Id-Defiċjenza ta' Klotho Tintensifika l-Espressjoni Indotta mill-Ipoksja Ta' IFN-/Permezz ta' Regolazzjoni Ta' RIG-I fil-Kliewi
Mar 25, 2022
Astratt L-ipoksja hija triq komuni għall-progressjoni tal-istadju finalimard tal-kliewi.Il-ġene I(RIG-I) li jinduċibbli mill-aċidu retinojku jikkodifika RNA helicase li jagħraf viruses inkluż SARS-CoV2, li huwa responsabbli għall-produzzjoni ta 'interferon (IFN)-a/ biex jipprevjeni t-tixrid ta' infezzjoni virali. Riċentement, l-attivazzjoni RIG-l instabet taħt kundizzjonijiet iposiċi, u n-nuqqas ta 'klotho intwera li jintensifika l-attivazzjoni ta' RIG-I fl-imħuħ tal-ġurdien. Madankollu, ir-rwoli ta 'dawn il-funzjonijiet fl-infjammazzjoni tal-kliewi jibqgħu elużivi. Hawnhekk, għal studju in vitro, l-espressjoni ta’ RIG-I u IFN-a/ ġiet eżaminata fil-far normalikliewi(NRK)-52Ċelloli E inkubati taħt kundizzjonijiet iposiċi (1 fil-mija O2). Sussegwentement, siRNA mmirat lejn RIG-I jew siRNA scrambled ġie trasfettat f'ċelloli NRK52E biex jeżamina l-espressjoni ta 'RIG-I u IFN-a/ß taħt kundizzjonijiet iposiċi. Aħna investigajna wkoll il-livelli ta 'espressjoni ta' RIG-I u IFN-a/ fi 33humankliewikampjuni tal-bijopsija djanjostikati b'nefropatija lgA. Għal studju in Vivo, indottajna l-ipoksja renali billi kklampjaw l-arterja renali għal 10 min fi ġrieden tat-tip selvaġġ (ġrieden WT) u ġrieden Klotho-knockout (KIT / ġrieden). L-inkubazzjoni taħt kundizzjonijiet iposiċi żiedet l-espressjoni ta 'RIG-lI u IFN-a/ fiċ-ċelloli NRK52E. Ir-regolazzjoni 'l fuq tagħhom ġiet inibita f'ċelluli NRK52E trasfettati b'siRNA mmirati lejn RIG-I. F'pazjenti b'nefropatija IgA, tbajja' immunoistokimika ta' kampjuni ta' bijopsija renali wriet li l-espressjoni ta' RIG-I kienet korrelatata ma' dik ta' IFN-a/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">kliewita 'ġrieden hypoxic WT u aktar upregulation kienet osservata fil-ġrieden hypoxic. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-ipoksja tinduċi l-espressjoni ta’ IFN-a/ permezz tal-upregulation ta’ RIG-I u li d-defiċjenza ta’ klotho tintensifika din l-espressjoni kkaġunata mill-ipoksja f’kliewi.
Kliem ewlieni:mard tal-kliewi; ċelluli tal-kliewi; sostituzzjoni tal-kliewi; ħsara renali; kliewi
CISTANCHE SE TTEJB IL-FUNZJONI TAL-KLIEI/RENALI
IntroduzzjoniKronikamard tal-kliewi(CKD) affettwa 697.5 miljun ruħ globalment fl-2017 [1], għalhekk hija rikonoxxuta sew bħala tħassib kbir għas-saħħa. Biex jittardja l-progressjoni tas-CKD, inibituri tal-mogħdija tas-sistema renin-angiotensin-aldosterone (RAAS) jintużaw f'ambjent kliniku [2,3]. Madankollu, l-effetti ta’ benefiċċju tagħhom huma limitati u ħafna pazjenti eventwalment jeħtieġu terapija ta’ sostituzzjoni tal-kliewi[4]. Patoloġikament, infjammazzjoni kronika u fibrożi interstizjali huma l-karatteristiċi komuni ta 'CKD, irrispettivament mill-marda primarja [5]. Għalkemm il-fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni (TGF)- 1 għandu rwol ċentrali fl-iżvilupp tal-fibrożi interstizjali [6-8], studji preċedenti wrew li l-infiltrazzjoni taċ-ċelloli infjammatorji hija responsabbli għall-produzzjoni ta' TGF{{12} } [9]. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-infjammazzjoni hija l-avveniment upstream tal-fibrożi interstizjali, u li l-infjammazzjoni hija mira terapewtika kandidata għal CKD.
