Interazzjonijiet Bejn Antiossidanti Polifenoliċi Quercetin U Naringenin Jiddettaw L-Imġieba Kimika u Bijoloġika Distinttiva relatata mar-Redox tat-Taħlitiet Tagħhom Parti 2

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

Q f'konċentrazzjoni li tammonta għal 1 μM kellha wkoll it-tendenza li tnaqqas l-espressjoni ta' ALOX12 u MT3 (0.05<><0.09) as="" well="" as="" sod2="" and=""><><0.09).the latter="" gene="" codes="" for="" a="" protein="" that="" belongs="" to="" the="" family="" of="" thioredoxins="" and="" acts="" as="" an="" endogenous="" antioxidant="" facilitating="" the="" reduction="" of="" other="" proteins8.in="" contrast,="" to="" n-,o="" at="" 1="" um="" up-regulated="" gtf2i=""><0.05).the other="" genes="" whose="" expression="" was="" significantly="" elevated="" by="" q="" at="" l="" μm="" were="" gsr,="" hspa1a,="" ptgsi,="" and="" txnrd1;="" all="" play="" key="" roles="" in="" building="" cellular="" defenses="" against="" oxidants.="" up-regulation="" of="" gsr="" is="" crucial="" for="" maintaining="" redox="">omeostażifiċ-ċelloli minħabba li l-proteina kodifikata żżomm livelli għoljin ta 'glutathione mnaqqas fiċ-ċitosol39. Min-naħa tiegħu, chaperone HSPAlA huwa meħtieġ biex jikkoreġi kwalunkwe misfolding li jseħħ, ukoll dawk li jirriżultaw minn espożizzjoni għalantiossidanti. Dan tal-aħħar jista 'jbiddel il-bilanċ redox lejn stat imnaqqas, li jwassal għal tnaqqis aktar probabbli ta' pontijiet disulfide għalsulfidril

gruppi u b'hekk tinbidel l-istruttura tal-proteini u b'hekk il-funzjoni0.PTGS1 ġene tikkodifika proteina li hija vet membru ieħor tal-familja tal-enzimi antiossidanti, jiġifieri prostaglandin synthase-241, Ir-raba' ġene imsemmi-TXNRD{{4 }}kodiċi għal thioredoxin reductase li jżomm thioredoxin (TXN) fl-istat ridott2.

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Bl-istess mod għal 1 μM, Q f'konċentrazzjoni ogħla (10 μM) naqqset ukoll l-espressjoni ta 'TXN (p<0.05） and="" sod2=""><><0.09). furthermore,="" a="" drop="" in="" expression="" was="" observed="" for="" sod1=""><><0.09). the="" investigated="" flavonol="" at="" 10μm="" influenced="" the="" expression="" of="" also="" 4="" genes="" up-regulated="" by="" its="" lower="" concentration∶="" gsr,="" hspa1a,="" ptgs1,="" and="" txnrd2=""><0.05). the="" additional="" up-regulated="" genes="" by="" the="" higher="" q="" concentration="" included="" gstz1="" and="" stk25=""><0.05) as="" well="" as="" gpx4="" and="" sirt2=""><><0.09). the="" protein="" encoded="" by="" gstz1="" is="" a="" member="" of="" the="" glutathione="" s-transferase="" family="" that="" are="" key="" enzymes="" implicated="" in="" the="" detoxification="" of="" electrophilic="" molecules="" by="" conjugation="" with="" gsh4,="" while="" stk25="" codes="" for="" serine/threonine="" kinase="" 25,="" a="" protein="" activated="" by="" oxidative="" stress="" that="" induces="" apoptotic="" cell="" death.="" in="" turn,="" gpx4="" codes="" for="" glutathione="" peroxidase="" 4,="" which="" supports="" the="" antioxidant="" barrier="" of="" the="" cell="" by="" catalyzing="" the="" reduction="" of="" peroxides="" by="" glutathione="" the="" up-regulation="" of="" sirt2,="" encoding="" nad-dependent="" protein="">deacetylase, li jiddeacetylate lisines interni preżenti, eż. istoni jew fatturi ta 'traskrizzjoni, għandu rwol fil-modulazzjoni ta' proċessi bijoloġiċi ewlenin, bħall-kontroll taċ-ċiklu taċ-ċelluli, id-divrenzjar taċ-ċelluli jew l-integrità ġenomika,46.

