Kif Cistanche Polysaccharide Inaqqas il-Melanogenesis U Naqqas l-Istress Ossidattiv?

Għal aktar informazzjoni jekk jogħġbok ikkuntattja:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola Polysaccharide jinduċi melanoġenesi fil-melanoċiti u jnaqqas l-istress ossidattiv

1Dipartiment tad-Dermatoloġija, It-Tielet Isptar Xiangya, Università Ċentrali tan-Nofsinhar, Changsha, iċ-Ċina

2Dipartiment tal-Uroloġija, It-Tielet Isptar Xiangya, Università Ċentrali tan-Nofsinhar, Changsha, iċ-Ċina

3 Ċentru Sperimentali tal-Mediċina, It-Tielet Isptar Xiangya, Università Ċentrali tan-Nofsinhar, Changsha, iċ-Ċina

Cistanchedeserticolagħandha ħafna effetti, ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Astratt: Bħala l-parti ewlenija tad-disturbi tal-pigmentazzjoni, il-mard tad-depigmentazzjoni tal-ġilda bħal vitiligo u naevus akromic huma komuni ħafna u jiksbu aktar attenzjoni issa. Il-patoġenesi tad-depigmentazzjoni tinkludi disfunzjoni u telf tal-melanocyte, li possibbilment huma kkawżati minn eredità, awtoimmunità u stress ossidattiv. Fosthom,stress ossidattivgħandu rwol ewlieni; madankollu, ftit trattamenti kliniċi jistgħu jittrattaw stress ossidattiv. Kif irrappurtat,Cistanchedeserticola polisakkarid(CDP) huwa antiossidant effettiv; ibbażat fuq dan, aħna evalwaw ir-rwol tagħha fil-melanoċiti u żvelaw aktar il-mekkaniżmi. F'dan l-istudju, sibna li CDP jista 'jippromwovi melanoġenesi f'melanoċiti epidermali umani (HEMs) u ċelluli B16F10 tal-melanoma tal-ġurdien, indotta wkoll pigmentazzjoni fiż-zebrafish. Barra minn hekk, CDP jista 'jattiva l-mogħdija tas-sinjali tal-proteina attivata mill-mitoġenu (MAPK), imbagħad irregola l-espressjoni tal-fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF) u ġeni downstream TYR, TRP1, TRP2, u RAB27A. Inkella, sibna li s-CDP jista' jnaqqas iċ-ċitotossiċità u l-apoptosi kkaġunata minn H2O2-f'melanoċiti. Aktar evidenza wriet li CDP jista' jtejjeb il-passaġġ antiossidant NRF2/HO-1 u jneħħi ROS intraċellulari. Fil-qosor, CDP jista 'jippromwovi l-melanoġenesi u jipprevjeni l-melanoċiti minn korriment mill-istress ossidattiv, li jissuġġerixxi li CDP jgħin biex iżomm l-istatus normali tal-melanoċiti. Għalhekk, CDP jista 'jkun mediċina ġdida għat-trattament ta' mard tad-depigmentazzjoni.

KELMI EWLENIN:

Cistanche deserticola polisakkarid, marda tad-depigmentazzjoni, melanocyte, melanogenesis, NRF2,stress ossidattiv

1 INTRODUZZJONI

Il-mard tad-depigmentazzjoni tal-ġilda, bħall-vitiligo u n-naevus akromic, huwa kkaratterizzat minn depigmentazzjoni tal-ġilda irqaq jew estensiva.1 Għalkemm il-leżjonijiet tal-ġilda rari jikkawżaw korriment fiżiku serju, jolqtu d-dehra tal-pazjent u joħolqu piż psikoloġiku sever, anke disturbi tas-saħħa mentali.2 Il- bidliet patoloġiċi maġġuri fid-depigmentazzjoni jinkludu disfunzjoni u telf tal-melanocyte, li jaffettwaw ħafna s-sinteżi u t-trasport tal-melanin,3 u b'hekk iwasslu għal akkumulazzjoni insuffiċjenti tal-melanin fil-ġilda.

Il-mekkaniżmi involuti fid-depigmentazzjoni bħalissa mhumiex magħrufa, iżda studji identifikaw xi fatturi relatati. Min-naħa waħda, il-funzjoni tal-melanocyte tiddependi parzjalment fuq il-fattur ta’ traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF), li huwa magħruf sew għall-promozzjoni tal-espressjoni ta’ ġeni relatati mal-melanoġenesi inkluż tyrosinase (TYR), proteina 1 relatata mat-tyrosinase (TRP1), relatata mat-tyrosinase. proteina 2 (TRP2), proteina relatata mar-ras Rab-27a (RAB27A) u fascin actin-bundling protein 1 (FSCN1).4 Fost dawn il-ġeni, TYR għandu rwol ewlieni fis-sintesi tal-melanin permezz tal-ossidazzjoni tal-l-dopa f’ dopaquinone.5 Min-naħa l-oħra, studji jissuġġerixxu taħlita ta’ diversi fatturi li jistgħu jkunu responsabbli għat-telf tal-melanoċiti, inklużi l-eredità, l-ambjent, l-awtoimmunità, u l-istress ossidattiv.6-9 Fost dawn il-fatturi, l-istress ossidattiv huwa meqjus bħala l-aktar importanti .

Il-mekkaniżmi ta'stress ossidattivli jikkawżaw depigmentazzjoni ġew parzjalment żvelati; It-tagħbija żejda ta' speċijiet ta' ossiġnu reattiv (ROS) hija fattur ewlieni wieħed.10 It-tagħbija żejda ta' ROS fid-depigmentazzjoni tinvolvi żbilanċ bejn is-sistemi favur u antiossidanti.11 Wieħed mill-elementi li jipparteċipaw f'dan l-iżbilanċ huwa l-fattur nukleari erythroid 2-relatat fattur 2/element ta' rispons antiossidant (NRF2/ARE) indeboliment fil-mogħdija ta' l-antiossidanti.12 Il-mogħdija tikkonsisti f'NRF2 u enzimi antiossidanti bħal heme oxygenase-1 (HMOX-1, HO-1) , catalase (CAT), glutathione peroxidase 1 (GPX1), u NAD(P)H quinone dehydrogenase 1 (NQO1).13 Meta l-melanoċiti jkunu esposti għal ROS eċċessiv, NRF2 jista’ jittrasloka fin-nukleu u jingħaqad mal-ARE kkonservat, imbagħad jippromwovi l-espressjoni ta 'enzimi antiossidanti. Madankollu, f'xi mard tad-depigmentazzjoni, bħall-vitiligo, mogħdija antiossidant NRF2/ARE indebolita ma tistax tneħħi b'mod effettiv ROS.14 It-terapiji kliniċi komunement użati fid-depigmentazzjoni jinkludu kortikosterojdi topiċi jew sistemiċi, inibituri tal-kalċineurin, ultravjola B b'medda dejqa (NBUVB; 311 nm) , 308-nm excimer light, trapjant epidermali awtologu, u terapija tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM). Il-kortikosterojdi u l-inibituri tal-kalċineurin jistgħu jnaqqsu l-attivazzjoni immuni anormali,15 filwaqt li l-fototerapiji jintużaw bħala trattamenti tal-ewwel linja; b'mod partikolari, NBUVB jistimula l-proliferazzjoni tal-melanoċiti u l-qerda taċ-ċelluli T,16 filwaqt li 308-nm dawl excimer jinduċi l-apoptożi taċ-ċelluli T.17 Barra minn hekk, l-effetti tat-terapiji TCM huma relatati mal-promozzjoni tal-melanoġenesi.18 Sa ċertu punt, dawn il-metodi huma ta’ għajnuna għat-titjib tad-depigmentazzjoni, iżda l-kontroll tal-progressjoni tal-marda jibqa’ ta’ sfida. Huwa meħtieġ li jiġu żviluppati terapiji ġodda, speċjalment għall-istress ossidattiv, li qabel kien traskurat.

