u tiddeċiedi x'għandek tiekol biex iżżomm ġilda żagħżugħa u b'saħħitha huma problemi diffiċli. Il-ġilda hija l-akbar organu tal-ġisem, magħmul mill-epidermide, id-dermis u s-saff taħt il-ġilda. Jaġixxi bħala ostaklu biex jipproteġi l-ġisem minn fatturi esterni u għandu wkoll rwol fis-saħħa u s-sbuħija[1]. It-tixjiħ tal-ġilda huwa proċess kumpless, li huwa maqsum f'tixjiħ kronoloġiku u tixjiħ tar-ritratti u huwa affettwat minn fatturi kemm interni kif ukoll esterni. Il-karatteristiċi ewlenin jinkludu l-akkumulazzjoni ta 'ħsara makromolekulari fiċ-ċellula, it-tnaqqis tal-funzjoni taċ-ċelluli staminali (il-promozzjoni tat-tiġdid tat-tessut), u t-telf gradwali tal-integrità fiżika tal-ġilda [2]. Il-mekkaniżmi molekulari ewlenin li jikkawżaw it-tixjiħ tal-ġilda jinkludu prinċipalment stress ossidattiv, tqassir tat-telomeri, ħsara lid-DNA, mutazzjoni ġenetika, regolamentazzjoni tal-mikro-RNA, akkumulazzjoni avvanzata tal-prodott finali tal-glikazzjoni, u tixjiħ infjammat [3]. It-tixjiħ tar-ritratti huwa iperplażja epidermali tal-ġilda, tnixxif u degradazzjoni tal-matriċi extraċellulari indotta mir-radjazzjoni ultravjola.cistanche nzIl-kawża ewlenija tat-tixjiħ tar-ritratti hija speċi ta’ ossiġnu reattiv (ROS) iġġenerat mir-radjazzjoni ultravjola li jimmedjaw l-espressjoni ta’ matrix metalloproteinases (MMPs) u pro-collagen tat-tip I permezz ta’ mogħdijiet tas-sinjali bħas-sinjalar tal-protein kinase (MAPK) attivat mill-mitoġenu. mogħdija, u b'hekk twassal għad-degradazzjoni tal-matriċi extraċellulari (ECM) fil-ġilda u l-apoptożi tal-fibroblasti [4]. F'dawn l-aħħar snin, iż-żamma tas-saħħa tal-ġilda u d-dewmien tat-tixjiħ saret popolari, u s-sejba ta 'ingredjenti naturali bħal peptidi bijoattivi u polifenoli b'funzjonijiet antiossidanti u kontra t-tixjiħ saret hotspot ta' riċerka [5].

Madankollu, il-collagen għandu piż molekulari kbir u huwa diffiċli li jiġi assorbit u utilizzat direttament, filwaqt li l-peptidi tal-kollaġen molekulari żgħar wara l-idroliżi tal-kollaġen għandhom attività bijoloġika aktar b'saħħitha u rata ta 'assorbiment għolja [6]. Sadanittant, l-applikazzjoni wiesgħa tal-kollaġen fl-ikel, mediċina, inġinerija tat-tessuti, kosmetiċi, u oqsma oħra għamlet peptidi tal-kollaġen b'piż molekulari aktar baxx, effiċjenza ogħla ta 'assorbiment, u attività bijoloġika aktar b'saħħitha favorita ġdida fl-ikel funzjonali u r-riċerka medika[{{1 }}]. Il-peptidi tal-kollaġen huma żgħar, li fihom 2-20 residwi ta' aċidu amminiku miksuba wara l-idroliżi tal-kollaġen. Jintużaw bħala suppliment tad-dieta għat-trattament tat-tixjiħ tal-ġilda minħabba l-funzjonijiet potenzjali anti-infjammatorji u antiossidanti tagħhom u r-regolamentazzjoni immuni u l-effetti ta 'antiossidazzjoni u proliferazzjoni fuq fibroblasti tal-ġilda [10].