L-ipoksja hija kundizzjoni li fiha ossiġnu insuffiċjenti jagħmilha fit-tessuti. Bħala rispons ċellulari għall-ipoksja, fatturi li jinduċu mill-ipoksja (HIF) għandhom rwoli importanti fil-prevenzjoni tal-ħsara fit-tessuti [10-12]. Madankollu, ipoksja severa twassal għal mard vaskulari akut, bħal puplesija [13], anġina pectoris[14], u mard tal-arterji periferali [15]. Riċentement, ġie rrappurtat li l-ipoksja kronika, bħall-apnea tal-irqad, tikkontribwixxi wkoll għall-iżvilupp ta 'diversi mard [16]. Rigward il-kliewi, Allegatament l-ipoksja tintensifika mal-progressjoni tal-istadju tas-CKD u bħalissa hija kkunsidrata patofiżjoloġija komuni li twassal għall-istadju finalimard tal-kliewi[17]. Kif issemma hawn fuq, l-infjammazzjoni hija kkunsidrata bħala avveniment upstream, għalhekk il-mekkaniżmu li bih l-ipoksja jinduċi infjammazzjoni għandu jiġi ċċarat fil-livell molekulari. L-infjammazzjoni hija kkaratterizzata minn uġigħ, sħana, ħmura, nefħa, u telf tal-funzjoni[18]. Madankollu, bażikament jiffunzjona biex jelimina l-kawża inizjali tal-ħsara taċ-ċelluli u biex ineħħi ċ-ċelloli nekrotiċi u t-tessut bil-ħsara. Fi kwalunkwe każ, l-infjammazzjoni mhijiex rispons speċifiku, u l-immunità innata hija kkunsidrata li tipparteċipa prinċipalment fil-proċess inizjali ta 'infjammazzjoni permezz tal-produzzjoni ta' interferon (IFN)- / [19]. Fost il-fatturi involuti fl-immunità intrinsika, ġene I li jinduċibbli mill-aċidu retinojku (RIG-I) huwa responsabbli għal risponsi immuni għal infezzjonijiet virali[20. Notevolment, studji reċenti wrew li l-ipoksja tirregola l-espressjoni RIG-I fil-moħħ u fil-fwied, li tirriżulta fil-produzzjoni ta 'IFN- / [21,22]. Madankollu, ir-rwol tal-ipoksja fl-espressjoni medjata minn RIG-I ta 'IFN- / B fil-kliewijibqa elużiv.
Klotho kien irrappurtat għall-ewwel darba bħala proteina kontra t-tixjiħ [23]. Tabilħaqq, il-ġrieden b'nuqqas ta' klotho juru ħajja mqassra akkumpanjata minn fenotipi li jixbħu t-tixjiħ tal-bniedem. B'kuntrast, ġrieden transġeniċi klotho juru ħajja estiża [24]. F'termini ta 'effetti renoprotective, instab li n-nuqqas ta' klotho tintensifika l-ħsara renali f'mudelli sperimentali ta 'mard renali, filwaqt li l-espressjoni żejda ta' klotho jew l-amministrazzjoni tal-proteina klotho ttejjebha [25]. Il-proteina Klotho teżisti fi tliet forom: koto tal-membrana, secreted, u intraċellulari. Fost dawn, klotho intraċellulari huwa rrappurtat li jrażżan l-espressjoni RIG-I flimkien ma 'infjammazzjoni [26], u tqajjem il-possibbiltà li d-defiċjenza ta' klotho taggrava r-regolazzjoni 'l fuq indotta mill-ipoksja ta' RIG-I u IFN- / inkliewi.Dawn is-sejbiet wassluna biex nissuponu li l-espressjoni ta' RIG-I u IFN- / żdiedet taħt kundizzjonijiet iposiċi f'linja ta 'ċelluli ta' ċelluli tubulari renali u li r-regolazzjoni 'l fuq indotta mill-ipoksja tagħhom ġiet intensifikata fil-ġrieden klotho-knockout (KI-7 ġrieden). F'dan l-istudju, nuru li l-ipoksja tirregola RIG-I kif ukoll IFN-a/ fil-far normalikliewiċelluli (NRK-52E) u kliewi tal-ġurdien. Aħna nuru wkoll li RIG-I huwa responsabbli għall-upregulation indotta mill-hyp-oxia ta 'IFN-c/ B. Fil-bniedem attwalikliewikampjuni minn pazjenti dijanjostikati b'nefropatija IgA, l-espressjoni RIG-I instabet li kienet korrelatata b'mod pożittiv ma 'IFN- / . Fl-aħħar nett, ir-regolazzjoni 'l fuq indotta mill-ipoksja ta' RIG-I u IFN-/ ġiet intensifikata fil-ġrieden KI-/-. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li d-defiċjenza ta’ klotho tintensifika l-espressjoni indotta mill-ipoksja ta’ IFN-/ permezz tal-upregulation ta’ RIG-I f’kliewi.
