Espressjoni tal-ġeni relatata mal-immunità fil-kliewi u l-milsa ta' goslings infettati b'astrovirus nefritiku tal-wiżż

Kuntatttina.xiang@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni.

ASTRATTL-astrovirus nefritiku tal-wiżż (GNAstV) kien iżolat għall-ewwel darba fl-2018, u kkawża telf ekonomiku kbir lill-industrija tal-wiżż. Madankollu, ftit huwa magħruf dwar l-ospitantirispons immunigħall-infezzjoni GNastV. F'dan l-istudju, erbgħin gosling ta' {{0}}jum kienu maqsuma b'mod każwali f'2 gruppi: infezzjoni u gruppi ta 'kontroll negattiv. Kull gosling fil-grupp ta 'infezzjoni kien ikkontestat b'0.5 mL GNAstV-JSHA ġol-muskoli, filwaqt li l-gosling fil-grupp ta' kontroll negattiv ġie mlaqqam bl-istess ammont ta 'PBS. Bidliet istopatoloġiċi u post tal-virus fil-milsaukliewiġew eżaminati, u l-espressjoni ta 'ġeni relatati mal-immunità ġiet iddeterminata minn qPCR f'7 u 14 d wara l-infezzjoni. Ir-riżultati tagħna wrew li d-deġenerazzjoni u n-nekrożi kkaġunata mill-infezzjoni GNAstV ta 'limfoċiti tal-milsa u ċelloli epiteljali renali, u dawn iċ-ċelloli kienu pożittivi għall-virus. Barra minn hekk, l-infezzjoni GNAstV induċiet l-attivazzjoni ta’ riċetturi ta’ rikonoxximent tal-mudell (RIG-I, MDA-5, u TLR3) u molekuli adapter ewlenin

(MyD88, MAVS, u IRF7) fil-milsa u l-kliewi, u rregolaw l-espressjoni tal-ġene ta 'interferon- fil-milsa u proteini antivirali (MX1, OASL, u IFITM3) fil-milsa u l-kliewi. Barra minn hekk, instabu livelli għoljin ta' espressjoni ta' interleukin(IL)-1 u IL-8 fil-milsa u iNOS fil-milsa u fil-kliewi. Dawn ir-riżultati indikaw li l-infezzjoni GNAstV attivat ir-rispons immuni innat tal-host. Barra minn hekk, l-infezzjoni GNAstV żiedet il-livelli ta 'espressjoni ta' CD8t, MHCI, u MHCII, u tindika li rispons immuni adattiv ġie attivat. Barra minn hekk, TGF- kien espress ħafna fil-milsa u l-kliewi, li tista 'tkun strateġija ta' evażjoni immuni ta 'GNastV biex tikkawża infezzjoni. Interessanti, kemm IL-1 kif ukoll IL-6 livelli ta' mRNA naqsu fil-kliewi, li jistgħu jgħinu biex jitnaqqsu l-leżjonijiet fil-kliewi. Dan huwa l-ewwel studju li jirrapporta bidliet fl-espressjoni tal-ġeni relatati mal-immunità b'reazzjoni għall-infezzjoni GNAstV, u r-riżultati tagħna jipprovdu għarfien dwar il-patoġenesi virali.

Kliem ewlieni: astrovirus nefritiku tal-wiżż, rispons immuni, milsa, kliewi, gosling

Ikklikkja biex titgħallem il-benefiċċji taċ-ċistanche u jkollok esperjenza ta' cistanche

INTRODUZZJONI

Mill-2017 'l hawn, diversi qatgħat tal-wiżż esperjenzaw tifqigħa severa ta' gotta fi 4- sa 16-goslings ta' ġurnata fil-Lvant taċ-Ċina, li wassal għal telf ekonomiku kbir fl-industrija tal-wiżż. Il-goslings infettati wrew piż tal-ġisem imnaqqas, u kliewi minfuħin u pallidu, b'urati bojod fl-ureteri u dispożizzjoni ta 'urati fuq il-wiċċ ta' l-organi vixxerali u l-kavità artikolari. Fl-2018, astrovirus ġdid tal-wiżż ġie iżolat mill-goslings infettati, u esperimenti ta 'riproduzzjoni tal-annimali wrew li kien l-aġent kawżattiv ewlieni tal-marda tal-gotta tal-gosling. Dan il-virus kien ġenetikament distint mill-mam astrovirus u l-astrovirus magħrufa. Fforma clade distinta skont is-sekwenza tal-aċidu amminiku tal-proteina ORF2 full-length (proteina kapsid), li hija l-aktar reġjun varjabbli tal-ġenoma. Għalhekk, għandha tingħata aktar attenzjoni għall-ħsara kkawżata mill-virus lill-goslings. Fl-istudju preżenti, l-astrovirus il-ġdid tal-wiżż jissejjaħ astrovirus nefritiku tal-wiżż (GNAstV).