Cistanche jista 'anti-aging

Wara l-amministrazzjoni orali, il-peptidi tal-kollaġen jiġu assorbiti fil-forma ta 'peptidi żgħar u jiġu ttrasportati malajr lejn id-demm, u eventwalment, lejn il-kliewi, il-ġilda, il-ġogi, u tessuti oħra biex jinħażnu u jintużaw. Wara 14-il jum, il-livelli ta' radjuattività baqgħu għoljin fil-ġilda tal-ġrieden li kienu ġew gavaged b'peptidi tal-collagen ittikkettati C14-. Il-peptidi tal-kollaġen jistgħu jiġu assorbiti u utilizzati kważi kompletament mill-ġisem, filwaqt li r-rata ta' assorbiment u utilizzazzjoni tal-kollaġen hija biss 50-60 fil-mija [6,11-13]. F'dawn l-aħħar snin, l-idrolisati tal-kollaġen minn ġilda tal-ħut, skala tal-ħut, għadam tal-baqra, ġilda tal-baqra u ġilda tal-majjal ġew irrappurtati b'mod wiesa 'li għandhom effetti ta' benefiċċju fuq it-taffija tat-tixjiħ tal-ġilda u rċevew attenzjoni konsiderevoli mir-riċerkaturi. Pereżempju, peptidi tal-kollaġen iżolati mill-ġilda tal-karpjun tal-fidda jippromwovu s-sinteżi pro-collagen u jinibixxu l-espressjoni tal-proteini AP-1, MMP-1, u MMP-3 billi jattivaw il-mogħdija TGF-/Smad biex jipprevjenu degradazzjoni tal-kollaġen u tiswija ta 'ċelluli tal-ġilda fotoaged [14]. L-amministrazzjoni orali ta 'peptidi tal-kollaġen bovini tista' ttejjeb ir-rilassament tal-ġilda, iżid il-kontenut tal-kollaġen u l-attività tal-enzimi antiossidanti, isewwi l-fibra tal-kollaġen, u jinnormalizza l-proporzjon tal-kollaġen tal-ġilda fil-ġrieden li qed jixjieħu [15]. Madankollu, peptidi tal-kollaġen minn sorsi differenti għandhom effetti differenti. L-ammont u l-istruttura ta 'peptidi attivi ħafna fid-demm wara l-amministrazzjoni orali ta' peptidi tal-kollaġen jiddependu fuq is-sors tal-kollaġen[10]. L-effett protettiv tal-peptide tal-kollaġen estratt mill-ġilda tat-tiġieġ kontra l-korriment tal-fibroblasti indotti mill-UVA kien superjuri għal dak tal-peptide tal-kollaġen estratt mill-ġilda tal-majjal, baqra jew tilapia, u l-effett tiegħu kien ekwivalenti għal tripeptide derivat mill-kollaġen (Gly-Pro -Hyp)[16]. It-twemmin reliġjuż u t-tħassib dwar il-mard (bħal marda tal-baqar tal-ġenn) wasslu lin-nies biex gradwalment ibiddlu d-direzzjoni tal-iżvilupp tal-kollaġen u l-prodotti tiegħu minn mammiferi terrestri għal tjur u organiżmi tal-baħar [17]. Bħala l-prodott sekondarju ewlieni tal-ipproċessar tat-tjur, l-għadam tat-tiġieġ huwa sors promettenti ta 'prodotti tal-kollaġen. Mhux biss inaqqas il-ħela ta 'riżorsi u t-tniġġis ambjentali iżda jippermetti wkoll l-użu effiċjenti ta' prodotti sekondarji. Għalhekk, f'dan l-istudju, użajna peptidi tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ bħala materja prima, b'ġrieden nude trattati b'D-galactose u UV biex jinduċu tixjiħ tal-ġilda, bħala l-mudell biex jevalwaw l-effett tal-amministrazzjoni orali tal-peptide tal-kollaġen fuq it-taffija tat-tixjiħ tal-ġilda f' ġrieden u jiddeterminaw il-mekkaniżmu rilevanti.

2. Materjali u Metodi

2.1. Materjali, Kimiċi, u Annimali

L-irziezet tat-tiġieġ ta 'l-Università Agrikola ta' Yunnan (Kunming, iċ-Ċina) ipprovdew it-tiġieġ minfuqa, li ġew separati, imnixxfa u mgħaffġa biex jiksbu l-ikla tal-għadam tat-tiġieġ. Su-peroxide dismutase (SOD), catalase(CAT), u glutathione peroxidase(GSH-PX) kits inxtraw minn Soleibao Biotechnology Co., Ltd.(Beijing, China). Hydroxyproline (HYP), interleukin-1 (IL-1 ), matrix metalloproteinase-1/3 (MMP{-1/3), tip I pro-collagen, u aċidu hyaluronic( Kitts HA) immunoassay marbuta mal-enżimi (ELISA) inxtraw minn Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, iċ-Ċina). Ġrieden nisa bla pil BALB/C b'saħħithom (18± 2g, sitt ġimgħat) inxtraw minn Nanjing Junke Bioengineering Corporation, Ltd.(Nanjing, iċ-Ċina) bin-numru tal-permess: SCXK(SU)2016-0010. Pepsin u papain inxtraw minn Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.(Shanghai, Ċina), u kimiċi oħra kienu ta 'grad analitiku. Il-ġrieden kollha ġew immaniġġjati skont ir-Regolamenti tal-Kura tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Provinċja ta 'Yunnan u approvati mill-Kumitat għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università Agrikola ta' Yunnan (ID tal-approvazzjoni: YAUACUC01).

