Iċ-Ċelloli Stem Mesenkimali Amniotiċi tal-Bniedem itaffu l-AGVHD Wara Allo-HSCT Billi Jirregolaw l-Interazzjonijiet Bejn il-Mikrobijota tal-Imsaren U l-Immunità tal-Imsaren

Astratt

Il-marda akuta tal-graft-versus-host (aGVHD) wara trapjant alloġeniku ta’ ċelluli staminali ematopojetiċi toħloq waħda mill-aktar sfidi vexanti. Id-disbiożi tal-mikrobijota tal-musrana tista 'tipproċedi b'aGVHD u ċ-ċelloli staminali mesenkimali (MSCs) għandhom potenzjal terapewtiku promettenti għal aGVHD. Madankollu, jekk l-hAMSCs jaffettwawx il-mikrobijota tal-musrana waqt it-taffija tal-aGVHD għadu mhux magħruf. Għaldaqstant, fittxejna li niddefinixxu l-effetti u l-mekkaniżmi sottostanti tal-MSCs derivati ​​mill-membrana amnjotika umana (hAMSCs) li jirregolaw il-mikrobijota tal-musrana u l-immunità intestinali f'aGVHD. Billi stabbilixxew mudelli umanizzati tal-ġurdien aGVHD u trattament tal-hAMSCs, sibna li l-hAMSCs tjiebu b'mod sinifikanti s-sintomi tal-aGVHD, reġġgħu lura l-iżbilanċ immuni tas-sottosettijiet taċ-ċelluli T u ċ-ċitokini, u rrestawraw il-barriera intestinali. Barra minn hekk, id-diversità u l-kompożizzjoni tal-mikrobijota tal-musrana tjiebu mat-trattament b'hAMSCs. L-analiżi ta 'korrelazzjoni ta' Spearman wriet li kien hemm korrelazzjoni bejn il-mikrobijota tal-musrana u proteini ta 'junction stretta, ċelloli immuni kif ukoll u ċitokini. Ir-riċerka tagħna ssuġġeriet li l-hAMSCs itaffu l-aGVHD billi jippromwovu n-normalizzazzjoni tal-mikrobijota tal-musrana u jirregolaw l-interazzjonijiet bejn il-mikrobijota tal-musrana u l-barriera intestinali, l-immunità.

benefiċċji cistanche għall-irġiel isaħħu s-sistema immuni

Kliem ewlieni

Marda akuta tat-tilqim kontra ospitanti · Ċelloli staminali mesenkimali amnjotiċi · Mikrobijota tal-imsaren · Barriera intestinali · Immunità intestinali

Introduzzjoni

Il-vantaġġ primarju tat-trapjant alloġeniku ta’ ċelluli staminali ematopojetiċi (allo-HSCT) huwa r-rispons qawwi kontra t-tumur minħabba effett ta’ tilqim kontra lewkimja (GVL) li jiġi attivat mir-rikonoxximent ta’ peptidi li jirriżultaw minn differenzi fil-polimorfiżmi ġenomiċi bejn il-pazjent u donatur. Madankollu, il-marda akuta tal-graft-versus-host (aGVHD) iddur madwar l-iżvilupp ta 'ħsara fit-tessut tar-riċevitur minħabba l-attakk miċ-ċelluli T donaturi allo-reattivi u tirrappreżenta kumplikazzjoni maġġuri ta' theddida għall-ħajja fl-alloHSCT [1, 2]. Id-disturb mikrobjali tal-musrana ġie rrappurtat li jinduċi reazzjonijiet infjammatorji u jikkorrelata ma 'mard assoċjat ma' infjammazzjoni [3, 4]. Bosta studji indikaw li perturbazzjonijiet fil-mikrobijota tal-musrana huma fattur essenzjali li jikkawża aGVHD wara allo-HSCT, u jsiru mira ġdida għat-trattament [5, 6]. Speċifikament, id-disbiożi tal-mikrobijota tal-musrana f'aGVHD hija ġeneralment ikkaratterizzata mit-telf tad-diversità batterjali intestinali u t-tkabbir ta 'patoġeni opportunistiċi [6]. Fil-GVHD gastrointestinali, il-barriera tal-mukuża kompromessa tibda l-attivazzjoni taċ-ċelluli ospitanti li jippreżentaw l-antiġenu u taċ-ċelluli T donaturi li jilħqu l-qofol tagħhom fid-divrenzjar taċ-ċelluli T tul paradigmi patoġeniċi tat-tip-1 u tat-tip-17 għad-detriment tat-T-T regolatorju toleroġeniku. mudelli taċ-ċelluli [7]. Primarjament fuq il-bażi tas-sekwenzjar 16S ribosomal RNA (16S rRNA) indika li speċi multipli ta 'mikrobijota tal-musrana ġew assoċjati ma' GVHD, u pereżempju, clostridia li tipproduċi butyrate huma assoċjati mal-manutenzjoni tal-funzjoni tal-barriera epiteljali u attenwazzjoni ta 'GVHD akut [8] ]. Iċ-ċelloli staminali mesenkimali (MSCs) kisbu attenzjoni kbira f'dawn l-aħħar għaxar snin minħabba l-potenzjali tagħhom ta 'tiġdid u differenzjazzjoni multilineage, kif ukoll proprjetajiet immunomodulatorji [9]. L-MSCs huma maħsuba li jippermettu tessuti bil-ħsara minn mikroambjenti infjammatorji u riġenerattivi bilanċjati fil-preżenza ta 'infjammazzjoni qawwija u ntużaw ħafna biex jittrattaw disturbi bbażati fuq l-immunità, li fihom l-aktar applikazzjoni klinika ta' suċċess hija involuta fit-trattament GVHD [10]. Iċ-ċelloli staminali mesenkimali amniotiċi tal-bniedem (hAMSCs) huma ċelloli staminali perinatali li jippossjedu kapaċità ta 'divrenzjar bħal ċelloli staminali embrijoniċi u proprjetajiet immunomodulatorji bħal ċelloli staminali adulti. Qsim ta 'fenotipi simili għal MSCs tipiċi, l-hAMSCs saru sors promettenti ta' ċelloli staminali minħabba l-faċilità, mhux invażivi u s-sigurtà tal-akkwist tat-tessuti, rendiment ta 'ċelluli abbundanti, u tilwim etiku u morali baxx ħafna meta mqabbel ma' ċelloli staminali minn sorsi oħra. L-AMSCs tal-bniedem għandhom il-vantaġġi ta 'immunoġeniċità baxxa u l-ebda tumoġeniċità, li jagħmluhom is-sors taċ-ċelluli ideali għat-terapija taċ-ċelluli [11, 12]. Esperimenti in vitro kkonfermaw li l-hAMSCs wrew kapaċità proliferattiva ogħla u kapaċità akbar ta 'tkabbir fit-tul minn MSCs derivati ​​mill-mudullun [13, 14]. Bosta studji wrew li l-hAMSCs għandhom il-potenzjal li jtejbu ħafna mard infjammatorju, inkluż mard infjammatorju tal-musrana, osteoartrite u mard awtoimmuni [11]. L-istudju reċenti tagħna wera li l-hAMSCs tjiebu l-aGVHD billi rregolaw il-bilanċ taċ-ċelluli T effector u Treg [15]. Madankollu, l-effett u l-mekkaniżmu tal-hAMSCs fuq id-disturb mikrobjali tal-musrana f'GVHD mhumiex magħrufa. Hawnhekk, aħna nimmiraw li ninvestigaw l-impatt potenzjali tal-hAMSCs fuq aGVHD kif ukoll il-mikroekosistema tal-musrana. Ikun l-ewwel studju li jiżvela l-mikrobijota tal-musrana u l-korrelazzjoni tagħha mal-immunità intestinali wara t-trattament tal-hAMSCs tal-aGVHD.

