Kif Il-Cistanche Tonify Kidney?
Mar 15, 2022
Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Kif il-mediċini Ċiniżi li tonifikaw il-kliewi jinibixxu l-apoptosi tan-newroni dopaminerġiċi?
Shaogang Lin,1 Shuifen Ye,2 Jinmu Huang,1 Yun Tian,3 Yihui Xu,2 Mengqi Wu,2 Jingxia Wang,2 Songying Wu,4 u Jing Cai, MD, Ph.D.2
MATERJALI U METODI
Disinn
Osservazzjoni komparattiva in vitro tal-farmakoloġija tas-serum.
Ħin u setting
L-esperimenti saru fil-Laboratorju taċ-Ċitobijoloġija, l-Università ta 'Fujian tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, iċ-Ċina mill-2010 sal-2011.
Materjali
Annimali
Total ta' 60 far maskili Wistar, ta' 8 ġimgħat, li jiżnu 200–220 g, inxtraw minn SLAC Laboratory Animal Co., Ltd., Shanghai, iċ-Ċina (liċenzja Nru SCXK (Hu) {{4} }). Kienu miżmuma fiċ-Ċentru tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Università ta 'Fujian tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża fiċ-Ċina f'20-22 grad b'umdità ta' 40-60 fil-mija u illuminazzjoni mis-7:00 am sas-7:00 pm L-ikel kien ipprovdut minn iċ-Ċentru tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Università ta 'Fujian tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża. Il-proċeduri sperimentali kollha kienu skont is-Suġġerimenti ta' Gwida għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju, ifformulati mill-Ministeru tax-Xjenza u t-Teknoloġija taċ-Ċina[33].
Cistanche għat-titjib tal-funzjoni tal-kliewi
Drogi
Herba Epimedii, il-parti mill-ajru tal-Epimedium sagittatum Maxim kienet mill-Provinċja ta 'Sichuan, iċ-Ċina; Semen Cuscutae, iż-żerriegħa matura niexfa ta 'Cuscuta Chinensis Lam., kienet mill-Provinċja ta' Shandong, iċ-Ċina; u Herba Cistanches, il-folja chylocaulous ta 'skala ta' Cistanche deserticola YCMa, kienet mir-Reġjun Awtonomu Uygur Xinjiang. Il-mediċini kollha ġew ipprovduti minn Fujian Pharmaceutical Co., Ltd., Fujian Province, iċ-Ċina. Herba Epimedii, Semen Cuscutae, u Herba Cistanches, 97.2 g kull wieħed, ġew mgħaddsa f'reċipjent tad-decoction li kien fih 1 500 mL ilma distillat, imsaħħan malajr, mgħolli, jinżammu f'100 grad sa ħalli l-komponenti attivi tal-mediċini jinħall u kkondensati għal 540 mL. L-ammont mhux raffinat ta 'droga fis-soluzzjoni tad-droga kien 0.180 g/mL. Is-soluzzjoni ġiet iffiltrata, imqiegħda fi flixkun, issiġillat, sterilizzat, u maħżun f'4 gradi. Selegiline, 5 mg × 10 pilloli għal kull kit, inxtara minn Nanjing Sike Pharmaceutical Co., Ltd. (Provinċja ta 'Jiangsu, iċ-Ċina). Selegiline, 21.6 mg, ġie maħlul f'ilma distillat doppju biex tipprepara soluzzjoni ta 'ilma ta' 540 mL. Il-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tad-droga kienet 0.04 mg/mL. Is-soluzzjoni tad-droga tqiegħdet fi flixkun, issiġillat, sterilizzat, u maħżun f'4 gradi.
Metodi
Preparazzjoni ta 'serum li fih id-droga
Il-gruppi ta' Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches, u selegiline kienu mxerrda intragastrikament b'serum li fih id-droga li kien fih 0.180 g/mL Herba Epimedii, Semen Cuscutae, jew Herba Cistanches, jew {{ 5}}.04 mg/mL selegiline, darbtejn kuljum, f'doża ta' 0.1 mL/kg, għal 14-il jum konsekuttiv. Il-grupp tas-serum vojt ġie amministrat volum ugwali ta 'ilma distillat. L-annimali ġew imċaħħda mill-ikel u l-ilma għal 12-il siegħa wara l-amministrazzjoni finali. Il-firien ġew anestetizzati b'injezzjoni intraperitoneali b'0.3 mL/100 g ketamine hydrochloride. Id-demm inġabar mill-aorta addominali u ċentrifugat fi 1 000 r/min għal 15-il minuta. Is-supernatant ġie maħsud, iddiżattivat f'banju ta 'l-ilma f'56 grad għal 30 minuta, iffiltrat minn membrana mikroporuża ta' 0.22 μm, u maħżun f'-20 grad.