Minħabba li GNAstV huwa virus li għadu kif qed jitfaċċa, ħafna studji ffukaw fuq l-iżolament tiegħu, l-analiżi ġenetika, u l-istabbiliment ta 'metodi dijanjostiċi (Yuan et al, 2018; Wan et al.,2019; Yin et al.,2020). Madankollu, ftit huwa magħruf dwar ir-rispons immuni ospitanti għall-infezzjoni GNAstV. L-astrovirus nefritiku tal-wiżż prinċipalment jikkawża ħsara lill-kliewi, lill-fwied u lill-milsa f'goslings, u nstabet tagħbija virali ogħla fil-kliewi u l-milsa meta mqabbla ma 'dik f'organi oħra (Jin et al, 2018; Xu et al,2019). Leżjonijiet tal-milsa u tagħbija virali għolja jindikaw li l-virus jista 'jikkawża ħsara lir-rispons immuni. Is-sistema immuni intrinsika għandha rwol importanti waqt l-infezzjoni tal-virus billi sservi bħala l-ewwel linja ta 'difiża kontra l-invażjoni virali (Chow J et al., 2015). Ir-riċetturi għar-rikonoxximent tal-mudell (PRR) jirrikonoxxu aċidi nuklejċi virali u jqanqlu rispons innat, inkluża l-produzzjoni ta 'ċitokini, bħal I-1 , TNF-x, u IFN, u proteini antivirali bħal OASL, IFITM3, u MX1. Ir-riċettur 3(TLR3) simili għal Toll marbut mal-membrana u r-riċetturi ċitosoliċi bħal RIG-I li prinċipalment fihom RIG-1 u MDA-5 huma l-aktar PRR importanti li jirrikonoxxu l-RNA virali. Ir-rispons immuni intrinsiku jinduċi sinjalazzjoni biex iqajjem ir-rispons immuni adattiv, li jikkontrolla l-infezzjoni virali f'fażi sussegwenti ta 'infezzjoni. L-immunità adattiva tinkludi r-rispons medjat mill-antikorpi/ taċ-ċelluli B rispons I u r-rispons medjat miċ-ċelluli, li jeħtieġu l-involviment ta' molekuli CD3 plus , CD4 plus , CD8 plus , u MHC klassi I u II. Bħalissa, il-mekkaniżmi li bihom GNAstV jaffettwa r-risponsi immuni innati u adattivi tal-ospitanti mhumiex ċari. Iċ-Ċina hija dar għall-ogħla popolazzjoni tal-wiżż madwar id-dinja; għalhekk, l-investigazzjoni tar-rispons immuni tal-wiżż għall-infezzjoni GNAstV hija importanti biex jiġi eluċidat il-mekkaniżmu ta 'patoġeniċità u l-immunità ta' GNAstV u jikkontrolla t-tixrid tiegħu. F'dan l-istudju, 2-goslings ta' jum kienu infettati b'GNastV. Il-bidliet istopatoloġiċi u l-post tal-virus, kif ukoll l-espressjoni tal-ġeni relatata mal-immunità fil-milsa u l-kliewi, ġew eżaminati mbagħad.

MATERJALI U METODI

Dikjarazzjoni ta' Etika

L-esperimenti kollha fuq l-annimali twettqu skont il-Linji Gwida għall-Annimali Sperimentali tal-Ministeru tax-Xjenza u t-Teknoloġija (Beijing, iċ-Ċina) u ġew approvati mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università Agrikola ta 'Nanjing.

Virus

L-iżolat GNAstV-JSHA (nru ta 'adeżjoni ta' GenBank MK125058) kien iżolat minn goslings morda bil-gotta (provinċja ta 'Jiangsu, iċ-Ċina) u miżmuma fil-laboratorju tagħna. It-titru tal-GAstV-JSHA kien 1 × 104.25 50 fil-mija doża infettiva tal-kultura tat-tessuti (TCID50)/mL kif determinat permezz ta' titrazzjoni fuq ċelluli epiteljali tal-kliewi tal-wiżż skont il-metodu ta' Reed & Muench.

