Identifikazzjoni ta' sbatax-il komponent f'Cistanches Herba kkultivati fid-deżert ta' Tarim permezz ta' HPLC-MS
Mar 17, 2023
NAN Ze-dong1 ,ＲEN Hua-zhong1 ,ZHAO Ming-bo2 ,JIANG Yong2 ,TU Peng-fei2*
( 1. Kulleġġ Vokazzjonali u Tekniku ta' Leshan, Leshan 614000, iċ-Ċina; 2. Laboratorju Ewlenin tal-Istat tad-Drogi Naturali u Bijomimetiċi, Skola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, Ċentru tax-Xjenza tas-Saħħa tal-Università ta' Peking, Beijing 100191, iċ-Ċina)
［Astratt］Għan: Biex jiġu identifikati l-komponenti kromatografiċi ta '60 fil-mija estratt tal-metanol fiCistanches deserticola Herbaikkultivat fid-deżert ta' Tarim minn HPLC-MS.Metodu: Analiżi HPLC-MS saret fuq kolonna Agilent ZOＲBAX Eclipse Plus C18 (4. 6 mm × 250 mm, 5 μm) ． Il-fażi mobbli kienet aċetonitrile-0. Soluzzjoni milwiema ta' 1 fil-mija ta' aċidu formiku permezz ta' elużjoni tal-gradjent bir-rata tal-fluss ta' 1 mL·min － 1, u l-wavelength ta' skoperta kien 254 nm. It-temperatura tal-kolonna kienet issettjata għal 25 grad, u l-volum tal-injezzjoni kien 10 μL. Ｒriżultat: Ġew identifikati b'mod preċiż sittax-il quċċata kromatografika / sbatax-il komponent billi tqabbel il-ħin ta 'ritenzjoni, il-piżijiet molekulari u l-joni tal-frammenti tal-komposti li iżolajna u identifikajna. Dawn il-komponenti kromatografiċi ġew determinati bħala coniferin, demethyl syringin, syringin, echinacoside, cistanoside A, verbascoside ( tubuloside A ), cistanoside B, isoverbascoside, 2'-acetylcistanoside A, cistanoside C, isocistanoside C, 2'-acetylverbascoside B, etupimerioside B, A, cistanoside K u cistanoside J.
Konklużjoni: Il-metodu HPLC-MS huwa adattat għall-identifikazzjoni tal-komponenti kromatografiċi ta '60 fil-mija estratt tal-metanol f'Cistanches Herba. Dan l-istudju se jipprovdi l-evidenza xjentifika biex jiġu analizzati b'mod komprensiv il-kostitwenti kimiċi ta 'din il-ħaxix mediċinali.
［Kliem ewlenin］ Cistanches deserticolaHerba; Cistanche; HPLC-MS; estratt tal-metanol
Cistanche deserticola YCMa
Cistanche deserticola, magħrufa wkoll bħala "ġinseng tad-deżert",hija mediċina tonika Ċiniża famuża, li hija mqassma fl-Inner Mongolia, Ningxia, Gansu, u Xinjiang taċ-Ċina [1].Għandu l-effett li tonifying kidney-yang, jibbenefika l-essenza tad-demm, xarrab l-imsaren, u jiddefeca. Huwa komunement użat fil-kliniċi biex jikkura impotenza maskili, infertilità femminili, uġigħ kiesaħ fil-qadd u l-irkoppa, stitikezza tal-stasis tad-demm, eċċ. [2-3].Cistanche deserticola mainkluża fl-ewwel parti tal-Farmakopea Ċiniża (edizzjoni 2015) hija z-zokk imnixxef imlaħħam ta 'Cistanche deserticola u Cistanche tubulosa (4). It-tim ta 'riċerka tagħna wettaq riċerka sistematika u fil-fond fuq pjanti Cistanche għal ħafna snin.Il-komponenti kimiċi tal-pjanti Cistanche huma prinċipalment phenylethanoid glycosides, minbarra iridojdi u glycosides tagħhom, lignans u glycosides tagħhom, glycosides tal-alkoħol benżil, eċċ.[5]. Studji farmakoloġiċi moderni juru li l-phenyl ethanol glycosides, il-komponenti ewlenin tal-ġeneru, għandhom effetti newroprotettivi, antiossidanti, protezzjoni tal-fwied, antibatteriċi, antivirali, anti-tumur, anti-infjammatorji, u effetti oħra [6-11].