Cistanche jista 'jtejjeb l-immunità

It-taħlita ta 'aglycones f'l μM naqqset l-espressjoni ta' APOE, CCL5, MT3, u MSRA sal-punt li laħqet sinifikat statistiku (p<0.05). the="" apolipoprotein="" encoded="" by="" apoe="" is="" a="" core="" component="" of="" plasma="" lipoproteins="" and="" is="" involved="" in="" their="" production,="" conversion,="" and="" clearance47.="" the="" protein="" encoded="" by="" msra="" carries="" out="" the="">enżimatikutnaqqis ta 'methionine sulfoxide għal methionine, għalhekk din il-proteina taħdem fit-tiswija ta' proteini bil-ħsara ossidattiva biex tirrestawra l-attività bijoloġika8. It-taħlita QN f'10 μM, b'mod simili għal doża aktar baxxa, naqqset l-espressjoni ta 'APOE, MT3, u MSRA (p<0.05). however="" at="" a="" higher="" concentration.="" the="" set="" of="" down-regulated="" genes="" was="" extended="" to="" incorporate="" cygb="" and=""><0.05). the="" latter="" gene="" sepp1="" encodes="" selenoprotein="" p="" the="" extracellular="">glikoproteinali għandu rwol antiossidant u jidher li huwa assoċjat maċ-ċelloli endoteljali49. It-taħlita QN-biss saħħet kemmxejn l-espressjoni tal-ġene PRDX5 li jikkodifika għal membru tal-familja peroxiredoxin ta 'enzimi antiossidanti, li r-rwol tiegħu huwa li jnaqqas il-perossidu tal-idroġenu u l-alkilidroperossidi50.

Diskussjoni

Il-bażi xjentifika ta 'osservazzjonijiet epidemjoloġiċi li jindikaw frott u ħxejjex sħaħ huma aktar effiċjenti fil-prevenzjoni ta' mard kroniku mhux infettiv minn komposti bijoattivi iżolati minnhom hija mifhuma ħażin. Il-kunċett tas-sinerġija tal-ikel, li jassumi l-influwenza addittiva jew saħansitra sinerġistika ta 'ingredjenti tal-ikel differenti fuq is-saħħa tal-bniedem, ġie propost bħala spjegazzjoni possibbli. Tali raġunament kien madankollu mminat sa ċertu punt mir-riċerka preċedenti tagħna li fiha qabbilna l-bijoattività ta’ ħxejjex pigmentati b’mod differenti (brassicas) kif ukoll frott tal-berry, abjad vs antoċjani li fihom, u ma sibna l-ebda mudell ta’ attività li jista’ jiġi attribwit għal varjetajiet ikkuluriti, b’ l-eċċezzjoni ta' attività antiossidant ogħla fit-testijiet kimiċi51. Lanqas l-effetti bijoloġiċi ma ġew imqabbla ma' dawk ta' cyanidin-3-O-glukoside iżolat investigati fil-konċentrazzjoni li seħħet f'materjal tal-pjanti studjat12. Investigazzjonijiet mekkanistiċi ulterjuri dwar ir-rikostituzzjoni tal-kawkaw ma wrew ukoll l-ebda effetti bijoloġiċi addittivi/sinerġistiċi ta' taħlitiet ta' komponenti kif previst mill-kunċett ta' sinerġija tal-ikel, iżda pjuttost bijoattività kompletament mibdula3. It-taħlitiet sussegwenti ta 'polifenoli tal-kawkaw dehru li jġibu ruħhom bħala sustanzi ġodda. Aħna ipoteżijna li l-interazzjonijiet bejn il-komponenti individwali fit-taħlita jistgħu joħolqu entità ġdida li turi proprjetajiet fiżikokimiċi modifikati li jirriżultaw f'attivitajiet bijoloġiċi ġodda. Tabilħaqq, il-varjetà ta 'interazzjonijiet possibbli bejn il-polifenoli (idroġenu, n, idrofobiku, kelanti, kovalenti u elettrostatiku), skoperti waqt investigazzjonijiet dwar l-applikazzjoni tagħhom bħala stabilizzaturi ta' nanopartiċelli immuntati waħedhom, intwerew li jipproduċu firxa ta 'strutturi differenti fil-funzjonalità. Ġie osservat ukoll li dawn il-fitokimiċi normalment jeżerċitaw aktar minn tip wieħed ta 'forzi attraenti ta' stabbilizzazzjoni. Fir-riċerka attwali, investigajna kif l-interazzjoni ta 'spiss li tikkompeti għall-interazzjonijiet f'taħlita ta' żewġ antiossidanti polifenoliċi biss kellha impatt fuq l-attivitajiet tagħha relatati mar-redox meta mqabbla ma 'komponenti individwali.

