Attività Multidirezzjonali Ta' Bakuchiol Kontra Mekkaniżmi Ċellulari Ta' Tixjiħ tal-wiċċ - Evidenza Sperimentali Għal Approċċ ta' Trattament Olistiku Parti 1

Astratt

Għan: It-tixjiħ tal-ġilda huwa proċess multifatturi li jinvolvi l-formazzjoni ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv, infjammazzjoni konsekuttiva b'vijabbiltà mnaqqsa taċ-ċelluli epidermali u dermali, u ħsara li tirriżulta lill-matriċi extraċellulari. Modalitajiet effettivi ta' trattament dermo-kosmetiku għandhom idealment jindirizzaw dawn il-karatteristiċi f'approċċ olistiku. Hawnhekk, iddeterminajna l-profil ta 'attività korrispondenti ta' bakuchiol, meroterpene derivat mill-pjanti, f'firxa ta 'studji in vitro, ex vivo, u in vivo u qabbilha ma' retinol, attwalment meqjus bħala l-istandard tad-deheb fil-kożmetiċi topiċi kontra t-tixjiħ.

Glycoside ta 'cistanche jista' wkoll iżid l-attività ta 'SOD fit-tessuti tal-qalb u tal-fwied, u jnaqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta' lipofuscin u MDA f'kull tessut, li jneħħi b'mod effettiv diversi radikali reattivi tal-ossiġnu (OH-, H₂O₂, eċċ.) u jipproteġi kontra ħsara fid-DNA kkawżata. minn OH-radikali. Cistanche phenylethanoid glycosides għandhom kapaċità qawwija ta 'scavenging ta' radikali ħielsa, kapaċità ta 'tnaqqis ogħla minn vitamina C, itejbu l-attività ta' SOD fis-sospensjoni ta 'l-isperma, inaqqsu l-kontenut ta' MDA, u għandhom ċertu effett protettiv fuq il-funzjoni tal-membrana ta 'l-isperma. Cistanche polysaccharides jistgħu jtejbu l-attività ta 'SOD u GSH-Px fl-eritroċiti u tessuti tal-pulmun ta' ġrieden senescent sperimentali kkawżati minn D-galactose, kif ukoll inaqqsu l-kontenut ta 'MDA u kollaġen fil-pulmun u fil-plażma, u jżidu l-kontenut ta' elastin, għandhom effett tajjeb għat-tħaffir fuq DPPH, itawwal iż-żmien ta 'ipoksja fil-ġrieden senescent, itejjeb l-attività ta' SOD fis-serum, u jdewwem id-deġenerazzjoni fiżjoloġika tal-pulmun fi ġrieden senescent b'mod sperimentali B'deġenerazzjoni morfoloġika ċellulari, esperimenti wrew li Cistanche għandu l-abbiltà antiossidant tajba u għandu l-potenzjal li jkun mediċina biex jipprevjeni u jikkura mard tal-ġilda li qed tixjieħ. Fl-istess ħin, echinacoside f'Cistanche għandu kapaċità sinifikanti li jneħħi r-radikali ħielsa DPPH u jista 'jneħħi speċijiet ta' ossiġnu reattiv, jipprevjeni d-degradazzjoni tal-kollaġen indotta minn radikali ħielsa, u għandu wkoll effett tajjeb ta 'tiswija fuq il-ħsara ta' l-anjoni radikali ħielsa tat-timina.

Ikklikkja Fuq Antiossidant Cistanche Tubulosa

【Għal aktar informazzjoni:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Metodi: Il-kapaċità u l-qawwa antiossidativa ta 'bakuchiol u retinol ġew analizzati billi tkejjel it-tnaqqis ta' 2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) permezz tat-tħassir ta 'assorbiment tagħha u l-ispettroskopija ta' reżonanza ta 'spin ta' l-elettroni, rispettivament. Effetti fuq il-prostaglandin E2 (PGE2), il-fattur inibitorju tal-migrazzjoni tal-makrofagi (MIF), il-fattur tat-tkabbir tal-fibroblasti 7 (FGF7), il-kollaġen tat-tip I u VII (COL1A1, COL7A1), il-livelli ta' fibronectin (FN) kif ukoll il-metabolizzazzjoni ta' tetrazolium li jinħall fl-ilma 1 (WST-1) ġew determinati fil-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem. Ir-riġenerazzjoni epidermali ġiet ivvalutata bl-użu ta' mudell ta' fejqan tal-feriti in vitro. Il-livelli tal-proteina FN ġew analizzati ex vivo wara trattament b'formulazzjoni li fiha bakuchiol, retinol, jew vettura bl-użu ta' fluwidu tal-folja tal-ġbid. It-titjib tal-kundizzjoni tal-ġilda ġie determinat in vivo fi studju ta 'tqabbil tal-wiċċ maqsum wara l-applikazzjoni ta' bakuchiol jew vettura.