Cistanche deserticolahuwa magħruf bħala 'ġinseng tad-deżert'.19 Il-komponenti tiegħu huma utli fil-korriment tal-fwied ikkawżat mill-etanol u l-iperplażja infjammatorja intestinali; jista' jintuża wkoll bħala reaġent kontra l-għeja, kontra l-infjammazzjoni u kontra t-tumur.20-22 Riċentement, Guo et al irrapportaw liCistanche deserticola polisakkarid(CDP), wieħed mill-komponenti ewlenin tiegħu, kellu attività antiossidant u epatoprotettiva20; żewġ studji oħra identifikaw ir-rwol tiegħu fil-protezzjoni taċ-ċelloli minn korriment f'kundizzjonijiet ta 'privazzjoni/riperfużjoni ta' ossiġnu-glukożju u osteoporożi.23,24 Madankollu, ir-rwol ta 'CDP f'mard ta' depigmentazzjoni ma ġiex spjegat. Hawnhekk, aħna mmirati li nikkonfermaw jekk CDP cstress ossidattivould jaffettwa l-melanoġenesi u jipproteġi l-melanocytes minn stress ossidattiv.

2.|MATERJAL U METODI

2.1|Kimiċi u antikorpi

Cistanche deserticolapolisakkarid(CDP) u l-dopa nxtraw minn Yuanye Biotec (purità akbar minn jew ugwali għal 98 fil-mija; Shanghai, iċ-Ċina). Hydrogen peroxide (H2O2), dimethyl sulphoxide (DMSO), NaOH, Triton X-100, 4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide ( MTT), u Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit inxtraw minn Sigma-Aldrich. 4 fil-mija paraformaldehyde newtrali nxtara minn Biosharp (Hefei, iċ-Ċina); u Kit tat-Tbajja ta' Immunofluworexxenza (Alexa Fluor 488) u 2,7-dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA) inxtraw minn Beyotime Biotec (Shanghai, iċ-Ċina). A Fontana-Masson Stain Kit u Nucleoplasmic Protein Estrazzjoni Kit inxtraw minn Sloarbio (Beijing, iċ-Ċina). Is-suppliment tat-tkabbir tal-melanoċiti umani (HMGS), il-mezz Eagle modifikat ta 'Dulbecco (DMEM), u l-mezz 254 inxtraw minn Gibco. Serum bovin tal-fetu (FBS) inxtara minn BI (Kibbutz Beit-Haemek, Iżrael). Antikorpi primarji għal -actin, TYR, TRP2, RAB27A, FSCN1, ERK, p-ERK, JNK, p-JNK,

p38, p-p38, NRF2, u HO-1 inxtraw minn Cell Signaling Technology, antikorp primarju għal MITF inxtara minn St John's Laboratory, antikorp primarju għal p-MITF inxtara minn Affinity Biosciences, antikorp primarju għal GAPDH inxtara minn Bioworld, u l-antikorp primarju għal TRP1 inxtara minn EMD Millipore.

2.2| Kultura taċ-ċelluli u trattament

Iċ-ċelloli tal-melanoma tal-ġurdien B16F10 ġew ikkultivati ​​f'DMEM medju supplimentat b'10 fil-mija FBS u 1 fil-mija penicillin-streptomycin taħlita antibijotika. Melanoċiti epidermali tal-bniedem (HEMs) ġew separati minn prepuzju uman (irreferi għall-istudju preċedenti tagħna25) u kkultivati ​​f'medju 254 supplimentat b'HMGS, 5 fil-mija FBS, u 1 fil-mija taħlita antibijotika penicillin-streptomycin. Iċ-ċelloli kollha ġew ikkultivati ​​f'inkubatur imxarrab f'37 grad b'5 fil-mija CO2. CDP ġie maħlul f'DMSO u dilwit

b'medja qabel l-użu, il-konċentrazzjoni finali ta 'DMSO kienet inqas minn 0.1 fil-mija. H2O2 ġie dilwit mal-mezz qabel l-użu.

2.3|Kultivazzjoni u trattament tal-fish zebra

L-embrijuni u l-medium tal-fish zebra nxtraw minn EzeRinka Biotech. Il-protokoll sperimentali ġie approvat mill-Kumitat tal-Etika tal-Università Ċentrali tan-Nofsinhar. Iż-zebrafish ġew ikkultivati ​​fi 12-pjanċi tal-bir f'37 grad 'il bogħod mid-dawl u ttrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CDP. Intuża mikroskopju maqlub biex josserva u jirreġistra l-melanins fl-irjus u d-denb taż-żebrafish kuljum. Wara l-osservazzjoni, biddilna l-mezz u erġajna żidna s-CDP. Id-densità tal-melanin fid-dnub taż-zebrafish ġiet imkejla b'Immaġini J, u l-valuri huma ppreżentati bħala densitajiet ottiċi integrati (IOD).

2.4| Vijabilità taċ-ċelluli

Il-vijabbiltà taċ-ċelluli kienet imkejla bl-użu ta' assaġġ MTT. Biex tiġi investigata ċ-ċitotossiċità ta' CDP, HEMs u ċelluli B16F10 ġew impjantati fi 96-pjanċi ta' bir f'densità ta' 2 × 1{{30}}3 ċelluli/bir u kkultivati ​​sakemm iċ-ċelloli kienu mwaħħla mal-pjanċi. Iċ-ċelloli mbagħad ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti (0, 2.5, 5, 10, 20, 40, 80, 160 u 320 ug/mL) ta' CDP għal 24, 48 jew 72 siegħa. Qabel il-kejl, 20 μL ta 'MTT ġew miżjuda ma' kull bir u l-pjanċi ġew inkubati f'37 grad għal 4 sigħat. Wara dan, warrabna s-supernatant u żidna 160 μL ta 'DMSO ma' kull bir biex ħoll il-kristalli tal-formazan. Il-valur tal-assorbenza f'490 nm kien imkejjel b'qarrej tal-pjanċa multimode (PerkinElmer). Biex jiġi investigat l-effett ta' CDP fil-kundizzjoni ta' ċitotossiċità indotta minn H2O2-, HEMs, u ċelluli B16F10 ġew ibbanjati fi 96-pjanċi ta' bir f'densità ta' 4 × 103 ċelluli/bir. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' CDP (0, 20, 40, jew 80 ug/mL) għal 24 siegħa, f'liema punt aħna żidna H2O2 (konċentrazzjonijiet finali: 500 μm għal HEMs u 1.0 mm għal ċelloli B16F10) għal kull bir u inkuba ċ-ċelloli għal 24 siegħa oħra. Waqqafna gruppi ta 'kontroll negattiv (NC) trattati b'CDP. Il-passi ta' skoperta kienu l-istess bħal dawk deskritti qabel.