CISTANCHE SE TTEJJEB INSUFFIRIMENT TAL-KLIEI/RENALI
Materjali u metodi AnnimaliĠrieden maskili C57BL/6J tat-tip selvaġġ(WT)(ta' 8 ġimgħat u li jiżnu 20-25 g) inkisbu minn Charles River Laboratories Japan (Yokohama, il-Ġappun). Ġrieden maskili (età 6 ġimgħat u li jiżnu madwar 15 g) inxtraw minn CLEA Japan, Inc. Il-ġrieden kienu miżmuma fl-Istitut tax-Xjenza tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Università ta’ Hiroshima (Hiroshima, il-Ġappun), kif deskritt qabel [27]. L-esperimenti kollha ġew approvati minn il-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università ta’ Hiroshima (numri tal-permessi: A19-158 u 2019-156) u saru skont il-Linji Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa (NIH) dwar l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju. Il-ġrieden WT u KI-' ġew maqsuma fi grupp ta' kontroll jew grupp ta' ipoksja (n=5f'kull grupp). Kundizzjonijiet iposiċi ġew indotti mill-ikklampjar tal-arterja renali tax-xellug għal 10 min taħt anestesija ġenerali (0.3 mg/kg medetomidine, 4 mg/kg midazolam, u 5 mg/kg butorphanol)[28]. Ġrieden fil-grupp ta 'kontroll għaddew minn operazzjoni finta li kienet l-istess proċedura bħal dik fil-ġrieden fil-grupp ta' ipoksja, ħlief għan-nuqqas ta 'ligazzjoni ta' l-arterja. Wara 10 min ta 'ipoksja, il-ġrieden ġew ewtanizzati permezz ta' titqib tal-qalb u tagħhomkliewiġew maħsuda. Ipoksja tal-kliewiġie kkonfermat minn western blotting għall-espressjoni tal-eritropojetin (S1 Fig).
Kultura taċ-ċelluliIl-far normalikliewi(NRK)-52Ċelloli E nxtraw mill-American Type Culture Col. lection (Manassas, VA, USA). Iċ-ċelluli NRK-52E ġew ikkultivati f'RPMI-1640medju li kien fih 10 fil-mija tal-fetu serum bovin (FBS) (Nichirei Bioscience, Tokyo, Ġappun) u peniċillina/streptomy-cin (Nacalai Tesque, Kyoto, Ġappun). Dawn is-clls ġew miżrugħa fi platti tal-kultura ta '10cm. Wara li kibru sa subkonfluwenza, iċ-ċelloli ġew inkubati f'1 fil-mija O2Modular Incubator Chamber (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, USA) għal 30,60,90, u 120 min, Lisati taċ-ċelluli kollha ġew ippreparati u suġġetti. għall-analiżi tal-western blot. L-ipoksja taċ-ċelloli NRK-52E ġiet ikkonfermata permezz ta' western blotting għall-espressjoni HIF-1 (S2 Fig).