Materjali u metodi

Iżolament, Kultura, u Identifikazzjoni ta 'hAMSCs

L-hAMSCs ġew estratti kif deskritt qabel [15]. Ċelloli tat-tielet passaġġ (P3) inħasdu mill-identifikazzjoni tal-fenotip permezz ta’ tbajja’ b’antikorpi kontra CD34 (581, BD Pharmingen, USA), CD45 (HI30, BD Pharmingen, USA), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen, BD Pharmingen). , USA), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, USA), CD90 (5E10, BD Pharmingen, USA), CD73 (AD2, BD Pharmingen, USA) u CD105 (SN6, bijoxjenza, USA), u mbagħad analizzati b'ċitometru tal-fluss ( BD FACS Canto II). Iċ-ċelloli ġew iċċekkjati għad-differenzjazzjoni multilineage tagħhom bl-użu ta 'mezz ta' induzzjoni speċifiku (BGscience, iċ-Ċina), u mtebbgħin b'Oil Red-O u Alizarin Red għal adipoġenesi u differenzjazzjoni osteoġenika, rispettivament. Il-hAMSCs fil-passaġġi 3 sa 6 intużaw għall-esperimenti.

cistanche tubulosa-titjib tas-sistema immuni

Ġbir tal-PBMCs tal-Bniedem

Inkisbu kampjuni tal-plażma minn voluntiera b'saħħithom b'kunsens infurmat bil-miktub. Iċ-ċelloli mononukleari tad-demm periferali tal-bniedem (PBMCs) ġew iżolati mid-demm periferali permezz ta 'ċentrifugazzjoni ta' densità Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Ċina), maħsula b'PBS, sospiżi f'buffer tal-liżi tad-demm aħmar (Solarbio, Ċina) f'4 grad għal 15-il minuta. Erġa' aħsel u mbagħad issospendi f'PBS għal injezzjoni tal-vina tad-denb fil-ġrieden NPG.

Ġrieden

8-10 ġimgħat ta 'età u 25-30 g ġrieden NPG irġiel u nisa nxtraw minn Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. u mrobbija taħt kundizzjonijiet SPF fuq ċiklu dawl-dlam ta' 12-il siegħa b'temperatura u umdità kostanti. Il-proċeduri kollha tal-annimali ġew approvati mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Università Medika tan-Nofsinhar (Nru L2019132) skont il-Linji Gwida tal-Kunsill Nazzjonali tas-Saħħa u r-Riċerka Medika taċ-Ċina dwar l-Esperimentazzjoni tal-Annimali.

Mudell tal-Annimali GVHD akut u Trattament

Il-mudell tal-ġurdien aGVHD ġie stabbilit kif deskritt qabel [15]. Għat-trattament, 5 × 105 hAMSCs għal kull ġurdien (minn hawn grupp hAMSCs) u PBS (minn hawn grupp aGVHD) ġew injettati permezz tal-vina tad-denb f'kull ġurdien fit-tielet jum wara t-trapjant. Fil-mudelli kollha tal-ġrieden, il-ġrieden ġew iċċekkjati kull jumejn għall-morbidità u l-bidliet fil-piż. Kull ġurdien ġie skurjat għal karatteristiċi patoloġiċi inklużi telf ta 'piż, qagħda mgħaqqda, pil mgħaffġa, feriti fil-ġilda, mobilità mnaqqsa, u dijarea u mbagħad iggradati skont is-sistema ta' punteġġ klinika aGVHD adattata minn dik deskritta oriġinarjament minn Cooke [16]. F'xi każijiet, ġrieden fil-grupp aGVHD sofrew minn aGVHD sever, u l-ġrieden fil-grupp hAMSCs fit-tielet jum wara t-trattament ġew sagrifikati biex jaħsdu d-demm periferali u l-organi fil-mira inklużi fwied, milsa, pulmuni u intestini. Il-ħmieġ ta 'dawn il-ġrieden inġabru qabel is-sagrifiċċju.

hAMSCs ittikkettati bil-GFP u Traċċar in vivo

L-hAMSCs ittikkettjati bil-GFP ġew stabbiliti u identifikati kif deskritt qabel [15]. Fil-qosor, aħna trasfettati l-ġene tal-proteina tal-fluworexxenza ħadra (GFP) f'hAMSCs b'lentivirus bħala vettur. 5 × 105 hAMSCs tikkettati GFP sospiżi f'500 μL PBS ġew injettati fil-ġrieden aGVHD permezz tal-vina tad-denb. Wara 24 siegħa u 72 siegħa, il-ġrieden ġew ewtanizzati biex jaħsdu l-imsaren u mbagħad iġġeneraw sezzjonijiet iffriżati. Il-kontrostaining DAPI intuża biex jiddistingwi ċ-ċelloli riċevituri.

Evalwazzjoni Istopatoloġika

L-organi fil-mira tal-aGVHD inġabru fil-ħin tan-nekropsja u mbagħad ġew ipproċessati fi blokki inkorporati fil-paraffin biex jiġġeneraw sezzjonijiet ħxuna ta' 5-μm għal tbajja ta' ematossilina u eosina (H&E). Il-punteġġi istoloġiċi ġew evalwati abbażi tal-qerda tal-istruttura tat-tessut u l-infiltrazzjoni tal-limfoċiti [17]. Għall-immunoistokimika, is-sezzjonijiet ġew deparafnizzati, idratati mill-ġdid, u ttrattati bi 3% H2O2 f'metanol għal 20 minuta biex tiġi inattivata l-attività tal-perossidasi endoġena. Imbagħad is-sezzjonijiet ġew soġġetti għall-irkupru tal-antiġen u ttrattati bl-albumina tas-serum għal siegħa. Sussegwentement, is-sezzjonijiet ġew inkubati b'antikorpi tal-fenek kontra l-bniedem CD45 (EP322Y, Abcam, l-Ingilterra) jew antikorpi ZO-1 ((EPR{19945-296, Abcam, l-Ingilterra) għal siegħa f'37 grad. antikorpi ġew skoperti b'antikorp sekondarju konjugat bl-HRP (Genentech, USA) u viżwalizzati b'DAB.Iż-żona pożittiva ġiet analizzata minn Image J.

sistema immunitarja li żżid il-pjanti cistanche

16S rRNA Sekwenzar tal-Mikrobijota Fekali

Id-DNA ġenomika tal-ippurgar ġiet estratta minn 0.1 g kampjuni tal-ħmieġ iffriżati bl-użu ta 'Kit tad-DNA tal-ippurgar EZNA® (Omega BioTek, Norcross, GA, US) skont il-protokoll tal-manifattur. Bl-użu tad-DNA ġenomika bħala l-mudell, intużaw primers speċifiċi (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′, u 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) bil-barcodes u PremixTaq (TaKaRa, iċ-Ċina) biex jamplifikaw ir-reġjuni ipervarjabbli V3-V4 tal-ġene batterjali 16S rRNA. Wara l-amplifikazzjoni u l-purifikazzjoni, il-ġenoma kollu tal-kampjun ġie sekwenzat fuq il-pjattaforma ta 'sekwenzjar ta' rendiment għoli Illumina Hiseq jew Miseq minn Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, Ċina) biex tinkiseb data mhux ipproċessata f'format FASTQ. L-analiżi tad-dejta tas-sekwenza twettqu prinċipalment bl-użu tal-pjattaforma Magichand.