2.5|Assaġġ ta 'NaOH tal-kontenut ta' melanin

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'{{0}}mm dixxijiet Petri u ttrattati b'CDP f'konċentrazzjonijiet differenti (0, 20, 40, u 80 ug/mL) għal 48 siegħa, imbagħad diġeriti bi trypsin u miġbura f'1. 5-mL tubi. Aħna ħselna ċ-ċelluli darbtejn b'ilma distillat doppju, erġajna sospiżi f'1 mL etanol, u tajnihom vortex biex nirilaxxaw il-melanin. Aħna mbagħad ċentrifugaw (200 g, 5 minuti) it-taħlita u mormija s-supernatant, żidna 1 mL ta '10 fil-mija DMSO (dilwit b'soluzzjoni ta' 1 mm NaOH) f'kull tubu, u ssospenda s-sediment. Inkubajna s-sospensjoni f'banju ta 'l-ilma fi 80 grad għal siegħa 1 biex tinħall il-melanin. Fl-aħħarnett, ittrasferijna 200 μL tal-likwidu għal 96-pjanċa ta 'bir u użajna qarrej tal-pjanċa multimode biex tkejjel il-valur tal-assorbiment f'470 nm.

2.6|Kejl ta' attività ta' Tyrosinase

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'{{0}}mm dixxijiet Petri u ttrattati b'CDP qabel il-kejl, diġeriti bi trypsin u miġbura f'tubi ta' 1.5-mL, u maħsula darbtejn b'salina buffered bil-fosfat (PBS). ). Aħna mċaqalqa 106 ċelluli minn kull kampjun għal tubu ġdid u morna s-supernatant wara ċ-ċentrifugazzjoni, imbagħad żidna 1 ml 0.5 fil-mija Triton X-100 mal-pellet taċ-ċelluli u ħżinna l- taħlita fi 0 grad għal 15-il minuta. Minn hemm 'il quddiem, aħna żidna 1 mL ta' l-dopa (1 mm, dilwit b'0.1 M phosphate buffer) bħala s-sottostrat u ħallat is-soluzzjoni, mċaqalqa 200 μL tat-taħlita għal 96-platt tajjeb immedjatament, u kejjel il-valur ta 'assorbiment (A0) f'475 nm bl-użu ta' qarrej tal-pjanċa multimode, rrepeti l-kejl f'10 minuti (A10). L-attività tyrosinase ġiet ikkalkulata b'(A10-A0)/105, u r-riżultati huma espressi bħala perċentwal ( fil-mija ) kontra l-kontroll negattiv.

2.7| Tbajja tal-melanin Fontana-Masson

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​fi 12-pjanċi tal-bir sakemm kisbu 50 fil-mija densità. Wara t-trattament, iċ-ċelloli ġew iffissati b'4 fil-mija paraformaldehyde newtrali għal 30 minuta u maħsula b'ilma distillat. Imbagħad żidna 500 μL soluzzjoni ta 'ammonja-fidda Fontana ma' kull bir u ħżin il-pjanċi fid-dlam għal 16-il siegħa biex żebgħa l-melanin. Sussegwentement, ħselna ċ-ċelloli b'ilma distillat ħames darbiet (minuta kull darba) u xarrabhom f'500 μL hyposulphite għal 5 minuti; finalment, neħħejna l-iposulfit u laħlaħ iċ-ċelloli mill-ġdid b'ilma distillat għal minuta. Imbagħad użajna mikroskopju maqlub biex nosservaw u nirreġistraw il-melanins.

2.8|Estrazzjoni tal-RNA u reazzjoni kwantitattiva tal-katina tal-polimerażi tat-traskrizzjoni inversa

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​fi 6-pjanċi tal-bir. Wara t-trattament, iċ-ċelloli ġew diġeriti bi trypsin u miġbura f'tubi ta' 1.5-mL. Aħna ħselna ċ-ċelluli darbtejn b'PBS, imbagħad żidna f'1 mL ta 'lysis buffer, ħallat it-taħlita b'vortex, u poġġiet it-tubi fuq is-silġ għal 5 minuti biex nilizzaw iċ-ċelloli kompletament. L-RNA ġie estratt bl-użu ta 'Total RNA Kit (Omega Bio-Tek) u reverse-trascribed (RT) bl-użu ta' ReverTra Ace qPCR RT Master Mix (TOYOBO). Reazzjoni kwantitattiva tal-katina tal-polimerażi tat-traskrizzjoni inversa (PCR) saret bl-użu ta' KODSYBR qPCR Mix (TOYOBO). Il-volum ta' reazzjoni tat-taħlita RT kien 20 μL, filwaqt li l-volum ta' reazzjoni tat-taħlita PCR kien 20 μL (cDNA 1-8 μL, MIX 10 μL, primer F 1 μL, primer R 1 μL, żid DEPC H2O sa 20 μL ). L-esperimenti twettqu skont il-protokolli. Is-sekwenzi tal-primers huma elenkati fit-Tabella S1.

2.9|Estrazzjoni tal-proteini u Western blotting/immunofluworexxenza

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'dixxijiet Petri ta' 100-mm. Wara t-trattament, iċ-ċelloli ġew diġeriti bi trypsin u miġbura f'tubi ta' 1.5-mL. Aħna ħselna ċ-ċelloli darbtejn b'PBS, imbagħad żidna f'500 μL ta' RIPA lysis buffer (Thermo Fisher) supplimentat b'1 mm phenylmethylsulphonyl fluoride (Thermo Fisher) u 1:100 cocktail dilwit inibitur tal-phosphatase (Roche). Il-proteina nukleari u taċ-ċitoplasma ġiet estratta bl-użu tal-Kit tal-Estrazzjoni tal-Proteina Nukleoplasmika skont il-protokoll tal-manifattur. Poġġejna t-tubi fuq is-silġ għal 30 minuta u għamilna vortex kull 5 minuti biex nilizzaw kompletament iċ-ċelloli. Aħna ċentrifuga ċ-ċelloli (200 g, 4 gradi, 15-il minuta), mċaqalqa s-supernatant għal tubu ġdid, u kejlu l-konċentrazzjoni tal-proteina totali bl-użu ta 'kit ta' analiżi tal-proteina BCA (KeyGEN Biotec). Aħna mgħollija l-proteini b'5× loading buffer (Beyotime Biotec, iċ-Ċina) f'100 grad għal 10 minuti, imbagħad ħżinhom f'-80 grad. Il-metodu tal-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide (PAGE) intuża fil-Western blotting, u 20 ug ta 'proteina ta' kull grupp ġew separati u trasferiti għal membrana tal-fluworidu tal-polyvinylidene. Wara l-imblukkar tal-antiġenu, inkubajna l-membrana f'antikorp primarju dilwit 1:1000 għal 16-il siegħa f'4 gradi, imbagħad ħsilna l-membrana b'PBST u inkubajna f'antikorp sekondarju fluworexxenti dilwit 1:10 000 għal siegħa f'37 grad. . L-intensità tal-fluworexxenza ġiet skoperta bl-użu ta' Odyssey CLx Imaging System (LI-COR). L-immunofluworexxenza twettqet bl-użu ta' Kit ta' Tbajja ta' Immunofluworexxenza (Alexa Fluor

488) b'dilwizzjoni ta' 1:100 ta' l-antikorp primarju.