Riżultati: B'kuntrast mar-retinol, bakuchiol wera effikaċja antiossidativa għolja. Il-livelli ta' PGE2 u MIF naqsu b'mod sinifikanti kemm minn bakuchiol kif ukoll minn retinol. Bakuchiol iżda mhux retinol żied b'mod sinifikanti l-livelli tal-proteina FGF7. Il-livelli ta' metabolizzazzjoni tal-WST-1 żdiedu b'mod sinifikanti minn bakuchiol u retinol. L-applikazzjoni ta 'Bakuchiol u retinol wasslet għal żieda sinifikanti fil-livelli ta' proteina COL1A1, COL7A1, u FN. Feriti supplimentati b'bakuchiol iżda mhux retinol wrew żieda sinifikanti fir-riġenerazzjoni tal-epidermide. Klinikament, żoni ttrattati b'formulazzjoni li fiha bakuchiol urew żieda statistikament sinifikanti fil-valuri tal-proteina FN wara applikazzjoni ta' 4-ġimgħa meta mqabbla ma' żoni mhux ittrattati u żoni ttrattati bil-vettura.

Konklużjoni: Din id-dejta tipprovdi evidenza għall-effikaċja multidirezzjonali tal-bakuchiol kontra l-karatteristiċi ċellulari tat-tixjiħ tal-ġilda. Il-profil ta 'attività tiegħu jaqsam xi karatteristiċi komuni mar-retinol iżda juri diversi effetti pożittivi mhux magħrufa s'issa fl-istudji tagħna, jiġifieri stimulazzjoni tal-komponent kritiku tal-matriċi extraċellulari FN, u riġenerazzjoni epidermali aċċellerata u fejqan tal-feriti.

KLIEM EWLENIN

kontra t-tixjiħ, bakuchiol, talba ssostanzjament in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, fiżjoloġija/strutturi tal-ġilda

INTRODUZZJONI

Ġilda anzjana hija kkaratterizzata minn tikmix, pigmentazzjoni irregolari, ħruxija tal-ġilda, u laxkezza. Dawn is-sinjali kliniċi huma r-riżultat ta 'alterazzjonijiet strutturali u metaboliċi kkawżati minn proċessi ta' tixjiħ intrinsiku u estrinsiku. It-tixjiħ intrinsiku ġie attribwit għal fatturi li jinkludu t-tqassir tat-telomeri, infjammazzjoni kronika, mutazzjonijiet singoli tad-DNA mitokondrijali u radikali ħielsa [1]. Ġilda anzjana tinkludi wkoll tnaqqis tas-sistemi antiossidattivi tagħha[2]. Ukoll, ir-rata tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli tonqos minħabba l-proċess ta 'tixjiħ bijoloġiku li jwassal għal telf ta' struttura u funzjoni tal-ġilda. It-tixjiħ estrinsiku huwa primarjament ikkawżat minn irradjazzjoni UV u influwenzi ambjentali. Dawn l-insulti jirriżultaw fi ħsara fil-ġilda li ssaħħaħ it-tnaqqis kronoloġiku u tħaffef it-tixjiħ tal-ġilda. Il-ġilda tal-bniedem tkompli titlef il-kapaċità li tlaħħaq mal-kundizzjonijiet infjammatorji matul ix-xjuħija, li tirriżulta fi stat proinfjammatorju kroniku.