Analiżi Ċitometrika tal-Fluss

L-organi fil-mira aGVHD u d-demm periferali tal-ġrieden ġew miksuba u ppreparati f'sospensjoni ta 'ċellula waħda. Iċ-ċelloli kienu mtebbgħin b'antikorpi monoklonali kontra CD3 (UCHT1, Biolegend, USA), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, USA), CD8 (RPA-T8, Biolegend, USA), CD25 (BC96, Biolegend, USA) jew imqabbla bl-isotip kontroll IgG (eBioscience, USA) għal 30 min f'temperatura tal-kamra fid-dlam. Imbagħad iċ-ċelloli ġew ipproċessati b'Lysing Buffer (BD Pharm Lyse™) f'4 gradi fid-dlam għal 15-il minuta. Tbajja intraċellulari ta 'Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, USA) twettqet skont ir-rakkomandazzjonijiet tal-manifattur (Kit ta' Soluzzjoni ta 'Fissar/Permeabilization; eBioscience). Imbagħad saru analiżi ċitometriċi tal-fluss polikromatiċi fuq Ċitometru tal-Fluss.

Kwantifikazzjoni taċ-ċitokini

Il-livelli ta 'ċitokini fis-serum u s-supernatant tat-tessut tal-ġrieden ġew determinati bl-użu ta' Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 cytokine kit (BD Pharmingen, USA) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Fil-qosor, 50 μL ta' kull wieħed mill-kampjuni tas-supernatant ġew inkubati b'50 μL ta' żibeġ tal-qbid taċ-ċitokini umani mħallta Th1/Th2/Th17 u 50 μL tar-reaġent ta' detezzjoni tal-PE uman Th1/Th2/Th17 f'temperatura tal-kamra fid-dlam, imbagħad sospiżi għall-analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss 3 sigħat wara.

PCR kwantitattiv f'ħin reali

L-RNA totali ġie estratt mit-tessut tal-kolon tal-ġrieden wara l-iżolament bl-użu ta 'Trizol Reagent (TaKaRa, iċ-Ċina). L-RNA totali intuża bħala mudell biex reverse traskrizzjoni cDNA. -actin intuża bħala referenza interna. L-espressjoni tal-mRNA ġiet imkejla bil-qPCR bl-użu tal-primers li ġejjin: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3', u ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3', u OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -actin-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3', u -actin-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. Il-metodu 2-ct intuża biex ikejjel il-livelli tal-espressjoni tal-RNA.

Analiżi Immunosorbenti Marbuta ma' Enżimi (ELISA)

Il-livelli ta 'D-LA u DAO fil-plażmi ġew imkejla bl-użu ta' kits ELISA (Jingmei, iċ-Ċina) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Fil-qosor, is-supernatanti tal-plażma miġbura tpoġġew fi 96-pjanċi miksija b'antikorpi speċifiċi sew, rispettivament. L-assorbiment kien irreġistrat f'450 nm bl-użu ta 'mikroplate reader (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

Analiżi Statistika

Id-dejta ġiet ippreżentata bħala medja ± SD. T-test ta' kampjuni indipendenti sar u viżwalizzat bl-użu ta' GraphPad Prism8.0. L-analiżi tad-dejta tas-sekwenza tal-rRNA 16S twettqu bl-użu tal-pjattaforma Magichand (http://cloud.maginenecom/). L-analiżi tal-korrelazzjoni bejn il-mikrobijota tal-musrana u l-immunità saret minn pakketti R (v3.6.3) biex turi matriċi ta 'korrelazzjoni. valuri P<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Riżultati

Identifikazzjoni ta' hAMSCs

L-hAMSCs urew poligoni jew morfoloġija bħal fibroblast fil-kultura (Fig. 1A) u kienu pożittivi ħafna għall-espressjoni tal-wiċċ ta 'markaturi speċifiċi għall-MSC CD90, CD105, u CD73, iżda negattivi għal CD34, CD45, HLA-DR, u CD11b (Fig. . 1C). Fir-rigward tad-divrenzjar multilineage, ir-riżultati tagħna wrew li l-hAMSCs wrew differenzjazzjoni adipoċitika u osteoblastika (Fig. 1B).

Il-hAMSCs Taffew b'mod sinifikanti s-Sintomi tal-aGVHD fil-ġrieden

L-ewwel evalwajna l-effett terapewtiku tal-hAMSCs fuq aGVHD. Meta mqabbel ma 'grupp aGVHD, hAMSCs tjiebu b'mod sinifikanti aGVHD, kif evidenzjat mill-telf ta' piż mnaqqas b'mod sinifikanti (Fig. 2B) u naqas punteġġ kliniku aGVHD (Fig. 2C). Barra minn hekk, il-grupp hAMSCs kellu rata ta 'sopravivenza ogħla b'mod sinifikanti meta mqabbla ma' ġrieden aGVHD (Fig. 2D). L-analiżi tal-istoloġija patoloġika wriet li aGVHD ikkawża ħsara severa fit-tessuti u infiltrazzjoni tal-lewkoċiti. hAMSCs, kif muri minn H & E, attenwat tfixkil tat-tessut u infiltrazzjoni ta 'ċelluli T eżoġeni fl-organi fil-mira aGVHD (Fig. 2E). B'mod konsistenti, ir-riżultati tal-IHC ikkonfermaw ukoll li l-hAMSCs tejbu manifestazzjonijiet patoloġiċi anormali (Fig. 2F). Dawn ir-riżultati ssuġġerew li l-hAMSCs kellhom il-potenzjal li jtejbu s-sintomi aGVHD fil-ġrieden aGVHD.

hAMSCs Affettwaw l-Immunità Ospitanti fil-ġrieden aGVHD

Biex nifhmu l-mekkaniżmi immunomodulatorji sottostanti li bihom l-hAMSCs inaqqsu l-aGVHD, kejlna l-attivazzjoni u l-espansjoni taċ-ċelluli T fid-demm periferali u l-organi fil-mira. L-assaġġ taċ-ċitometrija tal-fluss wera li l-hAMSCs inibixxu b’mod notevoli n-numru ta’ ċelluli CD3+CD4+T u CD{3+CD{8+T fid-demm u fl-organi fil-mira (Fig. 3A, B). Barra minn hekk, il-proporzjon ta' CD4+CD25+Foxp3+Tregs fid-demm u l-organi fil-mira tal-ġrieden fil-grupp hAMSCs kien ogħla b'mod sinifikanti minn dak fil-grupp aGVHD (Fig. 3C) . Imbagħad investigajna l-effett tal-hAMSCs fuq il-profil taċ-ċitokini (Fig. 4). L-amministrazzjoni ta' hAMSCs irriżulta fi tnaqqis ovvju fil-livelli ta' IL-17A, IFN- , TNF, IL-6, u IL{-2 fl-organi fil-mira u fid-demm meta mqabbla ma' dawk tal-grupp aGVHD, ħlief għal-livell ta’ TNF fil-milsa. Sadanittant, minbarra l-livelli ta' IL-10 fil-fwied, il-ġrieden tat-trattament tal-hAMSCs urew livelli sostanzjalment miżjuda ta' IL-10 u IL-4 fl-organi fil-mira u fid-demm. Meħuda flimkien, l-hAMSCs kellhom rwol protettiv fl-aGVHD billi ireġġgħu lura l-iżbilanċ immuni tas-sottosettijiet taċ-ċelluli T u l-maltemp taċ-ċitokini.