2.10|Kejl tal-apoptosi taċ-ċelluli

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'{{0}}mm dixxijiet Petri u ttrattati b'konċentrazzjonijiet differenti (0, 20, 40, u 80 ug/mL) ta' CDP għal 24 siegħa, u ġie miżjud H2O2 ( konċentrazzjonijiet finali: 500 μm għal HEMs, 1.0 mm għal ċelluli B16F10) għal kull bir u inkubati għal 24 siegħa oħra. Waqqafna wkoll gruppi trattati b'CDP u NC. Wara t-trattament, aħna ddiġerijna ċ-ċelloli bi trypsin ħieles mill-EDTA u ġbarnahom f'tubi, imbagħad ħsilna ċ-ċelloli darbtejn b'PBS u erġajna sospiżihom f'100 μL ta' PBS. Iċ-ċelloli kienu mtebbgħin b'Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit skond il-protokoll u skoperti permezz ta 'flow cytometry (FCM). Is-softwer FlowJo intuża biex janalizza r-rata tal-apoptożi.

2.11| Kejl ROS intraċellulari

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​fi {{0}}pjanċi bir-bir u ttrattati b'konċentrazzjonijiet differenti (0, 20, 40, u 80 ug/mL) ta' CDP għal 24 siegħa, li magħhom żidna H2O2 (konċentrazzjonijiet finali: 500 μm għal HEMs,

1.0 mm għal ċelluli B16F10) għal kull bir, inkubathom għal ieħor

24 siegħa u waqqaf gruppi trattati b'CDP u NC. Wara t-trattament, ħselna ċ-ċelloli darbtejn bil-PBS biex inneħħu l-medium u l-FBS kollha, imbagħad iddilwejt is-sonda DCFH-DA għal 1:1000 b'mezz u żidha ma 'kull bir. Inkubajna ċ-ċelloli f'37 grad għal 30 minuta u ħsilthom tliet darbiet b'medju mingħajr serum. Użajna an

mikroskopju tal-fluworexxenza invertit biex josserva u jirreġistra l-fluworexxenza, imbagħad uża ImageJ biex ikejjel l-intensità tal-fluworexxenza.

2.12|Statistika u analiżi

Id-dejta f'dan ix-xogħol hija ppreżentata bħala medja ± devjazzjoni standard (SD), u l-analiżi statistika saret bl-użu ta' GraphPad Prism (verżjoni 7.0) jew SPSS (verżjoni 22.0), u Student's t-test jew analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA) intużat għal paraguni ta' gruppi multipli. Il-valur griż tal-meded tal-proteini WB kien standardizzat b'GAPDH jew -actin. Valuri ta 'P <.05 tqiesu="" sinifikanti.="" l-esperimenti="" kollha="" ġew="" ripetuti="" mill-inqas="" tliet="">

3|RIŻULTATI

3.1|CDP indotta melanoġenesi fiċ-ċelloli HEMs u B16F10

Qabel ma bdejna, użajna l-assaġġ MTT biex ninvestigaw iċ-ċitotossiċità potenzjali ta' CDP fuq HEMs u ċelluli B16F10 tal-melanoma tal-ġrieden. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'CDP f'konċentrazzjonijiet differenti għal 24, 48, jew 72 siegħa. L-ittestjar tal-vijabbiltà HEM wera li meta l-konċentrazzjonijiet kienu inqas minn 320 ug/mL, CDP ma kellu l-ebda influwenza fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli; madankollu, il-vijabbiltà naqset b'mod sinifikanti hekk kif il-konċentrazzjoni laħqet 320 ug/mL f'24, 48, u 72 siegħa (P <.05; figura="" 1a).="" il-vijabbiltà="" taċ-ċelloli="" b16f10="" naqset="" ukoll="" f'48="" u="" 72="" siegħa="" meta="" cdp="" laħaq="" 320="" ug/ml="" (p=""><.01) iżda="" ma="" dehret="" l-ebda="" bidla="" f'konċentrazzjonijiet="" aktar="" baxxi="" (figura="" 1b).="" imbagħad="" esplorajna="" b'mod="" preliminari="" r-rwol="" ta="" 'cdp="" fil-melanoġenesi="" u="" qabbilna="" l-effetti="" tiegħu="" ma'="" dawk="" tal-ormon="" li="" jistimula="" l-melanocyte="" (-msh;="" konċentrazzjonijiet:="" 20,="" 100,="" u="" 400="" nm)="" u="" dmso="" (0.1="" fil-mija)="" f'hems.="" ir-riżultati="" tat-tbajja="" tal-melanin,="" l-attività="" tat-tyrosinase,="" u="" l-analiżi="" tal-kontenut="" tal-melanin="" issuġġerew="" li="" cdp="" kien="" komparabbli="" ma="" '-msh="" għall-promozzjoni="" tal-melanoġenesi,="" filwaqt="" li="" 0.1="" fil-mija="" trattament="" dmso="" ma="" għamel="" l-ebda="" differenza="" (figura="">

Aħna rfinajna aktar l-esplorazzjoni tagħna kif xieraq. L-HEMs ġew ittrattati b'CDP f'konċentrazzjonijiet differenti (20, 40, u 80 ug/mL) għal 48 siegħa; twettqu t-tbajja’ tal-melanin, il-kontenut tal-melanin, u l-analiżi tal-attività ta’ tyrosinase, u kollha wrew żidiet sinifikanti wara t-trattament CDP b’mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni li laħqet il-quċċata fil-grupp ta’ 80 ug/mL (P <.05, figura="" 2a-c)="" .="" imbagħad="" imkejla="" l-livelli="" ta="" 'mrna="" u="" proteina="" ta'="" ġeni="" relatati="" mal-melanoġenesi="" (mitf,="" tyr,="" trp1,="" trp2,="" rab27a,="" u="" fscn1).="" cdp="" żied="" b'mod="" sinifikanti="" l-livelli="" ta="" 'mrna="" ta'="" dawk="" il-ġeni="" f'hems="" (p=""><.05; figura="" s2a).="" barra="" minn="" hekk,="" il-livelli="" ta="" 'proteini="" mitf,="" tyr,="" trp1,="" u="" rab27a="" żdiedu,="" kif="" ukoll="" il-proporzjon="" ta'="" mitf="" fosforilat="" għal="" mitf="" totali="" (p=""><.05), filwaqt="" li="" trp2="" u="" fscn1="" ma="" wrew="" l-ebda="" differenza="" (figura="" 2d,="" e).="" ir-riżultati="" indikaw="" li="" cdp="" jista="" 'jippromwovi="" l-melanoġenesi="" u="" jirregola="" l-espressjoni="" ta'="" ġeni="" relatati="" mal-melanoġenesi="" fil-melanoċiti="">