Ġinseng tad-deżert
Fiċ-Ċina,Cistanche deserticolahuwa mqassam fil-Punent tal-Inner Mongolia, it-Tramuntana ta' Xinjiang, u l-Baċin ta' Qaidam f'Qinghai, iżda mhux f'Tarim Basin fin-Nofsinhar ta' Xinjiang. Fl-aħħar tad-disgħinijiet, biex jipproteġu l-qasam taż-żejt ta 'Tazhong u jikkontrollaw id-deżert, il-kwartieri ġenerali taż-żejt introduċew numru kbir ta' Haloxylon ammo dendron madwar iż-żejt ta 'Tazhong u fuq iż-żewġ naħat tal-awtostrada tad-deżert u mlaqqmu l-Haloxylon ammo dendron ma' cistanche, li ġie aktar minn 10 snin. Minħabba l-klima sħuna fin-Nofsinhar ta 'Xinjiang u l-kundizzjonijiet tajbin ta' irrigazzjoni bil-qtar fil-bażi taż-żejt, ir-rendiment ta 'cistanche deserticola huwa għoli ħafna, u r-rendiment ta' cistanche deserticola frisk għal kull mu jilħaq aktar minn 500kg [8]. Ħafna komponenti kimiċi f'Cistanche deserticola pproduċew numru kbir ta 'isomeri minħabba pożizzjonijiet ta' konnessjoni differenti ta 'sostituenti.Dan iġib diffikultajiet kbar għall-identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika ta' dan il-materjal mediċinali. Huwa diffiċli li jiġu identifikati b'mod preċiż il-komponenti tal-quċċata kromatografika jekk tiddependi biss fuq LC-MS mingħajr komposti monomeriċi bħala l-kontroll. Għalhekk, hemm ftit rapporti tal-letteratura dwar dan ix-xogħol fl-istadju bikri. L-awtur iżola ħafna komposti monomeriċi [9-11] minn Cistanche deserticola ikkultivati fid-Deżert Tazhong fl-istadju bikri. Permezz ta 'dawn il-komposti monomeriċi miksuba fl-istadju bikri, il-quċċati kromatografiċi parzjali HPLC tal-estratt tal-metanol ta' 60 fil-mija ta 'Cistanche deserticola ġew identifikati b'mod preċiż. Dan mhux biss jevita l-identifikazzjoni ripetuta ta 'xi komposti magħrufa fil-kostitwenti kimiċi ta' Cistanche deserticola, iżda wkoll jipprovdi xi referenza għal aktar riċerka dwar il-kontroll tal-kwalità tal-materjal mediċinali. F'dan id-dokument, 17-il komponent ta 'estratt ta' metanol ta '60 fil-mija ta' Cistanche deserticola ġew identifikati minn HPLC-MS.
Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti Cistanche
【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1.Materjal
Strument ta' reżonanza manjetika nukleari Inova-500 (Varian, USA); 6320IonTrap LC-MS spettrometru tal-massa, kolonna EclipseXDB-C18 (4.6mm × 250mm,5 μ m) (Agilent, USA); Miżien elettroniku QUINTIX313-1CN tat-tip 1/10000 (Diviżjoni Sedaris); Cleaner ultrasoniku KQ-500DV (Jiangsu Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); KMUP - Ⅰ Sistema Analitika ta 'Ġenerazzjoni ta' Ilma Ultra Pura Traċċa (Chengdu Haochun Instrument Equipment Co., Ltd.).