L-applikazzjoni topika ta 'retinojdi bħal aċidu retinojku, retina, jew retinol hija meqjusa bħala l-istandard tad-deheb kliniku għal trattament effettiv kontra t-tixjiħ [3, 4]. Il-mekkaniżmi molekulari tar-retinojdi ġew deskritti b'mod estensiv [5-10]. Ir-retinojdi topiċi jnaqqsu b'mod effettiv is-sinjali viżibbli tat-tixjiħ bħal t-tikmix, laxkezza, jew ħruxija [4, 11] u jnaqqsu d-depigmentazzjoni tal-ġilda bil-ħsara bil-fotografija inkluż livedo reticularis u lentigines actinic [12]. Madankollu, trattament topiku bir-retinojdi jista 'jwassal għal nixfa u irritazzjoni tal-ġilda dipendenti fuq il-konċentrazzjoni [13]. Peress li l-applikazzjoni tar-retinol tikkawża reazzjonijiet avversi minuri meta mqabbla ma 'retinojdi oħra bħall-aċidu retinojku [6, 14], huwa attiv użat ħafna fit-trattament kosmetiku tat-tixjiħ tal-wiċċ.

B'kuntrast mar-retinol li ilu applikat fi prodotti għall-kura tal-ġilda mill-1984 [15], il-bakuchiol reċentement kiseb attenzjoni biss bħala kompost topiku kontra t-tixjiħ. Bakuchiol huwa meroterpene (Figura 1) li huwa derivat miż-żerriegħa ta 'Psoralea corylifolia. Ilu jintuża fil-mediċina tradizzjonali Indjana u Ċiniża għal sekli [16, 17] u huwa tollerat tajjeb [18]. Bakuchiol ġie ssuġġerit li juri funzjonijiet bħal retinol, bħal f'mudell ta 'sostitut tal-ġilda, iż-żewġ sustanzi juru mudelli simili ta' espressjoni tal-ġeni in vitro [19] u titjib tal-ħsara tal-ġilda tal-ġilda in vivo [20]. Għalhekk, ġie msemmi wkoll bħala analogu retinojdi funzjonali derivat mill-pjanti [21]. Studji ulterjuri wrew antiossidanti [19, 22-24], anti-infjammatorji [19, 25-27], antibatteriċi [28] kif ukoll effetti antiproliferattivi u antitumorali [29, 30] ta 'bakuchiol.

Biex jittejbu u jitdewmu b'mod effettiv il-proċessi multifatturi tat-tixjiħ tal-ġilda, jeħtieġ li jiġu indirizzati mekkaniżmi ċellulari differenti f'approċċ integrat. Bakuchiol simultanjament jimmodula diversi miri u jagħmilha kompost promettenti f'dan ir-rigward. Peress li l-istress ossidattiv u infjammatorju huma relatati mill-qrib mat-tixjiħ fil-ġilda, il-prevenzjoni tagħhom minn bakuchiol tista 'tippromwovi l-kundizzjoni ġenerali tal-ġilda. Madankollu, il-kwalità tal-evidenza xjentifika attwali reċentement ġiet evalwata b'mod kritiku [31]. F'dan il-kuntest, iddeterminajna l-kapaċitajiet (i) antiossidanti u (ii) anti-infjammatorji ta 'bakuchiol u retinol u eżaminajna l-kapaċità tagħhom li jtejbu l-metaboliżmu ċellulari u s-sintesi tal-fattur tat-tkabbir 7 miġbur fil-qosor bħala (iii) attività taċ-ċelluli. Aħna analizzajna aktar jekk bakuchiol u retinol jaffettwawx l-espressjoni ta 'ċerti (iv) komponenti ECM u jtejbu (v) riġenerazzjoni epidermali u epitelizzazzjoni mill-ġdid. Fl-aħħarnett, sar studju in vivo biex tiġi vverifikata l-kapaċità klinika kontra t-tixjiħ tal-bakuchiol fil-ġilda tal-bniedem.