Benefiċċji ta' cistanche tubulosa-ssaħħaħ is-sistema immuni

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti Cistanche Enhance Immunity

【Staqsi għal aktar】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Il-hAMSCs Tejbu l-Ħsara tal-Barriera Intestinal fil-ġrieden aGVHD

Biex tinvestiga jekk l-hAMSCs jistgħux isewwi l-barriera intestinali f'aGVHD, l-ewwel osservajna jekk l-hAMSCs jistgħux jemigraw lejn l-imsaren. Kif muri f'Fig. 5A, l-hAMSCs ittikkettjati bil-GFP ġew skoperti fl-imsaren wara l-injezzjoni f'hAMSCs u setgħu engraft u jinfiltraw fl-imsaren. Imbagħad fassalna evalwazzjoni istopatoloġika tat-tessut intestinali ż-żgħir. Fil-grupp aGVHD, l-imsaren kien imnaqqar u nekrotiku, il-villi intestinali kienu ovvjament meqruda, il-villi ġew miksura u lewkoċiti massivi infiltraw il-mukuża intestinali, is-sottomukuża u l-lamina propria. Il-villi intestinali kienu rranġati regolarment, u ma kien hemm l-ebda ksur jew distakk tal-villus intestinali tal-epitelju villus wara t-trattament tal-hAMSCs (Fig. 5B). L-infiltrazzjoni tal-limfoċiti umani kienet osservata wkoll mill-immunoistokimika fl-imsaren fil-grupp aGVHD, filwaqt li t-trattament b'hAMSCs jista 'jnaqqas l-infiltrazzjoni tagħhom (Fig. 5C). Biex nivvalutaw l-effett protettiv tal-hAMSCs fuq l-integrità tal-mukuża intestinali, wettaqna immunoistokimika biex niskopru l-effett fuq ZO-1. Fil-grupp ta 'trattament ta' hAMSCs, il-livell ta 'espressjoni tal-proteina tight junction ZO -1 żdied b'mod sinifikanti meta mqabbel mal-grupp aGVHD (Fig. 5D). Aħna eżaminajna wkoll il-livelli ta 'espressjoni ta' mRNA ta 'proteini intestinali tight junction (TJs) u livelli fil-plażma ta' D-lactic acid (D-LA) u diamine oxidase (DAO) biex jiddeterminaw il-funzjoni tal-barriera intestinali u l-permeabilità intestinali. Meta amministrati ġol-vina, hMASCs jistgħu jżidu b'mod sinifikanti l-livelli ta 'espressjoni ta' mRNA ta 'ZO-1 u Occludin, il-proteini ewlenin ta' TJs (Fig. 5E, F), filwaqt li jnaqqas il-livelli ta 'D-LA u DAO (Fig. 5G, H). Għalhekk, meta seħħ aGVHD, il-barriera intestinali kienet bil-ħsara bit-tnaqqis tal-proteini tal-junction tight intestinali u l-permeabilità intestinali tiżdied. Sadanittant, l-hAMCSs jistgħu jreġġgħu lura b'mod notevoli l-interruzzjoni tal-barriera intestinali.

Fig. 1 Karatterizzazzjoni fenotipika u funzjonali tal-hAMSCs. (A) Mikrografi rappreżentattivi ta 'hAMSCs minn passaġġ 0 sa 3 (l-ebda tbajja, 100 ×). (B) Abbiltà ta 'differenzjazzjoni multilineage ta' hAM SCs. Id-differenzi adipoġeniċi ta 'hAMSCs (xellug) kienu mtebbgħin b'Oil Red-O, u d-differenzjazzjoni osteoblastika ta' hAMSCs (lemin) kienu mtebbgħin b'Alizarin Red (tbajja ', 100 ×). (C) Analiżi ċitometrika tal-fluss li tindika hAMSCs pożittivi għal CD90, CD105 u CD73 filwaqt li negattivi għal CD34, CD45, CD11b u HLA-DR

Fig. 2 hAMSCs itaffu aGVHD fil-ġrieden NPG. (A) Dijagramma skematika li turi skeda ta 'amministrazzjoni ta' hAMSCs f'mudelli ta 'ġurdien aGVHD. (B) Bidliet fil-piż tal-ġisem fi gruppi differenti (n=10). (C) punteġġ kliniku ta' aGVHD (ibbażat fuq telf ta' piż, qagħda miġbuda, pil mibrum, feriti fil-ġilda, mobilità mnaqqsa u dijarea) fi gruppi differenti (n=10). (D) Sopravivenza fost gruppi differenti (n=10). (E) Stampi mikroskopiċi rappreżentattivi tat-tbajja 'H&E (400×) u punteġġ tal-istoloġija (ibbażat fuq il-qerda tal-istruttura tat-tessuti u l-infltration tal-limfoċiti) (n =4). (F) Stampi mikroskopiċi rappreżentattivi tal-immunoistokimika (400 ×) u l-proporzjon ta 'żona pożittiva CD45 (n =4). Il-valuri ġew ippreżentati bħala medja±SD

Fig. 3 hAMSCs inibixxu l-espansjoni taċ-ċelluli T tad-donatur filwaqt li tejbu l-ġenerazzjoni jew l-espansjoni ta' Tregs in vivo. (A) Analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss taċ-ċelluli CD3+CD4+T (n=6), (B) Analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss tas-CD3+CD{8+ Ċelloli T (n=6), (C) Analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss ta' CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6). Il-valuri ġew ippreżentati bħala medja±SD

Fig. 4 ċitokini pro-infjammatorji regolati 'l isfel mill-hAMSCs IL-17A, IFN- , TNF, IL-6, IL{-2, u ċitokini anti-infjammatorji regolati 'l fuq IL-10 u IL -4 in vivo (n=5). Il-valuri ġew ippreżentati bħala medja±SD

Alternazzjonijiet tal-Mikrobijota tal-Imsaren Wara Trattament tal-hAMSCs fil-ġrieden aGVHD