Barra minn hekk, erġajna rreverifikajna l-effetti ta 'CDP b'ċelluli B16F10 u sibna li l-kontenut ta' melanin taċ-ċelluli B16F10 żdied b'mod sinifikanti (P ​​<.01; figura="" s2b).="" barra="" minn="" hekk,="" cdp="" b'mod="">

3.2|CDP ippromwova l-melanoġenesi fiż-zebrafish

Biex tinvestiga jekk CDP jistax jippromwovimelanoġenesiin vivo, użajna embrijuni tal-fish zebra. L-embrijuni tal-fish zebra ġew maqsuma f'erba 'gruppi u ttrattati kontinwament b'medja waħedha (NC) jew CDP f'konċentrazzjonijiet differenti (20, 40 u 80 ug/mL); id-densità u d-distribuzzjoni tal-granuli tal-melanin ġew osservati u rreġistrati kuljum. Hekk kif l-embrijuni tal-fish zebra kibru, sibna li d-densità tal-melanin żdiedet gradwalment fl-irjus u d-denb. Fit-3 jum, id-differenzi bejn il-gruppi kienu distinti, u d-differenza kompliet tiżdied sakemm spiċċajna l-esperiment fis-6 jum (Figura 3A). Aħna użajna l-Immaġni J biex tkejjel id-densità tal-melanin fid-dnub taż-zebrafish; id-densità tal-melanin fil-gruppi ttrattati b'CDP kienet ogħla b'mod sinifikanti minn dik fil-grupp ta 'kontroll (P <.05; figura="">

3.3|CDP attivat il-mogħdija tas-sinjal MAPK fiċ-ċelloli HEMs u B16F10

Biex tiżvela l-mekkaniżmi li bihom is-CDP ippromwovamelanoġenesi, aħna ttrattati HEMs b'CDP f'konċentrazzjonijiet differenti (20, 40 u

80 ug/mL) għal 48 siegħa u mbagħad investigat il-livelli fosforilati u totali tal-proteini ERK, JNK, u p38 fil-mogħdija tas-sinjalar MAPK. Kif imkejjel minn Western blotting, il-livelli p-ERK, p-JNK, u p-p38 żdiedu wara t-trattament CDP (P <.05), filwaqt="" li="" l-livelli="" totali="" tagħhom="" ma="" nbidlux="" (figura="" 4a,="" b).="" l-esperimenti="" ġew="" ripetuti="" b'ċelluli="" b16f10="" u="" l-livelli="" fosforilati="" tal-proteini="" erk,="" jnk="" u="" p38="" żdiedu="" (p=""><.05), iżda="" l-livelli="" totali="" mapk="" ma="" nbidlux="" (figura="" 4c,="" d),="" konsistenti="" mar-riżultati="" f'hems="">

3.4|CDP attenwat H2O2-indotta

ċitotossiċità u apoptożi f'ċelloli HEMs u B16F10

Aħna użajna H2O2 biex nissimulaw il-stress ossidattivambjent u esplorat aktar ir-rwol ta 'CDP fil-melanocytes taħtstress ossidattiv. Il-konċentrazzjoni finali ta 'H2O2 użata fl-HEMs kienet 500 μm, filwaqt li dik fiċ-ċelloli B16F10 kienet 1.0 mm. Biex tinvestiga l-effett tas-CDP fuq iċ-ċitotossiċità indotta minn H2O2-, aħna ttrattati minn qabel HEMs u ċelloli B16F10 b'CDP f'konċentrazzjonijiet differenti (20, 40, u 80 ug/mL) għal 24 siegħa, imbagħad żidna H2O2 u komplejna nittrattawhom għal 24 siegħa qabel ma twettaq l-osservazzjoni u l-assaġġ MTT.

L-H2O2 ikkawża blebbing apparenti tal-membrana u tnaqqis taċ-ċelluli fl-HEMs, fil-gruppi trattati minn qabel CDP, is-sitwazzjoni ġiet imtaffa. It-trattament b'CDP waħdu ma kellu l-ebda effett (Figura 5A). L-assaġġ MTT wera riżultat simili li t-trattament H2O2 naqqas il-vijabbiltà tal-HEM, filwaqt li CDP tejjeb b'mod sinifikanti dan l-impatt dannuż.

3.5|ROS intraċellulari indott minn H2O2-CDP f'HEMs u ċelloli B16F10

Biex ninvestigaw il-mekkaniżmi tas-CDP għat-tnaqqis taċ-ċitotossiċità u l-apoptożi indotti minn H2O2-, aħna skoprejna aktar ir-ROS intraċellulari fiċ-ċelloli HEMs u B16F10 bl-użu ta 'fluworexxenza DCFH-DA

4|DISKUSSJONI U KONKLUŻJONIJIET

F'dan l-istudju, investigajna r-rwol tas-CDP fiċ-ċelloli HEMs u B16F10. Għall-ewwel darba, sibna li CDP jista 'jippromwovimelanoġenesifil-melanoċiti u jippromwovu l-pigmentazzjoni fiż-zebrafish. Esperiment sussegwenti wera li l-mogħdija tas-sinjalar MAPK ġiet attivata taħt trattament CDP. Aħna investigajna aktar ir-rwol tagħha fistress ossidattivu sabet li s-CDP jista' jnaqqas iċ-ċitotossiċità u l-apoptosi indotti minn H2O2- fil-melanoċiti; sadanittant, CDP jista' jattiva l-passaġġ antiossidant NRF2/HO-1 u jneħħi ROS intraċellulari taħtstress ossidattivkundizzjonijiet.

Il-proteina kinażi attivata minn mitoġenu hija passaġġ vitali involut fir-regolamentazzjoni tal-MITF, fattur ewlieni ta’ traskrizzjoni li jippromwovi l-espressjoni ta’melanoġenesi-ġeni relatati u sussegwentement taffettwa s-sintesi u t-trasport tal-melanin.26,27 Fl-istudju tagħna, l-attivazzjoni ta 'ERK, JNK, u p38 fil-melanoċiti żdiedet b'mod sinifikanti wara t-trattament CDP; sadanittant, l-espressjonijiet ta 'MITF/p-MITF u TYR immexxija minn MITF, TRP1, TRP2 u RAB27A

kienu regolati 'l fuq kif xieraq. Għalhekk, nissuġġerixxu li CDP jista '

jippromwovumelanoġenesipermezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija tal-MAPK, iżda kif CDP jattiva l-MAPKs għadu mhux magħruf. Skont studji reċenti, ir-riċettur toll-like 4 (TLR4) huwa espress ħafna fil-melanocytes u involut fil-melanoġenesi.28,29 TLR4 hija proteina transmembrana importanti li tista 'tgħaqqad speċifikament lipopolysaccharide (LPS)30; studji rrappurtaw li LPS jista 'jikkaġuna melanogenesis.29 Interessanti, diversipolisakkaridiestratt minn pjanti jew faqqiegħ allegatament attivat TLRs u mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni downstream bħal MAPK u fattur nukleari kappa beta (NF-κB).31,32 Għalhekk, nissuspettaw li CDP jista' jiġi rikonoxxut u marbut minn TLRs, imbagħad jattiva s-sinjal MAPK downstream- mogħdija ling u tippromwovimelanoġenesi. Barra minn hekk, ir-riċetturi li jixbħu d-dominju tal-oligomerizzazzjoni li jgħaqqdu nukleotidi (NLRs) huma magħrufa li jirrikonoxxu ligands intraċellulari u jmexxu l-attivazzjoni tal-mogħdijiet tas-sinjalar MAPK u NF-κB.33,34 Kif irrappurtat, polysaccharides estratti minn Ganoderma lucidum u Astragalus jistgħu jidħlu fiċ-ċelloli u jaffettwaw NLRs.35,36 Għalhekk, huwa possibbli li CDP jista 'jidħol fil-melanoċiti u jirregola l-mogħdija ta' sinjalazzjoni MAPK permezz ta 'NLRs. Madankollu, huma meħtieġa aktar studji biex tiġi vverifikata din l-ipoteżi.