MATERJALI U METODI

Materjali tat-test

Bakuchiol inkiseb minn Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, l-Istati Uniti). Retinol inxtara minn Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, l-Istati Uniti). Għal esperimenti ta 'kultura taċ-ċelluli, iż-żewġ sustanzi tat-test ġew dilwiti friski f'DMSO (Merck, Darmstadt, il-Ġermanja). Għas-soluzzjonijiet tal-ħażna tad-DMSO, il-konċentrazzjoni applikata tas-sustanzi tat-test kienet 1000-darbiet 'l fuq mill-ogħla konċentrazzjoni applikata fil-kultura taċ-ċelluli li tagħti 0.1 fil-mija DMSO fil-midja jew buffer. Twettqu dilwizzjonijiet ulterjuri bl-użu tal-midja jew buffer b'0.1 fil-mija DMSO. Għalhekk, l-esperimenti kollha tal-kultura taċ-ċelluli twettqu fil-preżenza ta '0.1 fil-mija DMSO. Għall-istudji in vivo, retinol topiku ġie fformulat fl-istess vettura bħal bakuchiol.

Studji in vitro

Determinazzjoni tal-kapaċità antiossidativa

Bakuchiol, retinol (it-tnejn applikati f'konċentrazzjoni finali ta '100μM), jew it-trolox standard għoli (Merck, konċentrazzjoni finali ta' 25μM) ġew dilwiti f'DMSO. Fil-qosor, 30μL ta 'dawn il-komposti (10-darbiet konċentrazzjoni ogħla mill-konċentrazzjoni finali tal-assaġġ) ġew miżjuda ma' 96-pjanċa tal-qiegħ ċatt sew. Sussegwentement, 270μL ta '39ug/mL DPPH (Merck, dilwit f'taħlita ta' ilma/etanol 1:1) ġew miżjuda malajr ma 'kull bir li wassal għal konċentrazzjoni finali ta' 10 fil-mija DMSO. Bħala kontroll, is-soluzzjoni DPPH ġiet inkubata b'DMSO nieqes mis-sustanzi tat-test. Barra minn hekk, kontrolli vojta saru billi inkubaw bakuchiol jew retinol b'ilma/etanol (1:1) jew biss it-taħlita ta 'ilma/etanol (1:1) li kien fiha 10 fil-mija DMSO fin-nuqqas ta' DPPH. Wara 10, 30, u 60min, l-assorbiment f'524nm tkejjel bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate multimode Spark (Tecan, Männedorf, l-Isvizzera). Sinjali ta' kontrolli vojta tnaqqsu.

Determinazzjoni tal-qawwa antiossidativa

L-HDFs ġew miżrugħa fi {{0}}pjanċi tal-bir b'150 000 ċelluli/bir f'medja ta' 2 mL li kien fih 10 fil-mija serum tal-għoġol u inkubati għal 24 siegħa. Sussegwentement, il-mezz l-antik ġie mormi, u ċ-ċelloli ġew ittrattati b'mezz li kien fih 2 fil-mija serum tal-għoġol u bakuchiol jew retinol f'konċentrazzjoni finali ta '10 μM. HDFs ta 'kontroll ġew supplimentati b'0.1 fil-mija DMSO nieqes minn bakuchiol jew retinol. Kontrolli vojta saru billi inkuba medium mingħajr ċelluli. Wara 24 siegħa, il-medju kkundizzjonat ġie trasferit għal kolonni spin tal-konċentratur tal-proteina Vivaspin (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, il-Ġermanja) u kkonċentrat madwar 10-darbiet. Il-volumi tas-supernatanti medji kollha ġew indaqs permezz ta' żieda mill-ġdid tal-fluss. Il-livelli tal-proteina FGF7 tal-medju kondizzjonat konċentrat ġew analizzati bl-użu ta 'kit ELISA disponibbli kummerċjalment wara l-istruzzjonijiet tal-manifattur (Bio-Techne GmbH). Il-kejl sar bl-użu ta' Spark multimode microplate reader (Tecan). Sinjali miksuba minn kontrolli vojta tnaqqsu u l-livelli ta 'proteina FGF7 ġew normalizzati għan-numru totali taċ-ċelluli li ġie determinat bl-użu ta' counter taċ-ċelluli (Scepter, Merck).