Is-sekwenzjar ta 'l-rRNA 16S sar f'DNA ta' batterji fekali iżolat minn gruppi differenti ta 'ġrieden. L-indiċi -diversità, inklużi OUT, Chao1, u l-indiċi Shannon, manifestati tendenzi simili, u ġrieden trattament hAMSCs harbored mikrobijota b'ħafna ogħla -diversità relattiva għal dik tal-grupp aGVHD (Fig. 6A). Analiżi tal-koordinati prinċipali (PCoA) ibbażata fuq id-distanza unifrac peżata Un, id-distanza ta 'Manhattan, u d-distanza metrika ta' Bray-Curtis, taw punti ta 'dejta mxerrda fuq il-plots taż-żewġ gruppi, minkejja d-differenza ma kinitx sinifikanti (Fig. 6B). Sussegwentement, ivvalutajna l-pajsaġġ tal-mikrobijota tal-musrana biex ninvestigaw aktar id-differenza potenzjali fil-kompożizzjoni bejn iż-żewġ gruppi. Ġew ikkalkulati total ta '773 OTUs, u l-grupp ta' hAMSCs kellu OTUs ogħla meta mqabbel mal-grupp aGVHD (Fig. 6C). F'termini ta 'kompożizzjoni batterjali fil-livell tal-phylum, Firmicutes u Bacteroidetes kienu l-aktar żewġ phylum predominanti (Fig. 6D). Aħna organizzajna wkoll heatmap ta 'tqabbil għall-analiżi tal-mikrobijota tal-musrana bejn iż-żewġ gruppi (Fig. 6E). Il-ġeneru ta 'Odoribacter u Ruminococcus_1 wera abbundanza relattivament għolja fil-grupp ta' hAMSCs, li huma mikrobi importanti biex iżommu l-omeostażi intestinali (Fig. 6F, G). Biex nikkonferma liema batterju nbidel bit-trattament b'hAMSCs u min-naħa tiegħu affettwa l-progressjoni tal-marda kontra aGVHD, għamilna paraguni ta' klassi dimensjonali għolja bl-użu tal-analiżi diskriminanti lineari (LDA) tad-daqs tal-effett (LEfSe) li skopra differenzi notevoli fil-predominanza tal-komunitajiet batterjali bejn iż-żewġ gruppi. Kif muri fi (Fig. 6H, I), Streptococcaceae (il-familja u l-ġeneru Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058, u Delftia kienu t-tipi ewlenin ta 'batterji li jikkontribwixxu għad-disbiożi tal-mikrobijota tal-musrana fil-grupp aGVHD. Madankollu, il-batterji ta 'benefiċċju Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, u Clostridia (il-klassi u l-ordni Clostridiales) wrew arrikkiment relattiv fil-grupp hAMSCs, li jista' jkun assoċjat mat-taffija medjata minn hAMSCs ta 'aGVHD. B'mod kollettiv, id-diversità u l-kompożizzjoni tal-mikrobijota tal-musrana tjiebu wara l-amministrazzjoni tal-hAMSCs u mxew f'tendenza ġenerali li kienet ta 'benefiċċju għall-ġisem.

cistanche tubulosa-titjib tas-sistema immuni

Il-hAMSCs Irregolaw l-Interazzjonijiet bejn il-Mikrobijota tal-Imsaren u l-Immunità tal-Imsaren

Biex tifhem ir-relazzjoni potenzjali bejn il-mikrobijota tal-musrana u l-barriera tal-mukuża intestinali, il-korrelazzjonijiet bejn it-TJs u l-mikrobijota tal-musrana fil-livell tal-ġeneru ġew analizzati mill-analiżi ta 'korrelazzjoni ta' Spearman. Kif muri f'Fig. 7, kien hemm relazzjoni pożittiva bejn ZO-1 u batterji ta' benefiċċju, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1, u Ruminiclostridium_9. L-abbundanza relattiva tal-batterja ta' benefiċċju, Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1, u Ruminococcaceae_UCG.014 wriet korrelazzjonijiet pożittivi b'mod drammatiku ma' Occludin. Imbagħad wettaqna analiżi ta 'korrelazzjoni bejn il-mikrobijota tal-musrana u l-barriera immuni intestinali bil-metodu ta' korrelazzjoni tal-grad ta 'Spearman (Fig. 7). Aħna osservajna li ż-żieda ta' Roseburia, Muribaculum, u Ruminococcus _1, kienet korrelatata b'mod negattiv mal-perċentwal taċ-ċelluli CD3 +CD{4+T. Barra minn hekk, iż-żieda fil-batterji ta' benefiċċju, Ruminococcus_1 u Ruminiclostridium _9, kienet korrelatata b'mod pożittiv mal-perċentwal ta' Tregs filwaqt li korrelatata b'mod negattiv ma' IL-17. L-abbundanza ta' Lactobacillus u Candidatus_Arthromitus kienu korrelati b'mod negattiv ma' IFN- . Kien hemm korrelazzjoni negattiva bejn l-abbundanza ta' Muribaculum u IL-2. Iż-żieda fl-abbundanza ta' Candidatus_Saccharimonas u t-tnaqqis fl-Escherichia. L-abbundanza ta' Shigella kienet korrelatata b'mod pożittiv mal-livell IL-10 (Fig. 7). Ir-riżultati tal-analiżi tal-korrelazzjoni indikaw li l-hAMSCs tejbu l-ambjent infjammatorju tal-ospitanti u rregolaw l-omeostażi intestinali li tista 'tkun assoċjata mal-modulazzjoni tal-mikrobijota tal-musrana, u konsegwentement ipprevjeniet l-aGVHD.

Fig. 5 hAMSCs tjiebu disfunzjoni tal-barriera intestinali fil-ġrieden aGVHD. (A) hAMSCs tikkettati bil-GFP infiltrati fl-imsaren. (B) Stampi mikroskopiċi rappreżentattivi ta 'tbajja' H & E ta' l-imsaren (400 ×) u punteġġ ta 'l-istoloġija (ibbażat fuq il-qerda ta' l-istruttura tat-tessut u l-infiltrazzjoni tal-limfoċiti) (n =4). (C) Stampi mikroskopiċi rappreżentattivi tal-immunoistokimika (400 ×) tal-imsaren u l-proporzjon taż-żona pożittiva CD45 (n =4). (D) Stampi mikroskopiċi rappreżentattivi tal-immunoistokimika (400×) tal-imsaren u l-proporzjon taż-żona pożittiva ZO-1 (n=4). (E) livelli ta' espressjoni ta' mRNA ta' ZO-1 u Occludin (n=3). (F) Livelli tal-plażma ta 'D-LA u DAO (n=4).Il-valuri ġew ippreżentati bħala medja±SD