2.2. Preparazzjoni tal-kollaġen u Kompożizzjoni ta 'Amino Acid

L-estrazzjoni u l-kompożizzjoni tal-aċidu amminiku tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ segwew il-metodu deskritt minn Lieut al. [18] b'modifiki żgħar. It-trab tal-għadam tat-tiġieġ ġie mħawwad u mxarrba fi 0.05 M NaOH, 10 fil-mija n-hexane, u 0.25 soluzzjoni MEDTA (pH 7.5) fi proporzjon ta' 1/10(m/o). F'kull pass, il-kampjun ġie ttrattat għal 36 siegħa, u s-soluzzjoni tat-tixrib inbidel kull 6 sigħat biex jintefaħ it-trab tal-għadam u tneħħi proteini, xaħam u minerali mhux kollaġen mit-trab tal-għadam. Il-kampjun inħasel b'ilma pur għan-newtralità wara kull pass. L-ikla tal-għadam tat-tiġieġ ittrattat minn qabel tħallat b'aċidu aċetiku glaċjali 0.5 M li kien fih 0.1 fil-mija (w/v) pepsin fi proporzjon solidu għal likwidu ta' 1:10 (wo/v) u kontinwament imħawwad u estratt f'4 gradi għal 48 h. Imbagħad ġie ffiltrat, u l-filtrat ġie ċentrifugat fi 15,000xg għal 15 min fi 4 grad.daqs tal-pene cistancheIs-supernatant ġie aġġustat għal 7.5-7.8 b'soluzzjoni ta 'NaOH, u NaCl ġie miżjud għal konċentrazzjoni finali ta' 1.5 M. Wara li t-taħlita nżammet mhux disturbata għal 12-il siegħa f'4C għat-tmelliħ, il-preċipitat tal-kollaġen ġie ċentrifugat. fi 15,000×g għal 15-il minuta f'4 grad , imbagħad maħlul b'0.5 M aċidu aċetiku, dijaliżżat f'ilma pur, imnixxef bil-friża, u l-prodott lest kien kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ.

Il-kompożizzjoni tal-aċidu amminiku tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ ġiet iddeterminata mill-analizzatur awtomatiku tal-aċidu amminiku Sykam S433D (Munich, il-Ġermanja). Ċertu ammont ta 'kampjun ta' kollaġen li għandu jiġi ttestjat ittieħed f'tubu ssiġillat, miżjud b'10mL6 M HCl, u idrolizzat f'110 grad għal 24 siegħa. L-idrolizzat kien ikkonċentrat b'nfiħ tan-nitroġenu u maħlul mill-ġdid f'20 mL buffer ta 'aċidu ċitriku. Wara mikrofiltrazzjoni b'membrana mikroporuża ta '0.22 μm, 20 μL idrolizzat ittieħed għall-analiżi tal-ispettru tal-aċidu amminiku. Il-kontenut ta' aċidu amminiku fil-kampjun kien espress f'perċentwali.

2.3. Preparazzjoni u Distribuzzjoni tal-Piż Molekulari ta' Collagen Peptides(CPs)

Skont ir-riżultati tal-proċess ta 'ottimizzazzjoni preċedenti tagħna, is-CPs ġew ippreparati bl-użu ta' papain f'proporzjon ta 'enzima għal substrat ta' 1:4 0 (proporzjon tal-massa). Wara li aġġusta l-pH għal 7 u idroliżi enżimatika fi 63 grad għal 5 sigħat, l-enzima ġiet inattivata f'banju ta 'ilma jagħli għal 15-il minuta. L-idrolizzat ta 'l-enzima ġie dessalat u lajofilizzat, maħlul mill-ġdid f'soluzzjoni ta' aċidu formiku ta '0.1 fil-mija, u ċentrifugat biex jinkiseb is-supernatant. AQ Exactive HF Orbitrap High-Resolution Mass Spectrometer-OE-HF(Thermo Fisher, Waltham, MA, USA), mgħammar b'jonizzazzjoni elettrospray (ESI), intuża biex janalizza l-idrolizzat tal-kollaġen fil-mod ta 'skan sħiħ ta' 350-1800 m/z, u r-riżultati ġew irkuprati u analizzati bl-użu tal-Proteome Discoverer

2.1 softwer

2.4.Test tal-Annimali

Ġrieden BALB nisa/bla siġġu (n {{0}}) inżammu f'kamra taħt kundizzjonijiet ikkontrollati ta' temperatura (24±1 grad ), umdità (6{0± 5 fil-mija), u 12 h ċiklu ġurnata-lejl għal ġimgħa. Huma ngħataw aċċess ad libitum għall-ikel u l-ilma. Wara ġimgħa ta 'adattament, il-ġrieden ġew maqsuma b'mod każwali fil-ħames gruppi li ġejjin (n =11 għal kull grupp): (i). Grupp normali (N): UV mhux espost; amministrazzjoni orali ta' 0.4 mL salina kuljum. (ii). Grupp tal-mudell (M):UVespost flimkien ma' D-galactose (0.2 mL); amministrazzjoni orali ta' 0.4 mL salina kuljum. (i). Grupp ta' peptidi tal-kollaġen ta' doża baxxa (LCPs): UVesposed flimkien ma' D-galactose (0.2mL); orali

għoti ta' 0.4 mL CPs (doża: 200 mg kg-1 piż tal-ġisem) kuljum. (iv). Grupp ta 'peptidi tal-kollaġen ta' doża medja (MCPs): UV espost flimkien ma 'D-galactose; orali

għoti ta' 0.4 mL CPs (doża: 500 mg:kg-1 piż tal-ġisem) kuljum.