Id-39 sustanza ta 'kontroll użati f'dan l-esperiment kienu kollha iżolati minn Cistanche deserticola ikkultivata fid-deżert f'Tazhong mill-awtur fl-istadju bikri, u l-istrutturi tagħhom ġew determinati minn NMR u tekniki oħra ta' spettroskopija. L-istrutturi ta’ 39 kampjun ta’ kontroll ġew identifikati bħala Cistanche deserticoside J, Cistanche deserticoside K, Cistanche deserticoside L, Cistanche deserticoside M, Cistanche deserticoside N, epimeridinosideA, Isocistancheside C, angiocyanin B, Cistanche heterophyllin, Isocornicin, Cistanche deserticoside D, Cistanche deserticoside C, Cistanche cymosin, 2 '- acetyl Cistanche deserticoside A, 2' - acetyl Cistanche deserticoside A, Cistanche deserticola B, Cistanche deserticola A, Echinoside A, Cistanche deserticola glycoside E, Salidroside, 6 '- acetyl salidroside, saliside B, syringin, demethyl syringin , juniperin, (2E, 6E) - 3, 7-dimetil-8-hydroxyctadien-1-O- - D-glukoside, ( plus ) - siringina, ( plus ) - siringina-4 '- O- - D-glucopyranoside, ( plus ) - isoeucomminA, eucomminA, ( plus ) - rosin monomethyl ether- - D-glukoside, larviċida-4 ' - O- - D-glukoside, larviċida{-4-O- - D-glukoside{- - D glukopyranoside, hesperidin A, żona imwarrba A, 6-deoxycatapol. Il-purità tas-sustanzi ta' referenza kollha ta' hawn fuq hija aktar minn 98.0 fil-mija . Acetonitrile huwa kromatografikament pur (DikmaPure, USA), l-ilma huwa ilma ultrapur, u reaġenti oħra użati fil-proċess tat-test huma reaġenti puri analitiċi, prodotti minn Beijing Chemical Plant.
Il-materjal mediċinali użat f'dan l-esperiment, Cistanche deserticola, inġabar miż-żona tad-deżert ta' Tazhong, Xinjiang, f'Novembru 2010. Ġie identifikat mill-Professur Tu Pengfei tal-Iskola tal-Farmaċija tal-Università ta' Peking bħala iz-zokk imnixxef imlaħħam tal-pjanta Leobaceae Cistanche deserticola. Il-kampjun kien maħżun fiċ-Ċentru ta 'Riċerka Moderna tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża tal-Università ta' Peking (numru tal-kampjun: CD201011).
Cistanche deserticola slice
2.Metodi u riżultati
2.1 Preparazzjoni ta' soluzzjoni ta' referenza
Ħu madwar 1mg ta 'kull wieħed mid-39 kampjun ta' kontroll miksuba minn Cistanche deserticola fl-istadju bikri, iżenhom b'mod preċiż, poġġihom f'kunjett volumetriku ta '5mL rispettivament, ħollhom bil-metanol, u volumhom għall-iskala, u mbagħad ikseb il-kontroll uniku soluzzjoni.
2.2 Preparazzjoni tas-soluzzjoni tat-test
B'referenza għall-Farmakopea Ċiniża, 20edizzjoni 15, ħu madwar 1g tat-trab tal-prodott (permezz tar-raba' għarbiel), iżenha b'mod preċiż, poġġiha fi flixkun kannella ta' 100mL, żid b'mod preċiż 50mL ta' 60 fil-mija metanol, ttamp. it, ħawwadha sew, iżen il-massa, xarrabha għal 30min, trattament ultrasoniku għal 40min, kessaħha, iżen il-massa mill-ġdid, żid 50 fil-mija metanol biex tpatti l-massa mnaqqsa, ħawwadha sew, toqgħod, ħu s-supernatant, u uża filtrazzjoni tal-membrana mikroporuża 0.45 μ M, ħu l-filtrat kontinwu biex tikseb is-soluzzjoni tat-test.
2.3 Kundizzjonijiet kromatografiċi
Kolonna kromatografika AgilentEclipse XDB-C18 (4.6mm × 250mm,5 μ m), wavelength ta 'skoperta 254nm, temperatura tal-kolonna 25 grad; Bl-użu ta' aċetonitrile (A) - 0.1 fil-mija ta' soluzzjoni milwiema ta' aċidu formiku (B) bħala l-fażi mobbli, elużjoni tal-gradjent (0 - 20min, 5 fil-mija - 15 fil-mija A; 20 - 50 min, 15 fil-mija - 30 fil-mija A; 50 - 60min, 30 fil-mija - 50 fil-mija A; 60 - 70min, 50 fil-mija - 95 fil-mija A); Rata tal-fluss: 1.0mL · min-1, volum ta 'injezzjoni: 10 μ L.