Preparazzjoni ta 'soluzzjoni ta' 50×Sato
Taħlita ta' 60 mL DMEM/F12 (Gibco, Carlsbad, CA, USA), 15 mg insulina bovina (Sigma, St. Louis, MO, USA), 15 mg transferrin (Sigma), 145.8 mg sodium pyruvate (Biosharp, Korea), 12 mg putresċina (Solarbio, Beijing, iċ-Ċina), 25 μL selenit tas-sodju (1 mg/mL, 100 mg/100 mL H2O; Sigma), u 100 μL proġesteron (0.315 mg / mL, 15.75 mg/50 mL; Biosharp) ġie soġġett għal ultrasound f'banju tas-silġ għal 1.5 sigħat, iffiltrat permezz ta 'filtru ta' 0.22 μm, alikkwotat u maħżun f'-20 grad.
Cistanche għall-kura tal-funzjoni tal-kliewi
Kultura taċ-ċelluli
Iċ-ċelloli ġew miżrugħa f'DMEM/F12 supplimentati b'5 fil-mija (v/v) serum bovin tal-fetu (Gibco), 1 fil-mija (v/v) glutamina (Sigma), 2 fil-mija (v/v) 50×Sato's soluzzjoni, u 2 fil-mija (v/v) peniċillina/streptomycin. Iċ-ċelloli mbagħad ġew inkubati f'5 fil-mija (v/v) CO2 u miżmuma f'umdità saturata f'37 grad. Iċ-ċelloli ġew trypsinized b'0.25 fil-mija (w/v) trypsin u passaġġ. Iċ-ċelloli fil-fażi logaritmika nġabru għal esperimenti sussegwenti.
Effett ta 'H2O2 fuq it-tkabbir taċ-ċelloli MES23.5
Iċ-ċelloli ġew miżrugħa fi 96-pjanċi tal-kultura sew (5 × 105 ċelluli/bir), inkubati b'50, 100, 150, 200, 300, u 400 μmol/L H2O2 soluzzjoni tal-kultura (Shanghai Shiyi Chemicals Reagent Co., Ltd ., Shanghai, iċ-Ċina) wara 24 siegħa għal 1, 3, 6, 9, 12, 24 siegħa, segwit minn MTT (Sigma) għal 4 sigħat. Is-soluzzjoni fil-bjar ġiet mormija, u ġie miżjud 150 μL dimethyl sulfoxide (Sigma). Il-pjanċa tal-kultura tħawwad għal 10 minuti, u l-assorbiment tal-kampjuni f'570 nm ġiet determinata bl-użu ta 'qarrej awtomatiku tal-mikroplate (EXL800; Biotek, Winooski, VT, USA). Soluzzjoni tal-kultura DMEM/F12 ippreparata friska ntużat bħala kontroll negattiv. Żewġ bjar paralleli ġew stabbiliti f'kull punt tal-ħin. L-esperimenti saru fi tliet kopji.
Influwenza tas-serum li jkun fih il-mediċina f'konċentrazzjonijiet differenti fuq it-tkabbir taċ-ċelluli MES23.5 ittrattati H2O2-
Iċ-ċelloli ġew miżrugħa u esposti għal serum li fih id-droga li fih 5, 10, 15, 20, 25, u 30 fil-mija (v/v) Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches, u selegiline jew serum vojt għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli ġew ikkultivati aktar b'soluzzjoni tal-kultura li fiha 100 μmol/L H2O2 għal 3 sigħat, segwiti minn MTT għal 4 sigħat. Tliet bjar paralleli ġew stabbiliti f'kull grupp. Soluzzjoni tal-kultura DMEM/F12 ippreparata friska ntużat bħala kontroll negattiv. Ċelloli kkultivati f'soluzzjoni ta' kultura li fihom 100 μmol/L H2O2 u serum vojt servew bħala l-grupp mudell, u ċelloli kkultivati f'serum vojt biss servew bħala l-grupp ta 'serum vojt. L-esperimenti saru fi tliet kopji. Il-valur medju ta' assorbiment ta' kull grupp ġie kkalkulat bħala r-rata ta' sopravivenza taċ-ċelloli.