Determinazzjoni tal-metabolizzazzjoni tal-WST-1

HDFs ġew miżrugħa fi {{0}}pjanċi bir-bir bi 3000 ċellula/bir f'medja ta '100μL li kien fih 10 fil-mija serum tal-għoġol u inkubati għal 24 siegħa. Il-medju eżawrit ġie mormi, u ċ-ċelloli ġew ittrattati b'medja ta '100μL li kien fih retinol jew bakuchiol f'konċentrazzjoni finali ta' 1 μM jew 10 μM, rispettivament. HDFs ta 'kontroll ġew supplimentati b'0.1 fil-mija DMSO nieqes minn bakuchiol jew retinol. Bħala kontroll ulterjuri, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'10 fil-mija triton-X (Merck). Kontrolli vojta saru billi inkuba medium mingħajr ċelluli. Wara 72 siegħa, iċ-ċelloli ttebbgħu bl-użu tar-reaġent tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli disponibbli kummerċjalment WST-1 skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur (Merck). L-assorbiment tkejjel f'450 u 620nm bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate Tecan infinity M200 (Tecan). Id-differenza f'dawn il-kejl intużat għall-analiżi. Sinjali ta' kontrolli vojta tnaqqsu.

Determinazzjoni tal-livelli tal-proteina COL1A1 u COL7A1

L-HDFs ġew miżrugħa fi {{0}}pjanċi tal-bir b'10  000 ċelluli/bir f'100μL medium li kien fih 10 fil-mija serum tal-għoġol u inkubati għal 24 siegħa. Bakuchiol jew retinol ġie dilwit f'medja ta '100μL mingħajr serum tal-għoġol, u supplimentat mal-medja preżenti f'konċentrazzjoni finali ta' 1 μM jew 10 μM, rispettivament. Il-kontroll ġie supplimentat b'medja ta '100μL mingħajr serum li tagħti konċentrazzjoni ta' 0.1 fil-mija DMSO li tikkorrispondi għat-trattament ta 'retinol u bakuchiol. Bħala standard għoli, ġew applikati 10 ng/mL transforming growth factor- (TGF-) u 11ug/mL ascorbate tas-sodju (it-tnejn Merck). Kontrolli vojta saru billi inkuba medium mingħajr ċelluli. Wara 4 sigħat, il-livelli tal-proteina COL1A1 u COL7A1 tal-medju kondizzjonat ġew analizzati bl-użu ta 'kits ELISA disponibbli kummerċjalment wara l-istruzzjonijiet tal-manifattur (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, l-Istati Uniti). Il-kejl sar bl-użu ta' Spark multimode microplate reader (Tecan). Sinjali ta' kontrolli vojta tnaqqsu. Il-livelli tal-proteina COL1A1 u COL7A1 ġew normalizzati għall-ammont totali ta 'proteina lisat taċ-ċelluli li ġie ddeterminat bl-użu ta' kit ta 'assaġġ tal-aċidu bicinchoninic disponibbli kummerċjalment (Thermo Fisher Scientific) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Prerekwiżit għall-użu tar-riżultati kien ir-reazzjoni pożittiva taċ-ċelloli għall-istandard għoli ta 'TGF- u ascorbate tas-sodju.

Għall-analiżi tal-livelli tal-proteina COL7A1 wara żmien estiż ta 'inkubazzjoni, l-HDFs ġew miżrugħa fi pjanċi ta' 96-bir b'3000 ċellula/bir f'100μL medju li fih 10 fil-mija serum tal-għoġol. It-trattamenti, il-kontrolli u l-analiżi kollha saru kif deskritt hawn fuq bl-eċċezzjoni li bakuchiol u retinol intużaw biss f'konċentrazzjoni finali ta '10 μM. Iċ-ċelloli nħasdu meta ntlaħqet is-subkonfluwenza, b'mod partikolari, wara 72 jew 96 siegħa.

Determinazzjoni tal-livelli tal-proteina FN

L-HDFs ġew miżrugħa fi {{0}}pjanċi tal-bir b'10 000 ċelluli/bir f'medja ta '100μL li kien fih 10 fil-mija serum tal-għoġol u inkubati għal 24 siegħa. Il-mezz antik ġie sostitwit b'mezz li fih 2 fil-mija serum tal-għoġol u bakuchiol jew retinol f'konċentrazzjoni finali ta '10 μM. Il-kontroll kien supplimentat b'0.1 fil-mija DMSO nieqes minn bakuchiol jew retinol. Kontrolli vojta saru billi inkuba medium mingħajr ċelluli. Wara 24 siegħa, il-livelli tal-proteina FN tal-medju kondizzjonat ġew analizzati bl-użu ta 'kit ELISA disponibbli kummerċjalment wara l-istruzzjonijiet tal-manifattur (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, l-Istati Uniti). Il-kejl sar bl-użu ta' Spark multimode microplate reader (Tecan). Sinjali ta' kontrolli vojta tnaqqsu. Il-livelli tal-proteina FN ġew normalizzati għall-ammont totali tal-proteina lisat taċ-ċelluli li ġie ddeterminat kif imsemmi hawn fuq.