L-ewwel serje ta 'esperimenti kkonċentrati fuq determinazzjonijiet kimiċi u elettrokimiċi ta' parametri li jikkaratterizzaw l-ossidazzjoni ta 'flavonoids individwali u mħallta 1:1 (rappreżentanti ta' flavonol u grupp flavanone), separatament f'forma ta 'aglycone (Q N-) u glycoside (R, N plus ) . Il-korrelazzjonijiet bejn ir-riżultati ta 'dan il-kejl huma mogħtija fil-Fig,8. Il-valutazzjonijiet inizjali mwettqa mit-test tal-lott DPPH l-aktar popolari wrew li għalkemm iż-żewġ flavanones (N-, N plus ) dehru antiossidanti dgħajfa ħafna, żiedu l-attività antiossidant tat-taħlitiet, kemm QN kif ukoll RN plus , b'mod sinerġistiku (Fig. 2A). DPVanalysis ipprovda spjegazzjoni aktar profonda ta 'dan l-effett u indikat l-impatt deċiżiv tal-kinetika tar-reazzjoni. Irriżulta, li l-flavanones studjati faċilment jirrilaxxaw elettroni skond il-valur għoli tal-parametru termodinamiku E, (Fig.2C). Xorta waħda, il-kinetika ta 'dan il-proċess kienet bil-mod wisq biex tkun osservata mit-testijiet DPPH u PT. Il-flavanols, antiossidanti qawwija fit-test DPPH u PT, esebiti f'DPV il-proprjetajiet opposti — termodinamika mhux favorevoli tar-rilaxx tal-elettroni, iżda rata għolja tal-proċess ta 'ossidazzjoni. It-tqabbil ta 'strutturi ta' radikali intermedji jissuġġerixxi li flavonol semiquinone radical huwa aktar stabbli minn flavanone phenoxyl radical minħabba l-diversi mekkaniżmi stabilizzanti (Fig.1). Minn dan isegwi li l-istabbilizzazzjoni tal-intermedjarju radikali hija ta 'importanza kruċjali għall-kinetika tar-reazzjoni ta' ossidazzjoni u, konsegwentement, għall-attività riduttiva tal-komposti investigati.

L-attività antiossidant finali tat-taħlitiet studjati hija eżaltata permezz tal-fatturi termodinamiċi, b'impatt favorevoli fuq il-proċess ta 'ossidazzjoni, li sussegwentement tejbet il-kinetika tar-reazzjoni (Fig. 2B-F). Mekkaniżmu aktar dettaljat ta 'dan it-titjib għadu mhux spjegat bħalissa, x'aktarx jinvolvi interazzjonijiet speċifiċi ta' flavonol/flavanone. Dan it-titjib kien osservat mhux biss f'tubu tat-test iżda wkoll taħt ċirkustanzi ċellulari kif muri minn assaġġ CAA li fih l-attività antiossidant taż-żewġ taħlitiet, ON u RN plus, spostat attività antiossidant ogħla minn dik ta 'komponenti individwali (Fig.4). Il-parti kimika tal-investigazzjonijiet tagħna wriet id-diskrepanza fl-attività antiossidanti bejn il-komposti individwali u t-taħlitiet tagħhom. Wieħed jista

jindika l-importanza tal-kinetika tar-reazzjoni ta 'ossidazzjoni għall-attività antiossidant ġenerali u jissuġġerixxi li l-interazzjonijiet bejn il-komponenti individwali jinfluwenzaw il-proprjetajiet redox tat-taħlita. Għandu jkun korrett għall-inqas f'dan il-każ meta l-preżenza ta 'flavonols(Q, R) fit-taħlita żiedet l-abbiltà tal-flavanones (N-, N plus ) li jagħtu elettroni.