Xi studji sal-lum irrappurtaw l-applikazzjoni tal-ħxejjexpolisakkaridifil-melanoġenesi biex jinibixxi l-produzzjoni tal-melanin.37,38 Madankollu, f’dan l-istudju, CDP ippromwova l-melanoġenesi f’

melanocytes, u dan l-effett kien ikkonfermat aktar wara tqabbil ma '-MSH. CDP huwa wkoll tip tapolisakkaridestratt minn ħxejjex aromatiċi, nissuspettaw li l-effett oppost ta 'CDP jista' jkun relatat mad-differenzi strutturali bejn CDP u oħrajn.polisakkaridi. Polysaccharides huma ffurmati mill-polimerizzazzjoni ta 'monosaccharides iżda huma varjabbli fit-tip ta' monosaccharide, kompożizzjoni ta 'mono-saccharide, bond glycosidic, struttura tal-katina tal-ġenb, u piż molekulari39,40; dawn il-fatturi huma maħsuba li jiddeterminaw il-funzjonijiet bijoloġiċi tagħhom.41 Studji eżistenti pproponew l-istruttura tas-CDP u ssuġġerew li l-istruttura CDP sussegwentement tinfluwenza l-funzjoni tagħha.42 Għalhekk, hija meħtieġa aktar prova biex tifhem bis-sħiħ is-CDP u tikkonferma l-ipoteżi tagħna.

Melanogenesis hija mekkaniżmu protettiv importanti ta 'reżistenza

ħsara ultravjola u ż-żamma tal-omeostażi tal-ġisem43; fl-istess

ħin, il-melanoċiti huma faċilment esposti għal ambjenti sfavorevoli bħal tagħbija żejda ta 'ROS.11 Huwa magħruf li ROS jipparteċipaw fil-promozzjonimelanoġenesi, wieħed mill-mekkaniżmi qed jattiva l-MAPKs.44 Iżda studji wrew ukoll li dan l-effett jeżisti biss f'ċertu livell ROS, filwaqt li t-tagħbija żejda ta 'ROS tfixkel il-melanoġenesi b'mod sinifikanti.45 Ir-relazzjoni bejn ROS, MAPK, u melanogenesis hija varjabbli taħt kundizzjonijiet differenti, għalhekk, il-bilanċ bejn is-sistemi favur u kontra l-ossidant huwa ovvjament importanti. F'mard tad-depigmentazzjoni bħal vitiligo, sistema anti-ossidanti żbilanċjata u tagħbija żejda ta 'ROS inkontrollabbli se jagħmlu ħsara lill-melanoċiti u jnaqqas il-vijabbiltà taċ-ċelluli. H2O2 minn ċelluli B16F10. Meta l-melanoċiti ġew soġġetti għal trattament H2O2, il-vijabbiltà u r-rata tal-apoptożi tagħhom marru għall-agħar, iżda

It-trattament minn qabel CDP jista 'parzjalment jaqleb it-tendenza. Fl-istess ħin, ROS kien scavenged. Kif irrappurtat, l-attivazzjoni tal-mogħdija ta 'antiossidazzjoni NRF2/ARE hija metodu ewlieni ta' tneħħija ta 'ROS fiċ-ċelluli tal-ġilda.14 Fl-esperimenti tagħna, il-livelli ta' proteina ta 'NRF2 u HO -1 fil-melanoċiti kienu regolati 'l fuq wara trattament H2O2 mingħajr CDP; dan ifisser li l-H2O2-indottastress ossidattivjista' jattiva l-passaġġ NRF2/HO-1, iżda huwa insuffiċjenti biex jinżamm bilanċ redox u jipproteġi ċ-ċellula minn korriment. Madankollu, it-trattament minn qabel CDP saħħaħ il-mogħdija ta 'antiossidazzjoni NRF2/HO-1 u rrestawra l-bilanċ. Għalhekk, nissuġġerixxu li CDP jista 'jipproteġi l-melanoċiti minn korriment mill-istress ossidattiv permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija ta' antiossidazzjoni NRF2/HO-1 u t-tneħħija tar-ROS.

Sibna li t-trattament CDP waħdu m'għandu l-ebda influwenza fuq ROS jew NRF2/HO-1 fil-melanoċiti. Dan ir-riżultat jissuġġerixxi li CDP jista 'jaffettwa l-bilanċ redox taħt stress ossidattiv, iżda mhux kundizzjonijiet normali. Barra minn hekk, il-mogħdija ta 'antiossidazzjoni NRF2/HO-1 hija rrappurtata rregolata mill-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni PI3K, NF-κB, u MAPK.47,48 Fl-istudju tagħna, CDP kien kapaċi jattiva l-mogħdija ta 'sinjalazzjoni MAPK. Huwa possibbli li CDP jista' jattiva l-passaġġ NRF2/HO-1 permezz ta' MAPKs li jirregolaw 'il fuq. Kif irrapporta Slominski, il-melanoċiti huma sensuri tal-istress involuti f'netwerk regolatorju, u l-funzjonijiet tagħhom jistgħu jinbidlu malajr b'rispons għall-ambjent.49 Nissuġġerixxu li r-rwol ta 'CDP huwa influwenzat mill-istatus tal-melanoċiti, jista' jippromwovi l-melanoġenesi mingħajr ma jaffettwa l-antiossidant. sistema taħt kondizzjonijiet normali iżda restawr tal-bilanċ redox taħtstress ossidattivkundizzjonijiet. Għalhekk, il-funzjoni u s-sopravivenza tal-melanoċiti jistgħu jinżammu f'żewġ modi differenti minn CDP. CDP jgħin lill-melanoċiti jżommu l-omeostasi, li hija wkoll funzjoni importanti tal-melanoġenesi.50,51

Bħala konklużjoni, CDP jista 'jippromwovi l-melanoġenesital-melanoċiti

permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar MAPK. CDP jista 'jtejjeb is-sopravivenza tal-melanoċiti billi jattiva l-passaġġ antiossidant NRF2/HO-1 u jneħħi ROS intraċellulari taħt kundizzjonijiet ta' stress ossidattiv. Is-sejbiet tagħna huma sinifikanti għaliex juru li CDP jista 'jippromwovi t-tnejnmelanoġenesiu jipproteġi l-melanoċiti minnstress ossidattivkorriment, li possibbilment huwa responsabbli għal disfunzjoni u telf tal-melanocyte. Is-sejbiet ta 'dan l-istudju jindikaw li CDP jista' jkun mediċina ġdida fit-trattament tal-mard tad-depigmentazzjoni.