Determinazzjoni ta 'riġenerazzjoni epidermali f'mudell ta' fejqan ta 'feriti in vitro

L-esperimenti twettqu kif deskritt qabel [34]. Għat-trattament ta 'mudelli ta' fejqan tal-feriti, bakuchiol jew retinol ġew dilwiti f'DPBS u miżjuda f'konċentrazzjoni finali ta '100μM mar-reġjun tal-ferita (5 μL għal kull ferita). Il-feriti ta 'referenza ġew supplimentati bl-istess ammont ta' DPBS li kien fih 0.1 fil-mija DMSO mingħajr bakuchiol jew retinol. Feriti addizzjonali tħallew mhux trattati bħala kontroll ulterjuri. Mudelli ta 'fejqan tal-feriti ġew inkubati għal 43 siegħa f'umdità ta' 95 fil-mija, 5 fil-mija CO2, u 37 grad. Sussegwentement, il-kampjuni ġew iffriżati snap-ffriżati f'isopentane mkessħa minn qabel b'nitroġenu likwidu, u maħżuna f'-80 grad. L-epitelizzazzjoni mill-ġdid ġiet evalwata f’sezzjonijiet tal-kriostat imtebba’ bl-ematossilina u bl-eosina billi tkejjel it-tul tal-epidermide riġenerata bl-użu ta’ mikroskopju Leica DMLS (10×), kamera Leica MC 170 HD CCD u s-softwer Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, il-Ġermanja). Il-kwantifikazzjoni saret b'mod blinded.

Studji in vivo I u II

Għaż-żewġ studji in vivo, ir-rakkomandazzjonijiet tal-verżjoni attwali tad-Dikjarazzjoni ta' Ħelsinki u l-linja gwida tal-Konferenza Internazzjonali dwar l-Armonizzazzjoni ta' Prattika Klinika Tajba ġew osservati bħala applikabbli għal studju kożmetiku. Il-protokoll ta 'studju I ġie approvat mill-Kumitat ta' Etika Indipendenti Freiburg (kodiċi feki 08/2610). Fiż-żewġ studji, il-voluntiera kollha pprovdew kunsens bil-miktub u infurmat. Is-suġġetti kellhom ġilda b'saħħitha, kienu jappartjenu għall-ġilda Fitzpatrick tat-tip I sa III u l-bidu, jew bidla tal-medikazzjoni ormonali kienet kriterju ta 'esklużjoni.

Matul perjodu ta' 10-ġurnata ta' prekondizzjonament u matul il-perjodu kollu ta' studju, is-suġġetti kienu meħtieġa joqogħdu lura mill-espożizzjoni għall-UV fiż-żoni tat-test. L-attivitajiet li jippromwovu l-għaraq kienu pprojbiti 24 siegħa qabel il-valutazzjonijiet skedati.

Investigatur wera l-applikazzjoni korretta tal-formulazzjonijiet bl-użu ta 'ammont, li jikkorrispondi għall-kors tas-soltu tal-kura tal-ġilda tas-suġġetti.

Studju I: Determinazzjoni ex vivo tal-livelli tal-proteina FN

Minn 52 suġġett mara, li kienu rreġistrati f'dan l-istudju kkontrollat ​​bil-vettura, 33 suġġett temmew l-istudju, u dejta ta '31 suġġett (30-64 sena, età medja: 50.9 snin) kienet inkluża fl-analiżi tad-dejta. Il-waqfien seħħew minħabba l-pandemija tas-SARS-CoV-2 u raġunijiet personali (13-il suġġett) kif ukoll minħabba reazzjonijiet ta’ inkompatibbiltà (ħames suġġetti, ikkawżati mit-trattament tar-retinol). Reazzjonijiet ta 'inkompatibbiltà medjati mir-retinol kif ukoll kwistjonijiet ta' kampjunar ikkawżaw numri differenti ta 'suġġetti ttestjati għal kull kundizzjoni (ara r-riżultati għad-dettalji).