Diskussjoni

Analiżi mikrobjali avvanzata pprovdiet għarfien ġdid dwar l-interazzjonijiet kumplessi bejn il-mikrobijota ospitanti u l-imsaren [18]. Il-mikrobijota tal-musrana tista 'tiġi mibdula wara allo-HSCT u hija assoċjata mill-qrib ma' aGVHD, li tissuġġerixxi li l-mikrobijota tal-musrana tista 'tkun mira ġdida għat-trattament tal-aGVHD [5]. Bosta studji inkluż l-istudju reċenti tagħna esploraw u kkonfermaw l-effett terapewtiku tal-MSCs fuq aGVHD [15, 19, 20]. Madankollu, l-effett fuq il-mikrobijota tal-musrana matul dan il-perjodu għadu mhux ċar. F'dan l-istudju, investigajna l-impatt ta 'hAMSCs fuq aGVHD u l-mekkaniżmi potenzjali fih in vivo. B'konsistenza ma 'studji preċedenti [15, 21-23], ir-riżultati tagħna indikaw li l-hAMSCs għandhom effett protettiv favorevoli fuq aGVHD fil-ġrieden, kif muri minn sintomi aGVHD attenwati u sopravivenza fit-tul. Aħna wrejna wkoll li l-hAMSCs wrew effett immunosoppressiv permezz tat-tnaqqis tal-espansjoni taċ-ċelluli T tad-donatur filwaqt li ssaħħaħ il-ġenerazzjoni Tregs f'aGVHD. Sadanittant, l-hAMSCs jistgħu jirregolaw ċitokini pro-infjammatorji u jirregolaw ċitokini anti-infjammatorji in vivo, sabiex jinibixxu r-risponsi infjammatorji. Il-barriera intestinali, struttura densa magħmula minn monosaff ta 'ċelluli epiteljali intestinali, iżżomm l-integrità tagħha u tipprevjeni t-traslokazzjoni tal-mikrobijota luminali fi stat b'saħħtu [24]. Matul l-allo-HSCT, ir-reġimenti ta 'kondizzjonament jagħmlu ħsara lill-barriera intestinali, li hija l-pass inizjali fl-iżvilupp ta' aGVHD, peress li tippermetti t-traslokazzjoni ta 'batterji tul il-barriera u twassal biex tfixkel l-omeostasi immuni intestinali [24, 25]. L-evidenza akkumulata turi li l-MSCs għandhom il-kapaċità li jsewwu t-tessuti, li ġie ppruvat li jsewwi l-integrità tal-barriera intestinali fil-ġrieden tal-kolite [26]. Proteini ta 'junction stretta, inklużi ZO-1 u Occludin, għandhom rwol essenzjali fil-funzjoni tal-barriera intestinali u t-traslokazzjoni tal-mikrobijota tal-musrana fuq il-barriera intestinali indebolita tipprovoka infjammazzjoni [27]. D-LA huwa derivat minn batterji intestinali, u DAO jikkonċentra prinċipalment fil-mukoża intestinali. Għalhekk, konċentrazzjonijiet għoljin ta 'plażma D-LA u DAO jistgħu jirriflettu parzjalment bidliet fil-permeabilità intestinali u l-funzjoni tal-barriera intestinali [28]. Fil-preżent, sibna li l-livelli ta 'espressjoni ta' TJs żdiedu b'mod drammatiku wara l-amministrazzjoni ta 'hAMSCs, filwaqt li l-livelli fil-plażma ta' D-LA u DAO naqsu b'mod sinifikanti, li jindika li l-hAMSCs jistgħu jtejbu l-disfunzjoni tal-barriera intestinali u l-irkupru tal-permeabilità intestinali. L-imsaren huwa wieħed mill-organi l-aktar affettwati mill-aGVHD u r-riċerka enfasizzat li l-batterju, partikolarment il-mikrobijota tal-musrana għandha rwol ċentrali fil-patoġenesi u l-iżvilupp tal-aGVHD [5, 6]. Kif irrappurtat fi studji preċedenti, it-telf ta 'diversità batterjali ta' pazjenti allo HSCT kien assoċjat ma 'żieda fil-mortalità minn aGVHD [29, 30]. Id-dominazzjoni tal-ħmieġ minn patoġeni opportunistiċi Enterococcus u Proteobacteria ġiet ukoll marbuta ma 'żieda fil-GVHD [6, 31]. Għal dawn l-aħħar deċennji, ingħatat attenzjoni akbar lill-korrelazzjoni bejn il-mikrobijota tal-musrana u t-trattament tal-MSCs f'mard ta 'infjammazzjoni. L-MSCs ġew ippruvati li jtejbu d-disbijożi tal-mikrobijota tal-musrana ta 'artrite rewmatojde, sepsis u mard infjammatorju tal-musrana [32-34]. Biex tesplora aktar il-mekkaniżmu li bih l-hAMSCs itejbu l-aGVHD, investigajna l-impatt tal-hAMSCs fuq il-mikrobijota tal-musrana. Fl-istudju attwali, l-amministrazzjoni tal-hAMSCs wriet effett konsiderevoli fuq id-diversità tal-komunitajiet tal-mikrobi meta mqabbla ma 'l-ebda trapjant, li jindika li l-abbundanza tal-mikrobijota tal-musrana tista' tinbidel wara t-trattament tal-hAMSCs. Madankollu, ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti fil-kejl tad-diversità, possibbilment minħabba d-daqsijiet żgħar tal-kampjun taż-żewġ gruppi jew iċ-ċiklu ta 'trattament insuffiċjenti ta' hAMSCs. L-analiżi bl-użu ta 'heatmap ta' tqabbil fil-livelli tal-ġeneru indikat li l-amministrazzjoni ta 'hAMSCs żiedet l-abbundanza ta' batterji ta 'benefiċċju, Odoribacter u Ruminococcus_1 fil-flora intestinali, li kienu produtturi ta' aċidi grassi ta' katina qasira (SCFAs) bi proprjetajiet anti-infjammatorji [35 , 36]. Biex tidentifika l-batterja dominanti sottostanti medjata permezz tat-trapjant tal-hAMSCs, saret analiżi LEfSe bejn iż-żewġ gruppi. Meta mqabbel mal-grupp aGVHD, it-trattament b'hAMSCs żied b'mod sinifikanti l-abbundanza ta 'xi mikrobi ta' benefiċċju relatati ma 'effetti anti-infjammatorji, bħal Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, li kienu kollha deskritti bħala ta' benefiċċju għall-produzzjoni ta 'SCFAs tal-metaboliti tal-mikrobijota tal-musrana. 37–42]. Għalhekk, l-osservazzjonijiet tagħna indikaw li wara l-amministrazzjoni ta 'hAMSC, id-disbiożi tal-mikrobijota tal-musrana tjiebet, li hija manifestata mid-diversità mtejba u l-abbundanza relattiva miżjuda ta' batterji ta 'benefiċċju.

Fig. 6 Alternazzjonijiet tal-mikrobijota tal-musrana fil-ġrieden aGVHD. (A) paragun ta '-diversità. (B) paragun ta '-diversità. (C) Dijagramma Venn ta 'OTUs. (D) Abbundanza relattiva batterjali fil-livell tal-phylum. (E) Mappa tas-sħana tal-abbundanza tal-ispeċi fil-livell tal-ġeneru. (F) Abbundanza relattiva ta' Odoribacter fil-livell tal-ġeneru. (G) Abbundanza relattiva ta' Ruminococcus_1 fil-livell tal-ġeneru. (H) Kladogramma bbażata fuq analiżi LEfSe. (I) punteġġ LDA ikkalkulat minn karatteristiċi abbundanti b'mod differenzjat bejn gruppi aGVHD u hAMSCs. (AI) n=3 ġrieden għal kull grupp. Il-valuri ġew ippreżentati bħala medja±SD