RIKONOXXIMENTI

Dan ix-xogħol kien appoġġjat mill-Fondazzjoni Nazzjonali tax-Xjenza Naturali taċ-Ċina (Nru 81703101), il-Proġetti ta 'Talent Xiangya Ġdid tat-Tielet Isptar Xiangya tal-Università Ċentrali tan-Nofsinhar (Nru JY201623 u Nru 20170301), il-Fondazzjoni tax-Xjenza Naturali tal-Provinċja ta' Hunan ( Nru 2018JJ3788 u Nru 2018JJ3793) u l-Kummissjoni tas-saħħa tal-Proġett ta 'Hunan (Nru C2019173). Dr Yibo Hu wettaq il-parti prinċipali tal-istudju u kiteb il-manuskritt; Il-Professur Jing Chen u Qinghai Zeng iddisinjaw l-istudju u ggwidaw il-kitba manuskritt; Il-Professur Jinhua Huang, Lihua Huang, u Hong Xiang ipprovdew appoġġ tekniku u analizzaw id-dejta; Dr Yixiao Li, Ling Jiang, Yujie Ouyang, Yumeng Li, Lun Yang, u Xiaojiao Zhao kkontribwew għal parti mill-esperimenti.

KONFLITT TA' INTERESS

L-awturi jikkonfermaw li m'hemm l-ebda kunflitt ta' interess.

DIKJARAZZJONI TA’ DISPONIBBILTÀ TA’ DEJTA

Id-dejta li tappoġġja s-sejbiet ta 'dan l-istudju hija disponibbli mill-awtur korrispondenti fuq talba raġonevoli.

REFERENZI

1. Bleuel R, Eberlein B. Ġestjoni terapewtika tal-vitiligo. J Dtsch Dermatol Ges. 2018;16:1309-1313.

2. Taieb A, Meurant JM. Għandna nipprijoritizzaw interventi psikoloġiċi fil-ġestjoni tal-vitiligo? J Eur Acad Dermatol Venereol. 2018;32:2053-2054.

3. Picardo M, Dell'Anna ML, Ezzedine K, et al. Vitiligo. Nat Rev Dis Primers. 2015;1:15011.

4. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Pigmentazzjoni tal-melanin fil-ġilda tal-mammiferi u r-regolamentazzjoni ormonali tagħha. Physiol Rev 2004;84:1155-1228.

5. Slominski A, Zmijewski MA, Pawelek J. L-tyrosine u L-dihydroxyphenylalanine bħala regolaturi li jixbħu l-ormoni tal-funzjonijiet tal-melanoċiti. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2012;25:14-27.

6. Spritz RA. Relazzjonijiet ġenetiċi kondiviżi sottostanti vitiligo ġeneralizzat u mard tat-tirojde awtoimmuni. Tirojde. 2010;20:745-754.

7. Lin X, Tang LY, Fu WW, Kang KF. Vitiligo fit-tfulija fiċ-Ċina: profili kliniċi u sejbiet immunoloġiċi f'620 każ. Am J Clin Dermatol. 2011;12:277-281.

8. Boehncke WH, Brembilla NC. T-Lymphocytes Awtorattivi f'Mard Infjammatorju tal-Ġilda. Quddiem Immunol. 2019;10:1198.

9. Iannella G, Greco A, Didona D, et al. Vitiligo: Patoġenesi, varjanti kliniċi, u approċċi ta 'trattament. Autoimmun Rev 2016;15:335-343.

10. Forrester SJ, Kikuchi DS, Hernandes MS, et al. Speċi ta 'ossiġnu reattiv fis-sinjalar metaboliku u infjammatorju. Circ Res. 2018;122:877-902.

11. Denat L, Kadekaro AL, Marrot L, et al. Melanoċiti bħala instigaturi u vittmi ta 'stress ossidattiv. J Invest Dermatol. 2014;134:1512-1518.

12. Qiu L, Kanzunetta Z, Setaluri V. Stress ossidattiv u vitiligo: in-Nrf2-ARE

konnessjoni tas-sinjalar. J Invest Dermatol. 2014;134:2074-2076.

13. Hayes JD, Dinkova-Kostova AT. In-netwerk regolatorju Nrf2 jipprovdi interface bejn il-metaboliżmu redox u intermedjarju. Xejriet Biochem Sci. 2014;39:199-218.

14. Marrot L, Jones C, Perez P, Meunier JR. Is-sinifikat ta 'Nrf2

mogħdija fir-rispons tal-istress (ritratt)-ossidattiv fil-melanoċiti u l-keratinoċiti tal-epidermide umana. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2008;21:79-88.

15. van Geel N, Speeckaert R, Mollet I, et al. Mudell ta 'induzzjoni u terapija tal-vitiligo in vivo: prova klinika double-blind, randomised. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2012;25:57-65.

16. Nicolaidou E, Antoniou C, Stratigos A, Katsambas AD. Fototerapija Narrowband ultravjola B u 308-nm excimer laser fit-trattament tal-vitiligo: reviżjoni. J Am Acad Dermatol. 2009;60:470-477.

17. Novak Z, Bonis B, Baltas E, et al. Xenon chloride ultravjola B laser

huwa aktar effettiv fit-trattament tal-psorjasi u fl-induzzjoni tal-apoptożi taċ-ċelluli T minn ultravjola b'medda dejqa B. J Photochem Photobiol B Biol. 2002;67:32-38.

18. Xu P, Su S, Tan C, et al. Effetti ta 'estratti milwiema ta' Eclipse herba, Polygoni multiflora radix preparator, u Rehmanniae radix preparator fuq melanogenesis u l-migrazzjoni ta 'melanocytes umani. J Ethnopharmacol. 2017;195:89-95.

19. Wang T, Zhang X, Xie W.Cistanche deserticolaYC Ma, "Desertginseng": reviżjoni. Am J Chin Med. 2012;40:1123-1141.

20. Guo Y, Cao L, Zhao Q, et al. Karatterizzazzjonijiet preliminari, l-attività antiossidant u epatoprotective ta 'polisakkaridminnCistanche deserticola. Int J Biol Macromol. 2016;93:678-685.

21. Cai RL, Yang MH, Shi Y, et al. Attività kontra l-għeja ta 'estratt b'ħafna feniletanojdi minnCistanche deserticola. Phytother Res. 2010;24:313-315.

22. Zhang H, Xiang Z, Duan X, et al. Effetti antitumorali u anti-infjammatorji ta 'oligosaccharides minnCistanche deserticolaestratt fuq korriment tas-sinsla tad-dahar. Int J Biol Macromol. 2019;124:360-367.

23. Liu Y, Wang H, Yang M, et al.Cistanche deserticola polisakkaridijipproteġi ċ-ċelloli PC12 kontra l-ħsara kkawżata minn OGD/RP. Biomed Pharmacother. 2018;99:671-680.