Ċitometrija tal-fluss għall-espressjoni ta' FasL, Fas, caspase-3, u Bcl-2 fiċ-ċelloli MES23.5
Iċ-ċelloli ġew miżrugħa u ttrattati bħal qabel. Ċelloli kkultivati f'100 μmol/L H2O2 waħedhom kienu meqjusa bħala l-grupp mudell. L-antikorp FasL ittikkettat bil-phycoerythrin u l-kontroll tal-isotip FasL (5 μL kull wieħed), ġew miżjuda f’żewġ tubi (BD, San Jose, CA, USA), imħallta b’mod ugwali maċ-ċelloli, maħżuna f’temperatura ambjentali fid-dlam għal 15-il minuta, ċentrifugati f’ 1 000 r/min għal 5 minuti wara ż-żieda ta' 2 mL PBS. Is-supernatant ġie mormi, u ċ-ċelloli ġew sospiżi mill-ġdid bl-użu ta '500 μL PBS. Il-wavelength tal-apparat tal-laser għaċ-ċitometrija tal-fluss (Facscalibur; BD) kien 488 nm. Ir-rata ta 'espressjoni ta' ċelloli pożittivi FasL ġiet analizzata u kkalkulata permezz ta 'softwer Cell Quest (BD). Ir-rata ta' espressjoni ta' ċelloli pożittivi Fas-, caspase-3-, u Bcl-2-instabet bl-użu tal-istess metodu.
ELISA għall-kontenut tal-fattur tat-tkabbir tan-nervituri, il-fattur newrotrofiku derivat mill-moħħ, u l-fattur newrotrofiku derivat mill-linja taċ-ċelluli gliali fiċ-ċelloli
Iċ-ċelloli ġew miżrugħa u ttrattati kif deskritt qabel. Is-supernatant inħasad, u l-fattur tat-tkabbir tan-nervituri, il-fattur newrotrofiku derivat mill-moħħ, u l-kontenut tal-fattur newrotrofiku derivat mill-linja taċ-ċelluli gliali ġew imkejla skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur (BD). L-assorbiment tkejjel f'450 nm bl-użu ta 'qarrej awtomatiku tal-mikroplate (EXL800; Biotek, Winooski, VT, USA).
Analiżi statistika
Ir-riżultati ġew espressi bħala medja ± SD. Id-dejta ġiet analizzata bl-użu ta' softwer SPSS 18.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Twettqet analiżi one-way tal-varjanza segwita minn testijiet ta' paragun multiplu ta' l-inqas differenza sinifikanti. Valur ta' P < 0.05="" kien="" ikkunsidrat="" statistikament="">
Cistanche għall-funzjoni tal-kliewi
Rikonoxximenti
Nirringrazzjaw lil Chen B, il-Laboratorju tan-Newrobijoloġija, l-Università Medika Kapitali, talli pprovda b'mod grazzjuż MES23.5dopaminerġiċiċelloli tan-nervituri.
Noti f'qiegħ il-paġna
Finanzjament: Dan l-istudju kien appoġġjat mill-Fond għall-Iżvilupp ta 'Chen Keji Integrative Medicine, Nru CKJ2010025 u l-Fondazzjoni Ewlenin tal-Iżvilupp tas-Soċjetà fil-Fujian Province, Nru 2013Y0059.
Kunflitti ta' interess: Xejn iddikjarat.
Approvazzjoni etika: Dan l-istudju rċieva permess mill-Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Università ta 'Fujian tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, iċ-Ċina.