2.4 Kundizzjonijiet tal-ispettru tal-massa
Temperatura kapillari 350 grad ; Vultaġġ kapillari 3500V; Rata tal-fluss tal-gass tal-ġakketta (nitroġenu) 12.0L · min-1; Pressjoni tal-gass awżiljarju (nitroġenu) 206.8kPa; Il-firxa sħiħa tal-iskannjar tal-ispettrometrija tal-massa hija m/z 50 ~ 1000; Elju tal-gass tal-ħabta, l-enerġija tal-ħabta tintgħażel awtomatikament waqt it-test; Iġbor 1 labra għal kull mod ta 'jone pożittiv u negattiv.
2.5 Test ta' sustanza ta' referenza
Id-39 soluzzjoni ta 'referenza ppreparati taħt 2.1 ġew ittestjati taħt 2.3 kundizzjonijiet kromatografiċi u 2.4 kundizzjonijiet spettrometriċi tal-massa, u l-ħin ta' żamma u l-piż molekulari relattiv tagħhom ġew irreġistrati (Tabella 1).
2.6 Determinazzjoni tas-soluzzjoni tat-test
Ħu l-materjal mediċinali Cistanche deserticola miġbur miż-żona tad-deżert ta 'Tazhong, Xinjiang, u pprepara s-soluzzjoni tat-test skond il-metodu deskritt f'2.2. Imbagħad, wettaq id-determinazzjoni skont il-kundizzjonijiet kromatografiċi deskritti f'2.3 u l-kundizzjonijiet tal-ispettrometrija tal-massa deskritti f'2.4, u ddetermina l-kromatogramma HPLC u l-ispettrometrija tal-massa tagħha fil-modalità tal-jone pożittiv u negattiv (Figuri 1-3).
Fig. 1 kromatogramma HPLC ta' 60 fil-mija estratt ta' metanol ta' Cistanches Herba
Fig. 2 Kromatogramma TIC MS pożittiva ta 'estratt ta' metanol ta '60 fil-mija ta' Cistanches Herba
Fig. 3 Kromatogramma TIC MS negattiva ta 'estratt ta' metanol ta '60 fil-mija ta' Cistanches Herba
2.7 Identifikazzjoni tal-kromatogramma HPLC ta' materjali mediċinali
Taħt l-istess kundizzjonijiet (2.3 kundizzjonijiet kromatografiċi u 2.4 kundizzjonijiet tal-ispettrometrija tal-massa), il-komponenti ġew identifikati billi tqabbel il-ħin ta 'ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tal-kampjun tat-test u l-kampjun ta' kontroll. Il-proċess ta' identifikazzjoni speċifiku tal-quċċata tal-kromatogramma tal-kampjun tat-test (Figura 1) huwa kif ġej.
2.7.1 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 1
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 1 huwa ta' 16.67 minuti. Fil-modalità tal-jone pożittiv, il-quċċata tal-jone excimer m/z365 tingħata bħala [M plus Na] plus , filwaqt li fil-modalità tal-jone negattiv, tingħata l-quċċata tal-jone excimer m/z387 [M flimkien ma 'COOH] -. Il-piż molekulari relattiv tal-quċċata 1 huwa ddeterminat li jkun 342. Jingħata wkoll il-framment tal-jone m/z179, li joriġina mit-telf ta 'molekula 1 ta' glukożju 163 Da minħabba l-qsim tar-rabta glycoside. Skont il-ħin ta 'ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 1 ġiet identifikata bħala coniferin.
2.7.2 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 2
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 2 huwa 17.36min. Taħt il-mod tal-jone negattiv, il-qċaċet tal-jone tal-excimer m/z357 [M – H] -, 393 [M plus Cl] - jingħataw, u l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 2 huwa determinat li jkun 358. Fl-istess ħin, il- framment jone m/z195 huwa derivat mit-telf ta 'molekula 1 ta' glukożju 163 Da minħabba t-tkissir tal-bond glycoside. Il-quċċata kromatografika 2 ġiet identifikata bħala demethylsyringin skont il-ħin ta' ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza.
2.7.3 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 3
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 3 huwa 19.04min, il-quċċata tal-jone excimer m/z395 [M flimkien ma' Na] plus jingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z417 [M plus HCOO] - tingħata fil- Mod tal-jone negattiv, u l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 3 huwa determinat li jkun 372. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z209 huwa derivat mit-telf ta 'molekula 1 ta' glukożju 163 Da minħabba t-tkissir tal-bond glycoside. Il-quċċata kromatografika 3 ġiet identifikata bħala syringin skont il-ħin ta' ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza.