Trasfezzjoni ta' RIG-I siRNAIċ-ċelloli NRK52E ġew trasfettati b'20 nM siRNA mmirati lejn RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) jew siRNA ta' kontroll negattiv (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) bl-użu ta' Lipofectamine 2000 Transfection Scientific (Thermo Fisher Scientific) , skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Wara 43-45 siegħa, xi wħud minn dawn iċ-ċelloli ġew inkubati taħt kundizzjonijiet iposiċi (1 fil-mija O,) għal 30 min biex jiġi evalwat RIG-I. Iċ-ċelloli l-oħra nbidlu għal medium frisk. Wara 24 siegħa, dawn iċ-ċelloli ġew inkubati taħt can-ditions hypoxic (1 fil-mija O2) għal 60 u 120 min biex tikkonferma s-soppressjoni ta 'IFN-a/. Lisati taċ-ċelluli kollha ġew ippreparati u soġġetti għal analiżi tal-western blot.
Analiżi Western blotIl-ġbir tal-kampjuni u l-western blotting saru skont metodi deskritti qabel[29]. Antikorp monoklonali tal-fenek anti-RIG-I (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), antikorp poliklonali tal-fenek anti-IFN- 11 (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, USA), antikorp poliklonali tal-fenek anti-IFN- (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, USA), antikorp monoklonali tal-fenek anti-RIG-I (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), poliklonali tal-fenek antikorp anti-IFN- 2 (ab193055; Abcam, Cambridge, UK), antikorp poliklonali tal-fenek anti-IFN-(PA5-20390; Invitrogen), antikorp monoklonali tal-firien kontra l-klotho uman (KO603; TransGenic, Fukuoka , il-Ġappun), intużaw antikorp monoklonali tal-ġrieden anti- -actin (A5316; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA), u antikorp monoklonali tal-ġrieden anti{- -tubulina (T9026; Sigma-Aldrich) bħala antikorpi primarji. Bħala antikorpi sekondarji ntużaw immunoglobulina G tal-mogħoż kontra l-fenek konjugat bil-perossidażi tal-mogħoż (Dako, Glostrup, id-Danimarka) u l-immunoglobulina G tal-ġrieden kontra l-mogħoż (Dako). SuperSignal West Dura u s-sistema Pico (Thermo Fisher Scientific) intużaw biex jinstabu sinjali. L-intensità ta 'kull faxxa kienet imkejla permezz ta' softwer ImageJ (verżjoni 1.47y; Istituti Nazzjonali tas-Saħħa, Bethesda, MD, USA) u normalizzata għal-livell ta '-actin jew -tubulin.
CISTANCHE SE TTEJJEB IL-MARD TAL-KLIEWA/KLIEWA
Analiżi immunoistokimika tat-tessut tal-kliewi tal-ġriedenTbajja immunoistokimika twettqet skont metodi deskritti qabel [27]. Bħala antikorpi primarji, ġew applikati l-prodotti li ġejjin: antikorp monoklonali tal-fenek anti-RIG-I (#700366; Invitrogen), antikorp poliklonali tal-fenek anti-IFN- 2 (ab193055; Abcam), antikorp poliklonali tal-fenek anti-IFN- ( PA5-20390; Invitrogen), u antikorp monoklonali tal-firien kontra l-klotho uman (KO603; TransGenic).RIG-I-, IFN-a/ -, u żoni klotho-pożittivi ġew ikkwantifikati bħala l-medja ta’ 20 qasam magħżul b’mod każwali b’ Softwer ImageJ.
Ġbir ta' kampjuni kliniċi u dikjarazzjoni ta' etikaKampjuni tal-kliewi nkisbu permezz ta’ bijopsija renali fl-Isptar tal-Università ta’ Hiroshima bejn Awwissu 2014 u Novembru 2016 minn 33 pazjent li ġew dijanjostikati b’nefropatija IgA. Dan l-istudju żamm mal-prinċipji inkorporati fid-Dikjarazzjoni ta' Ħelsinki u ġie approvat mill-Kumitat tal-Etika tal-Università ta' Hiroshima(E-1718), Inkiseb kunsens infurmat fil-forma ta' opt-out fuq websajt(httns:/inzounaika Hiroshima-uaciplresearchl opt out.html).