Esperiment tal-Annimali

Il-kampjuni tal-milsa u tal-kliewi nġabru mill-esperiment preċedenti tagħna fuq l-annimali li kien deskritt fl-istudju ta 'Xu (Xuet al.,2019). Fil-qosor,2-erbgħin gosling ta' jum mingħajr infezzjoni GNAstV ġew separati b'mod każwali f'2 gruppi: infezzjoni u gruppi ta' kontroll negattiv. Kull gosling fil-grupp ta 'infezzjoni kien ikkontestat b'0.5 mL GNAstV-JSHA permezz ta' inokulazzjoni intramuskolari, filwaqt li l-gosling fil-grupp ta 'kontroll negattiv ġie mlaqqam bl-istess ammont ta' PBS.

Il-goslings kollha ġew immonitorjati kuljum għas-sinjali kliniċi. F'7 d wara l-infezzjoni (dpi), 10 goslings minn kull grupp ġew ewtanizzati u l-bidliet grossi ġew eżaminati, u mbagħad inġabru l-kliewi u l-milsa. Porzjon minn dawn il-kwistjonijiet ġie ffissat f'10 fil-mija formaldehyde għal eżami istopatoloġiku, il-bqija ġew maħżuna fi grad-80 għal aktar esperimenti. F'14 dpi, il-goslings superstiti ġew ewtanizzati u t-tessuti nġabru u nħażnu kif imsemmi hawn fuq.

Eżami istopatoloġiku

Il-kampjuni fissi ġew deidratati minn serje ta 'alkoħol, ċċarati fil-xylene, u inkorporati fil-paraffin. Imbagħad il-kampjuni ġew imqatta 'serje f'sezzjonijiet ta' 4 μm u mtebbgħin b'ematoxylin u eosin b'metodi ta 'rutina. Sezzjonijiet imtebba ġew eżaminati b'mikroskopju tad-dawl.

Sejbien tal-Post tal-Virus permezz ta' Ibridazzjoni In Situ

Il-metodu ta 'ibridizzazzjoni (FISH) in situ sar skont l-istruzzjonijiet tal-kit ISH kummerċjali (Boster, iċ-Ċina), b'xi modifiki. Qabel ma sar l-ISH, is-sensittività u l-ispeċifiċità tal-kampjun ġew ittestjati u ottimizzati permezz ta 'serje ta' trattamenti minn qabel. Fil-qosor, sezzjonijiet tat-tessuti deparaffinizzati ġew ittrattati minn qabel b'HCl (0.2 M, 15 min) u proteinase K （40 ug/mL, 20 min, 37 grad ）. Protease K ġiet inibita permezz ta 'fissazzjoni f'4 fil-mija paraformaldehyde għal 5 min. Imbagħad, saru l-passi ta 'ibridizzazzjoni u ta' wara l-ibridizzazzjoni. Probes ġew miżjuda mal-buffer ta' ibridizzazzjoni f'konċentrazzjoni ta' 0.5-2 ug/mL; il-buffer li kien fih is-sondi ġie żnaturat fi 98 grad għal 10 min u immedjatament imkessaħ fuq is-silġ. Bejn wieħed u ieħor 20 μL tat-taħlita ta 'ibridizzazzjoni ġew ippipettati fuq sezzjonijiet tat-tessut, miksija b'coverslips trattati b'diethylpyrocarbonate, u inkubati għal 16 sa 20 siegħa f'42 grad. Probi li kienu ibridizzati ma' RNA virali ġew skoperti bl-użu ta' antikorp anti-DIG konjugat ma' 3,3-N-diaminobenzidine tetrahydrochloride. Il-pjastri kienu counterstained b'metil aħdar u ssiġillati b'gomma newtrali. Biex tittejjeb is-sensittività, proteinase K intużat biex ittejjeb il-permeabilità tat-tessuti biex tiffaċilita d-dħul ta 'sondi fit-tessut.