2.7.4 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 4
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 4 huwa 27.66 min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z804 [M plus NH4] plus tingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z785 [M – H] - tingħata fil-modalità tal-jone negattiv. Il-piż molekulari relattiv tal-quċċata 4 huwa ddeterminat li jkun 786. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z623 huwa derivat mit-telf ta 'tkissir tal-bonds tal-ester ta' 1 molekula ta 'kaffeina 163 Da. Flimkien mal-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 4 ġiet identifikata bħala echinacea.
2.7.5 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 5
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 5 huwa 31.48min, il-quċċata tal-jone excimer m/z818 [M flimkien ma' NH4] plus jingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z799 [M – H] - tingħata fil- Mod tal-jone negattiv, u l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 5 huwa determinat li jkun 800. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z637 huwa derivat mit-telf ta 'tkissir tal-bonds tal-ester ta' 1 molekula ta 'kaffeina 163Da. Meta tgħaqqad il-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, ġie kkonfermat li l-quċċata kromatografika 5 kienet cistanche glycoside A.
Tabella 1 Piż molekulari u ħin ta' żamma( tＲ ) ta' 39 kompost standard
2.7.6 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 6
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 6 huwa 34.17min. Żewġ qċaċet tal-jone excimer m/z846642 [M flimkien ma NH4] plus huma mogħtija fil-modalità tal-jone pożittiv, u żewġ qċaċet tal-jone excimer m/z827623 [M – H] - jingħataw ukoll fil-modalità tal-jone negattiv. Huwa spekulat li l-quċċata 6 jista 'jkun fih żewġ komposti b'piż molekulari relattiv ta' 828624. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z665461 huwa derivat mit-telf ta 'tkissir tal-bond tal-ester ta' 1 molekula ta 'kaffeina 163 Da, u l-framment tal-jone m /z622 huwa derivat mill-ksur tal-bonds acetyl ester. Dawn iż-żewġ komposti ġew iżolati u kkombinati mal-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 6 kienet taħlita ta 'Cimicifugarin u anthocyanin A.
2.7.7 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 7
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 7 huwa 35.34 min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z832 [M plus NH4] plus , 837 [M plus Na] plus hija mogħtija fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z813 [M – H] - tingħata fil-modalità tal-jone negattiv , u l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 7 huwa 814. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z637 huwa derivat mit-telf li jkisser il-bonds tal-ester ta 'molekula 1 ta' aċidu feruliku 177Da. Flimkien mal-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 7 ġiet identifikata bħala cistanche glycoside B.
2.7.8 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 8
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 8 huwa 36.17min, il-quċċata tal-jone excimer m/z647 [M flimkien ma' Na] plus jingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z623 [M – H] - tingħata fil- Mod ta 'jone negattiv, u l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 8 huwa determinat li jkun 624. Fl-istess ħin, jingħata l-jone framment m/z461, li joriġina mit-tkissir tal-bond tal-ester u telf ta' molekula 1 tal-grupp tal-kaffeina 163 Da. Flimkien mal-ħin ta 'ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 8 ġiet identifikata bħala heterocoenoside.
2.7.9 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 9
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 9 huwa ta' 38.20 minuta. Il-qċaċet tal-jone eċimeru m/z860 [M flimkien ma' NH4] plus , 865 [M flimkien ma' Na] plus huma mogħtija fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-qċaċet tal-jone eċċimeru m/z841 [M – H ] -, 877 [M plus Cl] - huma mogħtija fil-modalità ta 'jone negattiv. Il-piż molekulari relattiv tal-quċċata 9 huwa ddeterminat li jkun 842. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z679636 huwa derivat mit-telf li jkisser il-bonds tal-ester ta 'molekula 1 ta' kaffeina 163 Da u molekula 1 ta 'acetyl 43 Da. Il-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza huma konsistenti, u l-quċċata ta 'identifikazzjoni 9 hija 2'- acetyl cistanche glycoside A.
