Fatturi Immunomodulatorji f'Cistanche Salsa

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Shinjiro MARUYAMA," Koji YAMADA, Hirofumi TACHIBANA

Cistanche salsa(C.A.Mever) G.Beck, Orobanchaceae huwa pjanta parassitika li tintuża bħala toniku mediċinali orjentali fil-Ġappun. Fl-istudju preċedenti tagħna, sibna li C, estratt tas-salsa tejbet il-produzzjoni kemm tal-IgM kif ukoll tal-IgG fil-limfoċiti umani tan-nodu Ivmph. Barra minn hekk, C, salsa dialysate (CSD) ippreparat bl-użu ta 'membrana tad-dijalisi bi produzzjoni igM mtejba ta' piż molekulari a3.500-Da fil-linja umana taċ-ċellula B BALL-1; barra minn hekk, ikkawża proliferazzjoni żgħira taċ-ċelloli. Madankollu, b' kuntrast, l- inibizzjoni tat- tkabbir ikkaġunata minn CSD akkumpanjata minn apoptożi fil- linja taċ- ċelluli tal- limfoma ta ' Burkitt uman Namalwa. Dawn ir- riżultati jindikaw il- preżenza possibbli ta ' kostitwenti attivi f' CSD li huma speċifiċi għal limfoċiti, S' issa, il- proprjetajiet kimiċi ta ' dawn il- kostitwenti ma ġewx iċċarati. F'dan l-istudju, aħna investigajna l-proprjetajiet kimiċi tal-kostitwenti attivi fis-CSD. Iż-żewġ attivitajiet imsemmija hawn fuq fil-linji taċ-ċelloli B ma ġewx inattivati permezz ta' trattament awtoklav ta' CSD. Bl-użu tal-kromatografija tal-kolonna tal-filtrazzjoni tal-ġell, sibna li l-qċaċet tal-frazzjonijiet attivi kienu kkonċentrati fi frazzjonijiet differenti. Ir-riżultati tagħna jissuġġerixxu li hemm mill-inqas 2 tipi ta 'kostitwenti attivi fis-CSD, u jistgħu jkunu polisakkaridi peress li huma kostitwenti ta' piż molekulari għoli li jinħall fl-ilma u termostable.

Kliem ewlieni: Cistanche salsa, piż molekulari għoli, IgM, inibizzjoni tat- tkabbir.

Introduzzjoni

Cistanche salsa(C.A. Meyer) G.Beck, Orobanchaceae huwa pjanta parassitika li tintuża bħala toniku mediċinali orjentali fil-Ġappun. Fiċ-Ċina, dan l-impjant huwa mediċina tradizzjonali importanti użata għat-trattament ta 'defiċjenza tal-kliewi u neurasthenia. Permezz ta 'studji in vitro, diġà rrappurtajna l-effetti ta' C. salsa fuq is-sistema immunitarja. Ewwel. aħna wrejna li l-estratt ta 'C. salsa tejbet il-produzzjoni ta' IgM u IgG fil-limfoċiti tan-nodi limfatiċi umani. It-tieni, urejna li C. salsa dialysate (CSD) ippreparat bl-użu ta '3,500-Da piż molekulari cut-off dialysis mem-brane enhanced IgM produzzjoni fil-linja umana taċ-ċellula B BALL-1; barra minn hekk, huwa wassal għall-proliferazzjoni taċ-ċelloli sa ċertu punt.2 Barra minn hekk, is-CSD għandu effett oppost li bih jinduċi inibizzjoni tat-tkabbir akkumpanjata minn apoptożi fil-linja taċ-ċelloli tal-limfoma tal-Burkitt uman, Namalwa.3)Dawn is-sejbiet issuġġerew li dan l-effett tas-CSD kien relatat mal-attivazzjoni taċ-ċelloli B, filwaqt li l-apoptożi rriżultat min-nuqqas ta' sinjali oħra li huma meħtieġa għad-differenzjazzjoni taċ-ċellula B, bħal ċitokini u kuntatt taċ-ċelloli; madankollu, il-proprjetajiet kimiċi tas-CSD ma ġewx iċċarati fl-ebda wieħed mill-istudji preċedenti. Għalhekk, f'dan l-istudju, investigajna l-proprjetajiet kimiċi tal-kostitwenti attivi fis-CSD.