Analiżi tal-ġeni immuni permezz ta' PCR kwantitattiv f'ħin reali

L-RNA totali ġie estratt bl-użu ta 'Trizol (Invitrogen, CA), u t-traskrizzjoni inversa tal-RNA saret bl-użu tal-kit HiScript Q RT SuperMix (Vazyme, iċ-Ċina). Termoċiklu (AB7300; Life Technologies) intuża għal PCR kwantitattiv. Is-softwer Primer 5.0 intuża għad-deżinjazzjoni tal-ġeni relatati mal-immunità, kif muri fit-Tabella 1. L-espressjoni tal-aċidu ribonuklejku ġiet normalizzata permezz ta 'kwantifikazzjoni ta' GAPDH bħala ġene tad-dar. Livelli ta' traskrizzjoni relattivi ġew analizzati bil-metodu bl-użu tal-{5}}AACT

Analiżi tal-Istatistika

Id-differenzi bejn il-grupp ta 'kontroll u l-grupp sperimentali ġew analizzati bit-test t ta' Student. Ir-riżultati huma espressi bħala l-medja ± devjazzjoni standard. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

RIŻULTATI

Bidliet Kliniċi

L-ebda mewt jew sinjali kliniċi ovvji ma ġew osservati fil-kontroll mhux imlaqqam. Madankollu, 5 mill-20 gosling infettati mietu matul l-esperiment, u tnaqqis fil-piż tal-ġisem kien osservat fil-goslings infettati bil-GNASTV. Fl-awtopsja, l-organi fil-grupp ta 'kontroll negattiv dehru normali, iżda d-dispożizzjoni ta' l-urati fuq il-wiċċ ta 'l-organi (fwied, qalb u kliewi), boroż tal-bili, u l-kavità artikolari ġiet skoperta fi goslings mejta. Barra minn hekk, kliewi minfuħin u pallidu b'urat abjad fl-ureteri kienu osservati fil-gżilli kollha infettati. Il-bidliet patoloġiċi ġew murija fl-istudju preċedenti tagħna (Xu et al..2019). Dawn ir-riżultati indikaw li aħna stabbilixxa b'suċċess mudell ta 'annimali ta' infezzjoni GNAstV fil-goslings.

Bidliet istopatoloġiċi fil-kliewi u l-milsa

Fuq eżami istopatoloġiku, il-kliewi u l-milsa mill-goslings ta 'kontroll negattiv dehru istoloġikament normali (Figuri 1A u 1B). Madankollu, deġenerazzjoni u nekrożi taċ-ċelloli epiteljali renali uinfjammatorjiinfiltrazzjoni taċ-ċelluli kienu osservati fil-kliewi ta 'goslings infettati (Figura 1C). Barra minn hekk, nekrożi tal-milsalimfoċitiu infiltrazzjoni taċ-ċelluli infjammatorji nstabu wkoll fil-milsa (Figura 1D).

Post tal-Virus fil-Kliewi u l-Mulsa

Il-post tal-astrovirus nefritiku tal-wiżż fil-kliewi u l-milsa ġie eżaminat bl-użu tal-ISH. Kif muri fil-Figura 2, ġew skoperti diversi partiċelli kannella fiċ-ċitoplasma ta 'ċelluli epiteljali tubulari renali, iżda l-ebda partiċelli kannella ma ġew osservati fil-glomeruli tal-kliewi. Ftit partiċelli kannella ġew skoperti fil-limfoċiti tal-milsa u ċ-ċelloli makrofaġi tal-milsa. Dawn ir-riżultati jindikaw li GNAstV jista 'jinfetta ċelluli epiteljali tubulari renali u limfoċiti tal-milsa.

Espressjoni ta' PRR u Molekuli Adapter fil-Mlsa u l-Kliewi ta' Goslings Infettati bil-GNastV L-espressjoni ta' PRR(RIG-1, MDA-5, u TLR3)u molekuli adapter ewlenin (MAVS, MyD88, uIRF7) fil-milsa u l-kliewi ġew determinati bil-qPCR kif muri fil-Figura3. Il-livell ta' mRNA tat-3 PRR fil-milsa żdied b'mod sinifikanti fil-grupp infettat f'7 u 14 dpi meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll negattiv (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Għaldaqstant, l-espressjoni tal-molekuli tal-adapter fil-grupp infettat f'7 u 14 dpi kienet ogħla b'mod sinifikanti minn dik fil-grupp ta' kontroll (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