2.7.10 Identifikazzjoni tal-kromatografiku peak 10
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 10 huwa 39.04min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z656 [M plus NH4] plus , 661 [M flimkien ma Na] plus tingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z637 [M – H] -, 673 [M plus Cl] - jingħata fil-modalità tal-jone negattiv. Il-piż molekulari relattiv tal-quċċata 10 huwa ddeterminat li jkun 638. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z475 huwa derivat mit-telf ta 'tkissir tal-bonds ester ta' 1 molekula ta 'kaffeina 163 Da. Il-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza huma konsistenti, u l-quċċata ta 'identifikazzjoni 10 hija Cistanche C.
2.7.11 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 11
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 11 huwa 40.82 min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z661 [M plus Na] plus , 677 [M plus K] plus tingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z637 [M – H] -, 673 [M plus Cl] - jingħata fil-modalità tal-jone negattiv. Jista 'jiġi ddeterminat li l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 11 huwa 638. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z475 huwa derivat mit-telf ta' tkissir tal-bonds tal-ester ta 'molekula 1 ta' kaffeina 163 Da. Meta tgħaqqad il-ħin ta 'ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 11 ġiet identifikata bħala isocistanche glycoside C.
2.7.12 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 12
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 12 huwa 41.48 min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z684 [M plus NH4] plus , 689 [M plus Na] plus tingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone tal-eċċimer m/z665 [M – H] - tingħata fil-modalità tal-jone negattiv . Jista 'jiġi determinat li l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 12 huwa 666. Fl-istess ħin, huwa muri li l-framment tal-jone m/z503460 ġej mit-telf ta' tkissir tal-bonds ester ta 'molekula 1 ta' kaffeina 163 Da u molekula 1 ta 'acetyl 43 Da. Skont il-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 12 ġiet identifikata bħala 2 '- acetyl coeliaoside.
Cistanche deserticola esperiment
2.7.13 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 13
Il-ħin ta 'żamma tal-quċċata kromatografika 13 huwa 44.29min, il-quċċata tal-jone excimer m/z689 [M flimkien ma' Na] plus jingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z665 [M – H] - tingħata fil- modalità tal-jone negattiv, u l-piż molekulari relattiv tal-quċċata 13 huwa 666. Fl-istess ħin, huwa muri li l-jone framment m/z503460 ġej mit-telf tal-ksur tal-bonds ester ta 'molekula 1 ta' kaffeina 163 Da u molekula 1 ta 'acetyl 43 Da. Flimkien mal-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 13 ġiet identifikata bħala anthocyanin B.
2.7.14 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 14
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 14 huwa 46.67 min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z675 [M flimkien ma' Na] plus hija mogħtija fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z651 [M – H] - tingħata fil-modalità tal-jone negattiv. Il-piż molekulari relattiv tal-quċċata 14 huwa 652. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z475 huwa derivat mit-telf ta 'tkissir tal-bonds tal-ester ta' 1 molekula ta 'grupp ta' aċidu ferulic 177Da. Flimkien mal-ħin ta 'ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 14 ġiet identifikata bħala epimeridinosideA.
2.7.15 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 15
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 15 huwa 49.90 min. Il-quċċata tal-jone excimer m/z698 [M plus NH4] plus , 703 [M plus Na] plus jingħata fil-modalità tal-jone pożittiv, u l-quċċata tal-jone excimer m/z679 [M – H] -, 715 [M plus Cl] - jingħata fil-modalità tal-jone negattiv. Il-piż molekulari relattiv tal-quċċata 15 huwa 680. Fl-istess ħin, il-framment tal-jone m/z517474 huwa derivat mit-telf li jkisser il-bonds tal-ester ta 'molekula 1 ta' kaffeina 163 Da u molekula 1 ta 'acetyl 43 Da. Il-quċċata kromatografika 15 ġiet identifikata bħala cistanche glycoside K ibbażata fuq il-ħin ta 'ritenzjoni u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza.