Il-parti sussegwenti tar-riċerka kkonċentrat fuq it-tqabbil ta 'proprjetajiet bijoloġiċi relatati mar-redox esibiti minn flavonoids individwali (O, R, N-, N plus ) u t-taħlitiet tagħhom (ON- u RN plus ). Iċ-ċelloli tal-kanċer tal-kolon uman HT29 servew bħala mudell rakkomandat għal studji nutrizzjonali tal-passaġġ alimentari tal-bniedem3, madankollu f'dan l-istudju, xi interpretazzjonijiet tad-dejta jirreferu wkoll għan-natura neoplastika ta 'din il-linja taċ-ċelluli. Ġie aċċettat b'mod ġenerali llum il-ġurnata, li l-bilanċ redox huwa vitali għas-sopravivenza u l-funzjoni taċ-ċelluli; għalhekk, l-espożizzjoni għal antiossidanti eżoġeni kif ukoll ROS jistgħu jimmodulaw ħafna proċessi ċellulari. Fuq stress riduttiv, abbundanza insuffiċjenti ta' ROS tista' tbiddel is-sinjalar taċ-ċelluli permezz ta' mogħdijiet dipendenti fuq ir-redox6. L-eċċess ta 'ROS, min-naħa l-oħra, iwassal għal stress ossidattiv u riskju akbar ta' ħsara ossidattiva lill-komponenti ċellulari. Il-punt tat-tluq bijoloġiku ta 'dan stud kien il-valutazzjoni tal-impatt tal-antiossidanti, individwali u fit-taħlita, fuq it-tkabbir ċellulari; l-attività li tiddependi fuq l-omeostasi redox ċellulari, peress li l-konċentrazzjoni xierqa ta 'ROS hija essenzjali għall-attivazzjoni ta' sinjalazzjoni li tixpruna l-proliferazzjoni taċ-ċelluli. Ir-riżultati tat-test tal-vijabbiltà taċ-ċelluli MTT wrew differenzi sostanzjali bejn it-trattamenti. Il-komposti puri ma kellhomx impatt fuq il-proliferazzjoni taċ-ċelluli b'mod sinifikanti meta mqabbla ma 'ċelloli ta' kontroll mhux ittrattati; tkabbir taċ-ċelluli laħaq livell kostanti fil-firxa wiesgħa ta 'konċentrazzjonijiet. B'kuntrast, iż-żewġ taħlitiet (QN-, RN plus ) stimulaw b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni taċ-ċelluli. Dan l-aħħar effett jista 'mhux neċessarjament ikun relatat biss ma' proprjetajiet antiossidanti ta 'taħlitiet, minħabba li r-riżultati tal-assaġġ CAA għal O kienu simili għal dawk għal taħlita ON. Madankollu, it-taħlitiet, iżda mhux il-komponenti individwali, apparentement appoġġaw aħjar iċ-ċelloli HT29 biex jittrattaw l-istress ossidattiv residwu, eż. billi jirrestawraw l-aħjar status redox; l-effett osservat qabel għal antiossidanti b'saħħithom bħal catechins55. Għalkemm iż-żieda sinerġika ta 'attività antiossidanti osservata għal taħlitiet tista' tiġi pperċepita bħala effett ta 'benefiċċju, il-fatt li kombinazzjonijiet bħal dawn ta' antiossidanti jistimulaw it-tkabbir taċ-ċelluli tal-kanċer mhuwiex mixtieq. Il-vantaġġi u l-iżvantaġġi ta 'antiossidanti u ROS fil-kanċer kienu suġġett ta' dibattitu għal xi żmien u wasslu għall-konklużjoni li l-antiossidanti jistgħu jippromwovu l-kanċer permezz ta 'mekkaniżmi kumplessi56 li jidher ukoll hawn.