24. Kanzunetta D, Cao Z, Liu Z, et al.Cistanche deserticola polisakkaridjnaqqas l-osteoklastoġenesi u r-risorbiment tal-għadam permezz tal-inibizzjoni tas-sinjalar RANKL u l-produzzjoni tal-ispeċi tal-ossiġnu reattiva. J Cell Physiol. 2018;233:9674-9684.

25. Fu C, Chen J, Lu J, et al. Ir-regolazzjoni baxxa ta 'TUG1 tippromwovi l-melanoġenesi u l-melanoġenesi indotta mill-UVB. Exp Dermatol. 2019;28:730-733.

26. Johannessen CM, Johnson LA, Piccioni F, et al. Programm ta' nisel tal-melanoċiti jagħti reżistenza għall-inibizzjoni tal-mogħdija ta' MAP kinase. Natura. 2013;504:138-142.

27. Vachtenheim J, Borovansky J. "Fiżjoloġija tat-traskrizzjoni" tal-formazzjoni tal-pigment fil-melanoċiti: rwol ċentrali ta 'MITF. Exp Dermatol. 2010;19:617-627.

28. Yu N, Zhang S, Zuo F, et al. Melanoċiti umani kkultivati ​​jesprimu riċetturi funzjonali li jixbħu lill-pedaġġ 2-4, 7 u 9. J Dermatol Sci. 2009;56:113-120.

29. Ahn JH, Park TJ, Jin SH, Kang HY. Melanoċiti umani jesprimu riċettur funzjonali li jixbhu lill-Toll 4. Exp Dermatol. 2008;17:412-417.

30. Reed SG, Carter D, Casper C, et al. Korrelata ta 'attivitajiet ta' adjuvants tal-familja GLA. Semin Immunol. 2018;39:22-29.

31. Guo MZ, Meng M, Feng CC, et al. Rumanzpolisakkaridmiksub minn Craterellus cornucopioides isaħħaħ l-attività immunomodulatorja f'mudelli ta' ġrieden immunosoppressivi permezz tar-regolazzjoni tal-mogħdija TLR4-NF-kappaB. Ikel Funct. 2019;10(8):4792-4801.

32. Wei W, Xiao HT, Bao WR, et al. TLR-4 jista' jimmedja mogħdijiet ta' sinjalazzjoni ta' AstragaluspolisakkaridRAP indotta espressjoni taċ-ċitokini taċ-ċelloli RAW264.7. J Ethnopharmacol. 2016;179:243-252.

33. Chen H, Yang D, Han F, et al. L-effettur batterjali T6SS EvpP jipprevjeni l-attivazzjoni tal-inflammasome NLRP3 billi jinibixxi l-passaġġ MAPK-Jnk dipendenti fuq Ca(2 plus). Mikrobi Ospitanti taċ-Ċelloli. 2017;21:47-58.

34. Levy M, Shapiro H, Thaiss CA, Elinav E. NLRP6: sensur immuni in-Nate multidimensjonali. Xejriet Immunol. 2017;38:248-260.

35. Chen YS, Chen QZ, Wang ZJ, Hua C. Effetti anti-infjammatorji u epatoprotettivi ta 'Ganoderma lucidumpolisakkaridikontra l-ħsara tal-fwied ikkawżata mit-tetraklorur tal-karbonju fil-ġrieden Kunming. Farmakoloġija. 2019;103:143-150.

36. Tian Z, Liu Y, Yang B, et al. Astragaluspolisakkaridjnaqqas il-kolite murina permezz tal-inibizzjoni tal-inflammasome NLRP3. Planta Med. 2017;83:70-77.

37. Jiang L, Huang J, Lu J, et al. Ganoderma lucidumpolisakkaridinaqqas il-melanoġenesi billi jinibixxi l-effetti parakrini tal-keratinoċiti u l-fibroblasti permezz tal-mogħdija IL-6/STAT3/FGF2. J Cell Physiol. 2019;234:22799-22808.

38. Cai ZN, Li W, Mehmood S, et al. Effett ta'polisakkaridFMP-1 minn Morchella esculenta fuq il-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10 u żebrafish. Ikel Funct. 2018;9:5007-5015.

39. Zhang C, Li Z, Zhang CY, et al. Karatteristiċi molekulari, u bijoattivitajiet ta 'polisakkaridimill-alfalfa (Medicago sativa L.). Nutrijenti. 2019;11:1181.

40. Coconi Linares N, Di Falco M, Benoit-Gelber I, et al. Il-preżenza ta 'komponenti traċċi twessa' b'mod sinifikanti r-rispons molekulari ta' Aspergillus niger għal guar gum. Bijoteknoloġija ġdida. 2019;51:57-66.

41. Ma H, Zhang K, Jiang Q, et al. Karatterizzazzjoni tal-pjantipolisakkaridiminn Dendrobium officinale permezz ta' tekniki kromatografiċi multipli u spettrometriċi tal-massa. J Chromatogr A. 2018;1547:29-36.

42. Dong Q, Yao J, Fang JN, Ding K. Karatterizzazzjoni strutturali u attività immunoloġika ta 'żewġ estratti bl-ilma kiesaħpolisakkaridiminnCistanche deserticolaYC Ma. Karboidrati Res. 2007;342:1343-1349.

43. Slominski AT, Zmijewski MA, Plonka PM, et al. Kif id-dawl UV imiss il-moħħ u s-sistema endokrinali permezz tal-ġilda, u għaliex. Endokrinoloġija. 2018;159:1992-2007.

44. Schalke S. Data ġdida dwar disturbi ta 'iperpigmentazzjoni. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2017;31(Suppl 5):18-21.

45. Glassman SJ. Vitiligo, speċi reattivi ta 'ossiġnu, u ċelluli T. Clin Sci. 2011;120:99-120.

46. ​​Ristow M. Tiżvela l-verità dwar l-antiossidanti: il-mitohormesis tispjega l-benefiċċji tas-saħħa indotti minn ROS. Nat Med. 2014;20:709-711.

47. Balogun E, Hoque M, Gong P, et al. Il-kurkumina jattiva l-ġene haem oxygenase-1 permezz tar-regolazzjoni ta' Nrf2 u l-element li jirrispondu għall-antiossidanti. Biochem J. 2003;371:887-895.

48. Paine A, Eiz-Vesper B, Blasczyk R, Immenschuh S. Sinjali lil

heme oxygenase-1 u l-potenzjal terapewtiku anti-infjammatorju tagħha.

Biochem Pharmacol. 2010;80:1895-1903.

49. Slominski A, Paus R, Schadendorf D. Melanocytes bħala ċelluli "sensorji" u regolatorji fl-epidermide. J Theor Biol. 1993;164:103-120.

50. Slominski RM, Zmijewski MA, Slominski AT. Ir-rwol tal-pigment tal-melanin fil-melanoma. Exp Dermatol. 2015;24:258-259.

51. Slominski A, Kim TK, Brozyna AA, et al. Ir-rwol tal-melanoġenesi fir-regolazzjoni tal-imġieba tal-melanoma: il-melanoġenesi twassal għall-istimulazzjoni tal-espressjoni HIF-1alfa u l-mogħdijiet li jattendu HIF dipendenti. Arch Biochem Biophys. 2014;563:79-93.