Espressjoni taċ-ċitokini fil-milsa u l-kliewi ta' Goslings infettati b'GNastV

L-espressjonijiet taċ-ċitokin, IL-1, I-6, IL-8, Ⅱ-10, TGF-B, u iNOS ġew determinati bil-qPCR kif muri fil-Figura 4. Fil-milsa, il-livelli ta' mRNA ta' IL-1B u TGF-B fil-grupp ta' infezzjoni f'7 u 14dpi kienu ovvjament ogħla minn dawk fil-grupp ta 'kontroll negattiv (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p=""> 0.05). Moreover, no difference in I-6 mRNA expression at 7 and 14 dpi was observed between the infection and control groups(P>0.05). Fil-kliewi, il-livelli ta' mRNA ta' I-1 f'7 u 14 dpi u I-6 f'7 dpi kienu aktar baxxi fil-grupp ta' infezzjoni minn dawk fil-grupp ta' kontroll negattiv (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

Espressjoni ta 'proteini antivirali fil-milsa u l-kliewi ta' goslings infettati b'GNastV

Il-livell ta' mRNA ta' IFN-d. fil-milsa u l-espressjoni ta 'proteini antivirali (OASL, IFITM3.and MIX1) fil-kliewi u l-milsa ġew determinati kif muri fil-Figura 5. Fil-milsa, il-livelli ta' mRNA ta 'IFN-2. OASL, IFITM3, u MX1 f'7 u 14 dpi kienu ogħla b'mod sinifikanti fil-grupp infettat minn dawk fil-grupp ta' kontroll negattiv (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

Espressjoni ta' CD4t, CD8 plus, u Molekuli tal-Klassi MHC u I fil-milsa ta' Goslings Infettati minn GNAstV

L-espressjoni tal-ġeni assoċjati mal-preżentazzjoni tal-antiġen (CD4', CD8', molekuli MHC klassi I u II) fil-milsa ġiet iddeterminata bil-qPCR kif muri fil-Figura 6. Il-livelli ta 'espressjoni ta' MHC I f'7 u 14dpi kienu ogħla b'mod sinifikanti fil-grupp infettat minn dawk fil-grupp ta 'kontroll negattiv (P <0.05). il-livelli="" ta'="" espressjoni="" ta'="" mhc="" ii="" f'14="" dpi="" kienu="" ovvjament="" ogħla="" fil-grupp="" infettat="" minn="" dawk="" fil-grupp="" ta'="" kontroll="" negattiv=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Il-livelli ta' CD8 flimkien ma' mRNA f'7 u 14 dpi kienu ogħla b'mod sinifikanti fil-grupp infettat minn dawk fil-grupp ta' kontroll negattiv (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

DISKUSSJONI

Astrovirus nephritic tal-wiżż huwa virus iżolat ġdid li jista 'jikkawża gotta vixxerali u l-mewt ta' goslings, li jwassal għal ħsara kbira lill-focks tal-wiżż. Sal-lum, m'hemm l-ebda vaċċini u aġenti terapewtiċi għat-trattament tiegħu. Għalhekk, huwa meħtieġ li tiġi investigata r-rispons immuni ospitanti għall-virus biex tifhem il-patoġenesi tiegħu u tiżviluppa vaċċini u terapiji. F'dan l-istudju, waqqafna b'suċċess mudell ta 'annimali fil-goslings permezz ta' inokulazzjoni intramuskolari b'GNAst V-JSHA. Il-post tal-virus fil-limfoċiti tal-milsa u l-makrofaġi u n-nekrożi tal-limfoċiti tal-milsa jindikaw li GNAstV jista 'jinfetta l-milsa u jikkaġuna ħsara lis-sistema immuni ospitanti. Madankollu, sa issa, ma kien hemm l-ebda rapporti dwar ir-rispons immunoloġiku ta 'goslings infettati b'GNastV. Barra minn hekk, ġie osservat titer virali għoli fiċ-ċelloli epiteljali renali. u dan jista 'jikkontribwixxi għal ħsara fil-kliewi u disturb ta' eskrezzjoni ta 'aċidu uriku.