Sebat ijiem qabel valutazzjonijiet skedati, l-użu ta 'prodotti għall-kura tal-ġilda, cleansers, u sapun fuq id-dirgħajn kien ipprojbit. Fl-ewwel jum ta 'studju, erba' żoni tat-test ġew stabbiliti fuq id-dirgħajn ta 'ġewwa. Fuq żewġ żoni tat-test, żewġ formulazzjonijiet verum ġew applikati biex ikun fihom {{0}}.5 fil-mija bakuchiol jew 0.15 fil-mija retinol, rispettivament. F'opinjoni ppubblikata mill-Kumitat Xjentifiku dwar is-Sigurtà tal-Konsumatur fl-2016, il-konċentrazzjoni applikata tar-retinol kienet ikkunsidrata bħala trattament kożmetiku [35]. Fiż-żewġ żoni tat-test l-oħra, intużat il-vettura korrispondenti, jew iż-żona tħalliet mhux ittrattata. Il-pożizzjonament tal-postijiet tat-trattament kien permuted. Wara 4 ġimgħat ta 'applikazzjoni darbtejn kuljum ta' formulazzjonijiet tat-test, il-voluntiera rritornaw lejn l-istitut tat-test. F'kull żona tat-test, ġew iġġenerati tliet folji tal-ġbid (7 mm fid-dijametru) kif deskritt qabel [36, 37]. Fil-qosor, tazzi blister tal-ġbid magħmul apposta fuq iż-żoni tat-test u ġie applikat vakwu ta '550-850 mbar. Wara bejn wieħed u ieħor 90–150 min, meta l-folji tal-ġbid kienu ffurmati, il-vakwu ġie rilaxxat, u l-fluwidu ġie aspirat mill-folja bl-użu ta 'labra ta' 24-gauge. Il-fluwidi ġew iffriżati immedjatament f'-80 grad fuq silġ niexef sal-analiżi. Il-livelli tal-proteina FN ġew ikkwantifikati f'kampjuni tal-fluwidu tal-folji tal-ġbid bl-użu ta' kit ELISA disponibbli kummerċjalment (R&D Systems). Il-kejl sar bl-użu ta' Spark multimode microplate reader (Tecan). Il-livelli FN ġew normalizzati għal-livelli totali ta 'proteini ta' kampjuni ta 'fluwidu tal-folji tal-ġbid li ġew determinati kif imsemmi hawn fuq.

Studju II: Determinazzjoni in vivo tat-titjib tal-kundizzjoni tal-ġilda

B'kollox, 43 voluntiera mara ġew irreġistrati f'dan l-istudju ta' tqabbil tal-wiċċ maqsum ikkontrollat ​​minn vettura. Skont valutazzjonijiet mediċi, is-suġġetti wrew tipi ta’ ġilda mħallta (ġilda xotta, normali, żejtnija u kombinata). 34 suġġett (39-66 sena, età medja: 56.2 snin) temmew l-istudju u ġew inklużi fl-analiżi. It-tluq kien ikkawżat minn problemi tekniċi u nuqqas ta 'konformità (tmien suġġetti), kif ukoll reazzjonijiet ta' inkompatibilità (suġġett wieħed, ikkawżat minn trattament ta 'vettura u bakuchiol).

Ġimagħtejn qabel il-bidu tal-istudju u matul il-perjodu kollu tal-istudju, il-voluntiera kienu meħtieġa joqogħdu lura milli jużaw prodotti għall-ikkunzar waħedhom jew trattamenti kosmetiċi intensivi tal-wiċċ (eż. tneħħija ta’ saffi superfiċjali tal-ġilda). Matul il-10-jum tal-perjodu ta' prekondizzjonament u matul l-istudju kollu, is-suġġetti ntalbu jastjenu milli jagħmlu għamla permanenti, trattamenti ta' xagħar u għajn, maskri tal-għajnejn, u garża. Tlett ijiem qabel l-ewwel valutazzjoni, is-suġġetti ntalbu joqogħdu lura milli jużaw prodotti għall-kura tal-wiċċ. Filgħaxija qabel il-gradazzjoni skedata, is-suġġetti kienu meħtieġa jwaqqfu l-applikazzjoni ta 'kożmetiċi dekorattivi.