2.7.16 Identifikazzjoni tal-quċċata kromatografika 16
Il-ħin ta' żamma tal-quċċata kromatografika 16 huwa ta' 55.36 minuti. Fil-modalità tal-jone pożittiv, jingħata l-quċċata tal-jone excimer m/z717 [M flimkien ma Na] plus, filwaqt li fil-modalità tal-jone negattiv, il-qċaċet tal-jone eċċimeru m/z693 [M – H] -, 729 [M flimkien mal-Cl] - huma mogħtija, li jirriżulta f'piż molekulari relattiv ta '694 għall-quċċata 16. Fl-istess ħin, huwa muri li l-framment jone m/z517474 ġej mill-ester bond tkissir telf ta 'molekula 1 ta' aċidu ferulic grupp 177 Da u molekula 1 ta ' grupp aċetil 43 Da. Flimkien mal-ħin ta 'żamma u l-piż molekulari relattiv tas-sustanza ta' referenza, il-quċċata kromatografika 16 ġiet identifikata bħala cistanche glycoside J. Il-qċaċet kromatografiċi tal-estratt tal-metanol ta '60 fil-mija ta' Cistanche deserticola ġew identifikati minn HPLC-MS flimkien mal-piż molekulari relattiv, żamma ħin, u framment jone tas-sustanza ta' referenza separata. Ir-riżultati wrew li 17-il komponent tas-16-il quċċata kromatografika ġew identifikati b'mod preċiż (Tabella 2).
Tabella 2 Quċċati kromatografiċi identifikati ta' Cistanches Herba u komposti standard ta' referenza
3 .Diskussjoni
3.1 Għażla tal-metodu tal-preparazzjoni tal-oġġett tat-test
L-għan ewlieni ta 'dan l-istudju huwa li jiġu identifikati l-quċċati HPLC ta' Cistanche deserticola. Għalhekk, l-għażla tas-solvent tal-estrazzjoni u l-metodu tal-estrazzjoni hija bbażata fuq il-kapaċità li tikseb aktar qċaċet HPLC. It-tim ta 'riċerka wettaq riċerka fit-tul fuq Cistanche deserticola u għamel ħafna xogħol fl-analiżi tal-kwalità. F'dan id-dokument, is-solvent ta 'estrazzjoni u l-metodu ta' estrazzjoni ta 'Cistanche deserticola ġew magħżula wkoll abbażi tax-xogħol ta' analiżi preċedenti tal-grupp ta 'riċerka u l-Farmakopea Ċiniża (edizzjoni 2015). Fl-aħħarnett, 60 fil-mija estrazzjoni ultrasonika tas-solvent tal-metanol għal 40 min intgħażlet bħala l-metodu ta 'estrazzjoni.
3.2 Għażla tal-kundizzjoni HPLC-MS
L-għażla tal-kolonna kromatografika f'dan id-dokument hija bbażata fuq l-analiżi tal-kwalità ta 'Cistanche deserticola fl-istadju bikri tal-grupp ta' riċerka, u l-investigazzjoni ta 'AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4.6mm × 250mm,5 μ m), DionexC18 (4.6mm × 250mm,5). μ m), ThermoC18(4.6mm × 250mm,5 μ m) Kolonna kromatografika, finalment agħżel kolonna kromatografika AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4.6mm × 250mm,5 μ m) Għandha effett ta 'separazzjoni tajjeb fuq Cistanche deserticola; Id-39 sustanza ta 'referenza jinkludu phenylethanoid, lignans, u phenylpropanoid, għalhekk il-wavelength ta' skoperta huwa 254nm; Fl-istess ħin, l-effetti tal-fażi mobbli bħal metanol-ilma, acetonitrile-ilma, metanol-0.1 fil-mija ilma aċidu fosforiku, acetonitrile-0.1 fil-mija ilma aċidu formiku fuq separazzjoni kromatografika u massa skoperta tal-ispettrometrija ġew investigati, u acetonitrile-0.1 fil-mija ilma tal-aċidu formiku ġie finalment magħżul bħala l-fażi mobbli.
3.3 Sommarju
Il-metodu stabbilit f'dan l-istudju identifika b'mod preċiż 17-il komponent minn 16-il quċċata kromatografika ta' 60 fil-mija metanolestratttaCistanche deserticola.