Sejba oħra interessanti kienet li l-effetti mhux mixtieqa tat-trattamenti, bħall-attività pro-ossidativa ta 'N-kixfet mill-assaġġ CAA kif ukoll il-ġenotossiċità ta' Q osservata fl-assaġġ tal-kometa ġew ittaffija għat-taħlitiet. L-aħħar assaġġ wera li l-ħsara fid-DNA kkawżata mill-ogħla konċentrazzjoni studjata (100 uM) ta 'O pur naqset għal-livell ta' kontroll għall-konċentrazzjoni ekwimolari tat-taħlita QN-(Fig. 5) li tista 'tkun marbuta mal-attività antiossidanti mtejba ta' ON -osservat fit-testijiet elettrokimiċi. Fil-każ tal-valutazzjoni tal-attività antiossidant ċellulari, l-aglycones wrew proprjetajiet antiossidanti (O) jew proossidanti (N-) aktar ċari minn glycosides korrispondenti (Fig.4). N- f'konċentrazzjonijiet fiżjoloġiċi ma qabeżx il-kapaċità ta 'buffering redox taċ-ċelluli HT29 normoxic, filwaqt li f'konċentrazzjonijiet ogħla minn dawk misjuba fil-plażma umana urew effett pro-ossidattiv dipendenti fuq il-konċentrazzjoni li naqas mal-ħin tal-espożizzjoni. Ġeneralment, aglycones naqas l-impatt inizjali tagħhom fuq l-istatus redox ċellulari matul il-kors taż-żmien (Fig.4). Iż-żewġ taħlitiet wrew attività antiossidanti mtejba, apparentement mhux influwenzata mill-effett pro-ossidant li jidher għal komposti individwali.

L-impatt differenzjat tat-taħlitiet meta mqabbel mal-komponenti individwali deher ukoll fil-verżjoni epiġenetika tal-assaġġ tal-kometa użat biex jimmonitorja l-bidliet fil-metilazzjoni tad-DNA. Flavonoids individwali wrew it-tendenza li jnaqqsu l-metilazzjoni tad-DNA globali b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni, bl-eċċezzjoni ta 'R, li ma influwenzax din il-modifika epiġenetika (Fig.6). Iż-żewġ taħlitiet naqqsu wkoll il-livell globali ta 'metilazzjoni tad-DNA, iżda ma ġiet innutata l-ebda korrelazzjoni mal-konċentrazzjoni. Ta 'min jinnota, li mhux biss l-istatus redox jista' jkollu rwol fil-kombinazzjoni tal-polifenoli peress li, fil-każ tal-metilazzjoni tad-DNA, iżda l-impatt tal-flavonoids studjati wkoll ma deherx li kien assoċjat mal-proprjetajiet li jnaqqsu tagħhom. Id-demetilazzjoni attiva hija magħrufa li tinvolvi ossidazzjoni iterattiva tal-grupp tal-metil f'5-methylcytosine għal carboxy form5758, għalhekk l-antiossidanti jkunu mistennija li jimblokkaw dan il-proċess. Fl-esperimenti tagħna, osservajna l-impatt oppost. Għalhekk, hawn probabbilment kien involut mekkaniżmu ieħor, li huwa l-inibizzjoni tad-DNMT metiltransferase (DNMT1)—l-enzima li tikkatalizza t-trasferiment tal-gruppi tal-metil għal strutturi dinukleotidi CpG fid-DNA. L-imblokk tal-manutenzjoni tal-mudell tal-metilazzjoni jwassal għal demetilazzjoni passiva fuq rawnds konsekuttivi ta 'replikazzjoni tad-DNA. Ir-riżultati tagħna huma konformi ma 'studji oħra li wrew l-inibizzjoni ta' DNMT1 minn quercetin9. Ukoll xi flavanones, inkluż N-intwera li jinibixxu l-attività DNMT1 f'estratti nukleari ta 'ċelluli KYSE-510 tal-karċinoma taċ-ċelluli squamous esophageal tal-bniedem. L-istudju tagħna wera wkoll li t-taħlit Q ma 'N-ikkawża tnaqqis notevoli fil-livell ta' metilazzjoni tad-DNA fil-konċentrazzjonijiet ittestjati kollha ta 'din it-taħlita. Riżultat simili kien osservat għal RN plus; madankollu, l-ipometilazzjoni tad-DNA seħħet f'livell inqas. Dawn l-osservazzjonijiet kollha jistgħu jkunu ta’ interess mil-lat terapewtiku. Il-mudell tal-metilazzjoni tad-DNA fil-kanċer huwa kkaratterizzat minn naħa waħda mit-telf globali tal-metilazzjoni fil-korpi tal-ġeni u r-reġjuni interġeniċi li jwasslu għal attenwazzjoni tal-istabbiltà tal-ġenoma!, min-naħa l-oħra, billi ipermetilazzjoni ta 'reġjuni rikki CpG fil-promoturi u sajlenser traskrizzjoni ta' espressjoni ta 'ġeni li jrażżnu t-tumur (TSGs)! Għalhekk, l-ipometilazzjoni tad-DNA indotta minn polifenoli tista 'terġa' tirrestawra l-espressjoni tal-ġeni tat-TSGs imsikkta u żżid ukoll gradwalment l-instabilità tal-ġenoma tal-kanċer sal-punt li jwassal għall-mewt taċ-ċelluli.