aGVHD huwa proċess infjammatorju kkumplikat li jinbeda mill-qerda tal-integrità tal-barriera intestinali segwita mit-traslokazzjoni tal-mikrobijota intestinali u l-komponenti tagħhom. Ir-rikonoxximent ta 'mudelli molekulari assoċjati mal-ħsara u mudelli molekulari assoċjati mal-patoġenu minn ċelloli li jippreżentaw l-antiġen jinduċi rispons pro-infjammatorju inkluż attivazzjoni ta' ċelluli T u tempesta ta 'ċitokini biex jaggravaw il-ħsara fil-barriera intestinali u jippromwovu l-iżvilupp ta' aGVHD [24, 43]. Min-naħa l-oħra, il-mikrobijota tal-musrana u l-metaboliti derivati ​​mill-mikrobijota bħal SCFAs għandhom rwoli importanti fiż-żamma tal-integrità tal-barriera intestinali u l-omeostasi intestinali kif ukoll fit-tiswir tas-sistema immuni tal-mukuża, u l-ibbilanċjar tad-difiża tal-ospitanti b'komponenti u metaboliti mikrobjali [24, 44] . L-interkomunikazzjoni bejn il-mikrobijota ospitanti u l-imsaren fil-barriera intestinali tirregola r-risponsi immuni mukosali u sistemiċi u, fi stati patoloġiċi, tista 'tirriżulta f'GVHD [6, 45, 46]. Issuġġeriet li l-mikrobijota tal-musrana hija relatata mill-qrib mal-espressjoni ta 'proteini ta' junction stretta [47]. L-istudju preżenti wera li l-espressjoni tal-mRNA ta’ TJs ZO-1 u Occludin kienet korrelattiva negattivament mal-abbundanza relattiva ta’ batterji ta’ ħsara filwaqt li kellha korrelazzjoni pożittiva ma’ batterji ta’ benefiċċju, li jindika li l-mikrobijota tal-musrana kienet importanti biex tinżamm l-integrità tal- barriera intestinali. Barra minn hekk, il-mikrobijota tal-musrana hija wkoll importanti ħafna fiż-żamma tal-barriera immuni intestinali [47]. Aħna osservajna li xi wħud mill-batterji ta' benefiċċju kienu korrelatati b'mod negattiv mal-perċentwal ta' ċelluli CD3+CD{4+T, iżda kkorrelati b'mod pożittiv mal-perċentwal ta' Tregs. Hawnhekk, aħna żvelaw li batterji ta 'benefiċċju, l-aktar produtturi ta' SCFA, kienu korrelati b'mod negattiv ma 'ċitokini pro-infjammatorji iżda korrelatati b'mod pożittiv ma' ċitokini anti-infjammatorji, filwaqt li batterji ta 'ħsara huma korrelatati bil-maqlub. Fil-qosor, id-differenza sinifikanti fil-mikrobijota tal-musrana bejn it-trattamenti ssuġġeriet stampa sħiħa tal-interazzjonijiet bejn il-mikrobijota tal-musrana u l-barriera intestinali, l-immunità. Kien għad hemm diversi limitazzjonijiet ta 'min jiddiskutu fl-esperimenti tagħna. L-ewwelnett, għalkemm l-istudju tagħna esplora l-effetti tal-hAMSCs fuq l-immunità, il-barriera intestinali u l-mikrobijota tal-musrana f'aGVHD, il-mekkaniżmu sottostanti għad irid jiġi vverifikat fi studju ulterjuri. It-tieni nett, it-tnaqqis tal-mikrobijota tal-musrana u t-trapjant tal-mikrobijota tal-ippurgar huma meħtieġa biex jindirizzaw il-korrelazzjonijiet kawżali fost il-mikrobijota tal-musrana, il-barriera intestinali u l-immunità. It-tielet, hija ġġustifikata aktar riċerka li tinvestiga l-impatt tal-hAMSCs fuq SCFAs derivati ​​mill-mikrobijota u metaboliti oħra. Bħala konklużjoni, ir-riċerka tagħna ssuġġeriet li l-hAMSCs itaffu l-aGVHD billi jippromwovu n-normalizzazzjoni tal-mikrobijota tal-musrana u jirregolaw l-interazzjonijiet bejn il-mikrobijota tal-musrana u l-barriera intestinali, l-immunità. L-istudju tagħna huwa l-ewwel wieħed li jiddefinixxi b'mod sistematiku l-effetti u l-mekkaniżmi sottostanti tal-hAMSCs li jirregolaw il-mikrobijota tal-musrana u l-immunità intestinali f'aGVHD.

Fig. 7 Analiżi ta' korrelazzjoni bejn mikrobijota tal-musrana u immunità intestinali. L-analiżi ta 'korrelazzjoni ta' Spearman saret bejn l-abbundanza relattiva ta '15-il mikrobijota tal-musrana differenti (fil-livell tal-ġeneru) u l-livell ta' espressjoni tal-mRNA ta 'TJs, il-perċentwal ta' ċelloli immuni kif ukoll il-konċentrazzjoni ta 'ċitokini fl-imsaren fost iż-żewġ gruppi. Il-valuri ta' Spearman r ivarjaw minn -0.5 (blu) sa 0.5 (aħmar)

Referenzi

1. Schmid, C. (2021). Pass eqreb lejn GVL mingħajr GVHD. Demm, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X., & Huang, X. (2018). Strateġiji għat-titjib u l-preservazzjoni tal-effetti kontra l-lewkimja mingħajr ma jaggravaw il-marda tat-tilqim kontra l-host. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Editjar ta 'preċiżjoni tal-mikrobijota tal-musrana jtejjeb il-kolite. Natura, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). Il-batterji tal-imsaren promossi b'mod selettiv minn fibri tad-dieta itaffu d-dijabete tat-tip 2. Science (New York, NY), 359(6380), 1151–1156. https:// doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018). Korriment tal-mikrobijota tal-musrana fi trapjant alloġeniku ta 'ċelluli staminali ematopojetiċi. Reviżjonijiet tan-natura. Kanċer, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017). Il-mikrobijota intestinali fit-trapjant alloġeniku taċ-ċelluli ematopojetiċi u l-marda tat-tilqim kontra l-ospitanti. Demm, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H. ., & Chen, T. (2020). Il-metabolit mikrobjali tal-imsaren trimethylamine N-oxide jaggrava GVHD billi jinduċi polarizzazzjoni tal-makrofagi M1 fil-ġrieden. Demm, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C. ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Il-metaboliti derivati ​​mill-mikrobijoma tal-musrana jimmodulaw il-ħsara taċ-ċelluli epiteljali intestinali u jtaffu l-marda tat-tilqim kontra l-ospitanti. Immunoloġija tan-Natura, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali ġinġivali umani jżommu t-tkabbir u l-karatteristiċi immunomodulatorji tagħhom indipendenti mill-età tad-donatur. Avvanzi tax-Xjenza, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016). L-applikazzjoni klinika ta 'ċelluli stromali mesenchymal fit-trapjant ta' ċelluli staminali ematopojetiċi. Ġurnal tal-Ematoloġija u l-Onkoloġija, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). Karatteristiċi u potenzjal terapewtiku taċ-ċelloli staminali derivati ​​mill-amnion tal-bniedem. Ġurnal Internazzjonali tax-Xjenzi Molekulari, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali amniotiċi umani jippromwovu r-riġenerazzjoni tal-għadam endoġenu. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Membrana amnjotika umana bħala sors alternattiv ta 'ċelloli staminali għall-mediċina riġenerattiva. Differenzjazzjoni; Riċerka fid-Diversità Bijoloġika, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016). Tqabbil ta' karatteristiċi bijoloġiċi u attività immunosoppressiva bejn ċelloli staminali mesenkimali amniotiċi umani u ċelloli staminali mesenkimali tal-mudullun tal-bniedem. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali amniotiċi umani jinibixxu aGVHD billi jirregolaw il-bilanċ taċ-ċelloli Treg u T efector. Ġurnal tar-Riċerka dwar l-Infjammazzjoni, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996). Mudell sperimentali ta 'sindromu ta' pnewmonja idjopatika wara trapjant tal-mudullun: I. Ir-rwoli ta 'antiġeni H minuri u endotossina. Demm, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali derivati ​​mit-tessut adipoż għandhom proprjetajiet immunosoppressivi in ​​vivo applikabbli għall-kontroll tal-marda tat-tilqim kontra l-ospitanti. Ċelloli Staminali (Dayton, Ohio), 24(11), 2582–2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR, & Macpherson, AJ (2012). Interazzjonijiet bejn il-mikrobijota u s-sistema immuni. Science (New York, NY), 336(6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490