Trab ta 'l-estratt ta' Cistanche
Ir-riżultati tar-riċerka mhux biss għandhom ċertu valur ta 'referenza għall-analiżi tal-kwalità ulterjuri tal-materjal mediċinali iżda wkoll jistgħu jevitaw xi xogħol ripetittiv fuq l-identifikazzjoni tal-istruttura tal-komposti magħrufa tal-materjal mediċinali. Madankollu, b'mod ġenerali, hemm relattivament ftit qċaċet kromatografiċi identifikati, u ħafna qċaċet kromatografiċi ma ġewx identifikati minħabba li ma ġewx assenjati lis-sustanza ta' referenza. Il-biċċa l-kbira tal-komponenti identifikati huma phenylethanoid glycosides, filwaqt li lignans huma rari. Dan jista 'jkun minħabba li l-metodu ta' estrazzjoni msemmi fl-edizzjoni 2015 tal-Farmakopea Ċiniża huwa prinċipalment immirat lejn phenylethanoid glycosides, jew minħabba li l-kontenut ta 'echinacoside u komposti bħal coliform fl-estratt ta' dan il-materjal mediċinali huwa għoli wisq, li jagħmilha diffiċli. biex tiskopri komposti oħra b'kontenut żgħir. Ir-raġunijiet speċifiċi jeħtieġ li jiġu ċċarati aktar.
[Referenzi]
[1] Kumitat Editorjali tal-Flora taċ-Ċina. Flora taċ-Ċina [M]. Beijing:Science Press, 1990: 86
[2] Yang Junshan. Ġinseng tad-deżert -- Cistanche deserticola [J]. Chinese Journal of Pharmacy,2011,46(12): 881．
[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai, et al. Riċerka dwar Cistanche deserticola u l-iżvilupp industrijali tagħha[J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46 (12): 882-887
[4]Kummissjoni Nazzjonali tal-Farmakopea. Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina. Parti I [M] Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015: 135
[5] JIANG Y,TU PF. Analiżi tal-kostitwenti kimiċi fl-ispeċi Cistanche ［J］． J Chromatogr A,2009,1216 ( 11): 1970-1979．
[6] PAN J, YUAN CS, LIN CJ, et al. Attivitajiet farmakoloġiċi u mekkaniżmi ta 'glikożidi fenilpropanoid naturali［J］． Pharmazie,2003,58(11): 767-775．
[7] FU GM, PANG HH, Wong Y. Glikożidi feniletanojdi li jseħħu b'mod naturali: twassal potenzjali għal terapewtiċi ġodda［J］． Curr Med Chem,2008,15 ( 25 ): 2592-2613．
[8] Rhode Mei, Long Mei, Du Wenjing, et al. Il-mekkaniżmu ta 'effett kontra l-osteoporożi tal-estratt ta' Cistanche deserticola fuq ġrieden M KOOPG ［ J ］. Esperjent Ċiniż Ġurnal tal-Preskrizzjonijiet, 2016, 22 (10): 138-142
[9] Ma Hui, Yin Ruoxi, Guo Min, et al. Effett ta 'Cistanche deserticola polysaccharide fuq tixjiħ indott minn D-galactose Effett ta' espressjoni CREB fil-ġrieden mudell antik ［ J ］. Chinese Experimental Prescriptions Journal, 2014, 20 (20): 137-141
[10] Tao Yicun, Li Jianying, Xu Yonghua, et al. Effetti ta 'phenylethanoside ta' Cistanche deserticola fuq il-firien Prevenzjoni u trattament ta 'edema pulmonari ta' altitudni għolja ［ J ］. Chinese Journal of Experimental Prescriptions,2014,20(15): 134-138．
[11] Zhou Haitao, Cao Jianmin, Lin Qiang. Cistanche deserticola fuq il-kapaċità eżawrita tal-għawm tal-firien U l-kapaċità antiossidant mitokondrijali mijokardijaku ［ J ］. Formula sperimentali Ċiniża Journal of Science, 2012, 18 (6): 229-233
[12] NAN ZD, ZHAO MB, ZENG KW, et al. Iridoids kontra l-infjammazzjoni miż-zkuk ta 'Cistanche deserticola kkultivati fid-deżert ta' Tarim ［J］． Chin J Nat Med,2016,14(1): 61-65．
[13] NAN ZD, ZENG KW, SHI SP, et al. Phenylethanoid glycosides b'attivitajiet anti-infjammatorji miz-zkuk ta 'Cistanche deserticola kkultivati fid-deżert ta' Tarim ［J］． Fitoterapia,2013,89: 167-174．
[14] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong, et al. Kimika ta 'cistanche tad-deżert ikkultivata fi Studju tal-Kompożizzjoni ta' Tazhong ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2013, 38 (16):2665-2670．
[15] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong, et alLignans [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2015, 40 (3):463-468．