(v). Grupp ta 'peptidi tal-kollaġen ta' doża għolja (HCPs): UV espost flimkien ma 'D-galactose; amministrazzjoni orali ta' 0.4 mL CPs (doża: 1000 mg·kg-1 piż tal-ġisem) kuljum.

It-trattament tad-D-galactose sar permezz ta' injezzjoni taħt il-ġilda ta' 0.2 mL ta' 10 fil-mija ta' soluzzjoni ta' D-galactose fuq wara ta' għonq il-ġurdien (doża: 1.0g/ kg-1piż tal-ġisem) kuljum. L-irradjazzjoni UV saret b'LAMPA UVA-340 ta' 40 W (O-panel, Cleveland, USA, wavelength massimu: 340 nm), id-distanza bejn il-lampa u d-dahar tal-ġrieden kienet 30 ċm (230 m J/ cm-), u l-irradjazzjoni damet għal 30 min kuljum għal seba 'ġimgħat (49 jum). L-intensità tar-radjazzjoni kienet imkejla b'radjumetru UVA365-(Xinbao Keyi Electronic Technology Co., Ltd., Xi'an, China). Siegħa wara D-galactose u trattament UV, il-ġrieden ingħataw 0.4 mL ta 'CPs oralment kuljum. Wara l-aħħar irradjazzjoni, il-ġrieden ġew anestetizzati, jintiżnu, u t-tessuti ttieħdu kampjuni għal analiżi sussegwenti.

2.5.Umdità tal-ġilda, Indiċi vixxerali, u Żieda fil-Piż tal-Ġisem

L-umdità tal-ġilda ġiet iddeterminata minn ISO 1442, u l-indiċi vixxerali ġie kkalkulat bl-użu tal-ekwazzjoni li ġejja: indiċi vixxerali (g/kg)=piż vixxerali/piż tal-ġisem.

2.6.Oxidatioe Stress, HA, u HYP Kontenut tal-ġilda

Kampjuni tal-ġilda ġew omoġenizzati b'disa 'darbiet l-ammont ta' salina normali (w/w) f'banju tas-silġ b'omoġenizzatur tat-tessuti (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., Beijing, Ċina), u mbagħad ċentrifugati f'2000 ×g u 4 gradi għal 10min. L-attivitajiet ta 'superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-PX), u l-kontenut ta' aċidu hyaluronic (HA) u hydroxyproline (HYP) fis-supernatant miġbur ġew determinati skond il-metodu deskritt fl-istruzzjonijiet li jikkorrispondu mal-kits rispettivi.

2.7. Ġilda Istoloġika

Kampjuni tal-ġilda tal-ġurdien ġew iffissati f'soluzzjoni ta 'paraformaldehyde ta' 4 fil-mija għal 24 siegħa, deidratati, inkorporati fil-paraffin, u mqattgħin. Is-sezzjonijiet tal-ġilda ġew imtebba 'b'ematossilina u eosina (HE) u osservati b'mikroskopju ta' fluworexxenza 'l quddiem ECLIPSE CI-E (Nikon, Ġappun). Il-ħxuna tal-epidermide tal-ġilda u d-dermis ġiet evalwata bl-użu tas-softwer Halcon 13.0.1.1 (MVTec, Munich, il-Ġermanja).

2.8.Sekwenzar tat-Traskriptome tal-Ġilda

2.8.1. Estrazzjoni tal-RNA, Kostruzzjoni tal-Librerija, u Sekwenzar tat-Traskriptome....

L-RNA totali ġie estratt mill-ġilda tal-ġrieden bl-użu tal-RNeasy Mini Kit (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., Beijing, iċ-Ċina) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-purità u l-konċentrazzjoni tal-RNA ġew iċċekkjati bl-użu tal-kaiaoK5500Spectrophoto-meter (Kaiao, Beijing, iċ-Ċina); L-integrità tal-RNA ġiet ivvalutata bl-użu tal-RNA Nano 6000 Assay Kit u s-sistema Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). L-analiżi tas-sekwenzjar tat-traskrizzjoni ta 'kull kampjun twettqet minn Biolinker Technology Company Limited (Kunming, iċ-Ċina).cistanche trabFil-qosor, ir-raggruppament tal-kampjuni kodifikati bl-indiċi twettqet fuq sistema ta 'ġenerazzjoni ta' clusters cBot bl-użu ta' HiSeq PE Cluster Kit v4-cBot-HS (Illumina) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Wara l-ġenerazzjoni tal-clusters, il-libreriji ġew sekwenzati fuq pjattaforma Illumina, u ġew iġġenerati 150 bp paired-end reads.