Analiżi immunoistokimika tat-tessut tal-kliewi tal-bniedemL-immunostaining twettqet skont metodi deskritti qabel [27]. Intużaw l-antikorpi primarji li ġejjin: antikorp monodonal anti-RIG-I tal-fenek (#700366; Invitrogen), antikorp monoklonali tal-ġrieden anti-IFN-(sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), u fenek żoni poliklonali anti-IFN-antibody(PA5-20390; Invitrogen), RIG-I-u IFN-a/-żoni pożittivi ġew kwantifikati bħala l-medja ta 'ħames oqsma magħżula b'mod każwali b'softwer Image].
Analiżi statistikaIr-riżultati huma ppreżentati bħala medja ± devjazzjoni standard (SD). Il-korrelazzjonijiet ġew ikkalkulati bl-użu ta 'analiżi ta' rigressjoni univarjata, Għal paraguni multipli, użajna analiżi ta 'varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA) segwita mit-test t ta' Student b'korrezzjoni Bonferroni. Id-differenzi bejn iż-żewġ gruppi ġew analizzati bit-test t ta' Student.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Riżultati:L-ipoksja tirregola 'l fuq RIG-I u IFN-a/ f'linja taċ-ċelluli tal-firien taċ-ċelluli epiteljali tal-kliewiBiex nidentifikaw l-effett ta 'ipoksja fuq l-espressjoni ta' RIG-I u IFN- a/ in Vitro, għamilna analiżi tal-western blot għal dawn il-proteini f'ċelloli NRK-52E kkultivati taħt kundizzjonijiet iposiċi. Il-livell ta' proteina ta' RIG-I laħaq il-quċċata fi 30 min u mbagħad naqas gradwalment fiċ-ċelloli NRK -52E taħt stimulazzjoni iposika (Fig 1A). -52Ċelloli E bi stimulazzjoni iposika (Eig 1Band1C). Il-knockdown ta’ RIG-I inaqqas l-espressjoni ta’ IFN-a/ f’ċelloli NRK52E b’ipoksja Biex jiġi vvalutat jekk RIG-I jipparteċipax fl-espressjoni ta’ IFN-/ taħt kundizzjonijiet iposiċi, investigajna l-espressjoni tagħhom f’ċelloli NRK-52E trasfettati b’ RIG-I siRNA jew negattiv
kontroll siRNA. L-ewwel, aħna kkonfermajna l-effett knockdown ta 'RIG-siRNA fiċ-ċelloli NRK-52E. Western blotting għal RIG-I żvela li RIG-I siRNA downregolat l-espressjoni RIG-I fiċ-ċelloli NRK -52E jew bi jew mingħajr stimulazzjoni iposika (Eig 2A). Imbagħad investigajna r-rwol tar-regolazzjoni 'l fuq ta' RIG indotta mill-ipoksja. -I fl-espressjoni ta' IFN- /B fiċ-ċelloli NRK-52E bl-użu ta' siRNA RIG-I jew kontroll negattiv. RIG-siRNA irażżan l-espressjoni ta 'IFN- / f'NRK -52Ecells (Eig2Band2C).