(Reveduta minn Diwakarla S, Norman C, Cheng HY, Wang JM)
(Editjat minn Wang LM, Su LL, Li CH, Song LP, Liu WJ, Zhao M)
REFERENZI
[1] Zhang ZX, Roman GC, Hong Z, et al. Il-marda ta 'Parkinson fiċ-Ċina: prevalenza f'Beijing, Xian, u Shanghai. Lancet. 2005;365(9459):595–597. [PubMed] [Google Scholar]
[2] Huwa JC, Wang WW. Effett ta 'Tianma Gauteng Yin fuqapoptożitadopaminerġiċinewroni fil-firien mudell tal-marda ta’ Parkinson. Zhongyi Zazhi. 2010;51(11):1024–1027. [Google Scholar]
[3] Perier C, Bové J, Vila M. Mitochondria u mewt taċ-ċelluli programmata fil-marda ta' Parkinson:apoptożiu lil hinn. Sinjal Antioxid Redox. 2012;16(9):883–895. [PubMed] [Google Scholar]
[4] Gallagher DA, Schapira AH. Etjopatoġenesi u trattament tal-marda ta 'Parkinson. Curr Top Med Chem. 2009;9(10):860–868. [PubMed] [Google Scholar]
[5] Rangasamy SB, Soderstrom K, Bakay RA, et al. Terapija b'fattur newrotrofiku għall-marda ta' Parkinson. Prog Brain Res. 2010;184:237–264. [PubMed] [Google Scholar]
[6] Zuccato C, Cattaneo E. Fattur newrotrofiku derivat mill-moħħ f'mard newrodeġenerattiv. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Scholar]
[7] Cai DF, Chen XQ, Gao Y. Effett tar-riċetta ta 'l-arbuxxelli yangban fuq il-funzjoni nigrostriatal fil-firien mudell Parkinsonjan wara trattament fit-tul b'levodopa. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2002;22(1):43–46. [PubMed] [Google Scholar]
[8] Yang MH, Wang HM, Liu Y. Effett ta 'Bushen Huoxue Decoction fuq ir-riċettur orfni u tyrosine hydroxylase fil-moħħ tal-firien bil-marda ta' Parkinson. Chin J Integr Med. 2011;17(1):43–47. [PubMed] [Google Scholar]
[9] Li SD, Liu Y, Yang MH. Effetti ta 'l-arbuxxelli Huo Xue yin fuq il-moħħ NF-kB u NO kontenut fil-mudell tal-marda ta' Parkinson ġurdien. J Tradit Chin Med. 2012;32(1):67–70. [PubMed] [Google Scholar]
[10] Tian Y, Cai J, Chen XZ, et al. Effetti protettivi ta 'nutrizzjoni Ċiniżakliewiħwawar fuq newroni ta 'newroni strijatali fil-ġurdien mudell tal-marda ta' Parkinson. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011;31(3):440–443. [Google Scholar]
[11] Yu H, Li YH, Feng XL, et al. Identifikazzjoni u analiżi tal-attività tat-tyrosine hydroxylase fiċ-ċelloli MES23.5. Zhongguo Shengwu Huaxue yu Fenzi Shengwu Xuebao. 2004;20(1):95–100. [Google Scholar]
[12] Wang XR. Beijing: Dar tal-Pubblikazzjoni Medika tan-Nies; 2007. Metodi u Teknoloġija Sperimentali tat-Tossikoloġija. [Google Scholar]
[13] Lv SJ. Beijing: Istampa tax-Xjenza Medika taċ-Ċina; 2010. Test tal-Immunoloġija Klinika. [Google Scholar]
[14] Eriksen JL, Wszolek Z, Petrucelli L. Patoġenesi molekulari tal-marda ta 'Parkinson. Arch Neurol. 2005;62(3):353–357. [PubMed] [Google Scholar]
[15] Christen Y. Stress ossidattiv u marda ta' Alzheimer. Am J Clin Nutr. 2000;71(2):621S–629S. [PubMed] [Google Scholar]
[16] Blandini F, Armenteros MT, Fancellu R, et al. Effett newroprotettiv ta 'rasagiline f'mudell ta' annimali gerriema tal-marda ta 'Parkinson. Exp Neurol. 2004;187(2):455–459. [PubMed] [Google Scholar]
[17] Zhang XN, Wang HH, Wang ZQ, et al. Effett protettiv ta 'icariin fuqapoptożita' newroni tal-firien ikkultivati primarjament indotti minn Aâ25-35 peptide. Zhejiang Daxue Xuebao: Yixue Projbizzjoni. 2007;36(3):224–228. [PubMed] [Google Scholar]