2.8.2. Analiżi tal-Bijoinformatika tad-Dejta tas-Sekwenzar tal-RNA

Gene Ontology (GO) u Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) analiżi ta 'arrikkiment ta' ġeni espressi b'mod differenzjali (DEGs) twettqet bl-użu tal-pakkett tal-analizzatur tal-cluster tal-lingwa R. Meta l-valur p kien inqas minn 0.05, l-oġġetti u l-mogħdijiet arrikkit minn GO u KEGG tqiesu li huma sinifikanti.

2.8.3. Reazzjoni Katina Reverse Transcriptase-Polymerase (qRT-PCR)

QRT-PCR sar kif deskritt qabel [19].

2.9.Wester1 Blot

Skont il-metodu deskritt minn Park et al. [20], saret analiżi Western blot (WB) biex tikkwantifika l-espressjoni ta 'proteini relatati mat-tixjiħ tal-ġilda fil-ġrieden. Il-konċentrazzjoni tal-proteina tal-lisat tal-ġilda f'kull grupp ta 'trattament ġiet ikkwantifikata bl-użu tal-kit BCA, separat b'SDS-PAGE (10 fil-mija acrylamide gel), trasferita għal membrana PVDF, imblukkata b'5 fil-mija ħalib xkumat, u inkubata b'ammont xieraq ta' primarju antikorpi (TGF-b1,c-Fos, c-Jun, Samd2/3, u -actin) f'4 gradi matul il-lejl. Wara l-ħasil bit-TBST, il-kampjuni tħalltu ma 'antikorpi sekondarji u inkubati f'temperatura tal-kamra għal siegħa. Il-ChemiDoc XRS plus chemiluminescence gel imager (BioRAD, Hercules, CA, USA) intuża biex jinstabu proteini speċifiċi. Image ]software intuża biex jikkwantifika l-espressjoni tal-proteina fil-mira f'kull grupp ta 'trattament, u r-riżultati kienu rappreżentati mill-valuri tad-densità normalizzati għal proteina -actin.

2.10.ELISA

Il-livelli ta' espressjoni ta' MMP-1, MMP-3, pro-collagen tat-Tip I, u IL-1 fil-fluwidu tal-liżi tal-ġilda ġew determinati permezz ta' immunoassay marbut ma' enżimi. L-assaġġ sar skont l-istruzzjonijiet ipprovduti mal-kit.

2.11. Analiżi Statistiċi

Ir-riżultati kollha ġew analizzati bl-użu tas-softwer SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, USA) permezz ta' analiżi one-way ta' varjanza (ANOVA) u test ta' firxa multipla ta' Duncan, bil-livell ta' sinifikat stabbilit għal p<0.05. originpro="" 2017="" (originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±standard="" deviation="">

3. Riżultati u Diskussjoni

3.1.Kompożizzjoni ta 'Amino Acid tal-Kallaġen

Il-kompożizzjoni tal-aċidu amminiku tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ tidher fit-Tabella 1. Gly kien l-aċidu amminiku ewlieni fil-kampjuni, li jammonta għal kważi terz (27.86 fil-mija) tal-aċidi amminiċi totali, u Hyp kien il- aċidu amminiku speċjali fil-collagen, li jammonta għal 9.83 fil-mija. Il-karatteristiċi ewlenin tal-molekuli tal-kollaġen kienu s-sekwenzi Gly-XY ripetuti u l-istruttura unika triple-helical komposta minn tliet ktajjen c. Gly ammontaw għal madwar terz tal-aċidi amminiċi totali, X u Y kienu spiss proline u hydroxyproline, jew jistgħu jkunu xi residwu [21]. Il-kompożizzjoni tal-aċidu amminiku tal-kampjun kienet simili għal dik tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ irrappurtat fi studji preċedenti u kellha l-karatteristiċi tipiċi tal-collagen [22].

3.2. Distribuzzjoni tal-Piż Molekulari tas-CPs

Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da(Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da,65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1000 Da,72 fil-mija). Madankollu, il-kumpanija Ġermaniża Gelita wriet permezz ta 'diversi studji kliniċi li l-effett tal-peptidi tal-kollaġen huwa ddeterminat prinċipalment mill-grad ta' tqabbil tiegħu mal-proprjetajiet tal-peptidi tal-kollaġen wara d-degradazzjoni tal-kollaġen uman, aktar milli l-piż molekulari tal-peptidi tal-kollaġen. Sabu li l-prodott VERISOL⑧ b'piż molekulari medju ta '2000 Da għandu l-aktar effett stimulanti fuq fibroblasts tal-ġilda, filwaqt li l-prodott FortigelTM b'piż molekulari medju ta' 3000 Da għandu effett speċjali fuq it-tiswija tal-qarquċa [25-27].