L-effetti ċellulari deskritti tal-polifenoli studjati wrew li mhux biss il-kontenut jew il-kompożizzjoni jew il-bijodisponibilità, iżda wkoll l-interazzjonijiet bejn il-komponenti jimmodulaw il-proprjetajiet elettrokimiċi kif ukoll bijoloġiċi tat-taħlitiet. Din il-konklużjoni kienet ukoll appoġġjata b'mod ċar mill-aħħar attività analizzata f'dan l-istudju, jiġifieri, il-modulazzjoni ta 'espressjoni ta' spettru wiesa 'ta' ġeni assoċjati mad-difiża antiossidant u r-rispons għall-istress ossidattiv. Id-dijagramma Venn (Fig. 7C) tiġbor fil-qosor l-impatt tal-aglycones flavonoid investigati fuq il-modulazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni. Fil-każ ta 'komposti puri (O, N-) f'1 uM, ġene wieħed biss (GTFZI) instab li kien affettwat miż-żewġ flavonoids. Madankollu, N-ikkawża r-regolazzjoni 'l isfel ta' dan il-ġene, filwaqt li Q żied l-espressjoni tiegħu. Dan l-impatt ma nżammx f'konċentrazzjonijiet ogħla ta' komposti puri u lanqas ma deher għat-taħlita tagħhom fi kwalunkwe doża. N u t-taħlita QN-down-regolati wkoll żewġ ġeni oħra, CCL5 u MT3, f'l μM u tliet ġeni li jħaddnu CYGB, MT3, u MSRA f'10uM. B'mod sorprendenti, ma nstab l-ebda xebh fir-regolamentazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni bejn Q u QN-u lanqas bejn Q, N- u QN-f'xi waħda mill-konċentrazzjonijiet investigati. Barra minn hekk, it-taħlita QN bidlet b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'tliet ġeni oħra (regolazzjoni 'l isfel APOE u SEPPI, regolamentazzjoni 'l fuq ta' PRDX5) li l-attività tat-traskrizzjoni tagħhom ma kinitx affettwata minn kwalunkwe komponenti individwali. Bħala konklużjoni, l-istudju tagħna juri li l-proprjetajiet bijoloġiċi tat-taħlitiet tal-polifenoli mhumiex biss il-kombinazzjoni ta 'attivitajiet imsaħħa jew imdgħajfa esibiti minn komponenti individwali. Dawn l-osservazzjonijiet jindikaw li l-bijoattività tal-fitokimiċi f'taħlitiet għandha tkun riżultat ta' interazzjonijiet bejn il-komponenti li jwasslu għall-emerġenza ta' sustanza ġdida bi proprjetajiet kimiċi u bijoloġiċi ġodda li huma diffiċli biex jiġu mbassra, Ir-riżultati tad-determinazzjonijiet imwettqa fl-istudju tagħna ma jappoġġawx biss. , iżda fil-fatt, iwessgħu l-idea tal-kunċett tas-sinerġija tal-ikel li jenfasizzaw il-fatt li anke modifiki żgħar fil-kompożizzjoni ta’ taħlita ta’ fitokimiċi li jinġarru mill-ikel (probabbilment ukoll ingredjenti tal-ikel ta’ oriġini oħra) joħolqu entità ġdida li l-impatt tagħha fuq is-saħħa tal-bniedem mhux bilfors jixbah lil dak. ta' komponenti individwali. Dan il-kunċett idgħajjef il-mod attwali kif is-supplimenti tad-dieta huma mfassla, li jibnu fuq indikazzjonijiet dwar is-saħħa stabbiliti minn riċerka dwar komposti iżolati. Minn perspettiva ta 'kimoprevenzjoni tad-dieta, l-istudju ppreżentat jispjega għaliex l-approċċ attwali li jenfasizza l-użu ta' komponenti tal-ikel bijoattivi iżolati ma kienx kapaċi jaqbel mal-osservazzjonijiet epidemjoloġiċi li saru għall-ikel kollu li n-nies jibilgħu. Jekk is-supplimenti tal-ikel għandhom joffru benefiċċji reali għas-saħħa fit-tul lill-individwi, huwa vitali li kombinazzjonijiet ta 'aġenti putattivi jiġu studjati flimkien u f'kuntest bijoloġiku.