Fl-ewwel 7 ijiem tal-fażi ta' 10-ġurnata ta' prekondizzjonament, is-suġġetti rċevew vażett tal-krema li kien fih il-krema tal-vettura tal-istudju (li ma kellux informazzjoni dwar il-kontenut) u applikawha darbtejn kuljum fuq wiċċhom kollu. Fil-linja bażi, il-voluntiera għamlu awto-gradazzjoni. B'mod partikolari, huma vvalutaw viżwalment id-dehra ġenerali tal-ġilda tal-wiċċ tagħhom billi osservaw il-freskezza u r-radjanza tagħha kif ukoll kwalunkwe sinjal ta 'tixjiħ tal-ġilda. B'hekk ġiet applikata skala analoga viżwali li tvarja minn 1 (għajjien ħafna, anzjan) sa 10 (frisk ħafna, l-ebda sinjali ta' ġilda ta' età). Imbagħad, is-suġġetti rċevew żewġ vażetti tal-krema blinded li fihom il-verum (vettura li fiha 0.5 fil-mija bakuchiol) jew il-vettura, rispettivament, mingħajr ebda speċifikazzjoni fuq il-kontenut. Matul il-perjodu ta 'studju ta' 12-il ġimgħa, naħa waħda tal-wiċċ ġiet ittrattata darbtejn kuljum bil-verum filwaqt li n-naħa l-oħra tal-wiċċ ġiet ittrattata darbtejn kuljum bil-vettura. L-allokazzjoni tat-trattamenti lis-siti tat-test ġiet permutata. Wara 12-il ġimgħa ta 'użu regolari, voluntiera reġgħu wettqu l-awto-gradazzjoni kif imsemmi hawn fuq.

Analiżi statistika

Analiżi statistiċi saru bl-użu ta' Microsoft Excel għal Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, l-Istati Uniti), SAS Software Package għall-Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, il-Ġermanja), u GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego). , California, l-Istati Uniti).

Id-distribuzzjoni normali tad-dejta ġiet ivvalutata bl-użu tat-test ta' Shapiro-Wilk. Jekk id-distribuzzjoni normali kienet ikkonfermata, saret analiżi tal-varjanza tal-kejl ripetut (RM-ANOVA) b'paragun post hoc f'pari. Jekk l-ipoteżi tan-normalità ġiet miċħuda, ranks trasformati bl-Blom tad-dejta oriġinali ġew ivvalutati bl-użu ta 'RM-ANOVA b'paragun post-hoc pari, jew id-dejta oriġinali ġiet ivvalutata bl-użu ta' test tal-grad tas-sinjali Wilcoxon. It-testijiet statistiċi kollha kienu fuq żewġ naħat f'livell ta' sinifikat ta' alfa=0.05.

RIŻULTATI

Studji in vitro

Determinazzjoni ta' effetti antiossidanti

Biex tanalizza l-effetti (i) antiossidattivi ta 'bakuchiol u retinol, għamilna żewġ analiżi differenti bl-użu ta' DPPH bħala molekula ta 'detector.

Kapaċità antiossidativa

Il-kapaċità antiossidativa ġiet iddeterminata billi tkejjel it-tnaqqis ta 'DPPH permezz tat-tħassir ta' assorbiment tiegħu. It-Trolox ta 'standard għoli wera kapaċità antiossidativa elevata b'mod sinifikanti meta mqabbla mal-kontroll (p=0.0000 għall-punti ta' ħin indikati kollha) li tivverifika kejl xieraq (Figura 2a). Dwar il-kontroll, l-assorbiment fil-kampjuni ttrattati b'bakuchiol tnaqqset ukoll b'mod sinifikanti fil-punti kollha tal-ħin investigati (10 min: p=0.0003, 30 u 60 min: p=0.0000 ) li juru kapaċità antiossidativa miżjuda. B'kuntrast, Retinol ma wera l-ebda kapaċità antiossidativa sinifikanti meta mqabbel mal-kontroll.

【Għal aktar informazzjoni:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】