Is-sistema immuni intrinsika hija l-ewwel linja ta 'difiża kontra patoġenu jinvadi. Fl-istudju tagħna, l-infezzjoni GNAstV ikkawżat żieda fit-TLR3. RIG-1, u MIDA-5 espressjoni tal-mRNA fil-milsa u l-kliewi, li jindika li s-sistema immuni intrinsika ġiet attivata li tista 'tikkontribwixxi għall-inibizzjoni tal-invażjoni virali, Ir-regolazzjoni 'l fuq ta' molekuli adapter ewlenin (MyD88 u IRF7 ) ikkonferma aktar dawn ir-riżultati. IFN huwa prodott wara l-attivazzjoni ta 'PRR, li għandhom rwol kritiku fis-soppressjoni virali permezz ta' induzzjoni ta 'diversi ġeni stimulati minn IFN li l-prodotti tagħhom għandhom attività antivirali diretta. Fl-istudju tagħna, l-espressjoni ta 'IFN-z fil-milsa u l-espressjoni ta' proteini antivirali (OASL, MX1, u IFITM3) fil-milsa u l-kliewi żdiedu wara l-infezzjoni GNAstrV. Żieda fil-produzzjoni ta 'proteini antivirali tista' tkun utli għall-inibizzjoni ta 'invażjoni virali. Skont dan, ir-riżultati tagħna wrew li TLR3.RIG-1. MDA-5 u IRF7 ġew attivati ​​waqt l-infezzjoni GNAstV. Studju preċedenti wera wkoll li t-tip ta 'sistema jillimita r-replikazzjoni tal-astrovirus uman in vitro u in vivo u jipprovdi protezzjoni kontra l-permeabilità tal-barriera indotta mill-astrovirus (Marvin et al..2015). Madankollu, is-sejbiet għal TLR3 u OASL kienu differenti minn dawk għall-PRR u l-proteini antivirali l-oħra fil-milsa, peress li l-espressjoni ta 'kemm TLR3 u OASL naqset f'14 dpi meta mqabbla ma' 7 dpi. Dan jista 'jkun relatat ma' regolamentazzjoni ta 'feedback negattiv jew tnaqqis tat-tagħbija tal-virus. Għaldaqstant, lL-1B f'14 dpi jista' jkun riżultat ta' mekkaniżmi regolatorji tal-ġisem kontra produzzjoni żejda ta' ċitokini proinfjammatorji. Interessanti, il-livell ta' mRNA ta' I-1 fil-kliewi naqas fil-grupp infettat. Livell aktar baxx ta 'din iċ-ċitokin proinfjammatorju jista' jgħin biex itaffi l-ħsara fil-kliewi. Studji preċedenti rrappurtaw li astrovirus uman u astrovirus tad-dundjan tat-tip 2 (TASt V-2) infezzjonijiet ma kinux assoċjati ma 'infjammazzjoni u kkawżaw ftit leżjonijiet fil-villi intestinali (Koci et al..2003; Sebire et al.2004), li jissuġġerixxu li din tista' tkun karatteristika ta' infezzjoni ta' astrovirus fiċ-ċelloli epiteljali. I-6 huwa wkoll ċitokin infjammatorju li jinduċi effetti antivirali permezz ta' rispons immuni effiċjenti iżda huwa wkoll involut fi proċessi li jwasslu għal ħsara vaskulari,infjammazzjonital-ħajt vaskulari, u trombożi. Fl-istudju tagħna, ma nstabet l-ebda bidla sinifikanti fl-IL-6 fil-milsa wara infezzjoni GNAstV; dan jista 'jkun relatat ma' differenzi kbar bejn goslings individwali. Madankollu, l-espressjoni I-6 naqset fil-kliewi, simili għall-osservazzjoni għal -1B; dan jista' jgħin ukoll biex itaffi l-ħsara fil-kliewi. I-8 hija medjatur responsabbli għar-reklutaġġ ta' newtrofili li jipparteċipaw fl-infiltrat infjammatorju lokali. F'dan l-istudju, I-8 kien regolat 'il fuq fil-milsa u l-kliewi, u għalhekk seta' kkontribwixxa għall-infjammazzjoni. IL-10 hija ċitokina anti-infjammatorja li tista 'tinibixxi l-produzzjoni ta' ċitokini proinfjammatorji. F'dan l-istudju, GNAstV ikkawża tnaqqis ovvju fil-livelli ta' IL-10 fil-milsa; dan jista 'jkun indikazzjoni ta' infjammazzjoni severa fil-milsa u waħda mill-kawżi ta 'ħsara fil-milsa. Infezzjoni b'infezzjoni ta' vi-ruses oħra, bħall-virus tal-enċefalite Ġappuniża u l-virus Zika, intweriet ukoll li tirriżulta fi tnaqqis fl-espressjoni I-10 (Swarup et al.2007; Abreu 2019), iżda l-mekkaniżmu eżatt sottostanti GNAstr Vinfection teħtieġ aktar studju. TGF- huwa ċitokina immunosoppressiva. Għalhekk, iż-żieda fil-livelli ta 'TGF-B fil-milsa u l-kliewi tindika li l-infezzjoni GNAstV tista' tinduċi soppressjoni immuni. Barra minn hekk, ġie rrappurtat li l-infezzjoni T AStV-2 żiedet il-livell tas-serum ta' TGF- fid-dundjani (Koci et al.2003). Żieda fil-produzzjoni ta 'TGF intweriet li trażżan ir-rispons immuni u ttejjeb ir-replikazzjoni virali (Letterio u Roberts, 1998). Għalhekk, żieda fil-produzzjoni ta' TGF tista' tikkontribwixxi għar-replikazzjoni ta' GNAstV billi tinibixxi r-rispons immuni ospitanti. iNOS huwa komponent importanti tar-rispons immuni intrinsiku u għandu rwol ewlieni fil-kontroll ta' infezzjonijiet virali. Fl-istudju tagħna, is-sejbiet indikaw li l-infezzjoni GNAstV