RIG-I jikkorrelata mal-livelli ta' espressjoni ta' IFN-/ f'kampjuni tal-kliewi umani ta' nefropatija IgAAħna eżaminajna jekk il-livell ta' espressjoni ta' RIG-I huwiex assoċjat ma' IFN-a/ f'kampjuni ta' bijopsija renali miksuba minn pazjenti b'nefropatija IgA (n=33). Il-karatteristiċi kliniċi dettaljati ta' dawn il-pazjenti huma murija fit-Tabella S1. Tbajja immunoistokimika għal RIG-I u IFN- / żvelat l-espressjoni tagħhom fil-glomeruli u t-tubuli renali (Fig 3A), u wriet li RIG-I huwa korrelatat b'mod pożittiv ma' IFN-o/ (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
L-ipoksja ma tbiddilx il-livell ta' espressjoni ta' klotho fil-ġrieden WT u K1-/Biex tiddetermina l-effett ta 'stimulazzjoni iposika fuq l-espressjoni ta' klotho in vivo, investigajna l-espressjoni tagħha f'WT u K-/ġrieden bi jew mingħajr 10 min ta 'stimulazzjoni iposika. Western blotting u tbajja immunoistokimika wrew li l-espressjoni klotho ma kinitx differenti bejn ġrieden WT bi u mingħajr ipoksja u li l-espressjoni klotho ma ġietx osservata f'KIT/ġrieden irrispettivament mill-preżenza jew in-nuqqas ta 'stimulazzjoni iposika (Eig 4Aand4B). Fil-ġrieden WT, klotho proteina kienet imtebba fiċ-ċitoplasma taċ-ċelloli tubulari (Fig 4B).L-espressjoni RIG-I hija intensifikata taħt kundizzjonijiet iposiċi fil-ġrieden K~.Allegatament, klotho intraċellulari jagħti l-abbiltà li jrażżan l-infjammazzjoni medjata minn RIG-I, għalhekk eżaminajna l-livell ta 'espressjoni u l-lokalizzazzjoni ta' RIG-I f'hypoxickliewital-ġrieden WT u Kl-/-. Western blotting wera li l-espressjoni RIG-I żdiedet fil-ġrieden WT bi stimulazzjoni iposika u li kienet intensifikata fil-ġrieden Kl-/- (Fig 5A). L-immunoistokimika wriet li ż-żona RIG-I-pożittiva żdiedet fil-ġrieden Kl-/-, li kienet simili għar-riżultati miksuba minn western blotting (Fig 5B).
IFN- huwa regolat 'il fuq taħt kundizzjonijiet iposiċi fil-ġrieden KI--Biex tidentifika l-effetti ta 'ipoksja fuq l-espressjoni ta'-a f'wvo, eżaminajna l-livell ta 'espressjoni u l-lokalizzazzjoni tagħha f'ġrieden iposiċi WT u KI. Western blotting wera li l-espressjoni IFN żdiedet fil-ġrieden WT bi stimulazzjoni iposika u li kienet aktar regolata fil-ġrieden (Fig 6A). Tbajja immunoistokimika wriet ukoll li ż-żona pożittiva IFN - - kienet osservata prinċipalment fiċ-ċelloli tubulari, u li l-livell ta 'espressjoni ta' IFN- wera l-istess tendenza bħal fil-blotting tal-Punent (Fig 6B).
IFN- jiżdied taħt kundizzjonijiet iposiċi fil-ġrieden K1T-/Minbarra IFN-c, eżaminajna l-livell ta 'espressjoni u l-lokalizzazzjoni ta' IFN-Bin hypoxic WT u ġrieden. Mir-riżultati ta 'western blotting, l-espressjoni ta' IFN żdiedet fil-ġrieden WT bi stimulazzjoni iposika, filwaqt li ġiet osservata żieda ulterjuri f'KIT/ġrieden (Fig 7A). Mal-kwantifikazzjoni taż-żona pożittiva ta' IFN- -, il-livell ta' espressjoni ta' IFN- żdied fil-ġrieden KI-/- meta mqabbel ma' dak fil-ġrieden WT' (Fig 7B).