3.3. Effett ta 'CPs orali fuq it-taffija tat-tixjiħ tal-ġilda

3.3.1. Piż tal-ġisem u Indiċi tal-Organi

L-indiċi tal-piż tal-ġisem u l-indiċi tal-organi huma importanti u jirriflettu l-istat tas-saħħa tal-ġrieden. Il-piż tal-ġrieden f'kull grupp żdied b'mod normali matul il-perjodu tat-test (Tabella 2). Iż-żieda fil-piż medju tal-grupp M kien inqas minn dak tal-grupp N, u dak tal-gruppi ta 'trattament CP kien ogħla minn dak tal-grupp M, li jissuġġerixxi li CPs ma kellhom l-ebda effetti sekondarji fuq il-ġrieden. F'rapporti preċedenti, id-doża ta 'ġrieden ittrattati bil-collagen peptide kienet l-aktar bejn 100-1000 mg/kg.bw·d, u d-doża sigura ta' peptidi tal-collagen tilapia laħqet 4.07 g/kg.bw·d [{{6} }].estratt tas-salsa cistanche Similarly, the growth of skin-aged mice after gavage with tilapia scale collagen peptides (dose: 500 and 1000 mg/kg.bw·d)was also similar to our results [29]. The spleen plays an important role in humoral and cellular immunity, thus, the spleen index is often used to evaluate immune system function. The liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups(p>0.05). Ir-riżultati kienu simili għal dawk ta 'studji preċedenti [30], li jindikaw li CPs huma sikuri u jistgħu jtejbu xi ftit l-immunità tal-ġrieden.

3.3.2. Kompożizzjoni tal-ġilda

It-trattament UV u D-galactose (grupp M) naqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta 'umdità, HA, u Hyp fil-ġilda, meta mqabbel ma' dawk tal-grupp, bi 13.36 fil-mija, 24.08 fil-mija, u 15.83 fil-mija, rispettivament (p<0.05)(table 2).the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>

Tibdil fil-kontenut ta’ umdità tal-ġilda jikkawża t-tikmix u t-tnaqqis fil-ġilda u huma affettwati minn komponenti tal-matriċi bħal kollaġen tal-ġilda u HA[31]. Hydroxyproline huwa aċidu amminiku stabbli, għani u speċjali fil-kollaġen, u l-kontenut tiegħu jista 'jirrifletti indirettament il-kontenut tal-kollaġen fil-ġilda, kif ukoll ix-xjuħija tal-ġilda. Barra minn hekk, HA, li hija espressa ħafna fl-ECM tal-ġilda, għandha rwol importanti fil-kontroll tal-bilanċ tal-ilma tal-ġilda, pressjoni osmotika, żamma tal-umdità, u elastiċità bħala sistema ta 'ħażna tal-ilma u komponent strutturali tal-ġilda [32]. F'dan l-istudju, il-kontenut ta 'umdità, HYP, u HA fil-ġilda żdied b'mod sinifikanti wara t-teħid ta' CP, li jista 'jkun relatat mal-promozzjoni tas-sinteżi tal-kollaġen u HA minn CPs. Barra minn hekk, iż-żieda fl-HYP u l-HA żiedet il-kontenut ta 'umdità.

3.3.3. Bidliet Istoloġiċi fil-ġilda

Il-bidliet istoloġiċi fil-ġilda ta 'wara tal-ġrieden wara seba' ġimgħat ta 'trattament kontinwu huma murija fil-Figura2. Il-ġilda li qed tixjieħ tal-grupp M wriet il-karatteristiċi ta 'wiċċ mhux maħdum, epidermide mħaxxna, dermis irqaq, u ċelloli skars, meta mqabbla mal-ġilda tal-grupp N. Madankollu, il-kundizzjoni tal-ġilda li qed tixjieħ fil-ġrieden tjiebet wara l-amministrazzjoni orali ta 'CPs, u żammet struttura lixxa, ordnata u kompluta simili għal dik fil-ġrieden tal-grupp N. Għalhekk, id-dermis tal-ġilda kienet irqaq b'mod sinifikanti, u l-epidermide kienet eħxen b'mod sinifikanti fil-grupp M milli fil-grupp N (p<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).="" the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously[4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,="" loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" into="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">

3.3.4.Livelli Antiossidanti u Infjammatorji tal-ġilda

Id-determinazzjoni tal-attività tal-enzimi antiossidanti hija l-aktar metodu użat komunement biex jiġi evalwat il-livell antiossidant fil-ġisem [28]. Kif muri fil-Figura 3, l-attivitajiet tal-kontenut CAT, SOD, GSH-Px, u MDA fil-grupp M kienu sinifikament aktar baxxi minn dawk fil-grupp N (p<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-px="" activities,="" and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activates="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrix="" collagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">