Materjali u Metodi

Is-CSD tħejja bl-istess metodu fl-istudju preċedenti tagħna. CSD ġie maħlul f' salina mewwieta bil- fosfat (PBS) b' 20 mg/ ml. Is-soluzzjoni ppreparata (0.8 ml) ġiet mgħoddija minn filtru (0.22 um)qabel l-applikazzjoni u mbagħad eluted bl-istess soluzzjoni minn kolonni li jkun fihom TOYOPEARL HW-40F (1.0×96.5 ċm; Tosoh Corp, il-Ġappun), TOYOPEARL HW-55F (1.0 × 98.0 cm; Tosoh Corp., il-Ġappun), u Sephacryl S-400HR (1.0×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,. l-Ingilterra); u mbagħad inġabru frazzjonijiet ta' 1 ml(30 qatriet). Biex jiġi ddeterminat il-volum vojt tal-ġellijiet u l-piż molekulari approssimattiv (MW) tal-kostitwenti frazzjonati, dextran blu (BD)(Sigma-Aldrich Japan K.K., il-Ġappun); u dextrans ta' MW magħruf miksub mil-Leuconostoc spp.(Sigma-Aldrich Japan K.K., il-Ġappun), jiġifieri ta' MW2,000kDa(D1),500kDa(D2),70 kDa (D3) u 6 kDa (D4); u cyanocobalamin (VB12, MW: 1355.4)(Wako Pure Chemical Industries Ltd., il-Ġappun) intużaw. Il-kontenut totali ta' zokkor u proteini ta' kull frazzjoni kien iddeterminat bl-użu tal-metodu ta' aċidu fenoliku u l-metodu baxx bil-kit tal-analiżi tal-proteina pierceTM bicinchoninic (BCA) (Thermo Fisher Scientific Inc., USA), rispettivament. L- albumina tas- serum tal- glukosju u tal- bovini ntużaw bħala standards rispettivi. Barra minn hekk, l-assorbenza fi 320nm (A:2o) ta' kull frazzjoni ġiet imkejla. Il-qċaċet tal-elużjoni tad-dextran blu u taċ-ċjaanokobalamin ġew iddeterminati mill-valur tal-assorbanza tagħhom f'260 nm, u l-qċaċet tad-dextrans ta' MW magħrufa ġew iddeterminati bl-użu tal-metodu tal-aċidu fenol-sulfuriku. CSD ġie awtoklavjat f'temperatura ta'120 °C għal 20 min biex jivvaluta t-termopstabilità tiegħu. Fil-bijoassaġġi, il-kultura taċ-ċelloli u l-kejl tal-IgM saru bl-istess metodu fl-istudju preċedenti tagħna.