osservat fil-ġrieden Kl-/- irrispettivament mill-preżenza ta 'stimulazzjoni iposika. Aħna wrejna li l-ipoksja renali żiedet l-espressjoni ta 'RIG-I u IFN- / u li l-espressjoni tagħhom ġiet intensifikata aktar fil-ġrieden Kl-/-. Dawn is-sejbiet issuġġerew li d-defiċjenza ta 'klotho intensifikat l-espressjoni indotta mill-ipoksja ta' RIG-I, li tirriżulta fir-regolazzjoni 'l fuq ta' IFN- / . Aħna identifikajna li l-ipoksja indotta l-espressjoni ta 'RIG-I u IFN- / kemm fi studji in vitro kif ukoll in vivo. Biex jadatta għal kundizzjonijiet iposiċi, HIF huwa stabbilizzat u jiffunzjona bħala fattur ta 'traskrizzjoni [30]. Fi studju preċedenti, ġie rrappurtat li RIG-I huwa involut f'molekuli li jinduċibbli mill-HIF. Madankollu, ma stajniex nidentifikaw li RIG-I huwa effettur downstream ta 'HIF. Minbarra l-infezzjoni tal-virus, l-espressjoni RIG-I tiżdied taħt kundizzjonijiet iposiċi [31]. Għalkemm studji preċedenti rrappurtaw li l-ipoksja taffettwa ċelluli epiteljali tubulari, ċelluli endoteljali, pericytes, fibroblasts, ċelluli infjammatorji u ċelluli proġenitriċi fil-kliewi [32,33], aħna nuru li r-regolazzjoni 'l fuq ta' RIG-I kienet osservata prinċipalment fiċ-ċelluli epiteljali tubulari fil-ġrieden. bi stimulazzjoni iposika, kif ukoll f'pazjenti b'nefropatija IgA. Minħabba li t-tubuli tal-kliewi huma kkunsidrati bħala sit ta' dħul ta' patoġeni transuretrali [34], RIG-I jista' jkollu rwol ċentrali fir-rispons immuni taċ-ċelloli epiteljali tubulari taħt kundizzjonijiet iposiċi. Ir-rispons immuni innat huwa attivat mhux biss minn mikro-organiżmi iżda wkoll sinjali ta 'allarm minn ċelluli bil-ħsara, midruba jew stressati [35]. F'dan l-istudju, urejna li l-espressjoni indotta mill-ipoksja ta 'RIG-I pparteċipat fil-produzzjoni ta' IFN- / f'linja taċ-ċelluli tal-firien ta 'tubuli renali. Id-dejta ppreżentata tissuġġerixxi li l-espressjoni RIG-I taħdem bħala s-sistema immuni intrinsika taċ-ċitosol bi tweġiba għal stress iposiku kif ukoll infezzjoni tal-virus. Studji preċedenti ddeskrivew li l-ipoksja tissaħħaħ matul l-iżvilupp ta 'CKD irrispettivament mill-marda primarja u li l-ipoksja tikkontribwixxi għall-progressjoni tal-ħsara renali [17]. Fi studju kliniku bl-użu ta 'immaġni ta' reżonanza manjetika li tiddependi mil-livell ta 'ossiġenazzjoni tad-demm, l-ipoksja renali mhux biss intensifikat matul il-progressjoni ta' CKD iżda wkoll bassret tali progressjoni [36]. Għalhekk, l-ipoksja bħalissa titqies bħala l-mogħdija komuni għall-progressjoni tal-istadju finalimard tal-kliewi, għalhekk l-infjammazzjoni kkaġunata mill-ipoksja għandha tkun mira terapewtika biex irażżan il-progressjoni tas-CKD.
Aħna wrejna li l-ipoksja tinduċi l-produzzjoni ta’ IFN-/, li huma kklassifikati bħala interferoni tat-tip 1. L-interferoni tat-tip 1 bażikament jiffunzjonaw biex jinibixxu r-replikazzjoni virali [37] u biex jirreżistu l-immunosoppressjoni kkaġunata mill-ipoksja [21,22]. Madankollu, studji mwettqa sal-lum irrappurtaw li interferoni tat-tip 1 iwasslu għall-attivazzjoni ta 'ċelloli naturali killer, li għandhom rwol importanti mhux biss fit-tneħħija ta' ċelloli infettati bil-virus iżda wkoll ħsara fit-tessuti [38]. Fil-fatt, studji preċedenti rrappurtaw li RIG-I jikkontribwixxi għall-infjammazzjoni f'diversi