Barra minn hekk, ir-rispons infjammatorju ċellulari kkawżat minn ROS jikkontribwixxi wkoll għat-tixjiħ tal-ġilda. Wara t-trattament UV u D-galactose (grupp M), il-kontenut ta 'IL-1 fil-ġilda tal-ġrieden żdied b'mod sinifikanti meta mqabbel ma' dak fil-grupp N (Figura 3D), li jindika li l-ġilda wriet rispons infjammatorju sinifikanti (p<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05), indicating="" that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the="" o2="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">

3.4.Mekkaniżmu ta 'Azzjoni ta' CPs Dietetiċi fit-Taffija tat-Tixjiħ tal-Ġilda

3.4.1.Analiżi u Validazzjoni tad-Dejta RNA-Seq

Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GO enrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A)and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B).The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group(Figure 4A,B).Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs, 4303 genes were significantly expressed in the mice's skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" six="" genes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes(including="" fos,="" jun,="" cxcl1,="" and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated(figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">

l-analiżi tal-arrikkiment u l-analiżi tal-arrikkiment tad-database KEGG ipprovdew appoġġ għal aktar investigazzjoni tal-funzjonijiet bijoloġiċi tad-DEGs. L-analiżi tal-GO wriet li d-DEGs ġew arrikkit b'mod sinifikanti fi proċessi bijoloġiċi bħar-replikazzjoni tad-DNA, ir-regolazzjoni tal-emopoiesi, ir-regolazzjoni tal-attività tal-hydrolase, u l-produzzjoni taċ-ċitokini; f'komponenti taċ-ċelluli, li kienu jinkludu vakuole litiċi u liżosomi, li fihom il-kollaġen u ġeni oħra relatati kienu arrikkit b'mod sinifikanti; f'termini ta 'funzjoni molekulari, attività ta' riċettur-ligand, attività ta 'ċitokini, u ġeni oħra relatati kienu arrikkit b'mod sinifikanti (Figura 5). L-analiżi tal-arrikkiment KEGG tal-ewwel 20 mogħdija tas-sinjali mibdula b'mod sinifikanti minn DEGs tidher fil-Figura 5. Interazzjoni ċitokine-riċettur, liżosomi, interazzjoni newroattiva ligand-riċettur, ċiklu taċ-ċelluli, lupus erythematosus sistemiku, u mogħdija TGF (p<0.05)were closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" differentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors="" [40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging="" [14].="" gene="" functional="" enrichment="" analysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41.="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">

3.4.2. Verifika tal-Mekkaniżmu ta' Azzjoni tas-CPs fit-Taffija tat-Tixjiħ tal-Ġilda

Biex tivverifika r-rwol tal-passaġġ tas-sinjalar TGF u l-interazzjoni ċitokine-riċettur fit-taffija tat-tixjiħ tal-ġilda minn CPs orali, saret analiżi WB biex tivverifika t-TGF- u l-fattur ta 'traskrizzjoni Smad2/3 fil-mogħdija ta' sinjalazzjoni TGF, kif ukoll iċ-ċavetta fattur ta' traskrizzjoni AP-1(c-Fos u c-Jun) li jirregola ċ-ċitokini. Il-kontenut ta' MMP-1, MMP-3, Tip I pro-collagen, u I-1 ġew determinati mill-ELISA. Ir-riżultati tal-analiżi WB wrew li l-espressjoni ta 'TGF- , Smad2, u Smad3 fil-grupp M kienet sinifikament aktar baxxa minn dik fil-grupp N(p<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased="" significantly=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">

Il-proteina AP-1 hija kumpless dimeriku ta' proteini tal-familja Jun u Fos u hija regolatur importanti tal-infjammazzjoni tal-ġilda u l-espressjoni taċ-ċitokini. Ġeneralment, il-kumpless magħmul minn c-Jun u c-Fos juri l-ogħla attività traskrizzjoni fil-ġilda [41, A42]. ROS prodott fiċ-ċelloli tal-ġilda li qed jixjieħu l-ewwel jattiva l-proteina AP-1 u mbagħad jirregola ċitokini downstream (bħal IL-1 ), MMPs, u l-mogħdija tas-sinjalar tat-TGF permezz tat-traskrizzjoni u t-traduzzjoni, u b'hekk tiffaċilita t-tixjiħ tal-ġilda [43 ,44]. Ir-reazzjoni ta 'sinjalazzjoni TGF-/Smad hija mogħdija klassika ta' sinteżi tal-kollaġen, u l-fattur ta 'traskrizzjoni Smad huwa fil-qalba ta' din il-mogħdija tat-trasduzzjoni tas-sinjal. TGF- iqanqal il-fosforilazzjoni u l-attivazzjoni ta 'downstream Smad2 u Smad3 billi jorbot mar-riċettur, u b'hekk iżid is-sintesi ta' COLI [14].