ovvjament upregulated espressjoni INOS. Produzzjoni għolja ta' iNOS tista' tippermetti lill-ospitant jirreżisti l-infezzjoni virali. Ir-riżultati tagħna kienu skont dawk ta 'studji preċedenti, li wrew li l-infezzjoni TAStV-2 tinduċi produzzjoni ta' iNOS, li tillimita r-replikazzjoni tal-astrovirus (Qureshi et al.,200l; Koci et al.,2004; Meyerhoff et al.,2012 ).

Is-sistema immuni adattiva għandha rwol ewlieni fil-kontroll ta 'infezzjonijiet virali. Fl-istudju tagħna, GNAstVinfection żied il-livell ta 'mRNA ta' MHC Ia, MHC Iix, u CD8 plus, u dan jindika li r-risponsi immuni umorali u ċellulari ġew attivati. Preċedentement, kien irrappurtat li l-infezzjoni tal-astrovirus uman tevoka produzzjoni ta 'antikorpi, li tista' tinnewtralizza l-virus (Kurtzand Lee, 1978). Madankollu.l-ebda bidliet sinifikanti ma nstabu fl-espressjoni ta 'CD4 flimkien ma' mRNA fl-istudju. Meta wieħed iqis li ċ-ċelluli CD4"T huma essenzjali għall-maturazzjoni taċ-ċelluli B u l-ispeċifiċità tal-antikorpi, huwa possibbli li GNAst V ma setax jinduċi rispons immuni umorali qawwi. Dan jista' jispjega għaliex ma ġiet osservata l-ebda żieda ovvja fl-MHC Ⅱaexpression f'7 dpi. Barra minn hekk , il-livelli mRNA ta 'CD8 u MHCIa f'14 dpi naqsu meta mqabbla ma' 7 dpi. Dan jista 'jkun relatat mat-tnaqqis tat-tagħbija tal-virus, kif imsemmi hawn fuq. F'dan l-istudju, l-antikorp GNAst V ma ġiex skopert minħabba li l-ebda kit kummerċjali mhu disponibbli. Għalhekk , ir-rwol tal-anti-korpi f'GNastVinfection jeħtieġ li jiġi investigat aktar.

Bħala konklużjoni, id-dejta tagħna żvelat il-mudelli ta 'rispons immuni fil-milsa u l-kliewi ta' goslings infettati b'GNast V. Fuq l-infezzjoni GNAst V, ġew attivati ​​ġeni relatati mal-immunità intrinsika u adattiva. Madankollu, il-produzzjoni ta 'ċitokini u proteini antivirali ma pproteġix lill-goslings kontra l-marda. Dan huwa l-ewwel studju li jirrapporta l-bidliet fl-espressjonijiet tal-ġeni relatati mal-immunità b'rispons għal GNAst Vinfection, li jista 'jgħin aktar biex jiċċara l-mekkaniżmi molekulari tal-interazzjonijiet GNAstV tal-host.