[18] Wang LH, Bu PC, Bao YM. Effett newroprotettiv ta 'estratti ta' Cuscuta Chinensis Lam fuq il-ħsara taċ-ċelluli PC12 differenzjati newronali indotta minn speċi reattivi ta 'ossiġnu. Xibao Shengwu Xue Zazhi. 2005;27:69–72. [Google Scholar]
[19] Sun SL, Wang B, Peng HS. Inibizzjoni ta' estratti ta' Dodder għal mijoċiti kardijaċiapoptożifil-ġrieden li qed jixjieħu. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011;31:642–644. [Google Scholar]
[20] Yang JH, Hu JP, Rena K, et al. Relazzjonijiet struttura-attività ta 'phenylethanoid glycosides fil-pjanti ta' Cistanche salsa fuq attività antiossidativa. Zhong Yao Cai. 2009;32(7):1067–1069. [PubMed] [Google Scholar]
[21] Wu Y, Li L, Wen T, et al. Effetti protettivi ta 'echinacoside fuq epatotossiċità indotta mit-tetrachloride tal-karbonju fil-firien. Tossikoloġija. 2007;232(1-2):50–56. [PubMed] [Google Scholar]
[22] Cheng SD. Beijing: Dar tal-Pubblikazzjoni Medika tan-Nies; 2006. Il-Marda ta' Parkinson. [Google Scholar]
[23] Yang T. Beijing: People's Medical Publishing House; 2010. Bijoloġija taċ-Ċelloli. [Google Scholar]
[24] Baba N, Koji T, Itoh M, et al. Bidliet reċiproċi fl-espressjoni ta 'Bcl-2 u Bax fin-nukleu ipogloss wara axotomy fil-firien adulti: involviment possibbli fl-induzzjoni ta' mewt taċ-ċelluli newronali. Brain Res. 1999;827(1-2):122–129. [PubMed] [Google Scholar]
[25] Zuccato C, Cattaneo E. Fattur newrotrofiku derivat mill-moħħ f'mard newrodeġenerattiv. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Scholar]
[26] Peterziel H, Unsicker K, Krieglstein K. TGFbeta jinduċi rispons GDNF fin-newroni permezz tar-reklutaġġ ta 'GFRalpha1 għall-membrana tal-plażma. J Cell Biol. 2002;159(1):157–167. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [Google Scholar]
[27] Hong M, Mukhida K, Mendez I. Terapija GDNF għall-marda ta 'Parkinson. Espert Rev Neurother. 2008;8(7):1125–1139. [PubMed] [Google Scholar]
[28] Chaturvedi RK, Shukla S, Seth K, et al. Il-fattur tat-tkabbir tan-nervituri jżid is-sopravivenza tadopaminerġiċitilqim, isalva n-newroni dopaminerġiċi nigrali, u jirrestawra d-defiċits funzjonali f'mudell tal-far tal-marda ta 'Parkinson. Neurosci Lett. 2006;398(1-2):44–49. [PubMed] [Google Scholar]
[29] Kavanagh ET, Loughlin JP, Herbert KR, et al. Funzjonalità ta' ċelluli PC12 protetti b'NGF wara espożizzjoni għal 6-hydroxydopamine. Biochem Biophys Res Commun. 2006;351(4):890–895. [PubMed] [Google Scholar]
[30] Baquet ZC, Bickford PC, Jones KR. Fattur newrotrofiku derivat mill-moħħ huwa meħtieġ għall-istabbiliment tan-numru xieraq ta 'dopaminerġiċinewroni fis-sustanza nigra pars compacta. J Neurosci. 2005;25(26):6251–6259. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [Google Scholar]
[31] Hung SY, Liou HC, Fu WM. Il-mekkaniżmu tal-azzjoni heme oxygenase-1 huwa involut fit-titjib tal-espressjoni tal-fattur newrotrofiku. Newrofarmakoloġija. 2010;58(2):321–329. [PubMed] [Google Scholar]
[32] Duarte EP, Curcio M, Canzoniero LM, et al. Newroprotezzjoni minn GDNF fil-moħħ iskemiku. Fatturi tat-Tkabbir. 2012;30(4):242–257. [PubMed] [Google Scholar]
[33] Il-Ministeru tax-Xjenza u t-Teknoloġija tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina. Suġġerimenti ta' Gwida għall-Kura u l-Użu ta' Annimali tal-Laboratorju. 2006 Settembru 30; [Google Scholar]