Barra minn hekk, ir-riżultati tal-ELISA wrew li l-kontenut ta' MMP-1, MMP-3, u IL-l fil-ġilda tal-grupp M kien ogħla b'mod sinifikanti minn dak fil-grupp N, u l-kontenut tat-Tip I pro-collagen kien ferm aktar baxx (p<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,="" mmp-3,="" and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group="" (p=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mmps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1α="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">

Minbarra l-mogħdijiet ta 'hawn fuq, f'dan l-istudju, il-ġeni regolati 'l fuq wara t-trattament CP ġew arrikkit b'mod sinifikanti fil-mogħdija tal-lysosome, li jindika li t-trattament CP attivat il-lysosome fil-ġilda (Figura 5). Studji preċedenti jindikaw li l-liżosomi attivati ​​ċari l-aggregati u jgħollu l-attivazzjoni taċ-ċelloli staminali newrali senescent matul ix-xjuħija [45]. Minbarra dawn, il-funzjoni miżjuda tal-liżosomi tista 'tnaqqas il-konċentrazzjoni ta' ROS intraċellulari biex tevita r-rqad taċ-ċelluli. Bl-istess mod, kwalunkwe tnaqqis fil-funzjoni tal-liżosomi jista 'jtejjeb il-konċentrazzjoni ta' ROS intraċellulari li fl-aħħar jippromwovi r-rqad taċ-ċelluli [46]. Għalkemm ma vverifikaniex b'mod sistematiku f'dan id-dokument, dawn ir-riżultati u rapporti preċedenti jimplikaw li l-attivazzjoni tal-funzjoni lisosomali tista 'tkun il-mod ewlieni biex is-CPs itaffu t-tixjiħ tal-ġilda, u aħna se nkomplu nimmiraw li tivverifikaha.

Għalhekk, dan l-istudju wera li CPs tad-dieta jistgħu itaffu t-tixjiħ tal-ġilda indott mill-UV u D-galactose b'mod dipendenti fuq id-doża. Is-CPs itaffu t-tixjiħ tal-ġilda billi jbaxxu l-livelli ta 'ossidazzjoni tal-ġilda, jinibixxu l-espressjoni ta' fatturi ewlenin ta 'traskrizzjoni AP-1(c-Jun u c-Fos), jattivaw il-mogħdija ta' sinjalazzjoni TGF- /Smad biex tippromwovi s-sintesi tal-kollaġen, jinibixxi l-espressjoni ta ' MMP-1 u MMP-3(li jinibixxu d-degradazzjoni tal-kollaġen), u jinibixxu l-infjammazzjoni tal-ġilda biex ittaffi t-tixjiħ tal-ġilda (Figura 8). Barra minn hekk, is-sejbiet tagħna fil-kurrent

4. Konklużjonijiet

Fil-qosor, dan l-istudju kkonferma li s-supplimentazzjoni tad-dieta tal-peptidi tal-kollaġen tal-għadam tat-tiġieġ tista’ ttaffi b’mod sinifikanti t-tixjiħ tal-ġilda kkaġunat mir-radjazzjoni ultravjola u D-galactose permezz ta’ mogħdijiet multipli, li jinkludu l-promozzjoni tas-sinteżi pro-collagen, l-inibizzjoni tad-degradazzjoni tal-kollaġen, it-titjib tal-livell antiossidant tal-ġilda u l-inibizzjoni. infjammazzjoni; it-taffija kienet dipendenti mid-doża b'CPs. Investigazzjoni dettaljata wriet li CPs l-ewwel inaqqsu l-livell ta 'ossidazzjoni tal-ġilda, jinibixxu l-espressjoni tal-fattur ewlieni ta' traskrizzjoni AP-1(c-Jun u c-Fos), u mbagħad jattivaw il-mogħdija tas-sinjalar TGF-/Smad biex jippromwovu sintesi tal-kollaġen, jinibixxi l-espressjoni ta 'MMP-1 u MMP-3 biex jinibixxi d-degradazzjoni tal-kollaġen, u jinibixxi l-infjammazzjoni tal-ġilda biex ittaffi t-tixjiħ tal-ġilda fil-ġrieden. Barra minn hekk, l-attivazzjoni tal-liżosomi tista 'wkoll tkun il-mogħdija ewlenija għas-CPs biex itaffu t-tixjiħ tal-ġilda, li hija denja ta' riċerka u verifika ta 'segwitu. Dawn ir-riżultati jipprovdu bażi teoretika għall-implimentazzjoni ta 'peptidi tal-kollaġen biex itaffu t-tixjiħ tal-ġilda u jwessgħu l-ambitu għall-utilizzazzjoni komprensiva ta' prodotti sekondarji tal-annimali f'ikel funzjonali.

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur: CC iddisinja, kejjel, u kiteb il-manuskritt; ZXand HT iddisinjaw u rrevedew il-manuskritt; YL ipprovda gwida metodoloġika; CGu YWrevedew il-manuskritt. L-awturi kollha qraw u qablu mal-verżjoni ppubblikata tal-manuskritt.

Dan l-artikolu huwa estratt minn Nutrients 2022, 14, 1622. https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients