Astratt

GħanBiex tinvestiga l-mekkaniżmu ta 'Cistanche phenylethanol glycosides (CPhGs) fuq il-funzjoni immuni intrinsika, it-tkabbir tat-tumur, u l-apoptożi taċ-ċelluli tat-tumur fil-ġrieden nude li jkollhom osteosarkoma reżistenti għall-mediċina.MetodiOsteosarkoma umana MG-63 linja taċ-ċelluli reżistenti għall-mediċina ġiet stabbilita b'metodu ta 'konċentrazzjoni gradjent, u nbena mudell ta' ġrieden nude ta 'osteosarkoma reżistenti għall-mediċina (36 ġrieden b'kollox, 6 għal kull grupp). Il-grupp mudell ingħata salina normali permezz ta 'gavage; il-grupp methotrexate (MTX) irċieva injezzjoni intraperitoneali ta 'MTX (20 mg/kg) kull tlett ijiem; il-grupp kombinat irċieva injezzjoni intraperitoneali ta 'MTX kull tlett ijiem flimkien ma' gavage ta 'kuljum ta' CPhGs ta 'doża medja (250 mg/kg); il-gruppi ta 'CPhGs b'doża għolja, medja u baxxa ngħataw gavage ta' CPhGs ta 'kuljum f'dożi għoljin (500 mg/kg), medji (250 mg/kg) u baxxi (125 mg/kg), rispettivament. Ġew osservati bidliet fid-daqs tat-tumur fil-ġrieden nude, ġew ippjanati kurvi tal-volum medju tat-tumur matul iż-żmien, u ġiet ikkalkulata r-rata ta 'inibizzjoni tat-tumur; livelli fis-serum ta' IL-2 u TNF- fil-ġrieden nude ġew skoperti mill-ELISA; L-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur ġiet imkejla b'ċitometrija tal-fluss; Western blot intuża biex jinstab l-espressjoni ta 'proteini Bcl-2, Bax relatati mal-apoptożi u l-espressjoni ta' p-AKT, p-mTOR, p-PI3K fit-tessuti tat-tumur.RiżultatiMeta mqabbel mal-grupp mudell, il-volum u l-piż tat-tumur fil-gruppi kollha ta 'trattament tnaqqsu b'mod sinifikanti (P ​​<0.001); meta mqabbla mal-grupp mudell u l-grupp MTX, il-livelli tas-serum ta 'IL-2 u TNF- fil-ġrieden nude tal-gruppi kollha CPhGs u l-grupp ta' kombinazzjoni żdiedu b'mod sinifikanti (P ​​< 0.01); meta mqabbel mal-grupp mudell, l-espressjoni ta 'Bax fil-gruppi kollha ta' trattament kienet irregolata b'mod sinifikanti 'l fuq (P <0.001), u l-espressjoni ta' Bcl-2 fi gruppi ta 'CPhGs ta' doża għolja u medja u l-grupp ta 'kombinazzjoni kien irregolat b'mod sinifikanti 'l isfel (P <0.001); meta mqabbel mal-grupp mudell u l-grupp MTX, ir-rata ta 'apoptożi tat-tumur fil-ġrieden nude tal-gruppi kollha CPhGs u l-grupp ta' kombinazzjoni żdiedet b'mod sinifikanti, filwaqt li l-livelli ta 'p-AKT, p-mTOR, u p-PI3K naqsu b'mod sinifikanti (P ​​<0.05).KonklużjoniCPhGs jistgħu jtejbu b'mod sinifikanti l-funzjoni immuni fi ġrieden nude li jkollhom osteosarkoma reżistenti għall-mediċina, u jippromwovu l-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur billi jirregolaw il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni PI3K/AKT/mTOR u l-espressjoni ta' proteini apoptotiċi Bax u Bcl-2, u b'hekk effettivament jinibixxu t-tkabbir tat-tumur.

Kliem ewlieniosteosarkoma;Cistanche phenylethanol glycosides; MG-63; ċelluli tat-tumur; apoptożi; mekkaniżmu ta' azzjoni; Mogħdija tas-sinjalar PI3K/AKT/mTOR

 

CISTANCHE TUBULOSA BENEFIĊĊJI

 

 

 

 

 

 

Osteosarkoma (OS)huwa tumur tal-għadam primarju malinn ħafna, bl-ogħla inċidenza fost tumuri malinni tal-għadam primarji adolexxenti, akkumpanjat minn rati ta 'diżabilità u mortalità estremament għoljin. Fil-preżent, methotrexate ta 'doża għolja (MTX) waħdu jew flimkien ma' aġenti kimoterapewtiċi oħra wara l-kirurġija jista 'jtejjeb b'mod effettiv ir-rata ta' sopravivenza ta 'pazjenti OS [1]. Madankollu, xi pazjenti OS huma insensittivi għall-kimoterapija minħabba reżistenza għall-mediċina, li twassal għal progressjoni tat-tumur. Barra minn hekk, is-sottosettijiet tal-limfoċiti T f'pazjenti b'tumuri ħafna drabi jkunu fi stat ta 'żbilanċ immuni, u l-kimoterapija tista' tkompli taggrava d-disturbi immuni u l-immunosoppressjoni fi żmien qasir [2]. Studji wrew li t-titjib tar-risponsi immuni tal-bniedem jista 'jtejjeb il-pronjosi ta' pazjenti OS mill-perspettiva tal-karatteristiċi bijoloġiċi tal-OS [3]. Ir-reżistenza għall-kimoterapija hija waħda mill-aktar problemi komuni u intrattabbli li jwasslu għal falliment tat-trattament f'pazjenti OS, u l-immunosoppressjoni hija wkoll waħda mill-fatturi ewlenin li jikkawżaw progressjoni rapida tat-tumur [4].

Il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni ta' phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/protein kinase B (AKT)/mammiferi tar-rapamicin (mTOR) hija meqjusa bħala waħda mill-mogħdijiet onkoġeniċi l-aktar importanti fil-kanċer tal-bniedem. Din il-mogħdija ta 'spiss hija attivata żżejjed f'OS, li tista' tmexxi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli OS, invażjoni, metastasi u anġjoġenesi, tinibixxi l-apoptożi, u tkompli twassal għal reżistenza OS għal mediċini kimoterapewtiċi [5]. Studji kkonfermaw li Cistanche phenylethanol glycosides (CPhGs), il-komponent ewlieni ta 'Cistanche deserticola, jista 'jtejjeb il-funzjoni immuni u jinibixxi t-tkabbir tat-tumur fil-ġrieden li jġorru l-epatoma [6].In vitrostudji wrew li CPhGs jistgħu jinibixxu b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni taċ-ċelloli tal-epatoma HepG2 u jinduċu l-apoptożi tagħhom [7]. L-induzzjoni tal-apoptożi taċ-ċelluli hija l-mekkaniżmu ewlieni tal-mediċini antitumorali attwali u wkoll hotspot ta 'riċerka fit-trattament tal-OS f'dawn l-aħħar snin. Ġrieden nude jaqsmu ħafna xebh mal-bnedmin fl-anatomija, il-fiżjoloġija u l-bijoloġija, u għandhom aċċettabilità għolja għal tumuri trapjantati, li jippermettu ksenotrapjant ta 'ċerti ċelluli eteroloġi tat-tumur, u b'hekk jintużaw ħafna fl-istabbiliment ta' mudelli ta 'tumur [8-9]. Dan l-istudju għandu l-ħsieb li jibni mudell tal-ġurdien nude ta 'osteosarkoma reżistenti għall-mediċina, josserva l-effetti ta' CPhGs fuq il-funzjoni immuni u l-mogħdija PI3K / AKT / mTOR f'dan il-mudell, kif ukoll l-effett inibitorju tiegħu fuq it-tkabbir tat-tumur u l-mekkaniżmu farmakoloġiku, sabiex jipprovdi referenzi għat-twessigħ ta 'ideat ta' trattament kliniku u riċerka bażika ta 'OS.

 

CISTANCHE TUBULOSA BENEFIĊĊJI GĦAT-TKABBIR TAL-GĦADM

 

CITANCHE GĦALL-BEJGĦ

Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-L-akbar esportatur ta' cistanche fiċ-Ċina:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel:+86 15292862950

 

 

1 Materjali u Metodi

1.1 Annimali Sperimentali

Sitta u tletin ġrieden nude grad SPF (6-8 ġimgħat, li jiżnu 19-25 g) inxtraw minn Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd., b'ċertifikat tal-annimali Nru.202367524. Dan l-esperiment ġie approvat mill-Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Università tal-Majjistral Minzu (Xbmu-3m-202306).

1.2 Linja taċ-Ċelloli

MG-63 ċelloli nxtraw mill-Bank taċ-Ċelloli tal-Akkademja tax-Xjenzi Ċiniża f'Shanghai.

1.3 Drogi u Reaġenti

Serum bovin tal-fetu, medju DMEM ta 'glukożju għoli, 0.25% Trypsin-EDTA, MTX (Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd., numri tal-lott PWL001, MA0212, MA0233-1, MB1156-1, rispettivament); CPhGs (Shaanxi Senyuan Biotechnology Co., Ltd., numru tal-lott SY20231212605); antikorp anti-p-mTOR, antikorp anti-p-PI3K, antikorp anti-p-AKT, antikorp anti-Bcl-2, antikorp anti-Bax (Hangzhou Huaan Biotechnology Co., Ltd., numri tal-lott HA600094, HA721673, ET1607-73, ET1701-53, ET17016-03 rispettivament); Kitts ELISA għal TNF- u IL-2 (Hangzhou Lianke Biotechnology Co., Ltd., numri tal-lott EK282, EK202, rispettivament).

1.4 Strumenti

Ċentrifuga refriġerata b'veloċità għolja tad-desktop CT14RD (Shanghai Tianmei Biochemical Instrument Co., Ltd.); SW-CJ-1FD bank nadif (Suzhou Purification Co., Ltd.); CO-5AC inkubatur taċ-ċelluli (Sanyo, il-Ġappun); Mikroskopju invertit tal-fluworexxenza AE31 (Xiamen Motic Industrial Group Co., Ltd.); RT-6100 microplate reader (Shenzhen Rayto Life Sciences Co., Ltd.); Sistema ta 'elettroforeżi tal-ġel PowerPoc, analizzatur tal-immaġini tal-ġel ChemiDoc™ (Bio-Rad, USA).

 

1.5 Metodi Sperimentali

1.5.1 Stabbiliment ta' osteosarkoma umana MG-63 linja taċ-ċelluli reżistenti għall-mediċina (MG-63/MTX)

MG-63 ċelluli ġew ikkultivati ​​għal fażi ta' tkabbir logaritmiku b'80% konfluwenza taċ-ċelluli. Medju tal-kultura taċ-ċelluli ppreparat minn qabel li fih 100 ng/mL MTX ġie miżjud, u l-mezz inbidel wara 48 siegħa. Meta ċ-ċelloli laħqu 80% konfluwenza għal darb'oħra, l-istess konċentrazzjoni ta 'medja li fiha MTX ġiet miżjuda. Il-passi ta' hawn fuq ġew ripetuti biex iċ-ċelluli ta' l-osteosarkoma MG-63 ikunu jistgħu jikbru b'mod stabbli f'medju li fih 100 ng/mL MTX. Imbagħad il-konċentrazzjoni ta 'MTX fil-medju żdiedet gradwalment bl-istess metodu, bl-użu ta' 200 ng/mL, 500 ng/mL, 1000 ng/mL, 2000 ng/mL, 5000 ng/mL u 10000 ng/mL f'sekwenza. Wara 5 xhur ta 'kultura, linja taċ-ċelluli reżistenti għall-mediċina tal-osteosarkoma (MG-63/MTX) li qed tikber b'mod stabbli f'10000 ng/mL MTX ġiet magħżula għal esperimenti sussegwenti.

 

 

1.5.2 Stabbiliment ta 'mudell ta' ġrieden nude li jkollu osteosarkoma reżistenti għall-mediċina

Il-mudell tal-annimali tal-osteosarkoma ġie stabbilit b'referenza għal-letteratura [10]. MG-63/Ċelloli MTX ġew ippreparati f'sospensjoni taċ-ċelluli ta '4 × 10⁶/100 μL, u 100 μL ġew injettati taħt il-ġilda fl-axilla tal-ġrieden nude biex josservaw il-formazzjoni tat-tumur.

1.5.3 Il-grupp u l-intervent tal-annimali

Ġrieden nude li jġorru tumuri kienu maqsuma b'mod każwali fi grupp mudell, grupp MTX, MTX flimkien ma 'grupp CPhGs (MTX-CPhGs), grupp ta' CPhGs ta 'doża għolja (CPhGs-H), grupp ta' CPhGs ta 'doża medja (CPhGs-M) u grupp ta' CPhGs (CPhGs-M) ta 'doża baxxa f'kull grupp ta' CPhGs (CPhGs) fi grupp ta '-6L. Gavage inbeda fil-jum 6 wara l-immudellar. Ġrieden fil-grupp mudell ingħataw 10 μL/g salina normali kuljum permezz ta 'gavage; il-grupp MTX irċieva injezzjoni intraperitoneali ta '20 mg/kg MTX kull tlett ijiem; il-grupp MTX-CPhGs irċieva gavage ta 'kuljum ta' 250 mg/kg CPhGs flimkien ma 'injezzjoni intraperitoneali ta' 20 mg/kg MTX kull tlett ijiem; il-grupp CPhGs-H irċieva gavage ta 'kuljum ta' 500 mg/kg CPhGs; il-grupp CPhGs-M irċieva gavage ta 'kuljum ta' 250 mg/kg CPhGs; il-grupp CPhGs-L irċieva gavage ta 'kuljum ta' 125 mg/kg CPhGs. Il-ġrieden nudi kollha ġew ittrattati kontinwament għal 15-il jum.

1.5.4 Kejl tal-volum u l-piż tat-tumur fi ġrieden nudi li jkollhom osteosarkoma reżistenti għall-mediċina

Il-volum tat-tumur tal-ġrieden nude f'kull grupp ġie osservat u rreġistrat, u tpinġi l-kurvi tat-tkabbir tat-tumur. Erbgħa u għoxrin siegħa wara l-aħħar amministrazzjoni, ġrieden ġew sagrifikati permezz ta 'dislokazzjoni ċervikali, tumuri ġew dissected u miżuna, u r-rata ta' inibizzjoni tat-tumur ġiet ikkalkulata. Il-formuli huma kif ġej:Volum tat-tumur=1/2 (dijametru tat-tumur twil × dijametru qasir tat-tumur²)Rata ta' inibizzjoni tat-tumur=[(piż medju tat-tumur tal-grupp tal-mudell - piż medju tat-tumur tal-grupp tat-trattament)/piż medju tat-tumur tal-grupp tal-mudell] × 100%

1.5.5 Sejbien ta' livelli tas-serum IL-2 u TNF- mill-ELISA

Is-serum ġie estratt minn ġrieden nude f'kull grupp, u l-livelli tas-serum ta' IL-2 u TNF- ġew skoperti mill-ELISA skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

1.5.6 Sejbien ta 'apoptożi taċ-ċelluli tat-tumur permezz ta' ċitometrija tal-fluss

It-tessuti tat-tumur minn kull grupp ġew ikkapuljati, mitħun, iffiltrati, ċentrifugati, u ċ-ċelluli ħomor tad-demm ġew lysed biex jippreparaw sospensjonijiet ta 'ċellula waħda f'tubi ċentrifugi. Il-konċentrazzjoni taċ-ċelluli ġiet aġġustata għal 1 × 10⁶ / mL, iċ-ċelloli ġew sospiżi mill-ġdid f'100 μL Binding Buffer, miżjuda ma '5 μL AV-FITC u PI, inkubati fid-dlam għal 15-il minuta, ċentrifugati, sospiżi mill-ġdid, u miżjuda b'400 μL Binding Buffer. Wara t-taħlit, il-kampjuni ġew skoperti permezz taċ-ċitometrija tal-fluss.

1.5.7 Sejbien ta' p-AKT, p-mTOR, p-PI3K u proteini apoptotiċi Bcl-2, Bax permezz ta' Western blot

Tessuti tat-tumur minn kull grupp ġew ikkapuljati u mqiegħda f'omoġenizzatur, lisati b'buffer tal-liżi tal-proteini u omoġenizzati. Wara liżi, is-supernatant inġabar biċ-ċentrifugazzjoni f'12000 r/min. Ġell elettroforetiku ġie ppreparat għas-separazzjoni tal-proteini, segwit minn trasferiment tal-membrana u imblukkar. Il-membrani ġew inkubati b'antikorpi primarji fi gradi 4 matul il-lejl, maħsula, u inkubati b'antikorpi sekondarji f'temperatura tal-kamra għal siegħa. Wara l-ħasil bil-buffer TBST fuq shaker, ġiet miżjuda soluzzjoni luminixxenti ECL għall-iżvilupp. Wara l-iffissar, saret analiżi tal-immaġni tal-ġel, u l-valuri tal-griż tal-faxxa tal-proteini ġew analizzati bl-użu ta 'softwer Image J.

1.6 Analiżi Statistika

L-analiżi statistika saret bl-użu tas-softwer GraphPad Prism 7 u SPSS 25.0. Id-dejta tal-kejl ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (x ± s). ANOVA f'direzzjoni waħda ntużat għal tqabbil bejn gruppi b'distribuzzjoni normali u varjanza omoġenja, u test mhux parametriku intuża għal data ta 'distribuzzjoni mhux normali. Paired t-test intuża biex janalizza r-rata ta 'inibizzjoni tat-tumur. P <0.05 tqieset statistikament sinifikanti.

 

 

Figura 1. Tqabbil morfoloġiku taċ-ċelloli MG-63 u MG-63/MTX (×200)

2 Riżultati

2.1 Osteosarkoma MG-63 Linja taċ-ċelluli reżistenti għall-mediċina (MG-63/MTX)

Iċ-ċelloli MG-63 oriġinali kibru b'mod aderenti b'daqs medju, l-aktar forma ta' magħżel, kultant irregolari, b'nuklei kbar u nukleoli ċari (Figura 1-A). MG-63/Ċelloli MTX kienu tawwalija, magħżel jew irregolari, bi psewdopodi ovvji (Figura 1-B).

2.2 Tqabbil tat-tkabbir tat-tumur fil-ġrieden ta 'kull grupp

Minn jum 6 ta 'gavage, il-volum tat-tumur fil-gruppi ta' trattament kien sinifikament iżgħar minn dak fil-grupp mudell. Fil-21 jum ta 'gavage, tqabblu tumuri minn 3 ġrieden nude f'kull grupp (Figura 2-A). Il-volum tat-tumur fil-gruppi kollha tat-trattament kien iżgħar minn dak fil-grupp mudell (P <0.001). Il-volum tat-tumur fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L u MTX-CPhGs kien iżgħar minn dak fil-grupp MTX (P <0.001). Fost il-gruppi CPhGs, il-volum tat-tumur naqas gradwalment maż-żieda fil-konċentrazzjoni tad-droga, u d-differenza mill-grupp mudell saret aktar sinifikanti (Figura 2-B). Ir-riżultati indikaw li CPhGs jistgħu jinibixxu b'mod sinifikanti t-tkabbir tat-tumur fil-ġrieden li jġorru tumuri reżistenti għall-mediċina, u l-effett inibitorju kien korrelatat b'mod pożittiv mal-konċentrazzjoni ta 'CPhGs.

Meta mqabbel mal-grupp mudell, il-piż medju tat-tumur fil-gruppi MTX, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L u MTX-CPhGs naqas b'mod sinifikanti (P ​​<0.001). Meta mqabbel mal-grupp MTX, ir-rata ta 'inibizzjoni tat-tumur fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L u MTX-CPhGs żdiedet b'mod sinifikanti, u fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M u CPhGs-L, ir-rata ta' inibizzjoni tat-tumur żdiedet b'mod dipendenti fuq id-doża (T1 b'konċentrazzjoni ta 'mediċina dejjem tiżdied).

2.3 Effetti tas-CPhGs fuq il-livelli tas-serum IL-2 u TNF- fil-ġrieden nude li jġorru tumuri reżistenti għall-mediċina

Meta mqabbel mal-grupp mudell, il-livell ta 'TNF-serum fil-grupp MTX żdied b'mod sinifikanti (P ​​<0.05), u l-livelli ta' TNF- u IL-2 fis-serum fil-grupp MTX-CPhGs żdiedu b'mod sinifikanti (P ​​< 0.01). Barra minn hekk, il-livelli ta’ TNF fis-serum fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M u CPhGs-L kienu ogħla b’mod sinifikanti minn dawk fil-grupp mudell (P < 0.001), il-livell ta’ IL-2 fis-serum fil-grupp CPhGs-M żdied (P < 0.01), u l-livelli ta’ IL-2 CPhG-L fis-serum żdiedu fil-gruppi CPh-L u CPhG-L aktar b'mod sinifikanti (P <0.001). Meta mqabbel mal-grupp MTX, il-livelli tas-serum TNF- u IL-2 fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L u MTX-CPhGs żdiedu b'mod sinifikanti (P ​​<0.001) (Tabella 2). Dan jissuġġerixxi li CPhGs jistgħu jtejbu l-funzjoni immuni intrinsika fi ġrieden OS li jġorru tumuri reżistenti għall-mediċina billi jirregolaw l-espressjoni ta 'TNF- u IL-2.

 

Figura 2. Tqabbil tal-volumi tat-tumur fil-ġrieden nudi b'tumuri f'kull grupp wara l-intervent (x ± s, n=3, mm3)

Nota: Grupp mudell; grupp MTX; Grupp CPhGs-L; grupp ta ' glycosides totali ta ' doża baxxa ta ' Cistanche deserticola phenylethanol; Grupp CPhGs-M; grupp ta ' glycosides totali ta ' doża medja Cistanche deserticola phenylethanol; Grupp CPhGs-H; grupp ta 'glycosides totali ta' doża għolja ta 'Cistanche deserticola phenylethanol; Grupp MTX-CPhGs; meta mqabbla mal-grupp Mudell, ***P<0.001; compared with the MTX group, ###P<0.001

Tabella 1. Effett ta 'Cistanche phenylethanoid glycosides fuq il-piż tat-tumur fil-ġrieden nude li jġorru tumur (n=3)

Grupp	Piż medju tat-tumur (g)	Rata ta' inibizzjoni (%)
Mudell	0.79 ± 0.04	-
MTX	0.49 ± 0.03	35.73 ± 4.61
CPhGs–L	0.33 ± 0.01	58.55 ± 4.02
CPhGs–M	0.31 ± 0.02	60.50 ± 0.98
CPhGs–H	0.28 ± 0.01	64.58 ± 1.77
MTX–CPhGs	0.18 ± 0.01	75.77 ± 1.78

*Nota: Il-grupp "Mudell" m'għandu l-ebda rata ta 'inibizzjoni rrappurtata fit-tabella tas-sors (muri bħala sing em). Jekk trid, nista 'nżid ukoll il-markaturi tas-sinifikat (eż., *, ##, eċċ.) bħala noti ta’ qiegħ il-paġna eżattament bħal fil-figura.

2.4 Effetti tas-CPhGs fuq l-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur fi ġrieden nude li jġorru tumuri reżistenti għall-mediċina

Meta mqabbel mal-grupp mudell, ir-rata ta 'apoptosi tat-tumur fil-gruppi MTX u CPhGs-L żdiedet b'mod sinifikanti (P ​​<0.05), u dik fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M u MTX-CPhGs żdiedet b'mod aktar sinifikanti (P ​​<0.001). Meta mqabbel mal-grupp MTX, ir-rata ta 'apoptosi tat-tumur fil-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M u MTX-CPhGs żdiedet (P <0.001) (Figura 3, Tabella 3). Ir-riżultati ta 'hawn fuq juru li CPhGs jistgħu jippromwovu l-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur fil-ġrieden nude li jġorru tumuri reżistenti għall-mediċina.

2.5 Effetti ta 'CPhGs fuq l-espressjoni ta' p-AKT, p-mTOR u p-PI3K fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude li jġorru tumur reżistenti għall-mediċina

Meta mqabbel mal-grupp mudell, l-espressjoni p-AKT fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude reżistenti għall-mediċina fil-grupp MTX naqset b'mod sinifikanti (P ​​<0.001). Il-livelli ta 'espressjoni ta' p-AKT, p-mTOR u p-PI3K fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude fil-gruppi MTX-CPhGs, CPhGs-H u CPhGs-M naqsu b'mod sinifikanti (P <0.001), l-espressjoni p-AKT fil-grupp CPhGs-L naqset (P < 0.001), u naqset l-espressjoni p < 0.001 aktar. b'mod sinifikanti (P <0.001). Meta mqabbel mal-grupp MTX, il-livelli ta 'espressjoni ta' p-AKT, p-mTOR u p-PI3K fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude fil-gruppi MTX-CPhGs u CPhGs-H naqsu wkoll b'mod sinifikanti (P <0.001), l-espressjoni p-AKT fil-grupp CPhGs-M kienet kemmxejn mnaqqsa l-espressjoni p-PI3.0. naqset b'mod aktar sinifikanti (P <0.001), l-espressjoni p-AKT fil-grupp CPhGs-L naqset (P <0.01), u l-espressjoni p-mTOR u p-PI3K naqset b'mod aktar sinifikanti (P <0.001) (Figura 4-A sa 4-D).

 

Tabella 2. Livelli ta' espressjoni ta' TNF- u IL-2 fis-serum f'kull grupp (n=3)

Grupp	TNF- (pg/mL)	IL-2 (pg/mL)
Mudell	79.90 ± 3.60	28.36 ± 2.35
MTX	93.71 ± 2.86*	28.87 ± 1.60
MTX–CPhGs	118.00 ± 3.78***###	40.92 ± 1.54***###
CPhGs–H	122.76 ± 2.97***###	45.03 ± 4.95***###
CPhGs–M	117.52 ± 3.60***###	41.44 ± 3.87***###
CPhGs–L	124.19 ± 8.37***###	44.77 ± 2.31***###

 

Noti (kif muri fil-figura):Mudell=grupp tal-mudelli; grupp MTX=methotrexate; CPhGs–L/M/H=grupp ta' glycosides ta' Cistanche phenylethanoid b'doża baxxa/medja/għolja; MTX–CPhGs=grupp ta' kombinazzjoni. Sinifikat vs Mudell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

2.6 Effetti ta 'CPhGs fuq l-espressjoni ta' Bcl-2 u Bax fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude li jġorru tumuri reżistenti għall-mediċina

Meta mqabbel mal-grupp mudell, l-espressjoni Bax fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude reżistenti għall-mediċina fil-gruppi kollha ta' trattament żdiedet b'mod sinifikanti (P ​​<0.001), l-espressjoni Bcl-2 fil-grupp MTX żdiedet (P <0.05), u l-espressjoni Bcl-2 f'MTX-CPhGs, CPhGs-H u CPhGs-H u CPhGs-H u CPhGs naqset b'mod sinifikanti <0. Meta mqabbel mal-grupp MTX, l-espressjoni Bcl-2 fit-tessuti tat-tumur tal-gruppi CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L u MTX-CPhGs naqset b'mod sinifikanti (P <0.001), u l-espressjoni ta 'Bax fil-gruppi CPhGs-H u CPhGs-M żdiedet b'mod sinifikanti (Figura 0401 <) 4-E, 4-F). Tindika wkoll li CPhGs jistgħu jippromwovu l-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur fil-ġrieden nude li jġorru t-tumuri reżistenti għall-mediċina billi jirregolaw l-espressjoni ta 'Bcl-2 u Bax.

 

 

3 Diskussjoni

Ir-reżistenza għall-kimoterapija u l-immunosoppressjoni f'pazjenti OS huma ostakoli fit-trattament kliniku tal-OS. Fil-preżent, il-mekkaniżmu ewlieni tal-mediċini kontra t-tumur huwa li jippromwovi l-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur, li tirrifletti direttament l-effikaċja tal-kimoterapija; min-naħa l-oħra, l-immunità tal-ġisem hija garanzija qawwija għall-pazjenti biex jittolleraw mediċini kimoterapewtiċi. Għalhekk, huwa kruċjali li jiġi studjat kif jippromwovi b'mod effettiv l-apoptożi ta 'ċelluli OS reżistenti għall-mediċina u jitnaqqas l-indeboliment immuni kkaġunat mill-kimoterapija.

Figura 3. Ir-rata ta' apoptożi taċ-ċelluli tat-tessut tat-tumur f'kull grupp ta' ġrieden (n=3, %)

Nota: A. Grupp mudell; B. Grupp Methotrexate (MTX); C. Methotrexate ikkombinat ma 'grupp ta' glikożidi totali ta 'Cistanche deserticola phenylethanol (MTX-CPhGs); D. Grupp ta' glycosides totali ta' Cistanche deserticola phenylethanol b'doża għolja (CPhGs-H); E. Doża medja Cistanche deserticola phenylethanol glycosides totali (CPhGs-M) grupp; F. Doża baxxa ta 'Cistanche deserticola phenylethanol glycosides totali (CPhGs-L).

Tabella 3. Rata ta' apoptosi taċ-ċelloli tat-tessut tat-tumur f'kull grupp (n=3)

Grupp	Rata ta' apoptożi (%)
Mudell	14.47 ± 1.10
MTX	19.77 ± 1.32*
MTX–CPhGs	29.21 ± 0.77***###
CPhGs–H	31.66 ± 1.93***###
CPhGs–M	30.13 ± 2.16***###
CPhGs–L	22.49 ± 3.02**

Noti (kif muri fil-figura):Mudell=grupp tal-mudelli; grupp MTX=methotrexate; CPhGs–L/M/H=grupp ta' glycosides ta' Cistanche phenylethanoid b'doża baxxa/medja/għolja; MTX–CPhGs=grupp ta' kombinazzjoni. Sinifikat vs Mudell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

 

 

Cistanche deserticolagħandu effetti farmakoloġiċi li jsaħħan il-kliewi u jimlew l-essenza, xarrab l-imsaren, kontra l-ossidazzjoni u jtejjeb l-immunità. Zhang et al. [11] irrapporta fl-1988 li l-estratt milwiema taCistanche deserticolajista 'jtejjeb il-funzjoni immuni u jistimula l-iżvilupp ta' organi immuni bħal timu fil-ġrieden. Sussegwentiin vivostudji aktar sabu liCistanchepolysaccharides kellhom effetti kontra l-kanċer tal-pulmun u kontra s-sarkoma [12]. Studji wrew li CPhGs, il-komponent ewlieni taCistanche deserticola, għandu effetti farmakoloġiċi bħal anti-ossidazzjoni, anti-aging, newroprotezzjoni, titjib immuni, protezzjoni tal-fwied u trattament ta 'disturbi spermatoġeniċi [13], u jeżerċita wkoll effetti antitumorali u li jsaħħu l-immunità fuq diversi tumuri malinni inklużi kanċer tal-fwied, kanċer tal-pulmun, kanċer tas-sider u kanċer tal-ovarji [14]. L-istudju preċedenti tagħna sab liCistanche deserticolajista 'jippromwovi l-apoptożi ta' ċelluli OS reżistenti għall-mediċinain vitrobilli tnaqqas l-espressjoni tal-proteini MRP1 u mutanti P53 [15]. Dan l-istudju sab li l-volum u l-piż tat-tumur fi gruppi ta 'trattament kienu iżgħar minn dawk fil-grupp mudell, u l-volum tat-tumur fi gruppi ta' konċentrazzjoni ta 'CPhGs differenti u grupp MTX-CPhGs kien ukoll iżgħar minn dak fil-grupp MTX, b'rata ta' inibizzjoni tat-tumur miżjuda. Dan jindika li CPhGs jistgħu jinibixxu b'mod sinifikanti t-tkabbir tat-tumur fil-ġrieden li jġorru tumuri OS reżistenti għall-mediċina, u l-effett inibitorju huwa korrelatat b'mod pożittiv mal-konċentrazzjoni ta 'CPhGs, li hija bażikament konsistenti mal-istudju minn Hou et al. [16] dwar l-effett inibitorju ta 'CPhGs fuq tumuri trapjantati taħt il-ġilda fil-ġrieden li jġorru l-epatoma H22.

Il-funzjoni immuni hija relatata mill-qrib mal-okkorrenza u l-iżvilupp tat-tumur. IL-2 huwa tip ta' fattur ta' tkabbir taċ-ċelluli fis-sistema immuni, li jista' jtejjeb il-funzjoni immuni tal-ġisem billi jippromwovi l-proliferazzjoni u d-divrenzjar taċ-ċelluli T, u jipproduċi ċelloli immuni b'attività antitumorali [17]. TNF- jeżerċita effetti antitumorali billi jorbot mar-riċetturi biex jinduċi l-apoptożi taċ-ċelluli tat-tumur, itejjeb il-funzjoni immuni tal-ospitanti, jaġixxi fuq iċ-ċelloli endoteljali vaskulari tat-tumur, iżid il-permeabilità vaskulari, jinduċi mewt programmata, u sussegwentement jikkawża emorraġija tat-tumur u nekrożi [18]. Analiżi tal-espressjoni tas-serum IL-2 u TNF- fil-ġrieden ta 'kull grupp wriet li l-livelli ta' espressjoni tas-serum TNF- u IL-2 fi ġrieden mudell li jġorru tumur ta 'gruppi differenti ta' konċentrazzjoni CPhGs u grupp MTX-CPhGs żdiedu b'mod sinifikanti. Dan jissuġġerixxi li CPhGs jistgħu jtejbu l-funzjoni immuni fil-ġrieden li jġorru tumuri OS reżistenti għall-mediċina billi jirregolaw l-espressjoni ta 'TNF- u IL-2, jinibixxu l-proliferazzjoni ta' ċelluli ta 'osteosarkoma reżistenti għall-mediċina, u b'hekk jeżerċitaw effetti antitumorali.

 

Figura 4. Dijagramma tar-riżultat tal-elettroforeżi tal-proteini p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2, u Bax fit-tessut tat-tumur tal-ġrieden nude (x ± s, n=3, mm3)

Nota: Mudell, grupp ta 'mudelli; MTX, grupp methotrexate; MTX-CPhGs, methotrexate flimkien ma 'grupp ta' glikosidi totali ta 'Cistanche deserticola phenylethanol; CPhGs-L, grupp ta 'glycosides totali ta' Cistanche deserticola phenylethanol b'doża baxxa; CPhGs-M, grupp ta ' glycosides totali ta ' doża medja Cistanche deserticola phenylethanol; CPhGs-H, grupp ta 'glycosides totali ta' doża għolja ta 'Cistanche deserticola phenylethanol; A. Riżultati Western Blot tal-proteini p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, Bcl-2, u Bax; B. p-mTOR; C. p-PI3K; D. p-AKT; E. Bcl-2; F. Bax; Meta mqabbel mal-grupp mudell, * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.001; Meta mqabbel mal-grupp MTX, # P < 0.05, ## P < 0.01, ### P < 0.001.

 

Il-fosforilazzjoni tal-AKT fil-mogħdija tas-sinjalar PI3K/AKT/mTOR tista’ tirregola direttament jew indirettament serje ta’ fatturi relatati mal-apoptożi bħall-familja Bcl-2, inibitur tal-proteina tal-apoptożi marbuta mal-X (XIAP), minuta doppja tal-ġurdien 2 (MDM-2) u proteina X assoċjata mal-Bcl-2 (Bax) [19]. Il-mogħdija tas-sinjalar PI3K/AKT/mTOR attivata b'mod anormali tista 'tirregola l-espressjoni tat-trasportaturi tal-membrana ABCB1 u ABCC1, u b'hekk tnaqqas l-effikaċja tal-kimoterapija u timmedja r-reżistenza OS għal mediċini kimoterapewtiċi [20]. Varjetà ta 'monomeri tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża jistgħu jippromwovu l-apoptosi taċ-ċelluli OS billi jinibixxu l-mogħdija tas-sinjalar PI3K/AKT/mTOR, bħal procyanidin B2, quercetin, luteolin uLactarius deliciosuspolisakkaridi [21]. Dan l-istudju sab li taħt l-azzjoni waħda ta 'MTX, l-espressjoni tal-proteina p-AKT naqset b'mod sinifikanti, filwaqt li l-espressjoni tal-proteina p-mTOR u p-PI3K ma wriet l-ebda differenza sinifikanti, li jindika li MTX għandu ftit effett fuq il-mogħdija tas-sinjalar PI3K/AKT/mTOR fit-tessuti tat-tumur ta' ġrieden nude reżistenti għall-mediċina. Madankollu, l-espressjoni ta 'proteini p-AKT, p-mTOR u p-PI3K fit-tessuti tat-tumur ta' ġrieden nudi OS reżistenti għad-droga li jġorru tumuri fi gruppi differenti ta 'konċentrazzjoni ta' CPhGs u grupp MTX-CPhGs kienet aktar baxxa minn dik fil-grupp mudell, u wkoll b'mod sinifikanti aktar baxx minn dik fil-grupp MTX, u żvela li CPhGs għandu effett inibitorju / inibitorju AKT / PITOR3K sinifikanti fuq il-passaġġ PI3K. ċelluli OS reżistenti għall-mediċina. L-iskoperta taċ-ċitometrija tal-fluss tal-apoptosi taċ-ċelluli tat-tumur wera li r-rata tal-apoptosi tat-tumur f'kull grupp żdiedet b'mod sinifikanti wara l-intervent tad-droga. Is-sejbien ta 'espressjoni tal-proteina Bax u Bcl-2 wera li l-espressjoni ta' Bax fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden nude li jġorru tumuri OS reżistenti għad-droga fi gruppi differenti ta' konċentrazzjoni ta 'CPhGs u grupp MTX-CPhGs żdiedet b'mod sinifikanti, filwaqt li l-espressjoni ta' Bcl-2 fit-tessuti tat-tumur ta 'ġrieden mudell f'MTX-CPhGs, CPhGs-CPhGs-gruppi naqset b'mod sinifikanti u grupp H-M. Dan jissuġġerixxi li ċerta konċentrazzjoni ta 'CPhGs tista' tippromwovi l-apoptożi ta 'ċelluli OS reżistenti għall-mediċinain vivobilli jinibixxi l-mogħdija tas-sinjalar PI3K/AKT/mTOR, l-espressjoni Bcl-2 li tirregola 'l isfel u l-espressjoni Bax li tirregola 'l fuq.

Bħala konklużjoni, CPhGs jistgħu jippromwovu l-apoptożi ta 'ċelluli OS reżistenti għall-mediċina u jinibixxu t-tkabbir tat-tumurin vivo, u l-mekkaniżmu tiegħu jista 'jinkiseb billi jinibixxi l-mogħdija ta' sinjalazzjoni PI3K / AKT / mTOR u jirregola l-espressjoni ta 'Bcl-2 u Bax. Sadanittant, CPhGs jistgħu jtejbu l-funzjoni immuni fi ġrieden OS reżistenti għall-mediċina li jġorru tumuri billi jirregolaw il-livelli ta 'espressjoni ta' TNF- u IL-2, u b'hekk jeżerċitaw effetti sinerġistiċi kontra t-tumur. Madankollu, il-potenzjal tal-applikazzjoni klinika tiegħu għad jeħtieġ aktar esplorazzjoni u riċerka.

 

Referenzi

1 Zhang C, Hu J, Zhu K, et al. Sopravivenza, kumplikazzjonijiet u riżultati funzjonali ta 'megaprostheses kkonsolidati għal osteosarkoma ta' grad għoli madwar l-irkoppa[J]. Int Orthop, 2018, 42(4):927-938. DOI:10.1007/s00264-018-3770-9.2 Liu Q, Xu R, Xu X, et al. Karatteristiċi u sinifikat tas-sottosettijiet tal-limfoċiti T fid-demm periferali tal-ġrieden tal-osteosarkoma[J]. Transl Cancer Res, 2022, 11(6):1503-1509. DOI:10.21037/tcr22-264.3 Wu W, Jing DD, Cao L, et al. Stat attwali u prospetti ta 'immunoterapija għall-osteosarkoma[J]. Ir-Riċerka tal-Kanċer dwar il-Prevenzjoni u t-Trattament, 2022, 49(7):721-726. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2022.21.1281.4 Wang CZ, Liu YF, Zhang XQ, et al. Progress tar-riċerka dwar il-mekkaniżmu ta 'astragaloside Ⅳ li jirregola l-azzjoni kontra t-tumur taċ-ċelloli immuni[J]. Arkivji Ċiniżi tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2024, 42(11):145-149. DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.11.029.5 Zhang J, Yu XH, Yan YG, et al. Sinjali PI3K/Akt fl-osteosarkoma[J]. Clin Chim Acta, 2015, 444:182-192. DOI:10.1016/j.cca.2014.12.041.6 Hu Q, You SP, Liu T, et al. Investigazzjoni dwar l-effett kontra l-kanċer tal-fwied ta' cistanche[J]. Karċinoġenesi, Teratoġenesi u Mutaġenesi, 2018, 30(3):194-199. DOI:10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.006.7 Qi XX, You SP, He ZX, et al. Effett ta 'Cistache deserticola phenylethanol glycoside fuq il-proliferazzjoni u l-apoptożi ta' ċelloli HepG2 in vitro[J]. Ġurnal tal-Università Medika ta 'Xinjiang, 2021, 44(9):1041-1047. DOI:10.3639/j.issn.1009-5551.2021.09.012.8 Panaampon J, Sasamoto K, Kariya R, et al. Stabbiliment ta 'ġrieden nude nieqsa minn ċelluli NK u l-applikazzjoni tagħhom għal xenografts ta' tumuri umani[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2021, 22(4):1069-1074. DOI:10.31557/APJCP.2021.22.4.1069.9 Yu CB, Sun P, Zhang XW, et al. L-istudju tal-mudell tal-annimali tal-xenograft tal-kanċer tal-frixa fil-ġrieden nude[J]. Progress fil-Bijomediċina Moderna, 2012, 12(9):1648-1650. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.10 Xu XR, Wang N, Sun MM, et al. Effetti differenti fil-ġrieden mudell ta 'osteosarkoma b'acupuncture f'punt wieħed u kompatibilità ta' acupoints[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 2020, 35(5):2271-2276. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.11 Zhang HQ, Zhang AX, Du NS, et al. Effetti ta' Cistanche deserticola fuq il-funzjoni immuni tal-ġrieden[J]. Ġurnal Ċiniż tal-Mediċina Tradizzjonali u tal-Punent Integrata, 1988, (12):736-737, 710. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZZXJ198812019.htm.12 Zhang HQ, Xu AH, Li DD. Effetti farmakoloġiċi tal-polisakkaridi Cistanche fuq tumuri u ġrieden li jġorru tumuri[J]. Ġurnal Ċiniż tal-Mediċina Tradizzjonali u tal-Punent Integrata, 1997, (S1): 155-156, 294. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=mg_qcPBBapnmsDqon66yc8-zI2VqwJgixywPNSnAl0qboPnZqB4FNuT0bsHSSvs0Dn72KJtZe__Sv82Jt0bsHS -S-Wcbp5ClislhRETaTYT6KGBMKP3_EreGXg3-BH52Itk0rqWiNksajNxzld06uvdfRzCDj-utLfgfANyySxJMHM-g==&uniplatform==NZKPT DOI:104&langu} Xue HY, Jiao CY, Yao J. L-istatus attwali ta 'effetti farmakoloġiċi ta' glycosides ta 'Cistanches Herba [J]. Il-Ġurnal Ċiniż tal-Farmakoloġija Klinika, 2018, 34(4):486-488. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.04.026.14 Tang Y, Wu JQ. Effetti kontra t-tumur ta' phenylethanoid glycosides imċaħħda minn Cistanche deserticola[J]. Bijoteknoloġija kurrenti, 2023, 13(3):399-405. DOI:10.19586/j.2095-2341.2023.0040.15 Xu W, Ding JX, Xie XW, et al. Effett ta 'Cistanche deserticola fuq ċelluli ta' osteosarkoma reżistenti għall-kimoterapija u espressjoni ta 'MRP1 u P53[J]. Ġurnal tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża Li-shizhen, 2021, 32(3):551-554. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2021.03.11.16 Hou XT, Liu T, Su DQ. Effett kontra t-tumur tal-phenylethanol glycosides minn Cistanche deserticola fuq ġrieden li jġorru tumur H22[J]. Ġurnal tat-Tossikoloġija, 2021, 35(3):231-235, 240. DOI:10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010.17 Zhang XY, Wang D, Fu CX, et al. Progress tar-riċerka dwar it-trattament ta' tumuri b'interleukin-2[J]. Oncology Progress, 2024, 22(6):581-585, 618. DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2024.22.06.01.18 Gao SY, Li D. Avvanzi tar-riċerka fil-fattur tan-nekrożi tat-tumur u l-kanċer[J]. Bullettin Farmakoloġiku Ċiniż, 2020, 36(9):1209-1213. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2020.09.006.19 Zhou H, Hai GF, Zhang T, et al. Il-progress tar-riċerka tal-mogħdija PI3K/AKT/mTOR u l-inibituri mmirati tagħha fit-trattament tal-kanċer[J]. China Pharmaceuticals, 2023, 32(5):127-135. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.05.030.20 Liu YJ, Cao YH, Kuang R. Progress tar-riċerka tal-mekkaniżmu tar-reżistenza għal ħafna mediċini tat-tumur u t-treġġigħ lura mill-mediċina tradizzjonali Ċiniża[J]. Ġurnal Farmaċewtiku Ċiniż, 2024, 59(7):561-570. DOI:10.11669/cpj.2024.07.001.21 Yang HD, Li N, Xie XW, et al. Monomeri tal-mediċina Ċiniża fit-trattament tal-osteosarkoma billi jirregolaw il-mogħdija tas-sinjalar PI3K/Akt/mTOR: reviżjoni[J]. Ġurnal Ċiniż ta 'Formuli Mediċi Tradizzjonali Sperimentali, 2023, 29(3):254-262. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221527.