materjali u metodi

Kimiċi, reaġenti. Il-komposti bijoattivi li ġejjin intużaw għall-istudju: quercetin (Q), rutin (R), naringin (N plus ), u naringenin (N-) minn Sigma-Aldrich (USA). Intużaw metanol ta 'grad analitiku u metanol minn POCH (Polonja) kif ukoll DMSO minn Sigma-Aldrich (USA). Is-sistema QPLUS185 minn Millipore (USA) intużat biex tippurifika l-ilma. Għal valutazzjonijiet ta' attività antiossidanti permezz ta' test spettrofotometriku, ġie applikat 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) minn Sigma-Aldrich (USA).0.1 M sodium phosphate buffer ippreparat billi jinħall Na, HPO12H , O u NaH, PO2H, O(Sigma-Aldrich, USA)f'ilma dejonizzat intuża fi studji elettrokimiċi. L-elettrodu tax-xogħol u ċ-ċellula elettrokimika tnaddfu bis-soluzzjoni ta '10 mM permanganat tal-potassju (Sigma-Aldrich, USA) f'95 fil-mija H, SO, (y/y) (POCH, Polonja). L-elettrodu ta 'referenza kien maħżun fi 3 M KCl (Sigma-Aldrich, USA) maħlul f'ilma dejonizzat. Ir-reaġenti kollha utilizzati fil-kultura taċ-ċelluli (PBS, medju McCoy 5A, tripsina, serum bovin fetali, antibijotiċi) inxtraw minn Sigma-Aldrich (USA). Is-soluzzjoni PBS ġiet ippreparata billi tħoll pillola waħda f'200 mL ilma purifikat, Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT) minn Sigma-Aldrich (USA) ġie applikat fit-test MTT. L-Assaġġ Antiossidant Ċellulari OxiSelect

Kit inxtara minn Cell Biolabs, Inc. (USA). Ir-reaġenti li ġejjin intużaw għall-assaġġ tal-kometa: aċidu idrokloriku (HCl), agarose b'punt ta' tidwib baxx (LMP agarose), klorur tas-sodju (NaCl, idrossidu tas-sodju (NaOH), aċidu ethylenediaminetetraacetic (EDTA),2-amino{{1 }}(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (Trizma-Base), Sybr Green I tebgħa tal-ġel tal-aċidu nukleiku u Triton X-100 minn Sigma-Aldrich (USA) kif ukoll tidwib normali point agarose (NMP agarose) minn Bioline(UK) Barra minn hekk, fl-assaġġ tal-kometa sensittiv għall-metilazzjoni, ġew applikati proteinase K(Merck, USA), enżimi ta' restrizzjoni (HpalI/MspI), u Tango buffer (Promega, UK).OIAshredder , RNeasy Mini Kit, RNase-Free DNase sett, RT² First Strand Kit, RT²SybrGreen qPCR Mastermix, RT2Profiler PCR Arrays for Oxidative Stress(PAHS 0065)minn Qiagen (Ġermanja) intużaw fi studji ġenomiċi.

Dan l-artikolu huwa estratt minnwww.nature.com/scientificreports