Estratt ta' Cistanche salsa

Riżultati u Diskussjoni

Il-Figura 1 turi l-kromatogrammi tal-kolonna tal-filtrazzjoni tal-ġell tas-CSD fuq HW-40F. Mill-Figura la, it-MW tal-kostitwenti attivi kien stmat li hu aktar minn 6 kDa abbażi tal-markatur D4 tad-dextran. Barra minn hekk, kemm l-attivitajiet tas-CSD, jiġifieri t-titjib tal-produzzjoni tal-IgM kif ukoll l-inibizzjoni tat-tkabbir, ma ġewx inattivati permezz ta' trattament awtoklav (il-Figura 2), għalkemm xi kostitwenti aggregati u ntilfu wara li s-CSD għadda mill-filtru 0.22-um. Ix-xejriet tal-elużjoni tas-CSD u tas-CSD awtoklavjat kienu kważi identiċi, madankollu, l-attività relattiva tat-titjib tal-produzzjoni tal-IgM fis-CSD awtoklavjat kienet aktar baxxa minn CSD mhux ittrattat. Uħud mir-raġunijiet jidhru li l-aggregati żammew il-kostitwenti attivi jew uħud mill-kostitwenti attivi ġew inattivati. Ir-riżultati tal-kromatografija fuq HW-55F urew il-preżenza possibbli ta' 2 tipi ta' fatturi immunomodulatorji: l-ewwel waħda, ikkonċentrata f'fr. no.32. kien kostitwent attiv b'piż molekulari għoli (HCS) li seta' jtejjeb il-produzzjoni tal-IgM, filwaqt li t-tieni wieħed, ikkonċentrat f'fr. no.50, kien kostitwent attiv b'piż molekulari medju (MCS)li seta' jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelloli (Figura 3). Madankollu, il-qċaċet miksuba kemm għall-HCS kif ukoll għall-MCS (fr.no.32 u 50 rispettivament) ma kinux daqs dawk tad-dextrans ta' MW magħruf (dejta li ma ntwerietx). Dawn l-osservazzjonijiet jindikaw il-possibbiltà li jkun hemm prodotti sekondarji ġġenerati artifiċjalment matul il-preparazzjoni tas-CSD, polimeri ta' kostitwenti attivi li jinqerdu faċilment u jinkludu unitajiet multipli, jew diversi kostitwenti attivi li għandhom MWs oriġinali differenti. Ix-xejriet tal-elużjoni fuq il-kromatogrammi juru li mhux faċli li jinkisbu kostitwenti puri mill-HCS u l-MCS peress li jidher li hemm diversi kostitwenti li għandhom MWs kemmxejn differenti kif imsemmi hawn fuq. Għalkemm it-tnejn huma taħlitiet ta' kostitwenti attivi, jidher li HCS tinkludi kostitwenti ta' MW li jaqbżu s-70 kDa, filwaqt li l-MCS tinkludi dawk ta' MW li jaqbżu s-6 kDa. HCS ġie eluted fuq HW-55F fi frazzjoni li kienet lil hinn mill-firxa ta 'separazzjoni. Fuq Sephacryl-S400.parti ta' HCS(fr.no.36) ġiet eluted fl-istess frazzjoni bħall-markatur D1, li huwa ta' MW 2,000 kDa (Figura 4). B'mod ġenerali, il-polisakkaridi u l-proteini jitqiesu bħala kostitwenti mw għoljin li jinħallu fl-ilma fl-estratti tal-pjanti. Peress li kważi l-proteini funzjonali kollha huma inattivati bit-trattament bis-sħana, jidhru li huma polisakkaridi. Madankollu, Park et. al. irrapporta l-proteina żgħira ċitotossika termostable imsejħa viskotossina, li hija ppreparata minn mistletoe (Album Viscum L., Viscaceae)estratt.4 Barra minn hekk, intwera viskotossini li jtejjeb l-attività immunomodulatorja ta' ċelloli qattiela naturali umani.5Fil-Figura 3, l-MCS, li għandu MW aktar baxx, juri kontenut ogħla ta' proteina. Meta wieħed iqis dawn il-fatti, l-MCS jista 'jkun polisakkarid8or marbut mal-proteini jista' jkun proteina termostable bħall-visotossini. Dawn ir-riżultati juru li ż-żewġ kostitwenti attivi jistgħu jkunu polisakkaridi. Inkella, l-MCS jista 'jkun proteini termostable.

Referenzi

1) Deng, M., Zhao, J.Y., Ju, X.D., Tu, P.F, Jiang, Y., Li, Z.B.: Effett protettiv ta 'tubuloside B fuq apoptożi kkawżata minn alpha TNF f'ċelloli newronali. Acta Farmakol. Sin.,25, 1276-1284,2004.

2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H.:Estratt ta' Cistanche salsaproduzzjoni IgM mtejba fil-linja taċ-ċelloli B umana, BALL-1J Trad. Med.,24,209-211,2007.

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:Cistanche salsaestratt indotta apoptożi fil-linja taċ-ċelluli tal-limfoma tal-Burkitt uman Namalwa. J.Trad. Med.,25,24-27,2008.

4) Park. JH, Hyun, C.K., Shin H.K: Effetti ċitotossiċi tal-komponenti fil-mistletoe ttrattat bis-sħana (album Viscum). Kanċer Let, 139, 207-213,1999.

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Il-viskotossini mistletoe jżidu ċ-ċitotossiċità medjata minn ċelluli qattiela naturali. Eur.J. Biochem., 269,2591-2600, 2002.

6) Fisher, M., Yang, L.X.: Effetti kontra l-kanċer u mekkaniżmi ta 'sakkaride-K poli (PSK): implikazzjonijiet ta' immunoterapija tal-kanċer. Anticancer Res.,22,1737-1754,2002.

supplimenti tal-cistanche