organi, bħall-pulmun [39],kliewi[40], u s-sistema nervuża [21]. F'dan l-istudju, urejna wkoll li l-upregulation ta 'RIG-I indotta mill-ipoksja hija responsabbli għall-produzzjoni ta' IFN- / . Għalhekk, interferoni tat-tip 1 jistgħu jiffunzjonaw biex jipproteġu kontra infezzjoni fi stat ta 'ipoksja, iżda jkunu ta' ħsara taħt kundizzjonijiet mhux infettati. Barra minn hekk, studju preċedenti rrapporta li, minbarra interferoni tat-tip 1, RIG-I huwa involut fil-produzzjoni ta 'ċitokini varji, bħal IL-1, IL- 6, u TNF- [41]. Minħabba li dawn iċ-ċitokini jikkawżaw ħsara fit-tessuti, ir-regolazzjoni 'l fuq indotta mill-ipoksja ta' RIG-I tista 'tipparteċipa fil-progressjoni ta' CKD. Aħna wrejna li d-defiċjenza ta 'klotho ittejjeb l-espressjoni RIG-I indotta mill-ipoksja, li hija akkumpanjata mir-regolazzjoni 'l fuq ta' IFN- / . Allegatament, l-espressjoni ta 'Klotho tonqos mat-tixjiħ u l-progressjoni ta' CKD [42,43]. Għalhekk, l-espressjoni RIG-I tista 'tkun aktar regolata fl-anzjani u pazjenti CKD taħt kundizzjonijiet iposiċi, li jwasslu għall-produzzjoni ta' IFN- / . Kif issemma hawn fuq, klotho jeżisti fi tliet forom - klotho tal-membrana, secreted, u intraċellulari - b'dan tal-aħħar ikun responsabbli għat-trażżin tal-produzzjoni medjata minn RIG-I ta 'ċitokini infjammatorji [26]. F'termini ta 'lokalizzazzjoni, urejna li l-espressjoni ta' klotho sseħħ prinċipalment fiċ-ċelloli tubulari renali, b'evidenza li l-espressjoni RIG-I hija prinċipalment intensifikata fiċ-ċelloli tubulari renali taħt kundizzjonijiet iposiċi. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li livell imnaqqas ta 'espressjoni klotho jikkontribwixxi għal produzzjoni mtejba medjata minn RIG-I ta' interferoni tat-tip 1 taħt kundizzjonijiet iposiċi.
CISTANCHE SE TTEJB L-UĠIGĦ TAL-KLIEI/KLIEWA
Fil-qosor, urejna li RIG-I u IFN- / indotti minn stimulazzjoni iposika fil-kliewi tal-ġrieden u linja taċ-ċelluli tal-firien ta 'ċelluli tubulari tal-kliewi, u li RIG-I kien involut f'ipoksja indott upregulation ta' esperimenti IFN- / in vitro. F'kampjuni ta 'bijopsija renali minn pazjenti b'nefropatija IgA, l-espressjoni RIG-I kienet korrelatata mar-regolazzjoni 'l fuq ta' IFN- / . Fl-aħħar nett, l-espressjoni indotta mill-ipoksja ta 'RIG-I ġiet intensifikata fil-ġrieden klotho-knockout, flimkien mal-upregulation ta' IFN- / . L-espressjoni medjata minn RIG-I ta 'interferon tat-tip 1 żdiedet taħt kundizzjonijiet iposiċi, u aktar upregulation kienet osservata fi stat ta' downre gulation ta 'klotho. Skont studji kliniċi, l-ipoksja hija aggravata bl-istadju avvanzat ta 'CKD [36] u hija tbassir tal-progressjoni fit-tul ta' CKD [36]. Barra minn hekk, l-espressjoni tal-klotho tonqos bit-tnaqqis tal-funzjoni renali, u t-tnaqqis tal-espressjoni tal-klotho huwa assoċjat ma 'ħsara renali [44]. F'dan l-istudju, nuru li d-defiċjenza ta 'klotho tintensifika l-espressjoni indotta mill-ipoksja ta' IFN- / permezz tar-regolazzjoni 'l fuq ta' RIG-I fil-kliewi u li l-espressjoni ta 'RIG-I hija assoċjata ma' dik ta 'IFN- / f'pazjenti attwali b'nefropatija IgA. Meta wieħed jieħu dawn is-sejbiet flimkien, kemm l-ipoksja kif ukoll it-tnaqqis ta 'klotho huma promossi matul il-progressjoni ta' CKD, u għalhekk l-attivazzjoni tal-immunità intrinsika hija msaħħa f'pazjenti CKD.