19. Kelly, K., & Rasko, JEJ (2021). Ċelluli stromali mesenkimali għat-trattament tal-marda tat-tilqim kontra l-ospitanti. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022) ). Ċelloli stromali mesenkimali għat-trattament ta 'trapjant akut u kroniku reżistenti għall-isterojdi kontra l-marda ospitanti: Esperjenza ta' użu ta 'kompassjoni multiċentriku. Stem Cells Translational Medicine, 11 (4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Iċ-ċelluli staminali mesenkimali derivati ​​mill-amnion tal-bniedem inaqqsu l-marda xenoġenika tat-tilqim kontra l-ospiti billi jipprevjenu l-attivazzjoni u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli T. Rapporti Xjentifiċi, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). Tqabbil ta 'proprjetajiet anġjoġeniċi, ċitoprotettivi u immunosoppressivi ta' ċelloli staminali mesenkimali derivati ​​minn amnion u korion tal-bniedem. PLoS One, 9(2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K. ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y (2019). Sigurtà u effikaċja ta 'ċelluli staminali mesenkimali derivati ​​mill-amnion (AM01) f'pazjenti b'mard akut ta' tilqim kontra l-host refrattarju għall-isterojdi wara trapjant alloġeniku ta 'ċelluli staminali ematopojetiċi: protokoll ta' studju għal prova Ġappuniża ta 'fażi I/II. BMJ Miftuħ, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop mt-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021). Rwoli tal-mikrobijota intestinali u metaboliti mikrobjali f'GVHD akut. Experimental Hematology & Oncology, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017). Patofiżjoloġija ta 'GvHD u ​​kumplikazzjonijiet maġġuri oħra relatati ma' HSCT. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali derivati ​​minn ċelluli staminali embrijoniċi jippromwovu l-integrità u r-riġenerazzjoni tal-epitelju tal-kolon billi jgħollu l-IGF ċirkolanti-1 fil-ġrieden tal-kolite. Theranostics, 10(26), 12204– 12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022). Berberine itejjeb l-aGVHD permezz ta 'rimodelazzjoni tal-mikrobijota tal-musrana, soppressjoni tas-sinjalar TLR4, u tiswija tal-barriera tal-kolon għall-inibizzjoni tal-infjammasomi NLRP3. Ġurnal tal-Mediċina Ċellulari u Molekulari, 26 (4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022). Il-mikrobijota intestinali tipparteċipa fl-effett protettiv ta' HO-1/BMMSCs fuq trapjant tal-fwied bi tilqim tal-fwied steatotiku fil-firien. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014). L-effetti tad-diversità batterjali tal-passaġġ intestinali fuq il-mortalità wara trapjant alloġeniku ta 'ċelluli staminali ematopojetiċi. Demm, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ demm-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Blautia intestinali hija assoċjata ma' mewt imnaqqsa mill-marda tat-tilqim kontra l-host. Bijoloġija tat-Trapjant tad-Demm u tal-Mudullun: Ġurnal tas-Soċjetà Amerikana għat-Trapjant tad-Demm u tal-Mudullun, 21 (8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Mikrobijoma tal-imsaren fit-trapjant alloġeniku ta 'ċelluli staminali ematopojetiċi u bidliet speċifiċi assoċjati ma' mard akut ta 'trapjant vs ospitanti. Ġurnal Dinji tal-Gastroenteroloġija, 27 (45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H. ., & Xiao, C. (2020). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali umbilikali tal-bniedem juru potenzjal terapewtiku fl-artrite rewmatojde billi jirregolaw l-interazzjonijiet bejn l-immunità u l-mikrobijota tal-musrana permezz tar-riċettur tal-idrokarburi Aryl. Fruntieri fil-bijoloġija taċ-ċelluli u tal-iżvilupp, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). Iċ-ċelloli staminali mesenkimali derivati ​​minn adipose jtaffu l-ħsara akuta fil-pulmun u jtejbu l-mikrobijota tal-musrana fil-firien settiċi. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). Ċelloli Stem Mesenchymal (MSC) derivati ​​minn Ċelluli Stem Pluripotenti Indotti (iPSC) ekwivalenti għal MSC derivati ​​minn xaħmi fil-promozzjoni tal-fejqan intestinali u n-normalizzazzjoni tal-mikrobijoma fil-mudell ta 'mard infjammatorju tal-musrana tal-ġrieden. Stem Cells Translational Medicine, 7 (6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305

35. Li, J., Zou, C., & Liu, Y. (2022). Titjib tal-allerġija tal-ikel indotta mill-ovalbumin fil-ġrieden permezz ta' kunsinna mmirata tar-rektum u tal-kolon ta' Cyanidin-3-O-Glucoside. Foods (Basel, l-Isvizzera), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). Klassifikazzjoni tal-okkorrenza ta 'dislipidemija bbażata fuq batterji tal-musrana relatati mal-konsum tax-xgħir. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Supplimentazzjoni ta 'vitamina D3 intramuskolari ta' doża għolja taffettwa l-mikrobijota tal-musrana ta 'pazjenti b'infezzjoni clostridioides diffile. Fruntieri fil-Mikrobijoloġija Ċellulari u ta' Infezzjoni, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D., & Duca, FA (2022). L-oligofruttożju jerġa' jġib il-livelli ta' aċidu xaħmi ta' katina qasira wara l-ikel waqt it-tmigħ b'ħafna xaħam. Obesity (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Disinn ta 'età konverġenti u diverġenti tad-diversità tal-mikrobijota tal-musrana fil-bnedmin u primati mhux umani. M-Sistemi: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.01512-21

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., & Liu, B. (2022). Titjib tad-dijabete tat-tip 2 mill-ġdid 6, 8-guanidyl luteolin quinone-kromju koordinazzjoni permezz ta 'mekkaniżmi bijokimiċi u interazzjoni mikrobijota musrana. Ġurnal ta 'Riċerka Avvanzata, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 ittaffi l-isteatożi tal-fwied kronika kkaġunata mill-alkoħol u l-ħsara fil-fwied fil-ġrieden permezz tar-restawr tal-omeostasi tal-fora intestinali. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022). Reviżjoni sistematika ta 'bijomarkaturi ta' tbassir tad-donaturi u r-riċevituri tar-rispons għat-trapjant tal-mikrobijota fekali f'pazjenti b'kolite ulċerattiva. EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y., & Zhang, Y. (2020). Tagħrif ġdid fil-bijoloġija bażika tal-marda akuta tat-tilqim kontra l-ospitanti. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R., & Takeda, K. (2020). Interazzjoni bejn il-mikrobijota, l-epitelja, u ċ-ċelloli immuni fl-imsaren. Reviżjoni Annwali tal-Immunoloġija, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Il-mikrobijota tal-imsaren hija assoċjata mad-dinamika taċ-ċelluli immuni fil-bnedmin. Natura, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) L-interazzjonijiet tripli bejn mikrobijota tal-musrana, mikobijota u immunità ospitanti. Reviżjonijiet Kritiċi fix-Xjenza tal-Ikel u n-Nutrizzjoni: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). Ir-rwol tal-barriera tal-mukuża intestinali f'mard awtoimmuni: Mira potenzjali. Fruntieri fl-Immunoloġija, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713